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1、第六章第六章ENAENA多肽抗多肽抗体谱体谱免疫印迹检测免疫印迹检测黑龙江中医药大学 临床医学院 诊断教研室黄 萍中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第一节第一节概述概述一、一、 何为何为ENA? ENA(Extractable nuclear antige) 盐水可提取性核抗原的总称。盐水可提取性核抗原的总称。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多
2、肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 核抗原：核抗原：组蛋白组蛋白 ：不溶于水不溶于水 DNA ；不溶于水不溶于水 ENA：可溶于生理盐水可溶于生理盐水是是非非组组蛋蛋白白核核蛋蛋白白，属属酸酸性性核核蛋蛋白白抗抗原原，是许多小分子量的是许多小分子量的RNA和多肽组成和多肽组成。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 二、多肽抗体谱二、多肽抗体谱 ENA抗抗体体是是指指能能与与核核中中盐盐水水可可提提取取抗抗原原发发生生特特异异性性结结合合抗抗体
3、体，既既是是抗抗核核抗抗体的一部分。体的一部分。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 ENA多肽抗体谱多肽抗体谱是是由由许许多多小小分分子子量量的的RNA和和多多肽肽组成。组成。不不同同的的uRNA各各有有其其相相应应的的抗抗体体。目目前前发发现现的的相相应应的的抗抗体体已已有有十十余余种种，其其中中，国国际际上上共共认认的的对对风风湿湿有有特特异异的的诊诊断断价价值值的的有有七七种种。故故将将这这七七种种抗抗体体叫叫做做多多肽抗体谱肽抗体谱中国历史
4、上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 三、三、 免疫印迹免疫印迹免疫印迹（免疫印迹（Immunoblot IBT）又又称称免免疫疫转转印印技技术术。是是一一项项新新的的生生化化技技术术。它它对对研研究究工工作作的的影影响响与与内内切切酶酶的的发发现现和和 PCR的的基基因因扩扩增增技技术术是是等等量量齐观的。齐观的。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗
5、体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理：将将凝凝胶胶电电泳泳与与固固相相免免疫疫结结合合起起来来，其主要的操作过程分三个步骤。其主要的操作过程分三个步骤。1、分离、分离盐水可提取抗原（盐水可提取抗原（ENA）中多中多肽按分子量的大小，先用肽按分子量的大小，先用SDS 聚丙烯酰胺凝胶分离聚丙烯酰胺凝胶分离中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理： 2 、转移转移将将分分离离的的
6、组组份份从从凝凝胶胶上上转转移移到到固固相相基质上，如硝酸纤维膜基质上，如硝酸纤维膜中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理： 3 、测定测定对转移后的组份进行免疫法测定，对转移后的组份进行免疫法测定，显示出蛋白带。显示出蛋白带。既通过抗体的反应，用酶联免疫吸既通过抗体的反应，用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）的数量与分子量的数量与分子量 中国历史上吸烟的历史和现状
7、、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理：免免疫疫转转印印技技术术实实际际上上是是一一项项将将凝凝胶胶电电泳泳技技术术、固固定定化化技技术术及及分分子子亲亲和和技技术术三三者融为一体的免疫转印技术。者融为一体的免疫转印技术。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：免疫转印技术优点：中
8、国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 1、高分辨率高分辨率免免疫疫转转印印技技术术综综合合了了电电泳泳技技术术分分辨辨率强的特点。率强的特点。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 2、高灵敏度高灵敏度免疫转印技术综合了免疫反应敏感免疫
9、转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点，可检出最小蛋白质性高的特点，可检出最小蛋白质1pg(10-12g) 中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 3、高特异性高特异性免免疫疫转转印印技技术术综综合合了了免免疫疫反反应应特特异异性性，根根据据抗抗原原抗抗体体的的特特异异反反应应，同同一一条条蛋白印迹上可做多项分析。蛋白印迹上可做多项分析。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解
10、吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 4、高度稳定性高度稳定性蛋白印迹膜便于保存，可存放蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12 个月。个月。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 5、设备简单，操作容易设备简单，操作容易免免疫疫转转印印技技术术在在临临床床检检验验中中必必有有远远大大前前程程，并并可可能能代代替替许许多
11、多现现有有的的传传统统检检验方法。验方法。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 第二节第二节检测对象检测对象 ENA多肽抗体谱多肽抗体谱早期诊断早期诊断SLE和多种风湿病，和多种风湿病，有较高的特异性和敏感性，有较高的特异性和敏感性，有助于结缔组织病的诊断有助于结缔组织病的诊断和鉴别诊断和鉴别诊断中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹
12、检测多肽抗体谱免疫印迹检测 一、风湿病的定义一、风湿病的定义风风湿湿病病学学是是一一门门以以内内科科学学和和临临床床免免疫疫学为基础的新兴学科学为基础的新兴学科其其研研究究的的对对象象是是风风湿湿性性疾疾病病，包包括括所所有有不不同同原原因因，以以及及不不明明原原因因引引起起的的骨骨、关关节、肌疾病。节、肌疾病。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症的疾病的疾病感炎性：感炎性
13、：莱姆（莱姆（Lyme）氏病氏病代谢性：代谢性： 痛风痛风内分泌性：内分泌性：甲状旁腺功能亢进甲状旁腺功能亢进遗传性；遗传性；粘液多糖病粘液多糖病退化性：退化性：骨关节炎骨关节炎生态环境性：大骨节病生态环境性：大骨节病中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎类风湿性疾病骨关节炎(RA)系统红斑狼疮系统红斑狼疮(SLE)干燥综合症干燥综合症(SS)硬皮病硬皮病(PS
14、S)皮肌炎和多发行肌炎皮肌炎和多发行肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病混合性结缔组织病(MCTD)中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 二、二、 适应症适应症 1、临临床床上上怀怀疑疑有有风风湿湿性性疾疾病病（结结缔缔组组织织病病或或自自身身免免疫疫性性疾疾病病），需需进进一一步步确诊者。确诊者。 2、 已已诊诊断断为为某某种种风风湿湿性性疾疾病病，但但需需明明确确是是否否合合并并其其它它风风湿湿性性疾疾病病，以以指指导导治疗者。治疗者。中国历史上吸
15、烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测二、二、 适应症适应症 3 、诊断未明，但有下列症状，需排除或诊断未明，但有下列症状，需排除或确诊何种风湿性疾病者：确诊何种风湿性疾病者： 、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减淋巴结肿大或白血球减少或血小板减少或溶血性贫血。少或溶血性贫血。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、蛋白尿。、蛋白尿。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施
16、以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、心包炎或胸膜炎。、心包炎或胸膜炎。、癫痫或精神、神经症状。、癫痫或精神、神经症状。、习惯性流产。、习惯性流产。、雷诺氏现象。、雷诺氏现象。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第三章第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困 难。难。、
17、下肢出现网状青紫。下肢出现网状青紫。、肺间质病变或肺动脉高压。肺间质病变或肺动脉高压。、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。经常口干、眼干、或反复腮腺炎。、易口腔溃疡或大量脱发。易口腔溃疡或大量脱发。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、吞咽困难，食道蠕动减弱。吞咽困难，食道蠕动减弱。、青年女性有偏头痛。青年女性有偏头痛。、荧光抗核抗体阳性。荧光抗核抗体阳性。、关节疼痛。关节疼痛。、长期反复性原因不明低热。长期反复性原因不明低热。中国历史上吸烟的历史和现状
18、、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第三章第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测三三 、送检标本送检标本 血清血清中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测四四 报告方式报告方式反应抗体反应抗体分子量分子量 1. 抗抗Sm抗体抗体+/- 29/28KD、13.5KD 2. 抗抗u1RNP抗体抗体+/- 73KD、32KD、17.5KD 3.抗抗Scl-70抗体抗体+/- 86KD、
19、70KD 4.抗抗SSA抗体抗体+/- 52KD 5.抗抗SSB抗体抗体+/- 48/47KD、45KD 6.抗抗JO-1抗体抗体+/- 55KD 7.抗抗Rib抗体抗体+/- 38KD16KD15KD + 表示有该种自身抗体表示有该种自身抗体 - 表示无该种自身抗体表示无该种自身抗体中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第三节第三节临床意义临床意义 中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，
20、提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义一抗一抗Sm抗体抗体 1.Sm为病人为病人Smith（发现抗体的第一位病人）发现抗体的第一位病人）的名字缩写的名字缩写 2.抗抗Sm抗体是酸性糖蛋白抗体是酸性糖蛋白 3.是目前公认的系统性红斑狼疮（是目前公认的系统性红斑狼疮（SLE）标记抗体，有利于标记抗体，有利于SLE的早期诊断。、的早期诊断。、注意：关键是注意：关键是13.5KD 一般是一般是13.5KD和和 29/28KD同时出现，若单独出现同时出现，若单独出现29/28 KD、无无13.5KD不能判断不能判断抗抗Sm抗体阳性抗体阳性 4.阳
21、性率阳性率30-50%，仅见于本病。，仅见于本病。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 二二 、抗抗u1RNP抗体抗体(抗抗RNP)1、是混合性结缔组织病是混合性结缔组织病(MCTD)的一项重的一项重要血清学特征。要血清学特征。2、阳性率可达阳性率可达95%以上。以上。3、73 KD（国外报导为国外报导为70 KD）和和32KD可可同时出现，也可分别出现。同时出现，也可分别出现。17.5 KD常拌常拌73 KD和和32 KD、一起出现
22、，单独出现少见。一起出现，单独出现少见。4、其它结缔组织病的阳性率、其它结缔组织病的阳性率系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（SLE ） 30%干燥综合症干燥综合症(SS) 20%硬皮病硬皮病(PSS) 7%中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 三、抗三、抗Scl-70抗体抗体 1、抗抗Scl-70抗体中的抗体中的SclSclerosis的缩写的缩写70代表抗原分子量，为代表抗原分子量，为70KD（70000） 2、是弥漫型硬皮病是弥漫型硬
23、皮病(PSS)的标记抗体。的标记抗体。 3、阳性率可达阳性率可达50-64% 4、在在86 KD和和70KD两区带间有时可见到两区带间有时可见到两条较弱的区带，是两条较弱的区带，是100KD的降解产的降解产物。物。两区带一般同时出现。两区带一般同时出现。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 四、抗四、抗SSA抗体（抗抗体（抗RO抗体）抗体）1SS为干燥综合症（为干燥综合症（Sjogrens syndrome）的缩写。的缩写。A为抗原子
24、序列号为抗原子序列号2曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称抗抗RO抗体。抗体。3对干燥综合症（对干燥综合症（SS）诊断有意义。阳性率诊断有意义。阳性率7080%合并合并SLE3050%单纯单纯SLE810%中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 四、抗四、抗SSA抗体（抗抗体（抗RO抗体）抗体）4可见于其它多种自身免疫性疾病。可见于其它多种自身免疫性疾病。包包括括SLE，硬硬皮皮症症，多多发发性性肌肌
25、炎炎和和类类风风湿湿关关节炎等疾病。节炎等疾病。5、该该抗抗体体阳阳性性也也可可引引起起亚亚急急性性皮皮肤肤狼狼疮疮的的皮皮损损与与SLE的的广广泛泛光光过过敏敏性性皮皮炎炎也也相相关关，IgG类类抗抗SSA抗抗体体通通过过胎胎盘盘进进入入胎胎儿儿后后可可引引起起新新生生儿狼疮综合症。儿狼疮综合症。6、个个别别因因抗抗体体与与心心脏脏的的传传导导系系统统相相结结合合可可造造成先天性心脏传导阻滞。成先天性心脏传导阻滞。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检
26、测临床意义临床意义 五、抗五、抗SSB抗体抗体1抗抗SSB抗体常伴随抗抗体常伴随抗SSA抗体同时出现。抗体同时出现。2抗抗SSB和抗和抗SSA抗体并存，对诊断抗体并存，对诊断SS（干干燥燥综合症）有特异性。综合症）有特异性。348KD、47KD、45KD三区常不仅同时出三区常不仅同时出现，也与现，也与52KD区带同时出现，区带同时出现，但但48/47KD有时很弱，不易分辨。有时很弱，不易分辨。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 六、
27、抗六、抗JO-1抗体抗体1是是Pm/Dm（肌炎肌炎/皮肌炎）公认的标记抗皮肌炎）公认的标记抗体，阳性率体，阳性率2540%。2主要见于多发性肌炎（主要见于多发性肌炎（Pm）在皮肌炎在皮肌炎（Dm）中阳性率较低。中阳性率较低。3抗抗JO-1抗体抗体 该该抗抗体体阳阳性性患患者者常常会会同同时时出出现现肌肌炎炎，肺肺部部间间质质性性病病变变的的关关节节炎炎等等症症状状。易易被被临临床床误误诊诊为慢性肺部感染或类风湿关节炎。为慢性肺部感染或类风湿关节炎。4确确定定55KD需需要要慎慎重重，因因为为临临床床意意义义不不明明为为54、56KD和和55KD在位置上相差不到在位置上相差不到1毫米毫米。中国历
28、史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 七、抗七、抗Rib抗体（抗核糖体抗体）抗体（抗核糖体抗体）1抗抗Rib抗体又称抗核糖体抗体（抗体又称抗核糖体抗体（rRNP）（抗抗rRNP抗体）抗体）2主要见于主要见于SLE，是是SLE的另一血清学标记抗的另一血清学标记抗体。体。 阳性率阳性率2030% 该抗体阳性与该抗体阳性与SLE的中枢神经系统病变相的中枢神经系统病变相关。关。中国历史上吸烟的历史和现状、所采取的措施以及由此带来的痛苦和灾难，可以进一步了解吸烟对人民健康的危害，提高师生的控烟意识
