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1、会计学1USP药典培训注射剂微粒药典培训注射剂微粒(wil)检查曾长金检查曾长金第一页，共55页。2Contents 目录目录(ml)11第一节第一节概述22第二节第二节光阻法与膜显微镜法介绍33第三节第三节光阻法测试44第四节第四节膜显微镜法测试55第五节第五节总结第1页/共54页第二页，共55页。第一节第一节第一节第一节 概述概述概述概述(ish)(ish)(ish)(ish)1、微粒(wil)检查介绍2、不溶性微定义 (dngy)3、微粒检查的意义4、微粒检查的要求5、微粒评估第2页/共54页第三页，共55页。4一、微粒检查一、微粒检查一、微粒检查一、微粒检查(jinch)(jinch)
2、(jinch)(jinch)介绍介绍介绍介绍在美国标准在美国标准USPUSP中，就静脉注射液和滴眼液进行微粒中，就静脉注射液和滴眼液进行微粒检查，主要涉及光阻法和膜显微镜法。这些方法并不是最好检查，主要涉及光阻法和膜显微镜法。这些方法并不是最好(zuho)(zuho)的，不一定对每一种配方和剂型都最合适（乳剂就的，不一定对每一种配方和剂型都最合适（乳剂就不合适），但是它代表了微粒测定的基础和标准的方法，可以不合适），但是它代表了微粒测定的基础和标准的方法，可以理解成最常用的方法。就这些方法而言，许多公司积累了许多理解成最常用的方法。就这些方法而言，许多公司积累了许多宝贵的和丰富了经验和历史数据
3、。此外，分析方法和限度是随宝贵的和丰富了经验和历史数据。此外，分析方法和限度是随着技术进步而演化，标准和规定并不是不变的，但是方法和限着技术进步而演化，标准和规定并不是不变的，但是方法和限度的改变度的改变 受监管机构、市场、商业等方面的影响。受监管机构、市场、商业等方面的影响。第3页/共54页第四页，共55页。5二、什么二、什么二、什么二、什么(shnme)(shnme)(shnme)(shnme)是不溶性微粒？是不溶性微粒？是不溶性微粒？是不溶性微粒？subject不溶性微粒是指在注射剂或溶液中不应该(ynggi)出现的、外来的、流动的物质（不是气泡）。任何半固体或固体，无论软硬、透明与否，
4、都可被作为微粒来计算。本质：本质：1、不不溶溶的的、流流动动的的固固体体(gt)或半固体或半固体(gt)；2、单体或集合物；、单体或集合物；3、单品种或多品种；、单品种或多品种；4、化学作用形成。、化学作用形成。来源：1、工艺中的外来物；2、工艺或产品中的一部分（渣、屑）；2、配方中固有的（如：蛋白质产品在一定温度下的沉降，或本身就有）。第4页/共54页第五页，共55页。6三、微粒三、微粒三、微粒三、微粒(wil)(wil)(wil)(wil)检查的意义检查的意义检查的意义检查的意义微粒检查是在可见异物检微粒检查是在可见异物检查符合规定后，用以检查静脉用查符合规定后，用以检查静脉用注射剂（溶液
5、型注射液、注射用注射剂（溶液型注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液）及供无菌粉末、注射用浓溶液）及供静脉注射用无菌原料药中不溶性静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒的大小及数量。微粒的大小及数量。微粒的定量检测对于产品微粒的定量检测对于产品的质量分析和控制是非常的质量分析和控制是非常(fichng)(fichng)必要的。通过膜显微必要的。通过膜显微镜法对产品中出现的微粒进行定镜法对产品中出现的微粒进行定性分析，可以有利于产品的质量性分析，可以有利于产品的质量跟踪和控制。此外，通过微粒分跟踪和控制。此外，通过微粒分析可以对配方的稳定性进行研究。析可以对配方的稳定性进行研究。第5页/共54页第六页，
6、共55页。7微粒来源微粒来源微粒来源微粒来源(liyun)(liyun)(liyun)(liyun)反映产品配方的不稳定性：反映产品配方的不稳定性：反映产品配方的不稳定性：反映产品配方的不稳定性：1 1、过程控制的失败；、过程控制的失败；2 2、配方的设计不好，影响了产品的使用、储存和相容；、配方的设计不好，影响了产品的使用、储存和相容；3 3、就生物制剂而言，特别考虑产品的稳定性；、就生物制剂而言，特别考虑产品的稳定性；4 4、容器和密封系统的问题；、容器和密封系统的问题；5 5、包装的问题（有的包装随时间的增加，会改性产生污染）；、包装的问题（有的包装随时间的增加，会改性产生污染）；6 6
7、、泄露或过量、泄露或过量(gu(guling)ling)的气体泄露；的气体泄露；7 7、不可控或未知的辅料因素；、不可控或未知的辅料因素；8 8、活性成分（某些成分分解）。、活性成分（某些成分分解）。第6页/共54页第七页，共55页。8四、微粒检测四、微粒检测四、微粒检测四、微粒检测(jinc)(jinc)(jinc)(jinc)要求要求要求要求静脉注射液和滴眼液都是无菌液体，在产品放行前，在物理外观和稳定性应该符合一定的要求，它们在放行前必须符合两个关于(guny)微粒限度的测试。1、可见微粒必须基本没有；2、显微可见微粒含量必须很低。第7页/共54页第八页，共55页。9方法方法1 1：光阻
8、法（：光阻法（LOLO）方法方法2 2：显微镜法：显微镜法注射液体积10 m25 m10 m25 m小容量注射液（体积小于100ml）6000个（每个容器）600个（每个容器）3000个（每个容器）此主要针对研发和有实力的单位。300个（每个容器）大容量注射液（体积大于100ml）25个（每ml）3个（每ml）12个（每ml）2个（每ml）第8页/共54页第九页，共55页。10五、微粒五、微粒五、微粒五、微粒(wil)(wil)(wil)(wil)评估评估评估评估1、终产品100%通过目视检查(jinch)（微粒的限度：50100m）2、容器含有的显微可见微粒应受控并满足最低标准（主要通过光阻
9、法&膜显微镜法）。结合目视检查和不溶性微粒的限度检查可以检查：1、产品的物理性状的改变 (gibin)（色彩改变 (gibin)，混浊，沉淀，聚集，结晶，透明度改变(gibin)）；2、悲剧性的微粒增加。第9页/共54页第十页，共55页。11测试方法目视(msh)法光阻法膜显微镜法第10页/共54页第十一页，共55页。121 1、目视、目视、目视、目视(m sh)(m sh)检查法检查法检查法检查法目视法是单借助人眼粗略的观察产品是否变色，混浊，沉淀，聚集，结晶来估计产品的质量。目视检查法所能见的微粒大小位于光阻法的检测上限，有许多局限性，带有主观性，重复性较差。光阻法检测属于仪器(yq)分析
10、，有局限性（容易误判），但重复性较好。第11页/共54页第十二页，共55页。132 2、限度、限度、限度、限度(xind)(xind)检查检查检查检查光阻法和膜显微镜法当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。光阻法不适用于黏度过高和易析出结晶的制剂，也不适用于进入传感器时容易产生气泡的注射剂。对于(duy)黏度过高，采用两种方法都无法直接测定的注射液，可用适宜的溶剂经适当稀释后测定。第12页/共54页第十三页，共55页。143 3、双重、双重、双重、双重(shungchng)(shungchng)法法法法不溶性微粒
11、检查的两种方法均适用于批放行检验或者稳定性试验检测，一般说来，首先(shuxin)采用光阻法，如果必要才采用膜显微镜法，每次检查可以结合两种方法一起用。条件：1、必需保证供试品溶液不被污染；2、通过药品的生产进度建立合适的批取样检测计划；3、在整个试验过程中采用纯水清洗容器、纯水稀释样品和纯水作为空白；4、不溶性微粒检查可以适用于大容量和微量注射液；第13页/共54页第十四页，共55页。15第二节第二节第二节第二节 光阻法与膜显微镜法光阻法与膜显微镜法光阻法与膜显微镜法光阻法与膜显微镜法 简述简述简述简述(jinsh)(jinsh)(jinsh)(jinsh)内容内容内容内容Others可见度
12、visuality光阻法LightObscurationParticleCountTest膜显微镜法MicroscopicParticleCountTest对比(dub)contrast第14页/共54页第十五页，共55页。16一、微粒一、微粒一、微粒一、微粒(wil)(wil)(wil)(wil)的可见度的可见度的可见度的可见度影响可见度的因素：1、实验人员的视力/实验仪器的灵敏度；2、微粒的物理特性；3、实验环境（背景和光线设置）。许多药品生产企业采用仪器和人联合进行系列检查，同时(tngsh)培训质量控制内审人员，以提高检验的可靠性。第15页/共54页第十六页，共55页。17二、光阻法二
13、、光阻法二、光阻法二、光阻法原理：当液体中的微粒通过一窄小的检测区时，与液体流向垂直(chuzh)的入射光，由于被微粒阻挡而减弱，因此由传感器输出的信号降低，这种信号变化与微粒的截面积大小相关，光阻法检查注射剂中不溶性微粒即依据此原理。第16页/共54页第十七页，共55页。18第17页/共54页第十八页，共55页。19光阻法光阻法光阻法光阻法1、显微可见的固体微粒、液体和气体微粒都被计数（缺点：造成测定值比较大）；2、样品测试液需被量化 (严格的取样程序 )；3、有相应的日常校准和取样程序（仪器系统(xtng)化标准化测试）；4、测试人员数目和环境要求受控；5、要有空白对照；6、有专门的测试供
14、应系统 (xtng)（水，专用的器皿工具，稀释和汇集系统(xtng)，文件化系统 (xtng)等）；7、某些物质不能用该法测试。第18页/共54页第十九页，共55页。20三、膜显微镜法计数三、膜显微镜法计数三、膜显微镜法计数三、膜显微镜法计数(jsh)(jsh)(jsh)(jsh)测试测试测试测试原理：将一个或多个容器中的产品中的固体物质截留在过滤膜上，计算在膜表面上的亚可见的到可见的，固体或半固体颗粒。通过计算100倍复合双眼光学显微镜上扫描截留表面上的颗粒计数。该方法高度依赖操作员，操作员对微粒和可接受性做出决策。此外，该法要求(yoqi)全部计数，也即对滤膜上的微粒一个接一个的数。但是部
15、分计数是允许的，也即只数网格中的一部分，然后估算整个滤膜上的微粒数目，不过和没有定义。建议：如果少于1000个微粒则应当全部计数，如果计数标尺视野（GFOV）中央和边缘的微粒计数小于2个那么就计算20个GFOV25mm膜的总计数或计算100个GFOV47mm膜的总计数。第19页/共54页第二十页，共55页。21膜显微镜法膜显微镜法膜显微镜法膜显微镜法1、采用过滤 (gul)的方式将单个容器或多个容器中的样品中的不溶性微粒过滤(gul)在滤膜上；2、对于滤膜（孔径小于 1m）上收集的显微可见微粒、固体和半固体微粒进行计数；3、将滤膜放在视野放大 100倍的显微镜下观察进行微粒计数；4、试验人员在
16、计数的同时确定微粒的大小，同时对是否符合标准要求做出判断。依赖于实验员；膜显微镜法最理想的操作条件是在两个靠得很近的单向气流工作台上进行操作，湿的层流罩专用于过滤(gul)操作，干层流操作工作台专用于显微镜检查。膜显微镜法可适用于大小容量的注射液的不溶性微粒检查，但是也可以适用于非常规机型的检查（乳剂，悬液）；对于较小量的供试品而言，可以不进行稀释至最小检验体积就可以直接进行测定。第20页/共54页第二十一页，共55页。22四、比较四、比较四、比较四、比较(bjio)(bjio)(bjio)(bjio)光阻法光阻法膜显微镜法膜显微镜法对于乳剂 (rj)或某些剂型不合适容易受气体，不溶性油滴等的
17、影响(yngxing)，测得数据往往较高，准确度不是很好！微电子计数，重复性较高可以对注射剂直接测量，适用性较广，对于小剂量昂贵的产品可以直接测量，不必汇集和稀释到测量水平。很大程度上依赖于操作员操作，企业要有严格的操作员培训和考核机制。目视计数，依赖于操作员的判断，重复性较差。光阻法其局限性在于微粒的形状，优势在于球形颗粒。其将所有的微粒模拟成球形，当微粒的外形与球形有差异时，就会出现偏差。膜显微镜法直接将膜上的微粒与校准过的直径为10m和25m的圆进行比较，同时还有一个镜台标尺。操作者还可以在操作的时候将视野中的微粒与直径为10m和25m的圆进行比对计数。第21页/共54页第二十二页，共5
18、5页。23第三节第三节第三节第三节 光阻法测试光阻法测试光阻法测试光阻法测试 详细介绍详细介绍详细介绍详细介绍(jisho)(jisho)(jisho)(jisho)内容内容内容内容1. Introduction2. 条件条件(tiojin)3. 测试方法和步骤测试方法和步骤(bzhu)4. 结果判定结果判定第22页/共54页第二十三页，共55页。24一、一、一、一、IntroductionIntroduction注射剂及非口服输液中的悬浮微粒是非故意存在于溶液中的可移动的不溶性的粒子（非气泡）。下文将陈述光阻法和膜显微镜法对注射剂及非口服输液中的悬浮微粒进行测试。光阻法已经较好的应用于注射剂
19、及非口服输液中的悬浮微粒的测试，但是有必要在光阻法测试基础上结合膜显微镜法测试来确认测试结果的可靠性和合理性。这两种方法并不是适用于对所有的非口服的注射或输液进行悬浮微粒测试。如：乳剂、胶体和脂质体供试液不适合用光阻法测试，而用膜显微镜法比较合理。相类似，当置入传感器，会产生气体或气泡的产品，不适合用光阻法而选用膜显微镜法。如果供试品的粘度比较高，需要对其进行稀释后才能用两种方法进行分析测试。随机的一个或一组样本(yngbn)测试的结果并不能推测未被测试的产品微粒情况，因此可靠的符合统计学采样的程序开发时非常重要的。对仪器的一般要求仪器通常包括取样器、传感器和数据处理器三部分。测量粒径范围为2
20、50m，检测微粒(wil)浓度为05000个/ml。仪器的校正与检定所用仪器应至少每6个月校正一次。第23页/共54页第二十四页，共55页。25二、二、二、二、General precautionsGeneral precautions测试要求在微粒较少并受控的环境下进行，最好是在层流生物安全柜里操作。用温和的清洗剂小心地清洗要用的玻璃器皿及过滤设备（除过滤膜外），然后用大量的清洁水冲洗清洗剂。在设备使用前，从上到下，从外到内地用无尘水冲洗设备。尤其是小量的供试液转移至测试容器的过程中，小心不要产生气泡于待测的供试液中。为了检验环境是否适合于微粒限度测试，常进行空白对照，具体程序是：在无微粒器
21、皿和水准备就绪条件下，测试5个装有5ml无微粒水的空白品的微粒数。如果总共25ml的空白中大于等于10m的微粒数超过(chogu)25个，那么准备工作是做得不充分的，那么就得重新调整和采取措施，并再次测试直到环境器皿水适合测试为止。第24页/共54页第二十五页，共55页。261、推荐用层流台；2、人员流动控制在最小；3、专用的玻璃器皿；4、为产品容量和类别而开发的稀释和汇集系统；5、已经建立仪器标准化测试（ IST）与实验室控制；6、供应商提供校准支持或者自己建立有关程序文件支持的内部体系。测定微粒的光阻计数仪器可能不同；通常仪器生产商在校准、验证和技术支持上能给予强烈支持；试验人员（需要培训
22、和资质确认，必需熟悉粒子计数的原理和测试操作）目标是对注射剂中的微粒的大小和数目测定和良好的重现性。光阻法微粒测定仪器的校准必需通过手动校准的方式(fngsh)进行，仪器应有标准化校准的硬件和软件。要点(yodin)第25页/共54页第二十六页，共55页。27仪器仪器仪器仪器(yq)(yq)(yq)(yq)标准化测试（标准化测试（标准化测试（标准化测试（ISTISTISTIST）: : : :1、流速的确认(qurn)；2、传感器的确认(qurn)和校准（确定传感器的测试浓度范围、传感器的灵敏度及检测最小微粒的粒径）；3、供试品取样体积的准确性确认(qurn)；4、系统适用性试验（微粒计数的准
23、确性，系统确认(qurn)和实验室控制）。第26页/共54页第二十七页，共55页。校准校准校准校准(jiozhn)(jiozhn)(jiozhn)(jiozhn)1 1、分离度、分离度判定传感器分辨大小的能力，使用校准微粒来判断反应的平均值或峰值。判定传感器分辨大小的能力，使用校准微粒来判断反应的平均值或峰值。2 2、准确度、准确度判定计数结果与外部标准的相似程度。判定计数结果与外部标准的相似程度。3 3、计数比率、计数比率判断大小的界限是否设定正确，使用美国药店标准品判断大小的界限是否设定正确，使用美国药店标准品15m15m进行设定。进行设定。通过对部分供试品溶液中的微粒计数的结果来确定整个
24、产品通过对部分供试品溶液中的微粒计数的结果来确定整个产品(chnpn)(chnpn)的微粒数目；的微粒数目；小于小于25ml25ml装量的样品要求多个容器取出混合；装量的样品要求多个容器取出混合；可以直接从注射液容器中取样检测；可以直接从注射液容器中取样检测；通过光从发生器中产生通过供试品溶液，被传感器接收（当微粒经过光束时，引起传感通过光从发生器中产生通过供试品溶液，被传感器接收（当微粒经过光束时，引起传感器上电压的增高，增高程度与被检测到的微粒大小有关）。器上电压的增高，增高程度与被检测到的微粒大小有关）。 28第27页/共54页第二十八页，共55页。29仪器仪器仪器仪器(yq)(yq)(
25、yq)(yq)标准化测试（标准化测试（标准化测试（标准化测试（ISTISTISTIST）取相对标准偏差不大于 5%，平均粒径为 10m的标准粒子，制成每 1ml中含10001500微粒数的悬浮液，静置 2分钟脱气，开启搅拌器，缓慢 (hunmn)搅拌使其均匀（避免气泡产生），依法测定3次，记录 5m通道的累计计数，第一次数据不计，后两次测定结果的平均值与已知粒子数之差应在20%以内。第28页/共54页第二十九页，共55页。30传感器分辨率传感器分辨率传感器分辨率传感器分辨率取相对标准偏差不大于5%，平均粒径为10m的标准粒子（均值粒径的标准差应不大于1m），制成每1ml中含10001500微粒
26、(wil)数的悬浮液，静置2分钟脱气，开启搅拌器，缓慢搅拌使其均匀（避免气泡产生），依法测定8m、10m和12m三个通道的粒子数，计算8m与10m两个通道的差值计数和10m与12m两个通道的差值计数，上述两个差值计数与10m通道的累计计数之比都不得小于68%。若校正结果不符合规定，应重新调试仪器后再次进行校正，符合规定后方可使用。注：如所使用仪器附有自检软件，可进行自检。第29页/共54页第三十页，共55页。31光阻法空白对照光阻法空白对照光阻法空白对照光阻法空白对照1、将容器敞开脱气超声脱气（ 80120W，30秒）、静置脱气、疏散样品脱气（也即增加与空气接触的表面积）；2、漩涡振摇借助手或
27、涡旋仪振摇装有空白对照的容器，将气泡赶至液体(yt)表面。3、测定5个5ml的无尘洁净水，保留所有计数；4、目标：在混合的 25ml样品中大于等于 10m的微粒不超过 25个（每ml不超过1个）。第30页/共54页第三十一页，共55页。32三、三、三、三、Method Method 测试程序测试程序测试程序测试程序 通过连续翻转混合供试品样本20次，必要时，谨慎放入密封的包装中，用喷射(pnsh)的无微粒水清洗该外包装以避免污染。通过适当的方法处理，以减少供试品中的气泡，如：通过超声处理2min脱气泡。就大剂量的样本而言，取一个样本测试。Forlarge-volumeparenterals,s
28、ingleunitsaretested.Forsmall-volumeparenteralslessthan25mlinvolume,thecontentsof10ormoreunitsiscombinedinacleanedcontainertoobtainavolumeofnotlessthan25ml;thetestsolutionmaybepreparedbymixingthecontentsofasuitablenumberofvials小瓶anddilutingto25mlwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-frees
29、olvent溶剂whenparticle-freewaterisnotsuitable.Small-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormoremaybetestedindividually.Powdersforparenteralusearereconstituted再现withparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.Thenumberoftestspecimens试样mustbeadequatetoprov
30、ideastatisticallysoundassessment.Forlarge-volumeparenteralsorforsmall-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormore,fewerthan10unitsmaybetested,basedonanappropriatesamplingplan.Removefourportions份,eachofnotlessthan5ml,andcountthenumberofparticlesequaltoorgreaterthan10mand25m.Disregard忽略theresultobtaine
31、dforthefirstportion,andcalculatethemeannumberofparticlesforthepreparationtobeexamined.第31页/共54页第三十二页，共55页。33光阻法光阻法光阻法光阻法 采样采样采样采样(ciyn)(ciyn)(ciyn)(ciyn)体积体积体积体积取样注意：1、单个产品容量 25ml混合10个或更多的容器以保证足够；2、单个产品容量大于 25ml至少一个容器3、单个产品很昂贵且量很少优先考虑膜显微镜法，可以多个汇集，但增加了成本。也可以稀释，不过要验证稀释后液体的稳定性。稀释程序：将产品装入或稀释在无尘水或合适的溶剂中，
32、20次反转(fnzhun)混合，至少 5ml/分，脱气，重复测定 4次，舍弃第一次数据。第32页/共54页第三十三页，共55页。34检查法检查法检查法检查法（1）标示装量为 25ml或25ml以上的静脉用注射液或注射用浓溶液除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，先倒出部分供试品溶液冲洗(chngx)开启口及取样杯，再将供试品溶液倒入取样杯中，静置2分钟或适当时间脱气，置于取样器上（或将供试品容器直接置于取样器上）。开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），依法测定至少3次，每次取样应不少于 5ml，记录数据；另取至少 2个供试品
33、，同法测定。每个供试品第一次数据不计，取后续测定结果的平均值计算。（2）标示装量为 25ml以下的静脉用注射液或注射用浓溶液除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，静置 2分钟或适当时间脱气，小心开启容器，直接将供试品容器置于取样器上，开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免产生气泡），由仪器直接抽取适量溶液（以不吸入气泡为限），测定并记录数据；另取至少3个供试品，同法测定。第一个供试品的数据不计，取后续测定结果的平均值计算。第33页/共54页第三十四页，共55页。35检查法检查法检查法检查法（1）和（2）项下的注射用浓溶液如黏度太大，不便直接测定时，可经适
34、当稀释，依法测定。也可采用适宜的方法(fngf)，在层流净化台上小心合并至少 3个供试品的内容物（使总体积不少于25ml），置于取样杯中，静置 2分钟或适当时间脱气，置于取样器上。开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），依法测定至少4次，每次取样应不少于 5ml。第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，根据取样体积与每个容器的标示装量体积，计算每个容器所含的微粒数。第34页/共54页第三十五页，共55页。36检查法检查法检查法检查法（3）静脉注射用无菌粉末除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，小心开启瓶盖，精密加入适量微粒检查用水（或适宜的溶剂），小心盖上瓶盖，缓缓振摇使内容
35、物溶解，超声处理（ 80120W）30秒或静置适当时间（冻干静注人免疫球蛋白不超过4小时）脱气，小心开启容器，直接将供试品容器置于取样器上，开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），由仪器直接抽取适量溶液（以不吸入气泡为限），测定并记录数据(shj)；另取至少3个供试品，同法测定。第一个供试品的数据(shj)不计，取后续测定结果的平均值计算。也可采用适宜的方法，取至少3个供试品，在净化台上用水将容器外壁洗净，小心开启瓶盖，分别精密加入适量微粒检查用水（或适宜的溶剂），缓缓振摇使内容物溶解，小心合并容器中的溶液（使总体积不少于25ml），置于取样杯中，超声处理（80120W）30秒或静
36、置适当时间（冻干静注人免疫球蛋白不超过4小时）脱气，置于取样器上。开启搅拌或以手缓缓转动，使溶液混匀（避免气泡产生），依法测定至少 4次，每次取样应不少于5ml。第一次数据(shj)不计，取后续测定结果的平均值，计算每个容器所含的微粒数。（4）供注射用无菌原料药按品种项下规定，取供试品适量（相当于单个制剂的最大规格量），置取样杯或适宜的容器中，照上述（3）法，自“精密加入适量微粒检查用水（或适宜的溶剂），缓缓振摇使内容物溶解”起，依法操作并测定。至少取3份供试品测定。计算每份所含的微粒数。第35页/共54页第三十六页，共55页。37四、四、四、四、EvaluationEvaluationEva
37、luationEvaluation评估评估评估评估(pn)(pn)(pn)(pn)Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeofmorethan100ml,applythecriteriaoftest1.A.Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeoflessthan100ml,applythecriteriaoftest1.B.Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeof100ml,applythe
38、criteriaoftest1.BNote:Test1.AisusedintheJapanesePharmacopoeiaIftheaveragenumberofparticlesexceedsthelimits,testthepreparationbytheMicroscopicParticleCountTest.Test1.ASolutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentofmorethan100mL.Thepreparationcomplieswith
39、thetestiftheaveragenumberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed25permLequaltoorgreaterthan10manddoesnotexceed3permLequaltoorgreaterthan25m.Test1.BSolutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentoflessthan100ml.Thepreparationcomplieswith遵守(znshu)th
40、etestiftheaveragenumberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed6000percontainerequaltoorgreaterthan10manddoesnotexceed600percontainerequaltoorgreaterthan25m.第36页/共54页第三十七页，共55页。38结果结果结果结果(jigu)(jigu)(jigu)(jigu)判定判定判定判定（1）标示装量为 100ml 或100ml 以上的静脉用注射液 除另有规定 (gudng) 外，每1ml中含10m以上的微粒不得过 25粒，含25m
41、以上的微粒不得过 3粒。（2）标示装量为 100ml 以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用浓溶液及供注射用无菌原料除另有规定 (gudng) 外，每个供试品容器（份）中含 10m以上的微粒不得过 6000粒，含25m以上的微粒不得过 600粒。方法方法1 1：光阻法（：光阻法（LOLO）注射液体积10 m25 m小容量注射液（体积小于100ml）6000个（每个容器）600个（每个容器）大容量注射液（体积大于100ml）25个（每ml）3个（每ml）注：光阻法容易 (rngy)产生假阳性，所以要结合膜显微镜进行测试。第37页/共54页第三十八页，共55页。39第四节第四节第四节第四节
42、 膜显微镜法测试膜显微镜法测试膜显微镜法测试膜显微镜法测试(csh)(csh)(csh)(csh)详细内容详细内容详细内容详细内容1. Introduction2. 条件条件(tiojin)3. 测试方法和步骤测试方法和步骤(bzhu)4. 结果判定结果判定第38页/共54页第三十九页，共55页。40一、一、一、一、IntroductionIntroductionIntroductionIntroduction介绍介绍介绍介绍(jisho)(jisho)(jisho)(jisho)Useasuitablebinocularmicroscope,filterassemblyforretainin
43、gparticulatematterandmembranefilterforexamination.Themicroscopeisequippedwithanocularmicrometercalibratedwithanobjectivemicrometer,amechanicalstagecapableofholdingandtraversingtheentirefiltrationareaofthemembranefilter,twosuitableilluminatorstoprovideepiscopicilluminationinadditiontoobliqueilluminat
44、ion,andisadjustedto10010magnifications.Theocularmicrometerisacirculardiametergraticule(seeFigure1)andconsistsofalargecircledividedbycrosshairsintoquadrants,transparentandblackreferencecircles10mand25mindiameterat100magnifications,andalinearscalegraduatedin10mincrements.Itiscalibratedusingastagemicro
45、meterthatiscertifiedbyeitheradomesticorinternationalstandardinstitution.Arelativeerrorofthelinearscaleofthegraticulewithin2percentisacceptable.Thelargecircleisdesignatedthegraticulefieldofview(GFOV).Twoilluminatorsarerequired.Oneisanepiscopicbrightfieldilluminatorinternaltothemicroscope,theotherisan
46、external,focusableauxiliaryilluminatoradjustabletogivereflectedobliqueilluminationatanangleof10to20.Thefilterassemblyforretainingparticulatematterconsistsofafilterholdermadeofglassorothersuitablematerial,andisequippedwithavacuumsourceandasuitablemembranefilter.Themembranefilterisofsuitablesize,black
47、ordarkgrayincolor,non-gridded非格子(gzi)的orgridded,and1.0morfinerinnominalporesize.第39页/共54页第四十页，共55页。要求要求要求要求(yoqi)(yoqi)(yoqi)(yoqi)对仪器的一般要求对仪器的一般要求 仪器通常包括层流净化台、显微镜、微孔滤膜及其滤器、平皿等。仪器通常包括层流净化台、显微镜、微孔滤膜及其滤器、平皿等。层流净化台层流净化台 高效高效(oxio)(oxio)空气过滤器孔径，气流方向由里向外，应定期检查风速及净化台上空空气过滤器孔径，气流方向由里向外，应定期检查风速及净化台上空气中的微粒数。
48、气中的微粒数。显微镜显微镜 双筒大视野显微镜，目镜内附标定的测微尺（每格）。坐标轴前后、左右移动范双筒大视野显微镜，目镜内附标定的测微尺（每格）。坐标轴前后、左右移动范围均应大于围均应大于30mm30mm，显微镜装置内附有光线投射角度、光强度均可调节的照明装，显微镜装置内附有光线投射角度、光强度均可调节的照明装置。检测时放大置。检测时放大100100倍。倍。微孔滤膜微孔滤膜 白色，孔径、直径白色，孔径、直径25mm25mm或或13mm13mm，一面印有间隔，一面印有间隔3mm3mm的格栅；膜上如有的格栅；膜上如有10m10m以上的不以上的不溶性微粒，应在溶性微粒，应在5 5粒以下，并不得有粒以
49、下，并不得有25m25m以上的微粒，必要时，可用微粒检查以上的微粒，必要时，可用微粒检查用水冲洗使符合要求。用水冲洗使符合要求。检查前的准备检查前的准备 试验环境检测符合规定后，在层流净化台上将滤器用微粒检查用水（或其他适宜溶试验环境检测符合规定后，在层流净化台上将滤器用微粒检查用水（或其他适宜溶剂）冲洗至洁净，用平头无齿镊子夹取测定用滤膜，用微粒检查用水（或其他剂）冲洗至洁净，用平头无齿镊子夹取测定用滤膜，用微粒检查用水（或其他适宜溶剂）冲洗后，置滤器托架上；固定滤器，倒置，反复用微粒检查用水适宜溶剂）冲洗后，置滤器托架上；固定滤器，倒置，反复用微粒检查用水（或其他适宜溶剂）冲洗滤器内壁，沥
50、干后安装在抽滤瓶上，备用。（或其他适宜溶剂）冲洗滤器内壁，沥干后安装在抽滤瓶上，备用。41第40页/共54页第四十一页，共55页。421、人员流动控制在最小；2、湿过滤和干计数步骤在洁净区进行；3、专用玻璃器皿；4、为产品容量和类别而开发的稀释和汇集系统；5、建立(jinl)实验室控制；6、操作人员必须进行严格的培训；7、有必要的操作员绩效评估。测试环境与制备1、在实验室中最洁净的区域进行测试和分析（与人员流动隔离，最好选择层流工作台，拆包在分析和测试区外面）；2、在空白对照制备前考虑包装的影响（如何开启，是否混合产品，有没有部分取样）；3、产品有没有毒性。要求(yoqi)第41页/共54页第
51、四十二页，共55页。 仪器标准化仪器标准化1 1、仪器经过验证；、仪器经过验证；2 2、设备负责人；、设备负责人；3 3、设备使用和维护程序（遵守相关的原则和方法）。、设备使用和维护程序（遵守相关的原则和方法）。设备和要求设备和要求1 1、100100倍（倍（1010倍）放大，带有计数视野的镜头；倍）放大，带有计数视野的镜头；2 2、两条照明路径（垂直或斜射、两条照明路径（垂直或斜射(xish)(xish)）；）；3 3、计数线窗（、计数线窗（2%2%）；需要验证该计数线）；需要验证该计数线4 4、标准没有要求但很重要：日常校准，空白对照，资格、标准没有要求但很重要：日常校准，空白对照，资格认
52、证（操作员，实验室等）；认证（操作员，实验室等）；5 5、过滤设备、过滤设备6 6、无尘水、无尘水7 7、过滤膜、过滤膜43设备设备设备设备(shbi(shbi(shbi(shbi) ) ) )第42页/共54页第四十三页，共55页。44二、二、二、二、General precautionsGeneral precautionsThetestiscarriedoutunderconditionslimitingparticulatematter,preferablyinalaminar-flowcabinet.Verycarefullywashtheglasswareandfilterasse
53、mblyused,exceptforthemembranefilter,withawarmdetergentsolutionandrinsewithabundantamountsofwatertoremovealltracesofdetergent.Immediatelybeforeuse,rinsebothsidesofthemembranefilterandtheequipmentfromtoptobottom,outsideandtheninside,withparticle-freewater.Inordertocheckthattheenvironmentissuitablefort
54、hetest,thattheglasswareandthemembranefilterareproperlycleanedandthatthewatertobeusedisparticle-free,thefollowingtestiscarriedout:determinetheparticulatematterofa50mlvolumeofparticle-freewateraccordingtothemethoddescribedbelow.Ifmorethan20particles10morlargerinsizeorifmorethan5particles25morlargerins
55、izearepresentwithinthefiltrationarea,theprecautionstakenforthetestarenotsufficient.Thepreparatorystepsmustberepeateduntiltheenvironment,glassware,membranefilterandwateraresuitableforthetest.第43页/共54页第四十四页，共55页。45三、三、三、三、Method Method 检查法检查法检查法检查法Mixthecontentsofthesamplesbyslowlyinvertingthecontaine
56、r20timessuccessively.Ifnecessary,cautiouslyremovethesealingclosure.Cleantheoutersurfacesofthecontaineropeningusingajetofparticle-freewaterandremovetheclosure,avoidinganycontaminationofthecontents.Forlarge-volumeparenterals,singleunitsaretested.Forsmall-volumeparenteralslessthan25mlinvolume,theconten
57、tsof10ormoreunitsiscombinedinacleanedcontainer;wherejustifiedandauthorized,thetestsolutionmaybepreparedbymixingthecontentsofasuitablenumberofvialsanddilutingto25mlwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.Small-volumeparenteralshavingavolumeof25
58、mlormoremaybetestedindividually.第44页/共54页第四十五页，共55页。Powdersforparenteraluseareconstitutedwithparticle-freewaterorwithanPowdersforparenteraluseareconstitutedwithparticle-freewaterorwithanappropriateparticle-freesolventwhenparticle-freewaterisnotsuitable.appropriateparticle-freesolventwhenparticle-fre
59、ewaterisnotsuitable.Thenumberoftestspecimensmustbeadequatetoprovideastatisticallysoundassessment.ForThenumberoftestspecimensmustbeadequatetoprovideastatisticallysoundassessment.Forlarge-volumeparenteralsorforsmall-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormore,fewerthan10large-volumeparenteralsorforsmal
60、l-volumeparenteralshavingavolumeof25mlormore,fewerthan10unitsmaybetested,basedonanappropriatesamplingplan.unitsmaybetested,basedonanappropriatesamplingplan.WettheinsideofthefilterholderfittedwiththemembranefilterwithseveralmilliliterWettheinsideofthefilterholderfittedwiththemembranefilterwithseveral
61、milliliter ofparticle-freewater.ofparticle-freewater.TransfertothefiltrationfunnelTransfertothefiltrationfunnelthetotalvolumeofasolutionpoolthetotalvolumeofasolutionpool orofasingleunit,andapplyvacuum.orofasingleunit,andapplyvacuum.IfneededaddstepwiseIfneededaddstepwiseaportionofthesolutionuntilthee
62、ntirevolumeisfiltered.Afterthelastaportionofthesolutionuntiltheentirevolumeisfiltered.Afterthelastadditionofsolution,beginrinsingtheinnerwallsofthefilterholderbyusingajetofparticle-additionofsolution,beginrinsingtheinnerwallsofthefilterholderbyusingajetofparticle-freewater.Maintainthevacuumuntilthes
63、urfaceofthemembranefilterisfreefromliquid.freewater.Maintainthevacuumuntilthesurfaceofthemembranefilterisfreefromliquid.PlacethemembranefilterinaPetridishPlacethemembranefilterinaPetridish andallowthemembranefiltertoair-drywiththeandallowthemembranefiltertoair-drywiththecoverslightlyajarcoverslightl
64、yajar .Afterthemembranefilterhasbeendried,placethePetridishonthestageofthe.Afterthemembranefilterhasbeendried,placethePetridishonthestageofthemicroscope,scantheentiremembranefilterunderthereflectedlightfromtheilluminatingdevice,andcountmicroscope,scantheentiremembranefilterunderthereflectedlightfrom
65、theilluminatingdevice,andcountthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan10mandthenumberofparticlesthatareequaltoorthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan10mandthenumberofparticlesthatareequaltoorgreaterthan25m.Alternativelygreaterthan25m.Alternatively ,partialmembranefiltercountanddeter
66、minationofthetotalmembranefiltercountby,partialmembranefiltercountanddeterminationofthetotalmembranefiltercountbycalculationisallowed.Calculatethemeannumberofparticlesforthepreparationtobeexamined.calculationisallowed.Calculatethemeannumberofparticlesforthepreparationtobeexamined.46第45页/共54页第四十六页，共5
67、5页。第46页/共54页第四十七页，共55页。48第47页/共54页第四十八页，共55页。TheparticlesizingprocesswiththeuseofthecirculardiametergraticuleTheparticlesizingprocesswiththeuseofthecirculardiametergraticule格子格子(gzi)(gzi)线线iscarriedoutbyiscarriedoutbytransformingmentallytheimageofeachparticleintoacircleandthencomparingittransforming
68、mentallytheimageofeachparticleintoacircleandthencomparingittotothe10mand25mthe10mand25mgraticulereferencecircles.Therebytheparticlesarenotmovedfromtheirinitiallocationswithinthegraticulefieldgraticulereferencecircles.Therebytheparticlesarenotmovedfromtheirinitiallocationswithinthegraticulefieldofvie
69、wandarenotsuperimposedonthereferencecirclesforcomparison.Theinnerdiameterofthetransparentofviewandarenotsuperimposedonthereferencecirclesforcomparison.Theinnerdiameterofthetransparentgraticulereferencecirclesisusedgraticulereferencecirclesisusedtotosizewhiteandtransparentparticles,whiledarkparticles
70、aresizedbyusingsizewhiteandtransparentparticles,whiledarkparticlesaresizedbyusingtheouterdiameteroftheblackopaquegraticulereferencecircles.theouterdiameteroftheblackopaquegraticulereferencecircles.InperformingthemicroscopicparticlecounttestdonotattemptInperformingthemicroscopicparticlecounttestdonot
71、attempttotosizeorenumerateamorphous,semi-sizeorenumerateamorphous,semi-liquid,orotherwisemorphologicallyindistinctmaterialsthathavetheappearanceofastainordiscolorationontheliquid,orotherwisemorphologicallyindistinctmaterialsthathavetheappearanceofastainordiscolorationonthemembranefilter.Thesemateria
72、lsshowlittleornosurfacereliefandpresentagelatinousorfilm-likeappearance.Inmembranefilter.Thesematerialsshowlittleornosurfacereliefandpresentagelatinousorfilm-likeappearance.Insuchcasestheinterpretationofenumerationmaybeaidedbytestingasampleofthesolutionbythelightsuchcasestheinterpretationofenumerati
73、onmaybeaidedbytestingasampleofthesolutionbythelightobscurationparticlecounttest.obscurationparticlecounttest.49第48页/共54页第四十九页，共55页。（1 1）标示装量为）标示装量为25ml25ml或或25ml25ml以上的静脉用注射液或注射用浓溶液以上的静脉用注射液或注射用浓溶液 除另有规定外，除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，在层流净化取供试品，用水将容器外壁洗净，在层流净化(jnghu)(jnghu)台上小心翻转台上小心翻转2020次，使次，使溶液混合均匀，立即小心开
74、启容器，用适宜的方法抽取或量取供试品溶液溶液混合均匀，立即小心开启容器，用适宜的方法抽取或量取供试品溶液25ml25ml，沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器（滤膜直径沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器（滤膜直径25mm25mm）中。静置）中。静置1 1分钟，缓缓抽分钟，缓缓抽滤至滤膜近干，再用微粒检查用水滤至滤膜近干，再用微粒检查用水25ml25ml，沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤，沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤膜近干，然后用平头镊子将滤膜移置平皿上（必要时，可涂抹极薄层的甘油使滤膜近干，然后用平头镊子将滤膜移置平皿上（必要时，可涂抹极薄层的甘油使滤膜平整），微启盖子使滤膜适当干燥后，将平
75、皿闭合，置显微镜载物台上。调好膜平整），微启盖子使滤膜适当干燥后，将平皿闭合，置显微镜载物台上。调好入射光，放大入射光，放大100100倍进行显微测量，调节显微镜至滤膜格栅清晰，移动坐标轴，倍进行显微测量，调节显微镜至滤膜格栅清晰，移动坐标轴，分别测定有效滤过面积上最长粒径大于分别测定有效滤过面积上最长粒径大于10m10m和和25m25m的微粒数。另取至少两个供的微粒数。另取至少两个供试品，同法测定，计算测定结果的平均值。试品，同法测定，计算测定结果的平均值。50第49页/共54页第五十页，共55页。（2 2）标示装量为）标示装量为25ml25ml以下的静以下的静脉用注射液或注射用浓溶液脉用注
76、射液或注射用浓溶液 除另有规除另有规定外，取供试品，用水将容器外壁洗定外，取供试品，用水将容器外壁洗净，在层流净化台上小心翻转净，在层流净化台上小心翻转2020次，次，使混合均匀，立即小心开启容器，用使混合均匀，立即小心开启容器，用适宜的方法直接抽取每个容器中的全适宜的方法直接抽取每个容器中的全部溶液，沿滤器内壁缓缓注入部溶液，沿滤器内壁缓缓注入(zh(zhr)r)经预处理的滤器（滤膜直径经预处理的滤器（滤膜直径13mm13mm）中，照上述（）中，照上述（1 1）同法测定。）同法测定。（3 3）静脉注射用无菌粉末及供）静脉注射用无菌粉末及供注射用无菌原料药注射用无菌原料药 除另有规定外，照除另
77、有规定外，照光阻法中检查法的（光阻法中检查法的（3 3）或（）或（4 4）制备）制备供试品溶液，同上述（供试品溶液，同上述（1 1）操作测定。）操作测定。51第50页/共54页第五十一页，共55页。52四、四、四、四、EvaluationEvaluationForpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeofmorethan100ml,applythecriteriaoftest2.A.Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeoflessthan100ml,applyth
78、ecriteriaoftest2.B.Forpreparationssuppliedincontainerswithanominalvolumeof100ml,applythecriteriaoftest2.B.Note:Test2.AisusedintheJapanesePharmacopoeiaTest2.ASolutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentofmorethan100mL.Thepreparationcomplieswiththetestif
79、theaveragenumberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed12permLequaltoorgreaterthan10manddoesnotexceed2permLequaltoorgreaterthan25m.Test2.BSolutionsforparenteralinfusionorsolutionsforinjectionsuppliedincontainerswithanominalcontentoflessthan100ml.Thepreparationcomplieswiththetestiftheaveragen
80、umberofparticlespresentintheunitstesteddoesnotexceed3000percontainerequaltoorgreaterthan10manddoesnotexceed300percontainerequaltoorgreaterthan25m.第51页/共54页第五十二页，共55页。（1 1）标示装量为）标示装量为100ml100ml或或100ml100ml以以上的静脉用注射液上的静脉用注射液 除另有规定外，每除另有规定外，每1ml1ml中含中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过1212粒，粒，含含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒
81、不得过2 2粒。粒。（2 2）标示装量为）标示装量为100ml100ml以下的静脉以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用浓溶液及供注射用无菌原料用浓溶液及供注射用无菌原料(yunlio)(yunlio)除另有规定外，每个供试除另有规定外，每个供试品容器（份）中含品容器（份）中含10m10m以上的微粒不以上的微粒不得过得过30003000粒，含粒，含25m25m以上的微粒不得以上的微粒不得过过300300粒。粒。53第52页/共54页第五十三页，共55页。第五节第五节第五节第五节 总结总结总结总结(zngji)(zngji)(zngji)(zngji)谢谢(xi xie)！第53页/共54页第五十四页，共55页。内容(nirng)总结会计学。3、单品种或多品种。6、供应商提供校准支持或者自己建立有关程序文件支持的内部体系。就大剂量(jling)的样本而言，取一个样本测试。谢谢第五十五页，共55页。
