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1、临床细菌学检验芮勇宇南方医科大学南方医科大学 南方医院南方医院 检验科检验科/ /检验系检验系1医学博士、博士后，主任技师（正高）、副研究员，医学博士、博士后，主任技师（正高）、副研究员，硕士导师，支部书记；硕士导师，支部书记；南方医院检验科南方医院检验科临床微生物检验室临床微生物检验室主任；主任；南方医院检验系南方医院检验系临床微生物学教研室临床微生物学教研室主任；主任；办公室办公室61642145，手机，手机137 2985 2982，E mail: 2第一部分：标本分类、每一类标本采集注意事项、第一部分：标本分类、每一类标本采集注意事项、涂片及鉴定结果解读；涂片及鉴定结果解读；第二部分：
2、药敏结果解读；第二部分：药敏结果解读；第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。3细菌标本类别标本明细容器1 静脉血静脉血、骨髓血液培养瓶2 中段尿无菌尿杯条码开头203 粪便灰色头短管粪便容器4 痰液无菌痰盒抽吸痰专用痰盒，手工贴条码条码开头205 咽拭子无菌拭子管条码开头204细菌标本类别标本明细容器6 穿刺液（说明标本部位）6.1胸水、腹水、关节腔液、引流液，脑脊液，深部脓液、腹透液等各部位穿刺液无菌拭子管（胸腹水、关节腔液、引流液等需加肝素抗凝）或直接将注射器送检，手工贴条码条码开头205细菌标本类别标本明细容器7 分泌物（说明标本部位）7.1前列
3、腺液、尿道、阴道、宫颈口等生殖道分泌物无菌拭子管条码开头207.2伤口分泌物无菌拭子管条码开头207.3各部位组织块无菌拭子管条码开头207.4气管、食道等部位刷片刷片盒6细菌标本类别标本明细容器8 器械8.1气管插管 无菌拭子管条码开头208.2动静脉插管、各部位引流管无菌拭子管条码开头208.3各种输液反应液体，医院感染监测物品的无菌试验 直接送检相应物品8.4空气监测，物表监测，医护人员手培养 到细菌室取培养皿或含培养液的无菌试管7一、血液标本病原菌检验一、血液标本病原菌检验8 目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿瘤、器官移植、爱滋病和结核
4、病病人不断增多，侵袭性瘤、器官移植、爱滋病和结核病病人不断增多，侵袭性诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加。诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加。 败血症病死率败血症病死率30%30%以上；以上；早期病原学诊断和合理抗早期病原学诊断和合理抗生素治疗，明显降低败血症病死率。生素治疗，明显降低败血症病死率。9血液培养的送检指征：血液培养的送检指征：发热发热 3838或低温或低温 101010109 9/ /L L，“核左移核左移”白细胞增多；白细胞增多；粒细胞减少，成熟的多核白细胞粒细胞减少，成熟的多核白细胞19090次次/ /分；呼吸频率分；呼吸频率2020次次/ /分；分；二氧化碳分压二氧
5、化碳分压32mmHg32mmHg；昏迷；多器官衰竭。昏迷；多器官衰竭。10最最好好在在抗抗生生素素使使用用前前采采集集，若若已已用用抗抗菌菌药药须须，则尽量避开血药浓度的高峰期；则尽量避开血药浓度的高峰期；建建议议第第一一次次可可在在病病人人发发热热初初期期或或高高峰峰期期采采集集，根根据据病病人人发发热热情情况况，在在2424h h内内再再取取2-32-3份份标标本本，以提高病原菌检出率。以提高病原菌检出率。血液血液标本采集标本采集的的注意事项：注意事项：1112标准血培养瓶（蓝色帽）：标准血培养瓶（蓝色帽）：帽子和标签纸左上方为蓝色，帽子和标签纸左上方为蓝色，“Standard 10 Ae
6、robic/FStandard 10 Aerobic/F”，用于成人需氧菌和真菌培养，用于成人需氧菌和真菌培养，血液量血液量3-103-10ml ml ，8-108-10mlml最佳。最佳。 13中和抗生素的树脂瓶（灰色帽）：中和抗生素的树脂瓶（灰色帽）：帽子和标签纸左上方为灰色，帽子和标签纸左上方为灰色，“PLUS+Aerobic/FPLUS+Aerobic/F” ，血液量血液量3-103-10ml ml ，8-108-10mlml最佳。最佳。14厌氧瓶（黄色或橘红色帽）：厌氧瓶（黄色或橘红色帽）：帽子和标签纸左上方为黄色，帽子和标签纸左上方为黄色，“Standard Anaerobic/F
7、Standard Anaerobic/F”，血液量血液量3-73-7ml ml ，5-75-7mlml最佳。最佳。 15中中和和抗抗生生素素的的儿儿童童瓶瓶（粉粉红红色色帽）：帽）：帽帽子子和和标标签签纸纸左左上上方方为为粉粉红红色，色，“PEDS PLUS/FPEDS PLUS/F”, , 血液量血液量1-31-3mlml。 16采采集集标标本本前前先先开开申申请请单单，到到检检验验科科细细菌菌室室或或门门诊诊领领取血培养瓶；取血培养瓶；采采血血前前先先在在培培养养瓶瓶标标签签纸纸左左侧侧空空白白处处（箭箭头头所所指指处处）填填写写抽抽血血时时间间和和病病人人科科别别、床号和姓名；床号和姓名
8、；不不要要在在培培养养瓶瓶条条形形码码上上涂涂写，以免影响扫描。写，以免影响扫描。17将将标标签签纸纸上上条条形形码码右右侧侧部部分分（含含数数字字）撕撕下下贴贴于于检查申请单上；检查申请单上；而而其其它它标标本本均均是是将将申申请请单单上上双双联联号号码码撕撕下下贴贴于于标标本上。本上。18注注射射器器采采血血后后，将将血血培培养养瓶瓶帽帽子子揭揭下下，橡橡皮皮由由金金属属皮皮（围围脖脖）固定于瓶上；固定于瓶上；将将橡橡皮皮塞塞用用70%70%酒酒精精消消毒毒，注注射射器器针针头头刺刺穿穿橡橡皮皮塞塞将将血血注注入入培培养养瓶内；瓶内；橡皮塞裸露即可。橡皮塞裸露即可。19 细菌室接到已采集血
9、液的培养瓶后，细菌室接到已采集血液的培养瓶后，立即放入立即放入自自动血液培养动血液培养检测检测仪，仪，自动培养及实时检测。自动培养及实时检测。20阳性初步结果报告：阳性初步结果报告：仪器阳性报警，仪器阳性报警，90%90%以上以上阳性标本阳性标本24h24h内检出；内检出；取出阳性瓶，对血液涂片及革兰氏染色；取出阳性瓶，对血液涂片及革兰氏染色；立立即即将将涂涂片片结结果果（G+G+、G-G-细细菌菌，球球菌菌或或杆杆菌菌，或真菌）电话通知相应科室，并在网上发出；或真菌）电话通知相应科室，并在网上发出；利利用用阳阳性性血血液液进进行行K-BK-B法法药药敏敏试试验验，第第二二天天将将初步药敏结果
10、电话通知相应科室。初步药敏结果电话通知相应科室。结果报告形式结果报告形式21血液涂片血液涂片22血液涂片血液涂片23血液涂片血液涂片24血液涂片血液涂片25血液涂片血液涂片26血液涂片血液涂片27阳性最终结果报告：阳性最终结果报告：将阳性血液接种血平板培养细菌；将阳性血液接种血平板培养细菌；第第二二天天将将血血平平板板上上生生长长的的细细菌菌鉴鉴定定及及MICMIC法法药药敏敏试试验验；第第三三天天发发鉴鉴定定及及MICMIC法法药药敏敏结结果果的的正正式报告。式报告。阴性结果报告：阴性结果报告：如如培培养养5 5天天仍仍为为阴阴性性，再再接接种种血血平平板板培培养养一一天天，核实为阴性后再发
11、报告。核实为阴性后再发报告。结果报告形式结果报告形式28二二、中段尿标本病原菌检验中段尿标本病原菌检验29检测泌尿系统感染；检测泌尿系统感染；一般进行细菌和真菌培养、菌落计数和药敏；一般进行细菌和真菌培养、菌落计数和药敏；也也可可离离心心后后对对沉沉渣渣进进行行涂涂片片检检查查，革革兰兰染染色色或或抗酸染色；抗酸染色；也可用于淋球菌培养和涂片检查。也可用于淋球菌培养和涂片检查。目的和意义目的和意义30最常采集中段尿，最常采集中段尿，晨起第一次尿送检最佳；晨起第一次尿送检最佳；先先用用肥肥皂皂水水、或或1 1：10001000高高锰锰酸酸钾钾水水溶溶液液冲冲洗洗女女性性外外阴阴部部及及尿尿道道口
12、口或或男男性性尿尿道道口口，再再用用灭灭菌菌水水清清洗洗，最最后后用用灭灭菌菌纱纱布布檫檫拭拭；排排尿尿弃弃去去前前段段尿尿，留留取取中中段段尿尿约约1010mlml于于无无菌菌容容器器内内加加盖送检。盖送检。采集方法采集方法31尿尿道道病病原原菌菌可可在在温温暖暖尿尿液液中中繁繁殖殖，中中段段尿尿标标本本采采集集后后应应尽尽快快送送检检，否否则则将将影影响响病病原原菌菌计计数的准确性；数的准确性；排排尿尿困困难难者者可可导导尿尿，避避免免多多次次导导尿尿所所致致尿尿路路感染，感染，导尿包必须为无菌的合格产品。导尿包必须为无菌的合格产品。采集方法采集方法32不染色涂片不染色涂片尿沉渣真菌尿沉渣
13、真菌 33中段尿中段尿34中段尿中段尿35“培培养养出出3 3种种以以上上细细菌菌，疑疑采采集集污污染染，重重留留标标本本”：如如培培养养出出3 3种种或或以以上上细细菌菌，且且无无优优势势菌菌；约约10%10%的的标标本本不不合合格格，采采集集时时污污染染，采采集集中中段段尿尿（尤尤其其女女性性）最最好好由由专专门门医医护护人人员员指指导导采采集，以减少污染。集，以减少污染。结果报告形式结果报告形式36“培养出少量某种细菌、菌落计数结果培养出少量某种细菌、菌落计数结果”：如如菌菌量量较较少少 10103 3mlml，但但为为单单一一菌菌种种，可可能能为为采采集集时时污污染染，也也可可能能是是
14、真真正正的的感感染染，临临床床医医生生可可根根据据病病人人临临床床表表现现判判断断或或再再留留取取标标本本送送检。检。结果报告形式结果报告形式37“培培养养出出某某种种细细菌菌、菌菌落落计计数数结结果果、药药敏敏结结果果”：一一般般认认为为细细菌菌或或真真菌菌10105 5ml ml ，且且必必须须有有优优势势，才才可可以以确确定定为为感感染染，对对优优势势菌菌进进行行鉴鉴定定和药敏。和药敏。10104 4mlml至至10105 5mlml，也有意义。，也有意义。 结果报告形式结果报告形式38三三、粪便标本病原菌检验粪便标本病原菌检验对肠道感染进行病原学诊断。对肠道感染进行病原学诊断。涂片革兰
15、染色查细菌、球涂片革兰染色查细菌、球/ /杆菌比、真菌。杆菌比、真菌。涂片暗视野查弧菌；抗酸染色。涂片暗视野查弧菌；抗酸染色。培养沙门氏和志贺菌；培养弧菌；培养真菌；培养沙门氏和志贺菌；培养弧菌；培养真菌；菌群失调病人，对占优势细菌进行鉴定药敏。菌群失调病人，对占优势细菌进行鉴定药敏。39标本采集：标本采集：挑取含脓、血或粘液粪便约挑取含脓、血或粘液粪便约2-32-3g g；置于清洁容器或置于保存液中送检；置于清洁容器或置于保存液中送检；排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子采集。排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子采集。40检查上下呼吸道感染检查上下呼吸道感染痰液（下呼吸道）和咽拭子（咽喉部）；痰液（下呼
16、吸道）和咽拭子（咽喉部）；可进行涂片查细菌、真菌或抗酸杆菌；可进行涂片查细菌、真菌或抗酸杆菌；可进行细菌、真菌或结核杆菌培养；可进行细菌、真菌或结核杆菌培养；上上述述检检查查只只要要一一口口痰痰即即可可，在在一一张张检检查查申申请请单上选上述多个项目。单上选上述多个项目。四和五、呼吸道标本的病原菌检验四和五、呼吸道标本的病原菌检验41采集深部痰采集深部痰，不是唾液和口水。不是唾液和口水。自自然然咳咳痰痰法法，最最好好为为清清晨晨第第一一口口痰痰，用用清清水水反复漱口用力咳出反复漱口用力咳出第一口痰于无菌容器内；第一口痰于无菌容器内；支气管镜采集法支气管镜采集法。采集方法采集方法 42痰液痰液4
17、3痰液痰液44痰液痰液45痰液痰液46痰液痰液47痰液痰液48全全球球每每年年增增加加结结核核病病人人约约800800万万 10001000万万，死死亡病人约亡病人约300300万；我国高发，广东也较高万；我国高发，广东也较高; ;结结核核分分枝枝杆杆菌菌菌菌体体表表面面含含脂脂质质成成分分，不不易易着着色色，但但一一经经着着色色后后，在在酸酸或或乙乙醇醇的的作作用用下下也也不不容容易脱色；易脱色；抗抗酸酸性性菌菌呈呈红红色色，其其它它细细菌菌及及细细胞胞等等背背景景呈呈蓝蓝色；色；油镜下查遍整个涂片，或至少油镜下查遍整个涂片，或至少100100个视野。个视野。涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌涂片抗
18、酸染色：检查抗酸杆菌4919841984年国内统一暂行规定报告方式：年国内统一暂行规定报告方式：未找到抗酸杆菌；未找到抗酸杆菌；找到抗酸杆菌找到抗酸杆菌1 1或或2 2个，个，全视野发现全视野发现1 1或或2 2个；个；找到抗酸杆菌找到抗酸杆菌 + +，全视野发现全视野发现3-93-9个；个；找到抗酸杆菌找到抗酸杆菌 + +，全视野发现全视野发现10-9910-99个；个；找到抗酸杆菌找到抗酸杆菌 + +，每视野发现每视野发现1-91-9个；个；找到抗酸杆菌找到抗酸杆菌 + +，每视野发现每视野发现1010个以上。个以上。 涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌5051报报“正常
19、菌群正常菌群”：培养出的均为不致病的细菌；培养出的均为不致病的细菌；培养出的细菌种类较多且无优势菌。培养出的细菌种类较多且无优势菌。报报“无菌生长无菌生长”：病人抗生素使用过度导致。：病人抗生素使用过度导致。结果报告形式结果报告形式 52报报“分离出某种细菌或真菌，比例，药敏分离出某种细菌或真菌，比例，药敏”：分分离离出出致致病病菌菌，而而不不是是常常见见的的正正常常菌菌群群，且且具有优势，约占血平板菌群总数的百分比具有优势，约占血平板菌群总数的百分比% %；同同一一病病人人如如痰痰中中连连续续分分离离出出同同一一种种菌菌，3 3天天内内如果已经做过药敏试验，则不再做药敏；如果已经做过药敏试验
20、，则不再做药敏；同同一一病病人人痰痰中中细细菌菌的的种种类类和和比比例例，会会随随着着治治疗情况变化，也受留取痰标本的质量影响。疗情况变化，也受留取痰标本的质量影响。结果报告形式结果报告形式 53六、穿刺液（脑脊液）病原菌检验六、穿刺液（脑脊液）病原菌检验脑脑脊脊液液采采集集：通通过过腰腰椎椎穿穿刺刺术术（Lumber Lumber puncturepuncture）以以无无菌菌操操作作采采集集脑脑脊脊液液3-53-5mlml于于无无菌菌小小瓶瓶或或无无菌菌试试管管中中，一一般般第第一一管管用用于于病病原原菌菌检检验验，第第二二管管用用于于理理化化检检验验，第第三三管管用用于于细胞学检验。细胞
21、学检验。54六、穿刺液（脑脊液）病原菌检验六、穿刺液（脑脊液）病原菌检验引引起起脑脑膜膜炎炎的的病病原原体体脑脑膜膜炎炎奈奈瑟瑟菌菌等等抵抵抗抗力力弱弱，不不耐耐冷冷，故故采采集集的的脑脑脊脊液液应应立立即即保保温温送送检检或或床边接种。床边接种。可查一般细菌真菌、隐球菌、抗酸杆菌。可查一般细菌真菌、隐球菌、抗酸杆菌。55新新生生隐隐球球菌菌广广泛泛分分布布于于自自然然界界，可可存存在在人人体体体体表表、口口腔腔及肠道；及肠道；经经呼呼吸吸道道侵侵入入人人体体，由由肺肺经经血血行行播播散散时时，可可侵侵犯犯所所有有脏脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜；器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜；好好发发于于细细
22、胞胞免免疫疫功功能能低低下下者者，如如AIDSAIDS、恶恶性性肿肿瘤瘤、糖糖尿尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者；病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者；临临床床上上怀怀疑疑隐隐球球菌菌性性脑脑膜膜炎炎时时，常常抽抽取取脑脑脊脊液液进进行行墨墨汁汁染色。染色。墨汁染色墨汁染色查隐球菌查隐球菌56脑脊液脑脊液离心离心3500r/m，10分钟；弃上清，沉渣涂片；分钟；弃上清，沉渣涂片；墨墨汁汁染染色色时时，先先取取一一玻玻片片，编编号号，先先滴滴1滴滴印印度度墨墨汁汁，再再将沉渣涂片，将适量墨汁和沉渣混匀，盖上盖玻片；将沉渣涂片，将适量墨汁和沉渣混匀，盖上盖玻片；将将显显微微镜镜视视野野调调暗
23、暗，先先用用低低倍倍镜镜观观察察全全片片，再再用用高高倍倍镜镜观观察可疑的细胞；察可疑的细胞；必必须须找找到到典典型型形形态态的的隐隐球球菌菌，荚荚膜膜清清楚楚，大大小小不不一一，有有出出芽等；芽等；非致病性隐球菌无荚膜。非致病性隐球菌无荚膜。墨汁染色墨汁染色查隐球菌查隐球菌57墨汁染色墨汁染色新型隐球菌新型隐球菌585960其其它它穿穿刺刺液液：如如胸胸腹腹水水、关关节节腔腔液液等等，穿穿刺刺针针注入无菌试管送检或将注射器直接送检；注入无菌试管送检或将注射器直接送检；如如为为多多管管穿穿刺刺液液或或相相关关组组织织，请请在在申申请请单单上上注注明是否都做培养鉴定；明是否都做培养鉴定；采采集集
24、注注意意事事项项：注注意意无无菌菌操操作作；如如培培养养出出类类白白喉喉杆杆菌菌，常常为为采采集集时时污污染染所所致致；可可用用血血液液培培养瓶培养。养瓶培养。61七、分泌物（伤口或脓液）病原菌检验七、分泌物（伤口或脓液）病原菌检验开开放放性性化化脓脓灶灶：应应先先用用灭灭菌菌生生理理盐盐水水冲冲洗洗表表面面污污染染菌菌，再再用用棉棉拭拭子子蘸蘸取取或或注注射射器器吸吸取取脓脓性性分泌物。分泌物。瘘瘘管管内内脓脓液液：先先用用灭灭菌菌棉棉拭拭子子挤挤压压瘘瘘管管弃弃去去前前端脓液，再收集脓汁。端脓液，再收集脓汁。62七、分泌物（伤口或脓液）病原菌检验七、分泌物（伤口或脓液）病原菌检验封闭性脓肿
25、：封闭性脓肿：可用注射器穿刺抽取。可用注射器穿刺抽取。疑疑为为厌厌氧氧菌菌感感染染者者：取取脓脓液液后后立立即即排排净净注注射射器器内内空空气气，针针头头插插入入无无菌菌橡橡皮皮塞塞送送检检；外外界界相相通部位的标本，如痰不能作厌氧菌培养通部位的标本，如痰不能作厌氧菌培养。63七、分泌物（生殖道）病原菌检验七、分泌物（生殖道）病原菌检验性性传传播播疾疾病病，简简称称性性病病，是是一一组组通通过过性性行行为为传传播播的的，侵侵犯犯皮皮肤肤、性性器器官官和和全全身身多多脏脏器器损损害的感染性疾病。害的感染性疾病。标标本本采采集集：常常取取生生殖殖道道分分泌泌物物，男男性性取取尿尿道道口口分分泌泌物
26、物或或前前列列腺腺液液，女女性性取取外外阴阴糜糜烂烂面面病病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物等。灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物等。64G-双球菌双球菌65白带白带66淋病淋病涂片染色镜检：涂片染色镜检：急急性性淋淋菌菌性性尿尿道道炎炎敏敏感感度度和和特特异异度度高高达达90%90%以以上上；对对慢慢性性无无症症状状淋淋病病的的女女性性患患者者涂涂片片检检查漏诊率达查漏诊率达40%40%，故必须同时进行培养。，故必须同时进行培养。培养鉴定及药敏培养鉴定及药敏结果准确，诊断金标准。结果准确，诊断金标准。67解脲解脲/ /人型支原体：人型支原体：开展了培养鉴定及药敏试验；开展了培养鉴定及药敏试验；需注
27、意的是标本采集后应尽快送检。需注意的是标本采集后应尽快送检。诊断试剂和方法要符合卫生部相关规定；诊断试剂和方法要符合卫生部相关规定；注意保护病人的隐私。注意保护病人的隐私。68八八、器械器械病原菌病原菌检验检验静脉插管等标本：静脉插管等标本：放入无菌试管中送检；放入无菌试管中送检；无菌试验：无菌试验：怀疑医疗用品被污染时送检怀疑医疗用品被污染时送检；空空气气培培养养：到到细细菌菌室室取取培培养养平平皿皿置置于于待待测测地地点点，打开平皿盖打开平皿盖1010minmin，盖上后送检；盖上后送检；医医护护人人员员手手培培养养和和物物表表培培养养：到到细细菌菌室室取取含含消消毒毒剂剂中中和和液液的的
28、无无菌菌试试管管，用用棉棉签签涂涂抹抹后后放放入入试试管中送检。管中送检。69第一部分：标本分类、标本采集注意事项、涂片及第一部分：标本分类、标本采集注意事项、涂片及鉴定结果解读；鉴定结果解读；第二部分：药敏结果解读；第二部分：药敏结果解读；第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。70稀释法稀释法（dilution methoddilution method）和和K-BK-B纸片琼脂扩纸片琼脂扩散法散法（Kirby-Bauer disc agar diffusion Kirby-Bauer disc agar diffusion methodmethod
29、）；稀释法的结果比稀释法的结果比K-BK-B法的更准确。法的更准确。本实验室利用细菌自动鉴定和药敏仪，为稀释本实验室利用细菌自动鉴定和药敏仪，为稀释法药敏试验，由仪器自动判断药敏结果。法药敏试验，由仪器自动判断药敏结果。 药敏检测的方法药敏检测的方法71根据临床实验室标准化委员会（根据临床实验室标准化委员会（clinical clinical laboratory standards of institute, laboratory standards of institute, CLSICLSI）标准判断标准判断敏感敏感（susceptiblesusceptible，S S）：推荐使用；：推
30、荐使用；中中介介（intermediateintermediate，I I）：药药物物MICMIC接接近近体体液液或组织可达到药物浓度，但反应低于敏感株；或组织可达到药物浓度，但反应低于敏感株；耐耐药药（resistantresistant，R R）；指指常常规规用用药药剂剂量量不不能能达到达到MICMIC，临床疗效不可靠。临床疗效不可靠。药敏检测的方法药敏检测的方法72抗菌药物的作用靶位抗菌药物的作用靶位73氨基糖甙类：氨基糖甙类：阿米卡星阿米卡星AmikacinAmikacin、庆大霉素、庆大霉素GentamicinGentamicin1 1代头孢：代头孢：头孢唑啉头孢唑啉Cefazoli
31、nCefazolin2 2代头孢：代头孢：头孢呋辛钠头孢呋辛钠CefuroximeCefuroxime sodium sodium3 3代头孢：代头孢：头孢他啶头孢他啶CeftazidimeCeftazidime、头孢噻肟、头孢噻肟CefotaximeCefotaxime、头孢吡肟（马斯平）、头孢吡肟（马斯平）CefepimeCefepime细菌室药敏试验中常选用的抗生素种类细菌室药敏试验中常选用的抗生素种类74单环单环-内酰胺类：内酰胺类：氨曲南氨曲南AztreonamAztreonam广谱青霉素类：广谱青霉素类：氨苄西林氨苄西林AmpicilinAmpicilin、青霉素、青霉素G G P
32、enicillinPenicillin、苯唑西林、苯唑西林OxacillinOxacillin 抗假单胞菌广谱青霉素：抗假单胞菌广谱青霉素：哌拉西林哌拉西林PiperacillinPiperacillin75复方复方-内酰胺类：内酰胺类：阿莫西林阿莫西林- -克拉维酸（奥格门丁）克拉维酸（奥格门丁）Amoxicilin/clavelanateAmoxicilin/clavelanate、氨苄西林氨苄西林- -舒巴坦（优力新）舒巴坦（优力新）Ampicillin/SulbactamAmpicillin/Sulbactam、哌拉西林哌拉西林- -他唑巴坦（特治星）他唑巴坦（特治星）Pioeraci
33、llin/TazobactamPioeracillin/Tazobactam、头孢哌酮头孢哌酮- -舒巴坦（舒普深）舒巴坦（舒普深）efoperazone/Sulbactamefoperazone/Sulbactam碳青霉烯类：亚胺培南碳青霉烯类：亚胺培南ImipenemImipenem、美罗培南、美罗培南MeropenemMeropenem76多肽类：多粘菌素多肽类：多粘菌素E E ColistinColistin E E、替考拉宁、替考拉宁TeicoplaninTeicoplanin、万古霉素、万古霉素VancomicinVancomicin磺胺类：复方新诺明（甲氧苄唑磺胺类：复方新诺明（
34、甲氧苄唑- -磺胺甲唑）磺胺甲唑）Timethoprim/SulfamethoxazoleTimethoprim/Sulfamethoxazole林可霉素类：克林霉素林可霉素类：克林霉素ClindamycinClindamycin大环内脂类：红霉素大环内脂类：红霉素ErythromycinErythromycin77氯霉素：氯霉素：氯霉素氯霉素ChloramphenicolChloramphenicol三代喹诺酮：三代喹诺酮：环丙沙星环丙沙星CiprofloxaxinCiprofloxaxin 、氧氟沙星、氧氟沙星OfloxaxinOfloxaxin 、左旋氧氟沙星、左旋氧氟沙星Levoflo
35、xacinLevofloxacin 、莫丙、莫丙沙星沙星MoxifloxacinMoxifloxacin四环素类：四环素类：四环素四环素TetracyclineTetracycline利福平利福平RifampinRifampin 78 产产 超超 广广 谱谱 -内内 酰酰 胺胺 酶酶 ( (extended extended spectrum-lactamasespectrum-lactamase，ESBLESBL) )：该该酶酶水水解解青青霉霉素素、头头孢孢菌菌素素及及单单胺胺类类的的超超广广谱谱- -酶酶，主主要要由由肺肺炎炎克克雷雷伯伯菌菌和和大大肠肠埃埃希希菌菌等等肠肠杆杆菌菌科科细菌
36、产生；细菌产生； CLSICLSI规规定定， ESBLESBL确确认认试试验验（+ +） ：则则对对青青霉霉素素类类、头头孢孢菌菌素素类类和和氨氨曲曲南南均均应应报报告告耐耐药药，而而不不考考虑虑体体外外药药敏敏结结果果，建建议议用用碳碳青青霉霉烯类抗生素。烯类抗生素。79 耐甲氧西林葡萄球菌（耐甲氧西林葡萄球菌（methecillinmethecillin resistance staphylococcusresistance staphylococcus，MRSMRS），）， CLSI CLSI规定，葡萄球菌如对苯唑西林（或甲规定，葡萄球菌如对苯唑西林（或甲氧西林）耐药：氧西林）耐药：对青
37、霉素类、头孢菌素类、碳对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏结果。药，而不考虑体外药敏结果。80 耐高浓度庆大霉素肠球菌（耐高浓度庆大霉素肠球菌（High level High level aminoglycosidesaminoglycosides resistance in resistance in EnterococcusEnterococcus） CLSI CLSI规定，规定，肠球菌引起的全身性严重感染，肠球菌引起的全身性严重感染，常联合应用常联合应用- -内酰胺类和氨基糖肽类抗生素，内酰胺类和氨
38、基糖肽类抗生素，如果肠球菌对高浓度庆大霉素耐药，则联合用如果肠球菌对高浓度庆大霉素耐药，则联合用药无效药无效。813 3、临床分离菌株的分布和药敏分析、临床分离菌株的分布和药敏分析利利用用WHOWHO提提供供的的WHONETWHONET软软件件，建建立立细细菌菌耐耐药药监监测数据库。测数据库。可可以以对对不不同同时时期期、不不同同科科室室、不不同同属属种种、不不同类型标本等的资料分别进行分析。同类型标本等的资料分别进行分析。下面介绍本院下面介绍本院0909年细菌耐药资料分析结果。年细菌耐药资料分析结果。8283848586878889909192939495969798991001011021
39、03104第一部分：标本分类、标本采集注意事项、涂片及第一部分：标本分类、标本采集注意事项、涂片及鉴定结果解读；鉴定结果解读；第二部分：药敏结果解读；第二部分：药敏结果解读；第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。105临床常见细菌鉴定要点106临床常见细菌鉴定要点临床常见细菌鉴定要点G+球菌球菌G-球菌球菌G-杆菌杆菌G+杆菌杆菌氧化酶，氧化酶，O/F肠杆菌科肠杆菌科非发酵菌非发酵菌分枝杆菌分枝杆菌菌落特征、革兰菌落特征、革兰/抗酸染色抗酸染色触酶触酶葡萄球菌葡萄球菌+肠球菌肠球菌-链球菌链球菌-触酶，氧化酶触酶，氧化酶奈瑟菌奈瑟菌+布兰汉菌布兰汉菌+
40、4糖：糖：葡乳麦蔗葡乳麦蔗DNA， N硝还硝还107临床常见临床常见G+球菌鉴定要点球菌鉴定要点葡萄球菌葡萄球菌链球菌链球菌肠球菌肠球菌触酶触酶+触酶触酶触酶触酶金葡金葡溶血溶血凝固酶凝固酶+溶血葡溶血葡溶血溶血凝固酶凝固酶-表皮葡表皮葡不溶血不溶血凝固酶凝固酶-肺炎链肺炎链溶血溶血奥扑托奥扑托辛辛S化脓链化脓链溶血溶血杆菌肽杆菌肽S无乳链无乳链溶血溶血CAMP+CAMP+高盐高盐七叶苷七叶苷阿拉伯糖阿拉伯糖屎屎肠肠阿阿+粪粪肠肠阿阿-108发酵菌发酵菌氧化氧化/发酵，发酵，+/+肠杆菌科肠杆菌科例外：非发酵菌例外：非发酵菌氧化氧化/发酵，发酵，+/-不动杆菌：不动杆菌：G-球球杆菌；杆菌；嗜
41、麦芽寡养单胞嗜麦芽寡养单胞菌：菌落黄色。菌：菌落黄色。例外：发酵菌例外：发酵菌氧化氧化/发酵，发酵，+/+弧菌属弧菌属非发酵菌非发酵菌氧化氧化/发酵，发酵，+/-假单胞菌属假单胞菌属氧化酶氧化酶-氧化酶氧化酶+临床常见临床常见G-杆菌鉴定要点杆菌鉴定要点O/F，KIA肠杆菌科生化肠杆菌科生化O/F非发酵菌生化非发酵菌生化血清学鉴定血清学鉴定O157：H7、沙门菌属、志贺菌属、沙门菌属、志贺菌属血清学鉴定血清学鉴定109临床分离细菌真菌中，有少部分通过传统生化反应临床分离细菌真菌中，有少部分通过传统生化反应和表型方法难以鉴定，给临床诊断和治疗带来困难。和表型方法难以鉴定，给临床诊断和治疗带来困难
42、。目前细菌真菌核糖体基因序列分析，已经成为分类目前细菌真菌核糖体基因序列分析，已经成为分类的金标准。的金标准。随着分子生物学技术的飞速发展，根据细菌和真菌随着分子生物学技术的飞速发展，根据细菌和真菌基因组的特点，对它们的核糖体基因进行扩增并测基因组的特点，对它们的核糖体基因进行扩增并测序，可以准确阐明难鉴定病原菌的属种。序，可以准确阐明难鉴定病原菌的属种。110细菌细菌的的16S 16S rRNArRNA编码基因由保守区和可变区组成，编码基因由保守区和可变区组成，保守区为细菌共有，细菌间无差别保守区为细菌共有，细菌间无差别, ,可变区具有属种可变区具有属种差异。差异。真菌真菌的的5.8S 5.
43、8S rRNArRNA基因和基因和28S 28S rRNArRNA基因由保守区和可基因由保守区和可变区组成，它们之间的变区组成，它们之间的ITS2ITS2区域也有属种差异。区域也有属种差异。111本研究利用通用引物扩增分别扩增细菌的本研究利用通用引物扩增分别扩增细菌的16S 16S rRNArRNA基因和真菌核糖体的转录间隔区基因和真菌核糖体的转录间隔区2 2（ITS2ITS2），），对对PCRPCR产物进行测序，将序列结果在产物进行测序，将序列结果在GenBankGenBank进行进行BlastnBlastn比对。比对。具体方法略，相关研究即将发表。具体方法略，相关研究即将发表。 11211
44、3114115116117本研究从血液中检出本研究从血液中检出2 2例临床不常见细菌。例临床不常见细菌。1 1例是生痰二氧化碳嗜纤维菌，例是生痰二氧化碳嗜纤维菌，G-G-球菌，是人类口腔球菌，是人类口腔的正常菌群，属于条件致病菌，常通过口腔粘膜进的正常菌群，属于条件致病菌，常通过口腔粘膜进入血液，感染者大多患有血液系统恶性肿瘤或粒细入血液，感染者大多患有血液系统恶性肿瘤或粒细胞减少等疾病。该例患者岁，男性，诊断为地中海胞减少等疾病。该例患者岁，男性，诊断为地中海贫血，来自小儿科层流病房。贫血，来自小儿科层流病房。118另外另外1 1例是根癌农杆菌，例是根癌农杆菌，G-G-杆菌，普遍存在于土壤，
45、杆菌，普遍存在于土壤，生活在植物根的表面，依靠由根组织渗透出来的营生活在植物根的表面，依靠由根组织渗透出来的营养物质生存，能诱发植物产生肿瘤，一般应用于植养物质生存，能诱发植物产生肿瘤，一般应用于植物的转基因研究。该例患者物的转基因研究。该例患者2020岁，女性，诊断为急岁，女性，诊断为急性胰腺炎，来自消化内科。性胰腺炎，来自消化内科。上述上述2 2例细菌引起的败血症国内文献未见报道，国外例细菌引起的败血症国内文献未见报道，国外有有4 4例病例报道。例病例报道。119本研究检出本研究检出4 4例临床难鉴定真菌。例临床难鉴定真菌。第第1 1例是马尔尼菲青霉菌，例是马尔尼菲青霉菌，常感染艾滋病患者
46、，本病常感染艾滋病患者，本病多见于东南亚。该例患者多见于东南亚。该例患者3939岁，男性，艾滋病抗体岁，男性，艾滋病抗体阳性，以肺炎收治于感染科。阳性，以肺炎收治于感染科。120第第2 2例是例是ArxiozymaArxiozyma telluristelluris，属于产孢子酵母菌，属于产孢子酵母菌，首次从南非土壤分离得到，大都感染啮齿类动物和首次从南非土壤分离得到，大都感染啮齿类动物和鸟类，较少感染人、猪、牛。此例标本来源是痰液，鸟类，较少感染人、猪、牛。此例标本来源是痰液，与白色念珠菌混合感染。该例患者与白色念珠菌混合感染。该例患者8282岁，女性，以岁，女性，以肺部感染收治于呼吸内科。
47、肺部感染收治于呼吸内科。121第第3 3例是黑曲霉菌，例是黑曲霉菌，标本来源是患者耳部脓液。该例标本来源是患者耳部脓液。该例患者患者2525岁，女性，就诊于耳鼻喉门诊，诊断为慢性岁，女性，就诊于耳鼻喉门诊，诊断为慢性化脓性中耳炎，国内文献报道耳部真菌感染的主要化脓性中耳炎，国内文献报道耳部真菌感染的主要病是黑曲霉菌。病是黑曲霉菌。122第第4 4例是镰孢菌，例是镰孢菌，标本来源是眼部分泌物。该例患者标本来源是眼部分泌物。该例患者4848岁，女性，诊断为角膜炎，来自眼科。我国镰孢岁，女性，诊断为角膜炎，来自眼科。我国镰孢菌所引起的真菌性角膜炎占真菌性角膜炎体的近菌所引起的真菌性角膜炎占真菌性角膜炎体的近4040。123Thank you!124
