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1、第六章第六章 食品中化学毒物的致突食品中化学毒物的致突变作用变作用一些基本概念 高产大豆高产大豆 高产青霉菌株高产青霉菌株大南瓜大南瓜太空椒（左）太空椒（左）有有利利的的突突变变白白化化病病患患者者有有害害的的突突变变白白化化玉玉米米苗苗畸畸形形的的雏雏鸭鸭人人类类的的多多指指 大多数基因突变对生物体大多数基因突变对生物体是有害的，只有少数是有利的，是有害的，只有少数是有利的，有些既无害也无益。有些既无害也无益。致致突变作用突变作用：是外来因素，特别是化学因子引是外来因素，特别是化学因子引起细胞核中的遗传物质发生改变的能力，而且起细胞核中的遗传物质发生改变的能力，而且这种改变可随同细胞的分裂过
2、程而遗传。这种改变可随同细胞的分裂过程而遗传。( (诱诱变作用变作用) )突变突变是致突变作用的后果。是致突变作用的后果。能引起突变的物质叫能引起突变的物质叫致突变物致突变物。3 3 3 3、染色体与基因有着平行的关系染色体与基因有着平行的关系染色体与基因有着平行的关系染色体与基因有着平行的关系 “爱美之心，人皆有之爱美之心，人皆有之”随着整容医疗水平的的随着整容医疗水平的的日臻完善，人们可以根据自己的喜好，日臻完善，人们可以根据自己的喜好，“制造制造”美丽，雕塑形体。美丽，雕塑形体。“人造美女人造美女”结婚后所生的孩结婚后所生的孩子一定会像她一样的美丽吗？子一定会像她一样的美丽吗？中国第一位
3、人造美女中国第一位人造美女化学毒物致突变的类型化学毒物致突变的类型 化学毒物致突变作用的机制及后果化学毒物致突变作用的机制及后果 研究化学毒物致突变作用的方法研究化学毒物致突变作用的方法 第六章第六章 食品中化学毒物的致突变作用食品中化学毒物的致突变作用 基因突变染色体畸变非整倍体和多倍体 第一节第一节 化学毒物致突变的类型化学毒物致突变的类型 突突 变变基因突变基因突变染色体数目变化染色体数目变化碱基置换碱基置换移码突变移码突变 密码子插入或丢失密码子插入或丢失转转 换换颠颠 换换碱基插入碱基插入碱基丢失碱基丢失非整倍体非整倍体多倍性多倍性染色体畸变染色体畸变缺失缺失、断片断片重重 复复倒倒
4、 位位易易 位位一一、基因突变基因突变一一、基因突变基因突变一一、基因突变基因突变 根据碱基置换产生的后果不同（即对多肽链上氨基根据碱基置换产生的后果不同（即对多肽链上氨基酸序列产生的影响不同），又可分为：酸序列产生的影响不同），又可分为： 同义突变同义突变 错义突变错义突变 无义突变无义突变 终止密码突变终止密码突变 同义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换同义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换同义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换同义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换后，密码子的意义没有改变，在合成多肽链时仍插入相同后，密码子的意义没有改变，在
5、合成多肽链时仍插入相同后，密码子的意义没有改变，在合成多肽链时仍插入相同后，密码子的意义没有改变，在合成多肽链时仍插入相同的氨基酸，即虽有碱基的改变，但不伴随氨基酸的变化，的氨基酸，即虽有碱基的改变，但不伴随氨基酸的变化，的氨基酸，即虽有碱基的改变，但不伴随氨基酸的变化，的氨基酸，即虽有碱基的改变，但不伴随氨基酸的变化，此种变化成为同义突变。此种变化成为同义突变。此种变化成为同义突变。此种变化成为同义突变。 一个氨基酸一般有一个氨基酸一般有一个氨基酸一般有一个氨基酸一般有2 26 6个密码子，丝氨酸有个密码子，丝氨酸有个密码子，丝氨酸有个密码子，丝氨酸有4 4个。个。个。个。错义突变：当三联密
6、码子中的一个碱基被另一个碱基置换错义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换错义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换错义突变：当三联密码子中的一个碱基被另一个碱基置换后，密码子的意义发生了改变，在合成多肽链时编码出了后，密码子的意义发生了改变，在合成多肽链时编码出了后，密码子的意义发生了改变，在合成多肽链时编码出了后，密码子的意义发生了改变，在合成多肽链时编码出了另一个氨基酸。即由于碱基置换使某一氨基酸的密码子变另一个氨基酸。即由于碱基置换使某一氨基酸的密码子变另一个氨基酸。即由于碱基置换使某一氨基酸的密码子变另一个氨基酸。即由于碱基置换使某一氨基酸的密码子变成了另一个氨基酸的
7、密码子，此种变化为错义突变。成了另一个氨基酸的密码子，此种变化为错义突变。成了另一个氨基酸的密码子，此种变化为错义突变。成了另一个氨基酸的密码子，此种变化为错义突变。无义突变：由于碱基置换，使无义突变：由于碱基置换，使无义突变：由于碱基置换，使无义突变：由于碱基置换，使mRNAmRNA上的一个密码子变成终上的一个密码子变成终上的一个密码子变成终上的一个密码子变成终止密码子（无义密码子），若这个密码子出现在基因中间，止密码子（无义密码子），若这个密码子出现在基因中间，止密码子（无义密码子），若这个密码子出现在基因中间，止密码子（无义密码子），若这个密码子出现在基因中间，就不能继续为氨基酸编码，使
8、翻译过程到此终止，肽链的延就不能继续为氨基酸编码，使翻译过程到此终止，肽链的延就不能继续为氨基酸编码，使翻译过程到此终止，肽链的延就不能继续为氨基酸编码，使翻译过程到此终止，肽链的延长提前结束。长提前结束。长提前结束。长提前结束。 终止密码子：终止密码子：终止密码子：终止密码子：UAGUAG，UAAUAA，UGAUGA终止密码突变：碱基置换使终止密码突变：碱基置换使终止密码突变：碱基置换使终止密码突变：碱基置换使mRNAmRNA上的终止密码子变成一个上的终止密码子变成一个上的终止密码子变成一个上的终止密码子变成一个氨基酸密码子，其结果是使合成的肽链延长到第二个终止密氨基酸密码子，其结果是使合成
9、的肽链延长到第二个终止密氨基酸密码子，其结果是使合成的肽链延长到第二个终止密氨基酸密码子，其结果是使合成的肽链延长到第二个终止密码时才结束。码时才结束。码时才结束。码时才结束。 终止密码子：终止密码子：终止密码子：终止密码子：UAGUAG，UAAUAA，UGAUGA一一、基因突变基因突变二二、染色体畸变染色体畸变三三、非整倍体与多倍体非整倍体与多倍体第二节第二节第二节第二节 化学毒物致突变作用的机制及后果化学毒物致突变作用的机制及后果化学毒物致突变作用的机制及后果化学毒物致突变作用的机制及后果 DNA损伤细胞分裂过程的改变突变的后果DNA合成修复酶系的作用1、碱基损伤碱基损伤一、一、DNADN
10、A损伤损伤 1、碱基损伤碱基损伤一、一、DNADNA损伤损伤 烷化剂是指化学性质活泼，能提供烷基使蛋白质和烷化剂是指化学性质活泼，能提供烷基使蛋白质和烷化剂是指化学性质活泼，能提供烷基使蛋白质和烷化剂是指化学性质活泼，能提供烷基使蛋白质和DNADNADNADNA等大分子物质发生烷基化的一类化合物。等大分子物质发生烷基化的一类化合物。等大分子物质发生烷基化的一类化合物。等大分子物质发生烷基化的一类化合物。 烷化剂种类很多，如硫芥，氮芥，环氧乙烷等。烷化剂种类很多，如硫芥，氮芥，环氧乙烷等。烷化剂种类很多，如硫芥，氮芥，环氧乙烷等。烷化剂种类很多，如硫芥，氮芥，环氧乙烷等。 烷化剂引起基因突变的机
11、制较复杂，既可引起碱烷化剂引起基因突变的机制较复杂，既可引起碱烷化剂引起基因突变的机制较复杂，既可引起碱烷化剂引起基因突变的机制较复杂，既可引起碱基置换，又可引起移码突变，其致突变性很强。基置换，又可引起移码突变，其致突变性很强。基置换，又可引起移码突变，其致突变性很强。基置换，又可引起移码突变，其致突变性很强。 烷化剂引起突变的主要方式：烷化剂引起突变的主要方式：烷化剂引起突变的主要方式：烷化剂引起突变的主要方式： 1. 1. 1. 1. 改变碱基配对的专一性（碱基改造剂作用）改变碱基配对的专一性（碱基改造剂作用）改变碱基配对的专一性（碱基改造剂作用）改变碱基配对的专一性（碱基改造剂作用）
12、2. 2. 2. 2. 引起引起引起引起 DNA DNA DNA DNA 脱嘌呤脱嘌呤脱嘌呤脱嘌呤平面大分子嵌入平面大分子嵌入DNADNA链链 有些大分子能以静电吸附形式嵌入有些大分子能以静电吸附形式嵌入DNADNA单链的碱单链的碱基之间或基之间或DNADNA双螺旋结构的相邻多核苷酸链之间，双螺旋结构的相邻多核苷酸链之间，称为嵌入剂。称为嵌入剂。平面大分子嵌入平面大分子嵌入DNADNA链造成移码突变。链造成移码突变。 一、一、DNADNA损伤损伤 1、碱基损伤碱基损伤嵌入物：具有嵌入嵌入物：具有嵌入嵌入物：具有嵌入嵌入物：具有嵌入 DNA DNA 双螺旋结构中相邻多核苷酸链之间双螺旋结构中相邻
13、多核苷酸链之间双螺旋结构中相邻多核苷酸链之间双螺旋结构中相邻多核苷酸链之间或或或或 DNA DNA 单链之间的结构特性的物质。单链之间的结构特性的物质。单链之间的结构特性的物质。单链之间的结构特性的物质。 常见的嵌入物：多环芳烃的环氧化物，吖啶（常见的嵌入物：多环芳烃的环氧化物，吖啶（常见的嵌入物：多环芳烃的环氧化物，吖啶（常见的嵌入物：多环芳烃的环氧化物，吖啶（dngdng）类化合物，联苯胺等。其共同的结构特征为：平面多环状结类化合物，联苯胺等。其共同的结构特征为：平面多环状结类化合物，联苯胺等。其共同的结构特征为：平面多环状结类化合物，联苯胺等。其共同的结构特征为：平面多环状结构，一般是三
14、个环，长度极为相似约构，一般是三个环，长度极为相似约构，一般是三个环，长度极为相似约构，一般是三个环，长度极为相似约 6.86.8 。 3.4AGGATCCT解解 链链AGGAAGGAAGGATCACT插入一个插入一个碱基碱基嵌 入嵌嵌 入入AGGA模板链模板链嵌 入嵌嵌 入入AGGATCT缺失一个缺失一个碱基碱基碱基类似物取代碱基类似物取代 与碱基非常相似的化学物，称碱基类似物。与碱基非常相似的化学物，称碱基类似物。 碱基类似物能在碱基类似物能在S S期中可与天然碱基竞争，并期中可与天然碱基竞争，并取代其位置。取代其位置。如：如：5-5-溴尿嘧啶溴尿嘧啶(5BU)(5BU)的氢键特的氢键特性
15、与性与 T T 相同，故可替代相同，故可替代T T与与A A 配对。配对。A AT T A A5BU5BU一、一、DNADNA损伤损伤 1、碱基损伤碱基损伤致突变物改变或破坏碱基的化学结构致突变物改变或破坏碱基的化学结构有些化学物可对碱基产生有些化学物可对碱基产生氧化作用氧化作用，从而破，从而破坏或改变碱基的结构，有时还引起链断裂。坏或改变碱基的结构，有时还引起链断裂。 有些化学物质可在体内形成有机过氧化物或有些化学物质可在体内形成有机过氧化物或自由基自由基，可间接使嘌呤的化学结构破坏，容易，可间接使嘌呤的化学结构破坏，容易出现出现DNADNA链断裂。链断裂。一、一、DNADNA损伤损伤 1、
16、碱基损伤碱基损伤 碱基化学结构改变后，使碱基配对异常，导致碱基置换。碱基化学结构改变后，使碱基配对异常，导致碱基置换。碱基化学结构改变后，使碱基配对异常，导致碱基置换。碱基化学结构改变后，使碱基配对异常，导致碱基置换。 常见的碱基改造剂有：羟胺，亚硝酸盐，烷化剂常见的碱基改造剂有：羟胺，亚硝酸盐，烷化剂常见的碱基改造剂有：羟胺，亚硝酸盐，烷化剂常见的碱基改造剂有：羟胺，亚硝酸盐，烷化剂 如：在亚硝酸盐作用下氧化脱氨基如：在亚硝酸盐作用下氧化脱氨基如：在亚硝酸盐作用下氧化脱氨基如：在亚硝酸盐作用下氧化脱氨基 C C U U A A HXHX ( (次黄嘌呤次黄嘌呤次黄嘌呤次黄嘌呤) ) 如：如：
17、如：如：C C 在羟胺作用下，可生成在羟胺作用下，可生成在羟胺作用下，可生成在羟胺作用下，可生成 6-6-羟胺基胞嘧啶羟胺基胞嘧啶羟胺基胞嘧啶羟胺基胞嘧啶(C*)(C*)，而，而，而，而 6-6-羟胺基胞嘧啶的氢键特性与羟胺基胞嘧啶的氢键特性与羟胺基胞嘧啶的氢键特性与羟胺基胞嘧啶的氢键特性与 T T 相同，故可替代相同，故可替代相同，故可替代相同，故可替代 T T 与与与与 A A 配对。配对。配对。配对。 A AT AT AC*C*2 2、DNADNA链受损链受损 二、细胞分裂过程的改变二、细胞分裂过程的改变非整倍性和多倍体的产生是由于染色体分离异常所至非整倍性和多倍体的产生是由于染色体分离
18、异常所至非整倍性和多倍体的产生是由于染色体分离异常所至非整倍性和多倍体的产生是由于染色体分离异常所至1.1.1.1.非整倍体是由于正常细胞未分裂而产生的。原因是由于细非整倍体是由于正常细胞未分裂而产生的。原因是由于细非整倍体是由于正常细胞未分裂而产生的。原因是由于细非整倍体是由于正常细胞未分裂而产生的。原因是由于细胞在第一次减数分裂时同源染色体不分离，或在第二次减胞在第一次减数分裂时同源染色体不分离，或在第二次减胞在第一次减数分裂时同源染色体不分离，或在第二次减胞在第一次减数分裂时同源染色体不分离，或在第二次减数分裂或有丝分裂过程中，姐妹染色单体不分离而形成。数分裂或有丝分裂过程中，姐妹染色单
19、体不分离而形成。数分裂或有丝分裂过程中，姐妹染色单体不分离而形成。数分裂或有丝分裂过程中，姐妹染色单体不分离而形成。2. 2. 多倍体涉及整个染色体组。在有丝分裂过程中，若染色体己多倍体涉及整个染色体组。在有丝分裂过程中，若染色体己多倍体涉及整个染色体组。在有丝分裂过程中，若染色体己多倍体涉及整个染色体组。在有丝分裂过程中，若染色体己正常复制，但由于纺锤体受损，染色单体不能分离到子细正常复制，但由于纺锤体受损，染色单体不能分离到子细正常复制，但由于纺锤体受损，染色单体不能分离到子细正常复制，但由于纺锤体受损，染色单体不能分离到子细胞中，这时染色体数目就会加倍，形成四倍体。减数分裂胞中，这时染色
20、体数目就会加倍，形成四倍体。减数分裂胞中，这时染色体数目就会加倍，形成四倍体。减数分裂胞中，这时染色体数目就会加倍，形成四倍体。减数分裂的异常也可使配子形成二倍体，若二倍体的配子受精，可的异常也可使配子形成二倍体，若二倍体的配子受精，可的异常也可使配子形成二倍体，若二倍体的配子受精，可的异常也可使配子形成二倍体，若二倍体的配子受精，可形成多倍体的受精卵。形成多倍体的受精卵。形成多倍体的受精卵。形成多倍体的受精卵。二、细胞分裂过程的改变二、细胞分裂过程的改变三三、突变的后果、突变的后果1、生殖细胞突变生殖细胞突变1、生殖细胞突变生殖细胞突变不同发育阶段的生殖细胞发生突变的不同发育阶段的生殖细胞发
21、生突变的意义不同意义不同 精原干细胞、卵原细胞和休止期的精原干细胞、卵原细胞和休止期的卵母细胞如果发卵母细胞如果发生生突变，就存在整个生育年龄将排出突变，就存在整个生育年龄将排出突变生殖细胞突变生殖细胞的的可能性。可能性。 精原干细胞以后的发育阶段或正在成熟与成熟精原干细胞以后的发育阶段或正在成熟与成熟了的了的卵母细胞如果发生突变，那么仅在很短卵母细胞如果发生突变，那么仅在很短一段时间一段时间中中（男性（男性8周左右，女性周左右，女性1次排卵周期），次排卵周期），才有排出才有排出突突变生殖细胞的可能。变生殖细胞的可能。 1、生殖细胞突变生殖细胞突变致死性突变致死性突变显性致死：使卵子不能受精或
22、突变配子与正显性致死：使卵子不能受精或突变配子与正 常配子结合后，在着床前或着床常配子结合后，在着床前或着床 后的早期胚胎死亡。后的早期胚胎死亡。 隐性致死：需要纯合子或半合子才能出现死隐性致死：需要纯合子或半合子才能出现死 亡效应。亡效应。 非致死突变非致死突变产生遗传病。产生遗传病。对基因库的遗传负荷产生不良影响。对基因库的遗传负荷产生不良影响。基因库是指某一物种的生育年龄群体于特基因库是指某一物种的生育年龄群体于特定时期能将遗传信息传至下一代的基因的定时期能将遗传信息传至下一代的基因的总和。总和。遗传负荷指基因库中携带的一定量的有害遗传负荷指基因库中携带的一定量的有害基因。基因。 1、生
23、殖细胞突变生殖细胞突变1、生殖细胞突变生殖细胞突变我国新生儿染色体异常人数的估算我国新生儿染色体异常人数的估算 2、体细胞突变体细胞突变2、体细胞突变体细胞突变 镰镰镰镰刀刀刀刀型型型型贫贫贫贫血血血血症症症症是是是是一一一一种种种种遗遗遗遗传传传传病病病病。正正正正常常常常人人人人的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞是是是是中中中中凹凹凹凹的的的的圆圆圆圆饼饼饼饼状状状状，而而而而镰镰镰镰刀刀刀刀型型型型细细细细胞胞胞胞贫贫贫贫血血血血症症症症患患患患者者者者的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞却却却却成成成成弯弯弯弯曲曲曲曲的的的的镰镰镰镰刀刀刀刀状状状状，这这这这样样样样的的的的红红红红细细细细
24、胞胞胞胞容容容容易易易易破破破破裂裂裂裂引引引引起起起起溶溶溶溶血血血血性性性性贫贫贫贫血血血血，甚甚甚甚至至至至造造造造成死亡。成死亡。成死亡。成死亡。正常型红细胞正常型红细胞 镰刀型红细胞镰刀型红细胞血红蛋白分子的部分氨基酸序列血红蛋白分子的部分氨基酸序列缬缬氨酸氨酸组氨酸组氨酸 亮氨酸亮氨酸苏氨酸苏氨酸脯氨酸脯氨酸谷氨酸谷氨酸谷氨酸谷氨酸赖氨酸赖氨酸-缬缬氨酸氨酸组氨酸组氨酸 亮氨酸亮氨酸苏氨酸苏氨酸脯氨酸脯氨酸缬氨酸缬氨酸谷氨酸谷氨酸赖氨酸赖氨酸1 2 3 4 5 6 7 8（正常血红蛋白正常血红蛋白）（异常血红蛋白异常血红蛋白）GAAGAACTTCTT谷氨酸谷氨酸缬氨酸缬氨酸DNAD
25、NAmRNAmRNA氨基酸氨基酸蛋白质蛋白质正常正常异常异常G GA AG GA AC CT T突变突变G GA A碱基对替换碱基对替换A AT TT TA A替换替换谷氨酸谷氨酸缬氨酸缬氨酸TAUA四、四、机体对机体对致突变作用的致突变作用的影响影响 常用的致突变试验注意事项第三节第三节第三节第三节 研究化学毒物致突变作用的方法研究化学毒物致突变作用的方法研究化学毒物致突变作用的方法研究化学毒物致突变作用的方法 染色体分析染色体分析 （1 1）染色体畸变分析）染色体畸变分析 主要观察染色体的结构畸变和数目畸变主要观察染色体的结构畸变和数目畸变（2) 2) 微核试验微核试验 能检察出断裂剂和有
26、丝分裂毒物能检察出断裂剂和有丝分裂毒物（3 3）姐妹染色体交换试验）姐妹染色体交换试验 现在以广泛用于筛选食品中化学物致突现在以广泛用于筛选食品中化学物致突变变 显性致死试验显性致死试验 显性致死试验：使雄性大鼠或小鼠接着显性致死试验：使雄性大鼠或小鼠接着受试物，然后使之与未接着该物质的雌性受试物，然后使之与未接着该物质的雌性大鼠或小鼠交配，观察胚胎死亡情况。大鼠或小鼠交配，观察胚胎死亡情况。精子畸形试验精子畸形试验 已知精子畸形是决定精子形成的基因发已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。常染色体和生突变的结果。常染色体和Y-Y-性连锁基因性连锁基因突变及某些染色体重排，如性突变及某
27、些染色体重排，如性- -常染色体易常染色体易位，也可使精子发生畸形。小鼠精子畸形位，也可使精子发生畸形。小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。传毒性作用。非程序性非程序性DNADNA合成试验合成试验 正常情况下，于细胞有丝分裂周期中，正常情况下，于细胞有丝分裂周期中，仅仅S S期是期是DNADNA合成期。当合成期。当DNADNA受损伤时，损伤受损伤时，损伤修复的修复的DNADNA合成主要在其他细胞周期，称程合成主要在其他细胞周期，称程序外序外DNADNA合成，即合成
28、，即UDSUDS，因此发现，因此发现UDSUDS增高，增高，即表明即表明DNADNA发生过损伤。发生过损伤。小鼠特异基因座试验小鼠特异基因座试验 特异基因座试验特异基因座试验(SLT)(SLT)是利用两种品系的是利用两种品系的小鼠，一种为小鼠，一种为T T型，其有几个与毛色、眼色型，其有几个与毛色、眼色和耳型有关的隐性突变基因的纯合子；另和耳型有关的隐性突变基因的纯合子；另一种为一种为3H13H1或或C57BLC57BL系，不具有这些基因的系，不具有这些基因的野生型，使后一种小鼠接触受试物，使之野生型，使后一种小鼠接触受试物，使之与与T T系交配。如果受试物未能使相应位点发系交配。如果受试物未
29、能使相应位点发生突变，则杂交一代为杂合子，生突变，则杂交一代为杂合子，T T系的隐性系的隐性基因不能表达，如果发生了突变，则相应基因不能表达，如果发生了突变，则相应的隐性基因可于出生时或断乳时表达。的隐性基因可于出生时或断乳时表达。 致致突变试验中的一些问题突变试验中的一些问题1.1.1.1.阴性、阳性对照组阴性、阳性对照组阴性、阳性对照组阴性、阳性对照组的设立的设立的设立的设立阴性对照：即未处理对照或溶剂阴性对照：即未处理对照或溶剂阴性对照：即未处理对照或溶剂阴性对照：即未处理对照或溶剂对照。对照。对照。对照。目的：获得目的：获得目的：获得目的：获得试验的基础试验的基础试验的基础试验的基础数
30、据。数据。数据。数据。阳性对照：是用某种已知能产生阳性对照：是用某种已知能产生阳性对照：是用某种已知能产生阳性对照：是用某种已知能产生阳性反应的阳性反应的阳性反应的阳性反应的物质物质物质物质作作作作对照。对照。对照。对照。目的：目的：目的：目的：* * * *通过对阳性物质的试验证明实验方法的可靠；通过对阳性物质的试验证明实验方法的可靠；通过对阳性物质的试验证明实验方法的可靠；通过对阳性物质的试验证明实验方法的可靠；* * * *验证实验者在本实验条件下，完成技术和鉴定致突验证实验者在本实验条件下，完成技术和鉴定致突验证实验者在本实验条件下，完成技术和鉴定致突验证实验者在本实验条件下，完成技术
31、和鉴定致突 变物的能力；变物的能力；变物的能力；变物的能力；* * * *证实经一定时间后，本实验的重复性。证实经一定时间后，本实验的重复性。证实经一定时间后，本实验的重复性。证实经一定时间后，本实验的重复性。2. 2. 体外试验的体外试验的活化系统活化系统前致突变物：本身不具致突变性，经哺乳动物前致突变物：本身不具致突变性，经哺乳动物前致突变物：本身不具致突变性，经哺乳动物前致突变物：本身不具致突变性，经哺乳动物代谢才代谢才代谢才代谢才转化成转化成转化成转化成致突变物的化学致突变物的化学致突变物的化学致突变物的化学物质。物质。物质。物质。哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞介导介
32、导介导介导 使用使用使用使用完整的细胞，特别是大鼠肝完整的细胞，特别是大鼠肝完整的细胞，特别是大鼠肝完整的细胞，特别是大鼠肝原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞，与测试细菌，与测试细菌，与测试细菌，与测试细菌或细胞一起或细胞一起或细胞一起或细胞一起培养。培养。培养。培养。S9S9S9S9 经经经经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经9000g9000g9000g9000g离心离心离心离心分离分离分离分离所得上清液，加上适当的缓冲液和所得上清液，加上适当的缓冲液和所得上清液，加上适当的缓冲液和所得上清液，加上
33、适当的缓冲液和辅助因子。辅助因子。辅助因子。辅助因子。 纯化酶纯化酶纯化酶纯化酶和基因工程和基因工程和基因工程和基因工程 纯化纯化纯化纯化酶：纯化的细胞色素酶：纯化的细胞色素酶：纯化的细胞色素酶：纯化的细胞色素P450P450P450P450、谷光苷、谷光苷、谷光苷、谷光苷肽转移酶、肽转移酶、肽转移酶、肽转移酶、过氧化物酶过氧化物酶过氧化物酶过氧化物酶。 基因工程基因工程基因工程基因工程：将人的细胞色素：将人的细胞色素：将人的细胞色素：将人的细胞色素P450P450P450P450基因插入组合细胞基因插入组合细胞基因插入组合细胞基因插入组合细胞内，内，内，内，再进行再进行再进行再进行致突变试验，使细胞具有代谢活化系统。致突变试验，使细胞具有代谢活化系统。致突变试验，使细胞具有代谢活化系统。致突变试验，使细胞具有代谢活化系统。
