临床微生物学检验：13-厌氧菌

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1、C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y厌氧菌厌氧菌病原生物学教研室病原生物学教研室 郭亚楠郭亚楠C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y一、概一、概 述述二、厌氧性细菌的检验二、厌氧性细菌的检验三、临床常见的厌氧菌三、临床常见的厌氧菌C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y( (一一) )

2、厌氧菌的概念、种类与分布厌氧菌的概念、种类与分布( (二二) ) 临床意义临床意义 一、一、 概概 述述C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y( (一一) ) 厌氧菌的概念、种类与分布厌氧菌的概念、种类与分布概念概念 厌氧菌（厌氧菌（anaerobic bacteriaanaerobic bacteria）是指一是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的细菌。才能生长的细菌。 疑难杂症：疑难杂症：“无菌性感染或脓肿无菌性感染或脓肿”、

3、“原因原因不明的发热不明的发热”，某些感染性疾病迁延不愈和反复，某些感染性疾病迁延不愈和反复发作。发作。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y种类种类 一类是有芽胞厌氧菌，另一类是无芽胞厌一类是有芽胞厌氧菌，另一类是无芽胞厌氧菌。氧菌。有芽胞厌氧菌只有一个菌属，即梭菌属，有芽胞厌氧菌只有一个菌属，即梭菌属，共共130130个种。个种。无芽胞厌氧菌已增至无芽胞厌氧菌已增至4040多个菌属，多个菌属，300300多个多个菌种和亚种；菌种和亚种；C CHHOONNG GQQI INNG G MME

4、 EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y对厌氧菌认识的进步对厌氧菌认识的进步 1.1.无芽胞厌氧菌种类数量均无芽胞厌氧菌种类数量均多于多于有芽胞厌氧菌，无有芽胞厌氧菌，无芽胞厌氧菌在临床厌氧菌标本检出率中约占芽胞厌氧菌在临床厌氧菌标本检出率中约占9O%9O%；2.2.厌氧菌分布十分广泛，是体内厌氧菌分布十分广泛，是体内正常菌群正常菌群的组成成的组成成员，多为条件致病菌；员，多为条件致病菌；3.3.厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染混合感染；4.4.厌氧菌对常用的氨基糖甙类抗生素耐药，而对厌氧菌对常用的氨基糖

5、甙类抗生素耐药，而对甲甲硝唑（灭滴灵）硝唑（灭滴灵）普遍敏感。普遍敏感。5.5.厌氧菌的分离鉴定较厌氧菌的分离鉴定较繁琐繁琐，目前国内大多医院尚，目前国内大多医院尚未开展此工作，而发达国家早已列为临床检验常规。未开展此工作，而发达国家早已列为临床检验常规。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y表表15-1 15-1 重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV

6、 VE ER RS SI IT TY Y 在人体正常菌群中厌氧菌占有绝对优势，在人体正常菌群中厌氧菌占有绝对优势，例如肠道菌群中厌氧菌与非厌氧菌（包括需氧例如肠道菌群中厌氧菌与非厌氧菌（包括需氧菌和兼性厌氧菌）的比例为菌和兼性厌氧菌）的比例为 ，即达即达 是厌氧菌，大肠杆菌等仅占是厌氧菌，大肠杆菌等仅占0.1%。每克。每克粪便含厌氧菌达粪便含厌氧菌达 个，皮肤、口腔、上呼个，皮肤、口腔、上呼吸道、女性生殖道的正常菌群中，也有大约吸道、女性生殖道的正常菌群中，也有大约 是厌氧菌。是厌氧菌。厌氧菌代谢产生的厌氧菌代谢产生的乙酸、乳酸乙酸、乳酸等能抑制病原菌等能抑制病原菌生长。其常作为生长。其常作为

7、条件致病菌条件致病菌而导致内源性感染。而导致内源性感染。1000：199.9%1000亿亿 80%90%C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y( (二二) ) 临床意义临床意义 比重大比重大; ; 脑脓肿、牙周脓肿、盆腔脓脑脓肿、牙周脓肿、盆腔脓肿等肿等80%80%以上是由厌氧菌引起的。其中一部以上是由厌氧菌引起的。其中一部分厌氧菌单独感染，大部分与需氧菌分厌氧菌单独感染，大部分与需氧菌混合混合感染感染。厌氧菌感染的条件厌氧菌感染的条件厌氧菌感染的临床特征厌氧菌感染的临床特征C CHHOON

8、NG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y1. 1. 厌氧菌感染的条件厌氧菌感染的条件（1 1）局部组织血供障碍（内伤）局部组织血供障碍（内伤）（2 2）皮肤黏膜屏障破坏（外伤）皮肤黏膜屏障破坏（外伤）（3 3）机体免疫力降低（疾病）机体免疫力降低（疾病）（4 4）菌群失调（药物）菌群失调（药物）C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y2. 2. 厌氧菌感染的临床及细菌学指征厌氧菌感染的临床及细菌学指征 凡有下

9、列情况者应怀疑有厌氧菌感染：凡有下列情况者应怀疑有厌氧菌感染：（1 1）感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀）感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音，是和坏死，皮下有捻发音，是产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌所引所引起感染的特征。起感染的特征。（2 2）发生在）发生在粘膜附近粘膜附近的感染，口腔、肠道、鼻咽的感染，口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等粘膜，均有大量厌氧菌寄生，这些腔、阴道等粘膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部份及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染。部份及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染。（3 3）深部外伤深部外伤如枪伤后，人或动物咬伤后的继发如枪伤后，人或动物咬伤后的继发感染，均

10、可能是厌氧菌感染。感染，均可能是厌氧菌感染。 （4 4）常规血培养阴性的细菌性心内膜炎等。）常规血培养阴性的细菌性心内膜炎等。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y（5 5）分泌物有）分泌物有恶臭恶臭，或为，或为暗血红色暗血红色，并在紫外光，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。（6 6）长期应用）长期应用氨基糖甙类氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例，抗生素治疗无效的病例，可能是厌氧菌感染。最近有可能是厌氧菌感染。最近有流产史流产史者，以及者，以及胃胃

11、肠手术肠手术后发生的感染。后发生的感染。（7 7）分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，）分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而而常规培养阴性者常规培养阴性者；或在液体及半固体培养基；或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y二、厌氧性细菌的检验二、厌氧性细菌的检验（一）（一） 标本的采集运送与处理标本的采集运送与处理（二）（二） 检验程序检验程序 （三）（三） 检验方法检验方法C CHHOONNG GQ

12、QI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y（一）（一） 标本的采集运送与处理标本的采集运送与处理 标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功养能否成功至关重要至关重要。 注意两点注意两点：标本不能被正常菌群所污染；标本不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。应尽量避免接触空气。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y此外还需注意：此外还需注意： 培养基要新鲜配置培养基要新鲜配置

13、 做耐氧试验：做耐氧试验：4-54-5，两种平板，三种环境，两种平板，三种环境 菌落太小，可用放大镜观察菌落太小，可用放大镜观察 胞外酶试验需要足够的菌液浓度胞外酶试验需要足够的菌液浓度C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y1. 1. 标本的采集方法标本的采集方法 液体标本：无菌操作抽取血液、关节液、液体标本：无菌操作抽取血液、关节液、心包液、腹腔液、胸腔积液和膀胱穿刺液等；心包液、腹腔液、胸腔积液和膀胱穿刺液等；两瓶。两瓶。 深部组织块，深部组织块，1ml1ml以下的粘稠标本：中以下的粘稠

14、标本：中耳炎、鼻炎、脑脓肿、宫内感染。耳炎、鼻炎、脑脓肿、宫内感染。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 下列标本无送检价值，不宜做下列标本无送检价值，不宜做厌氧菌培养厌氧菌培养： 鼻咽拭子；鼻咽拭子；齿龈拭子；齿龈拭子；痰和气管痰和气管抽取物；抽取物；胃和肠道内容物、肛拭；胃和肠道内容物、肛拭；接近接近皮肤和粘膜的分泌物；皮肤和粘膜的分泌物；褥疮溃疡及粘膜层褥疮溃疡及粘膜层表面；表面；排出的尿或导尿；排出的尿或导尿；阴道或子宫拭阴道或子宫拭子；子；前列腺分泌物。前列腺分泌物。C CHHO

15、ONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y表表1-2 1-2 不同部位标本采集法不同部位标本采集法标本来源标本来源收集方法收集方法封闭性脓肿封闭性脓肿妇女生殖道妇女生殖道下呼吸道分泌物下呼吸道分泌物胸腔胸腔组织组织尿道尿道窦道、子宫腔、窦道、子宫腔、深部创伤深部创伤针管抽取针管抽取后穹窿穿刺抽取后穹窿穿刺抽取 肺穿刺术肺穿刺术胸腔穿刺术胸腔穿刺术无菌外科切开无菌外科切开上阴部膀胱穿刺上阴部膀胱穿刺用静脉注射的塑料导管用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽吸穿入感染部位抽吸C CHHOONNG GQQI INNG

16、 G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 在紧急情况下，可用在紧急情况下，可用棉拭子取材棉拭子取材，并采，并采用适合的培养基传送，做厌氧菌培养，最理用适合的培养基传送，做厌氧菌培养，最理想是想是能取得组织标本能取得组织标本，因厌氧菌在组织中比，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长，而且组织标本可真实在渗出物中更易生长，而且组织标本可真实反映出感染过程的细菌学变化。反映出感染过程的细菌学变化。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y

17、2.2.标本运送中应尽量避免接触空气，标本运送中应尽量避免接触空气， 方法如下：方法如下：C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y1.1.无菌针筒运送法无菌针筒运送法 2.2.无氧小瓶运送法无氧小瓶运送法C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 3. 3. 棉拭运送法棉拭运送法 一般不用，因棉拭子中有空气一般不用，因棉拭子中有空气不利于厌氧菌生长。不利于厌氧菌生长。 4. 4. 大量液体标本运

18、送法大量液体标本运送法 装满标本瓶，即可驱装满标本瓶，即可驱除瓶中的空气，加盖密封即可运送。除瓶中的空气，加盖密封即可运送。 5. 5. 组织块运送法组织块运送法 组织块放在密封的厌氧罐中组织块放在密封的厌氧罐中运送。罐内放入一团用酸化硫酸铜浸泡过的钢丝绒。运送。罐内放入一团用酸化硫酸铜浸泡过的钢丝绒。 6. 6. 厌氧袋运送法。厌氧袋运送法。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 3.3.处理与观察处理与观察 标本送到实验室后，应在标本送到实验室后，应在2O2O30min30min内处理

19、完毕，内处理完毕，最迟不超过最迟不超过2h2h。如果一时来不及接种，可将标本置。如果一时来不及接种，可将标本置室温下保存。一般认为室温下保存。一般认为标本不要冷藏标本不要冷藏。 每次标本接种前均应观察标本的性状，包括标每次标本接种前均应观察标本的性状，包括标本的气味、是否脓性、带血或腐败物质等，厌氧菌本的气味、是否脓性、带血或腐败物质等，厌氧菌的代谢产物中有某些带气味的物质，对厌氧菌的鉴的代谢产物中有某些带气味的物质，对厌氧菌的鉴定很重要。均要求详细记录定很重要。均要求详细记录 。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER

20、 RS SI IT TY Y( (二二) ) 检验程序检验程序 见图见图 15-1 15-1 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y（三）（三） 检验方法检验方法1.1.直接镜检直接镜检 除血液外，各种标本均须在接种前摇除血液外，各种标本均须在接种前摇匀后，取匀后，取1 1滴均匀涂布在玻片上，然后作革滴均匀涂布在玻片上，然后作革兰染色、镜检，观察细菌的形态和染色性，兰染色、镜检，观察细菌的形态和染色性，并估计标本中大致的含菌量，用并估计标本中大致的含菌量，用+ +、+、+、+等符号作半定量记

21、录。等符号作半定量记录。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 肉眼观察及直接镜检的临床意义：肉眼观察及直接镜检的临床意义： 标本直接涂片染色镜检标本直接涂片染色镜检+ + 标本性状与气味标本性状与气味+ + 标本来源标本来源 = =初步鉴定和进一步鉴定起到指导作用。初步鉴定和进一步鉴定起到指导作用。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y例如：例如：标本发臭，镜检发现染色不均，形态奇特者，

22、常为厌氧菌标本发臭，镜检发现染色不均，形态奇特者，常为厌氧菌感染。感染。两端钝圆着色深，中间着色浅不均匀，且有空泡，长短不两端钝圆着色深，中间着色浅不均匀，且有空泡，长短不一的革兰阴性杆菌常为脆弱类杆菌。一的革兰阴性杆菌常为脆弱类杆菌。革兰阳性杆菌，无芽胞，呈乳酸气味者，可能是乳酸杆菌。革兰阳性杆菌，无芽胞，呈乳酸气味者，可能是乳酸杆菌。菌体分支，呈棒状，菌体分支，呈棒状，X,Y,VX,Y,V或栅栏状排列，且在脓汁中发或栅栏状排列，且在脓汁中发现黄色颗粒，有琥珀酸气味者，大多是放线菌。现黄色颗粒，有琥珀酸气味者，大多是放线菌。涂片是革兰阳性芽胞杆菌，肯定是梭状芽胞杆菌属的细菌涂片是革兰阳性芽胞

23、杆菌，肯定是梭状芽胞杆菌属的细菌涂片为革兰阳性芽胞杆菌，有异丁酸，异戊酸味，标本来涂片为革兰阳性芽胞杆菌，有异丁酸，异戊酸味，标本来自抗生素相关性肠炎，多是艰难梭菌。自抗生素相关性肠炎，多是艰难梭菌。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y2.2.分离培养分离培养 （1 1）初代培养：）初代培养： 临床标本中厌氧菌的初代临床标本中厌氧菌的初代培养比较困难，不仅要有一个与人体内感染部位培养比较困难，不仅要有一个与人体内感染部位相似的无氧环境，而且还要选择适当的相似的无氧环境，而且还要选择适当的培

24、养基培养基 。培养基选择培养基选择标本接种标本接种厌氧培养方法厌氧培养方法C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y培养基的选择培养基的选择强化血琼脂平板（强化血琼脂平板（BAPBAP）卡那卡那- -万古霉素冻溶血琼脂平板（万古霉素冻溶血琼脂平板（KVLBKVLB）产黑产黑色素普雷沃菌色素普雷沃菌七叶苷胆汁平板（七叶苷胆汁平板（BBEBBE）脆弱类杆菌组的细菌脆弱类杆菌组的细菌卵黄平板（卵黄平板（EYAEYA） 用于选择产气荚膜梭菌用于选择产气荚膜梭菌 。C CHHOONNG GQQI INNG

25、 G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY YCCFACCFA培养基培养基选择艰难梭菌。选择艰难梭菌。乳酸钠培养基乳酸钠培养基选择韦荣球菌。选择韦荣球菌。改良改良FMFM培养基培养基选择梭杆菌。选择梭杆菌。BSBS培养基培养基选择双歧杆菌等。选择双歧杆菌等。适用于需氧和微需氧菌生长的培养基等。适用于需氧和微需氧菌生长的培养基等。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 各种琼脂平板要求当天配制或放在充以各种琼脂平板要求当天配制或放在充以C

26、OCO2 2的容器内，置于的容器内，置于44冰箱保存，限在冰箱保存，限在1 12d2d内用完。内用完。 培养基用前培养基用前24h24h必须置于无氧环境，使必须置于无氧环境，使其其预还原预还原或使用预还原灭菌法（或使用预还原灭菌法（Prereduced Prereduced anaerobic steri1izedanaerobic steri1ized，PRASPRAS）制作的培）制作的培养基。养基。 液体培养基，在用前必须煮沸液体培养基，在用前必须煮沸10min10min，以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种。以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种。C CHHOONNG GQQI INNG G

27、MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 标本的接种标本的接种 每份标本需氧和厌氧培养。每份标本需氧和厌氧培养。 如如仅要求厌氧菌生长仅要求厌氧菌生长，除接种上述培养基，除接种上述培养基外，还应接种一种或几种选择性培养基，抑制外，还应接种一种或几种选择性培养基，抑制其它细菌生长，以利于厌氧菌生长。其它细菌生长，以利于厌氧菌生长。 同时应接种一支液体培养基同时应接种一支液体培养基增菌增菌用，如平用，如平板无菌生长时，可用液体培养重新转种。板无菌生长时，可用液体培养重新转种。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC

28、 CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 厌氧菌培养方法厌氧菌培养方法 常用方法有常用方法有厌氧罐法厌氧罐法、气袋法气袋法和和厌厌氧手套箱法氧手套箱法等。前两种方法比较简便，不等。前两种方法比较简便，不需特殊设备，适用于小型实验室，后一种需特殊设备，适用于小型实验室，后一种方法设备较为复杂而昂贵，但效果最佳。方法设备较为复杂而昂贵，但效果最佳。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y厌氧罐培养法厌氧罐培养法 本法类型较多，但都不外乎用一个可严密本法类型较多，但

29、都不外乎用一个可严密封闭的罐子，应用物理或化学方法造成无氧环封闭的罐子，应用物理或化学方法造成无氧环境。境。 常用方法有冷触媒法和抽气换气法、钢末常用方法有冷触媒法和抽气换气法、钢末法等。法等。 冷触媒法、钢末法较为简便、安全；抽气冷触媒法、钢末法较为简便、安全；抽气换气法比较可靠。换气法比较可靠。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y图图1-3 1-3 厌氧罐法厌氧罐法C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS

30、 SI IT TY Y 以上介绍的厌氧罐培养法，都应用厌以上介绍的厌氧罐培养法，都应用厌氧指示剂检查其罐内是否为无氧状态，一氧指示剂检查其罐内是否为无氧状态，一般使用般使用美蓝指示剂美蓝指示剂，无氧为白色，有氧为，无氧为白色，有氧为蓝色。蓝色。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y气袋法气袋法 本法原理与冷触媒法相同，只是将厌氧本法原理与冷触媒法相同，只是将厌氧罐用无毒、透明的塑料袋代替，其中有产生罐用无毒、透明的塑料袋代替，其中有产生氢气和二氧化碳的安瓿一支，已还原成美白氢气和二氧化碳的安

31、瓿一支，已还原成美白的安瓿一支，袋内放钯催化剂，每一塑料袋的安瓿一支，袋内放钯催化剂，每一塑料袋内可放入内可放入1 1一一2 2个平板。个平板。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 厌氧手套箱培养法厌氧手套箱培养法 厌氧手套箱（厌氧手套箱（anaerobic g1ove boxanaerobic g1ove box）是迄）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。一。厌氧手套箱（图厌氧手套箱（图1-41-4）的问世，大幅度地提）的问世，大幅度地提

32、高了厌氧菌的阳性检出率高了厌氧菌的阳性检出率 。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y图图1 14 4厌氧手套箱的外形与结构厌氧手套箱的外形与结构C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 其它培养法其它培养法 适用于基层实验室中应用。如平皿焦性适用于基层实验室中应用。如平皿焦性没食子酸法、庖肉基法、生物耗氧法、液体没食子酸法、庖肉基法、生物耗氧法、液体培养基法等培养基法等 。 除某些脆弱类杆

33、菌和产气荚膜梭菌外，除某些脆弱类杆菌和产气荚膜梭菌外，大多数厌氧菌的初代培养生长较慢。故厌氧大多数厌氧菌的初代培养生长较慢。故厌氧培养在培养在3737至少应培养至少应培养48h48h。如疑为放线菌。如疑为放线菌则应延长则应延长727296h96h。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y（2 2） 次代培养和厌氧菌的确定次代培养和厌氧菌的确定 标本经标本经48h48h初代培养后，用放大镜观察初代培养后，用放大镜观察平板上的菌落性状。平板上的菌落性状。 每个平板挑选每个平板挑选5 5个不同性状菌

34、落，每个个不同性状菌落，每个菌落分别接种菌落分别接种2 23 3个平板，每个平板划分个平板，每个平板划分4 46 6个区，分别作几个菌落的次代培养。然个区，分别作几个菌落的次代培养。然后分别放入有氧、无氧和含后分别放入有氧、无氧和含5%5%1O%1O%二氧化二氧化碳环境中培养碳环境中培养48h48h。 确定需氧菌、兼性厌氧菌、二氧化碳菌确定需氧菌、兼性厌氧菌、二氧化碳菌和专性厌氧菌。和专性厌氧菌。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y3 3 鉴定试验鉴定试验 可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、

35、菌可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。步鉴定。 最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物（气液相色谱法）等项检查。有条件者，产物（气液相色谱法）等项检查。有条件者，尚可进行尚可进行PCRPCR、基因探针技术进行鉴定。、基因探针技术进行鉴定。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y4 4检验结果分析与报告检验结果分析与报告 根据革兰染色镜检，菌落性状、耐氧试根据革兰染色镜检，菌落性

36、状、耐氧试验及药敏试验若发现厌氧菌可初步报告：验及药敏试验若发现厌氧菌可初步报告：“检出厌氧菌，形似检出厌氧菌，形似菌菌”； 再根据生化反应及终末代谢产物作最终再根据生化反应及终末代谢产物作最终报告：报告：“分离鉴定出分离鉴定出菌菌”，“药物敏药物敏感试验：感试验：”。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y三、临床常见的厌氧菌三、临床常见的厌氧菌（一）（一） 厌氧性球菌厌氧性球菌 （二）（二） 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌革兰阴性无芽胞厌氧杆菌（三）（三） 革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧

37、杆菌 （四）（四） 梭状芽胞杆菌属梭状芽胞杆菌属C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y（一）（一） 厌氧性球菌厌氧性球菌 G GC C：主要包括：主要包括消化球菌属消化球菌属（黑色消化黑色消化球菌球菌Peptococcus nigerPeptococcus niger）和）和消化链球菌属消化链球菌属（Peptostreptococcus anarobiusPeptostreptococcus anarobius）等等9 9个种。个种。 G GC C：主要包括：主要包括韦荣球菌属韦荣球菌属（V

38、eillonellaVeillonella）、）、氨基酸球菌属氨基酸球菌属（AcidaminococcusAcidaminococcus）和）和巨球菌属巨球菌属（MegasphaeraMegasphaera）。）。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y临床意义临床意义 黑色消化球菌和消化链球菌在临床上黑色消化球菌和消化链球菌在临床上可引起人体各部组织和器官的化脓性感染，可引起人体各部组织和器官的化脓性感染，常与其它细菌混合感染。常与其它细菌混合感染。 韦荣球菌致病力不强，为条件致病菌。韦荣球

39、菌致病力不强，为条件致病菌。临床标本可采自软组织脓肿和血液。大多见临床标本可采自软组织脓肿和血液。大多见于混合感染。于混合感染。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y（二）（二） 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌是一大群不形革兰阴性无芽胞厌氧杆菌是一大群不形成芽胞的厌氧杆菌，种类较多，包括类杆菌成芽胞的厌氧杆菌，种类较多，包括类杆菌属、普雷沃菌属、卟啉单胞菌（紫单胞菌属）属、普雷沃菌属、卟啉单胞菌（紫单胞菌属）和梭杆菌属等。它们是人体和梭杆菌属等。它们是人

40、体正常菌群正常菌群的重要的重要组成成员，部分菌株可作为组成成员，部分菌株可作为条件致病菌条件致病菌，引，引起厌氧菌感染。起厌氧菌感染。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y临床意义：临床意义： 类杆菌类杆菌常寄生于人的口腔、肠道和女性常寄生于人的口腔、肠道和女性生殖道，是一种条件致病菌，主要引起内源生殖道，是一种条件致病菌，主要引起内源性感染。性感染。 其中脆弱类杆菌占临床厌氧菌分离株的其中脆弱类杆菌占临床厌氧菌分离株的2525，占类杆菌分离株的，占类杆菌分离株的5050，居临床厌氧，居临床

41、厌氧菌分离株首位。脆弱类杆菌也可引起女性生菌分离株首位。脆弱类杆菌也可引起女性生殖系统、胸腔及颅内感染。殖系统、胸腔及颅内感染。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 产黑色素普雷沃菌产黑色素普雷沃菌主要寄居在正常人体主要寄居在正常人体的口腔、女性生殖道等部位，组成这些部位的口腔、女性生殖道等部位，组成这些部位中的正常菌群，仅次于脆弱类杆菌。中的正常菌群，仅次于脆弱类杆菌。 本属菌群可单独引起感染，但更常见与其本属菌群可单独引起感染，但更常见与其它厌氧菌、需氧菌或兼性厌氧菌引起的混合它厌氧菌

42、、需氧菌或兼性厌氧菌引起的混合感染。女性生殖道及口腔感染较为多见。感染。女性生殖道及口腔感染较为多见。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 卟啉单胞菌属卟啉单胞菌属主要分布于人类口腔、泌主要分布于人类口腔、泌尿生殖道和肠道，在尿生殖道和肠道，在正常人体的检出率低正常人体的检出率低。 近年来发现动物源性紫单胞菌在被动物近年来发现动物源性紫单胞菌在被动物咬伤的人体感染者中发现，咬伤的人体感染者中发现， 从不同类型临床感染者的口腔、胸腔、从不同类型临床感染者的口腔、胸腔、皮肤、软组织、阴道、阑尾

43、的病灶中分离出。皮肤、软组织、阴道、阑尾的病灶中分离出。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 核梭杆菌核梭杆菌在临床感染中最常见，在口腔、在临床感染中最常见，在口腔、生殖器、胃肠道和上呼吸道中被发现。生殖器、胃肠道和上呼吸道中被发现。 它可引起咽炎、扁桃体炎、中耳炎、上它可引起咽炎、扁桃体炎、中耳炎、上颌窦炎、龈炎和牙周炎，有时并发单核细胞颌窦炎、龈炎和牙周炎，有时并发单核细胞增多症。增多症。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI

44、IV VE ER RS SI IT TY Y（三）革兰阳性无芽胞厌氧杆菌（三）革兰阳性无芽胞厌氧杆菌 本组细菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌本组细菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌(anaerobic nonsporeforming Gram-positive (anaerobic nonsporeforming Gram-positive bacilli)bacilli)在临床厌氧菌中约占在临床厌氧菌中约占1515。临床常见的有。临床常见的有丙酸杆菌属、优杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属、丙酸杆菌属、优杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属、蛛网菌属和放线菌属。蛛网菌属和放线菌属。 厌氧菌中，革兰阳性无芽胞杆菌有厌氧菌

45、中，革兰阳性无芽胞杆菌有6 6个属，几个属，几十个菌种，鉴定不易。十个菌种，鉴定不易。Bailer(1986)Bailer(1986)认为首先应该认为首先应该用气液相色谱法（用气液相色谱法（GLCGLC），根据其代谢产物不同，定），根据其代谢产物不同，定出是什么属，初步结果如表出是什么属，初步结果如表1-31-3。 在基本定属后，再根据各属的生化反应定种。在基本定属后，再根据各属的生化反应定种。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y表表1-3 1-3 用用GLCGLC（气液相色谱法）对气液相

46、色谱法）对革兰阳性无芽胞厌氧杆菌定属革兰阳性无芽胞厌氧杆菌定属C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y临床意义：临床意义： 痤疮丙酸杆菌痤疮丙酸杆菌是皮肤上的优势菌群，是皮肤上的优势菌群，存在于正常皮肤的毛囊与汗腺中，能使皮存在于正常皮肤的毛囊与汗腺中，能使皮脂中的类脂形成长链脂肪酸，刺激局部引脂中的类脂形成长链脂肪酸，刺激局部引起皮脂管的梗阻，与痤疮和酒渣鼻有关。起皮脂管的梗阻，与痤疮和酒渣鼻有关。 痤疮丙酸杆菌在植入修复物或器械引痤疮丙酸杆菌在植入修复物或器械引起的感染中也有重要作用，对原

47、有心瓣膜起的感染中也有重要作用，对原有心瓣膜损伤者可引起心内膜炎。损伤者可引起心内膜炎。C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 优杆菌优杆菌是人和动物口腔与肠道正常菌是人和动物口腔与肠道正常菌群的组成成员，对机体有营养、生物拮抗和群的组成成员，对机体有营养、生物拮抗和维持肠道微生态学平衡等功能。维持肠道微生态学平衡等功能。 少数菌种与其它厌氧菌或兼性厌氧菌造少数菌种与其它厌氧菌或兼性厌氧菌造成混合感染，引起人体心内膜炎等疾病。成混合感染，引起人体心内膜炎等疾病。C CHHOONNG GQQI

48、 INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 双歧杆菌属（双歧杆菌属（BifidobacteriumBifidobacterium）中的中的细菌是人和动物肠道内的重要细菌是人和动物肠道内的重要生理菌群生理菌群。它。它在体内起到调节和维持人体微生态平衡的重在体内起到调节和维持人体微生态平衡的重要作用。要作用。 它能合成人体所必需的多种维生素等营它能合成人体所必需的多种维生素等营养物质，能拮抗多种肠道病原微生物，有抗养物质，能拮抗多种肠道病原微生物，有抗感染作用，增强机体的免疫力，抗肿瘤，调感染作用，增强机体的免疫力，抗肿瘤，调节

49、肠道菌群关系，起到营养保健、抗衰老与节肠道菌群关系，起到营养保健、抗衰老与延年益寿、控制内毒素血症、提高人体对放延年益寿、控制内毒素血症、提高人体对放射线的耐受力等不可估量的功能。射线的耐受力等不可估量的功能。 C CHHOONNG GQQI INNG G MME EDDI IC CA AL L UUNNI IV VE ER RS SI IT TY Y 乳杆菌乳杆菌是脊椎动物消化道、阴道的是脊椎动物消化道、阴道的正常共生菌，对致病菌的繁殖有抑制作用。正常共生菌，对致病菌的繁殖有抑制作用。也广泛应用于乳制品或发酵饲料。也广泛应用于乳制品或发酵饲料。 乳酶生（乳酶生（LactasinumLactasinum）是一种活的乳）是一种活的乳酸菌制剂。酸菌制剂。 口腔乳杆菌与龋齿的形成有关。口腔乳杆菌与龋齿的形成有关。