制备常用培养基ppt课件

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1、实验三 常用培育基的制备、灭菌与消毒实验实验目的：目的：目的：目的：1.1.1.1.了解培育基的配制原理了解培育基的配制原理了解培育基的配制原理了解培育基的配制原理 2. 2. 2. 2.掌握配制培育基的普通方法和步掌握配制培育基的普通方法和步掌握配制培育基的普通方法和步掌握配制培育基的普通方法和步骤骤 培培培培育育育育基基基基是是是是人人人人工工工工配配配配制制制制的的的的，适适适适宜宜宜宜微微微微生生生生物物物物生生生生长长繁繁繁繁衍衍衍衍或或或或产产生生生生代代代代谢谢产产物物物物的的的的营营养基养基养基养基质质原原原原那那那那么么么么：目目目目的的的的明明明明确确确确 ; ; ; ;营

2、营养养养养协协调调; ; ; ;控控控控制制制制PHPHPHPH、浸浸浸浸透透透透压压等等等等条条条条件件件件; ; ; ;经经济济节节约约方法：方法：方法：方法：查阅查阅文献文献文献文献; ; ; ;精心精心精心精心设计设计; ; ; ;实验实验比比比比较较 步步步步骤骤：称量、熔化、：称量、熔化、：称量、熔化、：称量、熔化、调调PHPHPHPH、过滤过滤、分装、分装、分装、分装、 加塞、包扎、加塞、包扎、加塞、包扎、加塞、包扎、灭灭菌、冷却、无菌菌、冷却、无菌菌、冷却、无菌菌、冷却、无菌检查检查 培育基种培育基种类: :碳碳源源、氮氮源源、能能源源、生生长因因子子、无无机机盐、水、水一、按

3、成份的不同划分一、按成份的不同划分 天天然然培培育育基基、合合成成培培育育基基、半半合成培育基合成培育基二、按培育基的物理形状划分二、按培育基的物理形状划分 固固体体培培育育基基、液液体体培培育育基基、半半固体培育基固体培育基三、按培育基用途划分三、按培育基用途划分 根根底底培培育育基基、加加富富培培育育基基、鉴别培育基、培育基、选择培育基培育基 牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培育基培育基n n牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培育基是一种运用最广泛和培育基是一种运用最广泛和最普通的最普通的细菌根底培育基。其配方如下：菌根底培育基。其配方如下：n n牛肉膏牛肉膏3g3g，蛋白，蛋白胨10g10g，Nacl5gNa

4、cl5g，琼脂脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，PH7.0PH7.07.2(7.2(后后调) )高氏高氏1 1号培育基号培育基n n高氏高氏1 1号培育基是用于分号培育基是用于分别和培育放和培育放线菌的菌的合成培育基。其配方如下：合成培育基。其配方如下：n n可溶性淀粉可溶性淀粉20g20g，KNO3 1gKNO3 1g，NaCl 0.5gNaCl 0.5g，K2HPO43H2O 0.5gK2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5g，FeSO47H2O 0.01gFeSO47H2O 0.01g，琼脂脂151520g20g，水，水

5、1000mL1000mL，pH7.4pH7.47.67.6。 查氏合成培育基氏合成培育基n n查氏合成培育基是用来分氏合成培育基是用来分类和培育霉菌的和培育霉菌的培育基培育基,其配方如下：其配方如下：n nNaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g,n n MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然自然麦芽汁培育基麦芽汁培育基n n用来培育酵母菌用来培育酵母菌, ,干麦芽粉加干麦芽粉加4 4倍水倍水, ,在在50-50-6060保温糖化保温糖化3-43-4小小时，用碘液，用碘液实验检查至至糖化完全糖化完全为止止, ,

6、调整糖液整糖液浓度度, ,煮沸后，煮沸后，过滤，调pHpH为6.06.0。消毒与消毒与灭灭菌菌消毒：消消毒：消灭灭病原菌和有害微生物的病原菌和有害微生物的营营养体养体灭灭菌：菌：杀灭杀灭一切微生物的一切微生物的营营养体，芽胞和养体，芽胞和孢孢子。子。方法：方法：物理的方法：加物理的方法：加热热、过滤过滤、辐辐射射化化学学的的方方法法：用用化化学学试试剂剂抑抑制制或或杀杀灭灭微微生生物物。主主要要破破坏坏细细菌菌代代谢谢机机能能。如如重重金金属属离离子子，磺磺胺胺类药类药物及抗生素等。物及抗生素等。 加加加加热热法：法：法：法：干干干干热热法：火焰灼法：火焰灼法：火焰灼法：火焰灼烧灭烧灭菌和菌和

7、菌和菌和热热空气空气空气空气灭灭菌菌菌菌1 1 1 1、火焰灼、火焰灼、火焰灼、火焰灼烧烧适用于接种适用于接种适用于接种适用于接种环环、接种、接种、接种、接种针针和金属器和金属器和金属器和金属器具如具如具如具如镊镊子等，子等，子等，子等，试试管口和瓶口，涂布用玻璃管口和瓶口，涂布用玻璃管口和瓶口，涂布用玻璃管口和瓶口，涂布用玻璃棒。棒。棒。棒。2 2 2 2、热热空气空气空气空气灭灭菌利用高温枯燥空气菌利用高温枯燥空气菌利用高温枯燥空气菌利用高温枯燥空气160160160160170C170C170C170C加加加加热灭热灭菌菌菌菌1 1 1 12h2h2h2h，适用于玻璃器皿和，适用于玻璃器

8、皿和，适用于玻璃器皿和，适用于玻璃器皿和培育皿等。原理加培育皿等。原理加培育皿等。原理加培育皿等。原理加热热使蛋白量使蛋白量使蛋白量使蛋白量变变性，与水性，与水性，与水性，与水的含量有关，当的含量有关，当的含量有关，当的含量有关，当环环境和境和境和境和细细胞含水量越大，胞含水量越大，胞含水量越大，胞含水量越大，凝固越快。凝固越快。凝固越快。凝固越快。3 3 3 3、本卷、本卷、本卷、本卷须须知：知：知：知： 1 1 1 1培育基、橡胶制品、塑料制品不能用培育基、橡胶制品、塑料制品不能用培育基、橡胶制品、塑料制品不能用培育基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；此法；此法；此法； 2 2 2 2温度控

9、制在温度控制在温度控制在温度控制在180180180180； 3 3 3 3物品不能太物品不能太物品不能太物品不能太挤挤； 4 4 4 4温度降至温度降至温度降至温度降至70707070时时才开箱才开箱才开箱才开箱门门。 湿湿热法法 ：原理：由于湿原理：由于湿热中菌体吸水，蛋中菌体吸水，蛋白白质容易凝固，因蛋白容易凝固，因蛋白质含水含水量添加，所需凝固温度降低；量添加，所需凝固温度降低；湿湿热的蒸气有潜的蒸气有潜热存在。所以存在。所以效果比同温度下干效果比同温度下干热好。好。高高压蒸汽蒸汽灭菌法：菌法：1 1、设备：高：高压灭菌菌锅2 2、时间长短根据短根据灭菌物品的种菌物品的种类和数量不同有

10、所和数量不同有所变化。化。3 3、适用于培育基、任、适用于培育基、任务服、橡服、橡胶物品等的胶物品等的灭菌，也可用于玻菌，也可用于玻璃器皿的璃器皿的灭菌。菌。4 4、本卷、本卷须知：知： 1 1冷空气冷空气彻底排除；底排除；2 2加加水；水；3 3压力降力降为“0“0时方可方可翻开。翻开。 n n在运用高在运用高压蒸气蒸气灭菌菌锅灭菌菌时，灭菌菌锅内内冷空气的排除能否完全极冷空气的排除能否完全极为重要，由于空重要，由于空气的膨气的膨胀压大于水蒸气的膨大于水蒸气的膨胀压，所以，所以，当水蒸气中含有空气当水蒸气中含有空气时，在同一，在同一压力下，力下，含空气蒸气的温度低于含空气蒸气的温度低于饱和蒸

11、气的温度。和蒸气的温度。灭菌菌锅内留有不同分量空气内留有不同分量空气时，压力与温力与温度的关系度的关系见表表2 常常压压蒸汽蒸汽灭灭菌：菌： 对对于于不不宜宜用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌的的培培育育基基如如明明胶胶培培育育基基、牛牛乳乳培培育育基基，含含糖糖培培育育基基等等可可采采用用此此法法。彻彻底底灭灭菌菌那那么么采采用用间间歇歇灭灭菌方法。菌方法。 煮沸煮沸灭灭菌法：菌法： 适用注射器和解剖器皿，适用注射器和解剖器皿，时间时间101015min15min， 超高温超高温杀杀菌菌 -150C -150C和和2-8s2-8s对对牛乳和其它液牛乳和其它液态态食品食品灭灭菌。菌。 优优点点 ：坚

12、坚持食品价持食品价值值和和营营养成分。养成分。 过滤过滤过滤过滤除菌：除菌：除菌：除菌： 原理：介原理：介原理：介原理：介质质质质在有在有在有在有压压压压力力力力时时时时阻隔微生物。阻隔微生物。阻隔微生物。阻隔微生物。 适用范适用范适用范适用范围围围围：许许许许多多多多资资资资料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备设备设备设备：蔡氏：蔡氏：蔡氏：蔡氏过滤过滤过滤过滤器，器，器，器，滤滤滤滤膜膜膜膜过滤过滤过滤过滤器。器。器。器。 优优优优缺陷：不破坏培育基成分，只适用少量缺陷：不破坏培育基成

13、分，只适用少量缺陷：不破坏培育基成分，只适用少量缺陷：不破坏培育基成分，只适用少量滤滤滤滤液。液。液。液。 本卷本卷本卷本卷须须须须知：知：知：知：1 1 1 1、压压压压力适当；力适当；力适当；力适当； 2 2 2 2、无菌条件下、无菌条件下、无菌条件下、无菌条件下进进进进展；展；展；展； 3 3 3 3、防止浸透景象。、防止浸透景象。、防止浸透景象。、防止浸透景象。 辐射灭菌： 原理：紫外线波长在200300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效能与强度和时间的乘积成正比。 缺陷：穿透力不大。距照射物1.2m为宜。 运用：无菌

14、室，医院。 本卷须知：对眼睛和皮肤有刺激作用。 化学化学药药品品灭灭菌：菌： 原理：运用化学制原理：运用化学制剂剂破坏破坏细细菌代菌代谢谢机能。机能。 杀杀菌菌剂剂如重金属离子；如重金属离子； 抑菌抑菌剂剂如磺胺如磺胺类类及多数抗生素。及多数抗生素。 留意：与留意：与药药品的品的浓浓度高低，度高低，时间长时间长短，微生短，微生物种物种类类以及微以及微 生物所生物所处处的的环环境有关。境有关。 常用化学常用化学杀杀菌菌剂剂有：乙醇、醋酸、石碳酸有：乙醇、醋酸、石碳酸 福福尔尔马马林、升汞、高林、升汞、高锰锰酸酸钾钾、新、新洁洁尔尔灭灭等等 分分别别与与纯纯化化：从从混混杂杂的的微微生生物物群群体

15、体中中获获得得只只含含某一种某一种 或某一株微生物的或某一株微生物的过过程。程。 为为什什么么要要进进展展纯纯培培育育：平平板板上上的的单单一一菌菌落落并并不不一一定保定保 证证是一种菌。是一种菌。 常用的分常用的分别别、纯纯化方法：化方法： 单细单细胞挑取法、稀胞挑取法、稀释释涂布平板法涂布平板法 稀稀释释混合平板法、平板划混合平板法、平板划线线法法 实验四四 微生物的分微生物的分别、纯化及培化及培育技育技术稀稀释释涂布平板法涂布平板法 ： 步步骤骤： 1 1、倒倒平平板板：牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培育育基基，高高氏氏I I号号培培育育基基，查查氏氏培培育育基基冷冷却却至至55-6055-

16、60时时，混混匀匀后后倒倒平平板板，牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培育育基基倒倒4 4皿皿，高高氏氏I I号号培培育育基基和和查查氏氏培育基各倒培育基各倒3 3皿。皿。 2 2、制制备备污污水水稀稀释释液液：10g10g土土样样，参参与与90ml90ml无无菌菌水水中中，在在三三角角瓶瓶中中振振摇摇20min20min。取取0.5ml 0.5ml 参参与与盛盛有有4.5ml4.5ml无无菌菌水的水的试试管中，以此管中，以此类类推，制成不同稀推，制成不同稀释释度。度。 3 3、涂涂布布：将将上上述述每每种种培培育育基基平平板板底底面面标标志志稀稀释释度度，然然后后用用无无菌菌吸吸管管从从最最后后三三

17、种种稀稀释释度度，即即10-410-4、10-510-5和和10-610-6的的试试管管中中汲汲取取0.1ml0.1ml对对号号放放入入平平板板上上，用用玻玻棒棒涂涂布。布。 4 4、培培育育：高高氏氏I I号号和和查查氏氏倒倒置置培培育育于于2828培培育育箱箱中中培培育育3-5days3-5days，牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨琼琼脂脂培培育育基基在在3737培培育育1-1-2days2days。 5 5、挑菌落：、挑菌落：转转至斜面，至斜面，检查检查能否一致，保管。能否一致，保管。 平板划平板划线线法：法： 1 1、倒倒平平板板，标标志志培培育育基基称称号号，编编号号和和实验实验日期。日期。

18、2 2、划、划线线方法方法 稀稀释释混合平板法混合平板法 ：1 1、先加菌、先加菌2 2、倒平板、倒平板时时留意培育基温度留意培育基温度3 3、混合均匀、混合均匀 微生物培育技微生物培育技术术1、斜面接种、斜面接种2、液体培育基接种、液体培育基接种3、穿刺接种、穿刺接种将已接种的斜面、半固体和液体培育基将已接种的斜面、半固体和液体培育基放置培育箱放置培育箱中培育将生中培育将生长长好的菌种用牛皮好的菌种用牛皮纸纸包好，包好，置置4冰箱中冰箱中保管。保管。察看菌落形状并察看菌落形状并记录序号 来源 大小 外形 边缘 颜色 外表 代谢物 种类实验五：放线菌及霉菌形状察看目的要求目的要求1.了解放了解

19、放线线菌、霉菌的形状察看的菌、霉菌的形状察看的原理。原理。2.学学习习并掌握察看放并掌握察看放线线菌、霉菌形菌、霉菌形状的操作方法。状的操作方法。3.初步了解放初步了解放线线菌、霉菌的形状特菌、霉菌的形状特征。征。原理原理放线菌是一群丝状，放线菌是一群丝状，G+G+的细菌，在气生菌的细菌，在气生菌丝末端构成孢子。丝末端构成孢子。细胞壁主要成分是肽聚糖，最适细胞壁主要成分是肽聚糖，最适pHpH与细菌与细菌类似。主要以孢子方式进展无性繁衍。类似。主要以孢子方式进展无性繁衍。其其DNA DNA 碱基组成中碱基组成中GCGC含量特别高。超越任含量特别高。超越任何知的细菌。何知的细菌。 许多临床运用的抗

20、生素都由链霉菌种产生。许多临床运用的抗生素都由链霉菌种产生。 放线菌放线菌(Actinomycetes)分生分生孢子子丝琼脂外脂外表表基内菌基内菌丝气生菌气生菌丝The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium 基内菌丝基内菌丝and aerial mycelium气生菌丝气生菌丝 with chains of conidiospores分生孢子分生孢子分生孢子丝分生孢子丝琼脂外琼脂外表表基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete c

21、olony showing the substrate mycelium基内菌丝基内菌丝 and aerial mycelium 气气生菌丝生菌丝with chains of conidiospores分生孢子分生孢子n n放放线菌生菌生长到一定到一定阶段，大部分气生菌段，大部分气生菌丝分化成分化成孢子子丝，经过横割分列的方式横割分列的方式产生生成串的分生成串的分生孢子。子。孢子子丝形状多形状多样，有直、，有直、弯曲、弯曲、钩状、螺旋状、状、螺旋状、轮生等多种形状。生等多种形状。孢子也有球形、子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等形、杆状和瓜子状等等。它等。它们的形状构造都是放的形状构造都是放线菌

22、分菌分类鉴定定的重要根据。的重要根据。 放放线菌的菌落早期菌的菌落早期绒状同状同细菌菌落月牙状菌菌落月牙状类似，后期构成似，后期构成孢子菌落呈子菌落呈粉状、枯燥，有各种粉状、枯燥，有各种颜色呈同心色呈同心圆放射状。放射状。链霉菌的各种链霉菌的各种孢子丝构造孢子丝构造链霉菌的分别链霉菌的分别 ： pH中性偏碱中性偏碱 喜干含水少喜干含水少 采用含各种无机盐的选择性培育基采用含各种无机盐的选择性培育基知放线菌可以产生500多种抗生素。大多数抗生素对不同的细菌有独特的疗效有50多种被实践运用Antibiotics放线菌放线菌Actinomycetes 霉菌 ( molds)n n是是是是丝丝状真菌的

23、状真菌的状真菌的状真菌的总总称称称称, , , ,即即即即“发发霉的真菌。通常指菌霉的真菌。通常指菌霉的真菌。通常指菌霉的真菌。通常指菌丝丝体比体比体比体比较较兴兴隆而又不隆而又不隆而又不隆而又不产产生大型子生大型子生大型子生大型子实实体的真菌。常在潮湿的气候下大体的真菌。常在潮湿的气候下大体的真菌。常在潮湿的气候下大体的真菌。常在潮湿的气候下大量生量生量生量生长长繁衍。繁衍。繁衍。繁衍。形状特征 Morphological characteristics n n属异养型真核生物，具有丝状或管状构造，单个分支称为菌丝。菌丝构成的网络状构造称为菌丝体。n n营养菌丝vegetative myce

24、lium：汲取营养n n气生菌丝aerial myceliumn n繁衍菌丝:孢子丝，进展繁衍。分类classificationn n有隔菌丝：有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质相互沟通。如曲霉和青霉。n n无隔菌丝：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，菌丝内有许多核，在生长过程中只需核的分裂和原生质体质量的添加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。(1)nonseptate(2)septate繁衍方式繁衍方式n n无性繁衍：无性繁衍：n n芽生芽生孢子子n n节孢子子n n孢囊囊孢子

25、子n n后垣后垣孢子子n n分生分生孢子子n n有性繁衍：有性繁衍：n n卵卵孢子子n n接合接合孢子子n n子囊子囊孢子子Sporangiospores 孢囊孢子Sporangiospores are formed within a sporangium 节孢子Arthrospores分生孢子分生孢子ConidiosporesConidiospores卵孢子卵孢子OosporesOosporesantheridiumoospheresoosporesoogoniumOospores formation接合接合孢子子 Zygospores Zygospores接合孢子接合孢子构成过程构成过程子

26、囊孢子子囊孢子 Ascospores Ascospores几种常几种常见霉菌霉菌属属主要特征主要特征分布分布作用与用途作用与用途根霉属根霉属菌丝无隔菌丝无隔, ,单细胞单细胞迅速蔓延迅速蔓延, ,有假根有假根, ,孢子囊呈黑色孢子囊呈黑色, ,产生孢子囊和接产生孢子囊和接合孢子合孢子常长在淀粉类食常长在淀粉类食品上如馒头、面品上如馒头、面包、甘薯等包、甘薯等能将淀粉转化为能将淀粉转化为糖，用于消费糖糖，用于消费糖化酶，酿造甜酒化酶，酿造甜酒等等曲霉属曲霉属菌丝分隔，分生菌丝分隔，分生孢子梗顶端膨大，孢子梗顶端膨大，顶囊上生辐射状顶囊上生辐射状小梗菌落疏松、小梗菌落疏松、颜色多样颜色多样空气、谷

27、物、土空气、谷物、土壤和各种有机物壤和各种有机物上上分解淀粉和蛋白分解淀粉和蛋白质才干强，用于质才干强，用于制曲、制醋、消制曲、制醋、消费柠檬酸、酶制费柠檬酸、酶制剂及糖化饲料等剂及糖化饲料等青霉属青霉属菌丝分隔，孢子菌丝分隔，孢子梗呈扫帚形，菌梗呈扫帚形，菌落由严密到疏松，落由严密到疏松，多呈蓝绿色多呈蓝绿色空气、土壤及物空气、土壤及物品上，腐烂的柑品上，腐烂的柑橘上更多橘上更多青霉素产生菌，青霉素产生菌，也用于制备农用也用于制备农用抗生素和发酵饲抗生素和发酵饲料料根霉 根霉的形状构造根霉的形状构造曲霉曲霉曲霉的形状构造曲霉的形状构造左左侧侧分生分生孢孢子梗具有一子梗具有一层层小梗；右小梗；

28、右侧侧分生分生孢孢子梗具子梗具 有二有二层层小梗小梗 青霉 青霉的形状构造青霉的形状构造 A A单轮单轮型型 B B非非对对称型称型 C C对对称二称二轮轮型型实验内容内容n人人们设计了各种培育和察看方法，了各种培育和察看方法，这些方法的主要目的是些方法的主要目的是为了尽能了尽能够坚持放持放线菌和霉菌自然生菌和霉菌自然生长形状下形状下的形状特征。本的形状特征。本实验采用插片法。采用插片法。插片法插片法:倒平板倒平板插片插片接种接种培育培育镜检镜检记录绘图记录绘图 压压印法印法:倒平板倒平板划划线线接种接种挑取菌落挑取菌落加盖加盖玻片玻片镜检镜检记录绘图记录绘图 埋片法埋片法:倒倒琼琼脂脂切槽切

29、槽接种接种培育培育镜检镜检记录绘图记录绘图 n n倒平板倒平板倒平板倒平板 将培育基熔化后，倒将培育基熔化后，倒将培育基熔化后，倒将培育基熔化后，倒10-1210-1210-1210-12毫升左右于毫升左右于毫升左右于毫升左右于灭灭菌培育皿菌培育皿菌培育皿菌培育皿内，凝固后运用内，凝固后运用内，凝固后运用内，凝固后运用.n n插片插片插片插片 将将将将灭灭菌的盖玻片以菌的盖玻片以菌的盖玻片以菌的盖玻片以45454545度角插入培育皿内的培育基度角插入培育皿内的培育基度角插入培育皿内的培育基度角插入培育皿内的培育基中，插入深中，插入深中，插入深中，插入深约为约为1/21/21/21/2或或或或1

30、/31/31/31/3。n n 接种与培育接种与培育接种与培育接种与培育 用接种用接种用接种用接种环环将菌种接种在盖玻片与将菌种接种在盖玻片与将菌种接种在盖玻片与将菌种接种在盖玻片与琼琼脂相接的沿脂相接的沿脂相接的沿脂相接的沿线线，放置放置放置放置28282828培育培育培育培育3 3 3 37 7 7 7天。天。天。天。n n 察看察看察看察看 培育后菌培育后菌培育后菌培育后菌丝丝体生体生体生体生长长在培育基及盖玻片上，小心用在培育基及盖玻片上，小心用在培育基及盖玻片上，小心用在培育基及盖玻片上，小心用镊镊子将盖玻片抽出，悄然擦去生子将盖玻片抽出，悄然擦去生子将盖玻片抽出，悄然擦去生子将盖玻

31、片抽出，悄然擦去生长较长较差的一面的差的一面的差的一面的差的一面的菌菌菌菌丝丝体，将生体，将生体，将生体，将生长长良好的菌良好的菌良好的菌良好的菌丝丝面子向的面子向的面子向的面子向的载载玻片，玻片，玻片，玻片，压压放于放于放于放于载载玻片上。直接在玻片上。直接在玻片上。直接在玻片上。直接在显显微微微微镜镜下察看。下察看。下察看。下察看。 关键步骤及本卷须知n n倒平板要厚一些，接种倒平板要厚一些，接种时划划线要密。要密。n n插片插片时要有一定角度并与划要有一定角度并与划线垂直。垂直。n n察看察看时，宜用略暗光，宜用略暗光线；先用低倍；先用低倍镜找到找到适当适当视野，改野，改换高倍高倍镜察看

32、。察看。 n n假假设用用0.1%0.1%美美蓝对培育后的盖玻片培育后的盖玻片进展染展染色后察看，效果会更好。色后察看，效果会更好。 思索思索题镜检时，他如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?他以为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么？ 实验实验六、菌种保藏六、菌种保藏 几种常用的保藏方法： 1、传代培育法 保藏的菌种经过斜面、穿刺或疱肉培育基用于厌氧细菌培育好后，置4C冰箱中存放，定期进展传代培育、再存放。 可用胶塞替代棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延伸保管期。 2、载体法 使生长适宜的微生物吸附在一定的载体上进展枯燥。 常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。 3

33、3、悬悬液法液法 将将细细菌、酵母菌菌、酵母菌细细胞胞悬悬浮在一定的溶液中保管。浮在一定的溶液中保管。 溶液包括蒸溶液包括蒸馏馏水、糖溶液、磷酸水、糖溶液、磷酸缓缓冲液、食冲液、食盐盐水等。水等。 4 4、冷、冷冻冻法法 使菌种一直存放在低温使菌种一直存放在低温环环境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。 此法关此法关键键是要抑制是要抑制细细胞的冷胞的冷冻损伤冻损伤。留意控制降温速率及。留意控制降温速率及维护剂维护剂的运用。的运用。 5 5、真空枯燥法、真空枯燥法 这类这类方法包括冷方法包括冷冻冻真空枯燥法和真空枯燥法和L L枯燥法。枯燥法。 冷冷冻冻真空枯燥法

34、是将要保藏的微生物真空枯燥法是将要保藏的微生物样样品先品先经经低温低温预冻预冻，然后在低温形状下，然后在低温形状下进进展减展减压压枯燥。枯燥。 L- L-枯燥法那么不需求低温枯燥法那么不需求低温预冻样预冻样品，只是使品，只是使样样品品维维持在持在101020C20C范范围围内内进进展展真空枯燥。真空枯燥。 操作方法操作方法 1 1、斜面保藏法、斜面保藏法 将菌种将菌种转转接在适宜固体斜面培育基上，待其接在适宜固体斜面培育基上，待其充分生充分生长长后，用牛皮后，用牛皮纸纸将棉塞部分包扎好将棉塞部分包扎好 棉棉塞塞换换成胶塞效果更好成胶塞效果更好 ，置，置4C4C冰箱中包藏。冰箱中包藏。 保藏保藏

35、时间时间依微生物的种依微生物的种类类而定。霉菌、放而定。霉菌、放线线菌及芽菌及芽孢孢菌保管菌保管2 24 4个月移种一次，酵母菌个月移种一次，酵母菌间间隔两个月，普通隔两个月，普通细细菌一个月，假菌一个月，假单单胞菌两周胞菌两周传传代一次。代一次。 此法此法优优点是操作点是操作简单简单、运用方便，缺陷是保、运用方便，缺陷是保藏藏时间时间短、易被短、易被污污染。染。 2、液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。 将试管直立，置低温或室温下保管。 此法适用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏12年，普通细菌也可保藏1

36、年左右。 3、穿刺保藏法 按穿刺接种方式培育菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4冰箱存放。 4 4、砂土管保藏法、砂土管保藏法 1 1 河砂河砂处处置置 取河砂假取河砂假设设干参与干参与盐盐酸酸10% 10% ，加，加热热煮沸煮沸30min30min除去有机机除去有机机质质。倒去。倒去盐盐酸溶液，用自来水冲洗酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸至中性，最后一次用蒸镏镏水冲洗，烘干后用水冲洗，烘干后用4040目目筛筛子子过筛过筛，弃去粗，弃去粗颗颗粒，粒，备备用。用。 土壤土壤处处置置 取非耕作取非耕作层层不含腐殖不含腐殖质质的痩黄土或的痩黄土或红红土，加自来水浸泡洗土，加自来水浸泡洗涤涤数次，

37、直至中性。烘干后碾碎，数次，直至中性。烘干后碾碎，用用100100目目筛筛子子过筛过筛，粗，粗颗颗粒部分粒部分丢丢掉。掉。 (3) (3)砂土混合砂土混合 处处置妥当的河砂与土壤按置妥当的河砂与土壤按3 3：1 1的比例的比例掺掺合合( (或根据需求而用其他比例，甚至可全部作砂或土或根据需求而用其他比例，甚至可全部作砂或土) )均匀后，装入均匀后，装入10x100mm10x100mm的小的小试试管或安瓿管中，每管分装管或安瓿管中，每管分装1g1g左右，塞上棉塞，左右，塞上棉塞，进进展展灭灭菌菌( (通常通常采用采用间间歇歇灭灭菌菌2-32-3次次) )，最后烘干。，最后烘干。 (4) (4)无

38、菌无菌检查检查 每每1010支支砂砂土土管管随随机机抽抽1 1支支，将将砂砂土土倒倒入入肉肉汤汤培培育育基基中中，3030培培育育40h40h，假假设设发发现现有有微微生生物物生生长长，一一切切砂砂土土管管那那么么需需重重新新灭灭菌菌，再再作作无无菌菌实实验验，直至，直至证证明无菌后方可运用。明无菌后方可运用。 (5) (5)菌菌悬悬液的制液的制备备 取取生生长长强强壮壮的的新新颖颖斜斜面面菌菌种种，参参与与2-3ml2-3ml无无菌菌水水( (每每18x180mm 18x180mm 的的试试管管斜面菌种斜面菌种) )，用接种，用接种环环悄然将菌苔洗下，制成菌悄然将菌苔洗下，制成菌悬悬液。液。

39、 (6) (6)分装分装样样品品 每每支支砂砂土土管管( (注注明明标标志志后后) )参参与与0 05ml5ml菌菌悬悬液液( (刚刚刚刚使使砂砂土土润润湿湿为为宜宜) )， 用接种用接种针针拌匀。拌匀。 (7) (7)枯燥枯燥 将将装装有有菌菌悬悬液液的的砂砂土土管管放放入入枯枯燥燥器器内内，枯枯燥燥器器底底部部盛盛有有枯枯燥燥剂剂。用用真空真空泵泵抽干水分后火焰封口抽干水分后火焰封口( (也可用橡皮塞或棉塞塞住也可用橡皮塞或棉塞塞住试试管口管口) )。 (8) (8)保管保管 置置4 4冰冰箱箱或或室室温温枯枯燥燥处处，每每隔隔一一定定的的时时间间进进展展检检测测。此此法法多多用用于于产产

40、芽芽孢孢的的细细菌菌、产产生生孢孢子子的的霉霉菌菌和和放放线线菌菌。在在抗抗生生素素工工业业消消费费中中运运用用广广泛、泛、 效果效果较较好，可保管几年好，可保管几年时间时间，但，但对营对营养养细细胞效果不佳。胞效果不佳。 5 5、冷、冷冻冻真空枯燥法真空枯燥法 1 1 冻冻干管的干管的预备预备：中性硬制玻璃，烘干，：中性硬制玻璃，烘干，灭灭菌。菌。 2 2 菌种培育：菌种培育：细细菌芽菌芽孢孢零落；放，霉零落；放，霉孢孢子丰子丰满满。 3 3 维护剂维护剂的配制：配制，的配制：配制，灭灭菌，菌，检查检查 4 4 菌菌悬悬液的制液的制备备：2-3ml2-3ml维护剂维护剂 5 5 分装分装样样品：菌品：菌悬悬液每管液每管0.2ml0.2ml 6 6 预冻预冻：程序控温：程序控温仪仪降温降温 7 7 冷冷冻冻真空枯燥：真空枯燥：-50-50下抽真空下抽真空 8 8 取出取出样样品：品：轻轻敲松散即达敲松散即达标标 9 9 第二次枯燥：第二次枯燥： 1010 熔封熔封 1111 存活性存活性检测检测：抽取一管：抽取一管进进展存活性展存活性检查检查 (12 (12 保管：保管：44保管保管