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1、比较不同途径给胰岛素对血糖的比较不同途径给胰岛素对血糖的影响影响立项的依据立项的依据胰岛素自发现以来一直是治疗糖尿病的主要药物，特别是1965年中国首次人工合成胰岛素成功为胰岛素广泛应用于临床奠定了基础1。然而直接将胰岛素口服给药，可使其在胃肠道被蛋白酶迅速降解，故临床常采用注射给药，但注射给药给病人带来诸多不便。近年来，非注射给药途径的胰岛素制剂已成为国内外学者的研究热点2。实验目的实验目的本实验通过对正常家兔及糖尿病家兔不同途径给予胰岛素，比较不同途径给药时胰岛素的降血糖作用。同时学习葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的方法。实验原理实验原理胰岛素是一种由两条多肽链组成的酸性蛋白质，A链含21个氨
2、基酸残基，B链含30个氨基酸残基，A、B两链通过两个二硫键以共价相连。胰岛素通过促进糖原的合成和储存，加速葡萄糖的氧化和酵解，并抑制糖原分解和异生而降低血糖3。实验对象、器材及药品实验对象象 家兔（家兔（2.52.53kg3kg）实验器材器材 722722型型分分光光光光度度计计、离离心心机机、兔兔手手术术台台、固固定定 绳绳、水水浴浴箱箱、离离心心管管若若干干、小小试试管管若若干干、移移液液管管5ml5ml和和1ml1ml若若干干、注注射射器器5ml5ml和和2ml2ml及及微微量量注射器若干、注射器若干、100ml100ml锥形瓶、胶布、纱布等。锥形瓶、胶布、纱布等。实验药品品 1%1%戊
3、戊巴巴比比妥妥钠钠、胰胰岛岛素素注注射射剂剂、胰胰岛岛素素口口腔腔黏黏膜膜喷喷雾雾剂剂（40IU/ml40IU/ml）、四四氧氧嘧嘧啶啶、肝肝素素、pH7.4pH7.4磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液、Na2CO3Na2CO3、酒酒石石酸酸、CuSO4CuSO4 6H2O6H2O、钼钼酸酸、钨钨酸酸钠钠、85%85%浓浓磷磷酸酸、浓浓硫硫酸酸、无无水水葡葡萄萄糖糖、生理盐水、苯甲酸。生理盐水、苯甲酸。实验方法和步骤1.1.家兔四氧家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立糖尿病模型的建立4 4： （1 1）、取）、取3636只健康成年家兔，雌雄兼只健康成年家兔，雌雄兼备，体重，体重2.52.53kg3kg。 （2
4、2）、糖尿病模型的制）、糖尿病模型的制备方法参考文献方法参考文献5 5，取，取1818只只成年家兔，雌雄兼成年家兔，雌雄兼备，空腹，空腹24h24h后静脉后静脉给予予150mg/kg150mg/kg6 6四氧四氧嘧啶生理生理盐水溶液，水溶液，3d3d后待空腹血糖后待空腹血糖浓度达到度达到16.65mmol/L16.65mmol/L以上以上时，即，即认为生成糖尿病模型。生成糖尿病模型。 （3 3）、正常家兔与糖尿病家兔分）、正常家兔与糖尿病家兔分别随机分随机分为3 3组，雌雄，雌雄兼兼备，共，共6 6组。实验方法和步骤具体分组：i）正常组，胰岛素注射给药；ii）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素注射给
5、药；iii）正常组，胰岛素滴眼给药；iv）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素滴眼给药；v）正常组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药；vi）四氧嘧啶糖尿病模型组，胰岛素口腔黏膜喷雾给药。2.实验前家兔禁食1820h，取六组家兔，分别称重。以3%戊巴比妥钠1ml/kg耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将家兔仰位固定于兔台。随时补充适量戊巴比妥钠使动物在整个实验中维持浅麻醉状态。3.每只家兔刺破耳缘静脉取血1ml，随后立即补充同体积肝素化的生理盐水。实验方法和步骤4.i）组、ii）组15min后皮下注射胰岛素0.75ml/kg，并记录注射时间。分别取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml7，并补充同体积
6、肝素化的生理盐水，取血方法同步骤3。5.iii）组、iv）组15min后用微量注射器取胰岛素50l滴入动物左眼，并记录注射时间。分别取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理盐水，取血方法同步骤3。6.v）组、vi）组15min后取胰岛素口腔黏膜喷雾剂0.25ml/kg经适量pH7.4磷酸盐缓冲液稀释后从舌下喷雾给药，并记录给药时间。分别取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml，并补充同体积肝素化的生理盐水，取血方法同步骤3。实验方法和步骤7.葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤8：（1）、血液采集后，取干燥锥形瓶一个，准确加入蒸馏水
7、7.0ml，用移液管吸取全血0.2ml，慢慢将血液滴入水中，并用其水洗涤移液管吸头，使血液全部移入锥形瓶中，混匀。（2）、加入1/3mol/LH3SO40.4ml，10%钨酸钠溶液0.4ml，充分混匀，放置510min。（3）、待溶液由红色变为咖啡色后，离心7min（转速为3000r/min）。（4）、测定方法：手工操作法取试管3支，取上清液按下表操作。实验方法和步骤 表-1 家兔血糖测定（ml）试剂试剂空白管空白管标准管标准管测定管测定管血清2.0葡萄糖标准应用液2.0蒸馏水2.0碱性磷酸铜 2.02.02.0充分摇匀，置沸水浴中准确煮沸8min，取出切勿摇动，冷水中冷却磷钼酸试剂2.02.
8、02.0实验方法和步骤（5）、混匀放置3min，将上述各管用蒸馏水3ml稀释。将各管混匀后，用空白管调“0”点，在波长620nm处比色，读取标准管及测定管吸光度。（注：本法对葡萄糖有专一性，不受其它糖及还原性物质干扰，其正常值为130150mg/100ml。）血糖含量计算方法：血糖含量（mmol/L）=(测定管吸光度/标准管吸光度)100/180.220.025观察指标观察指标 比较六组家兔各时间血糖含量，记录数据，计算后填入下表比较六组家兔各时间血糖含量，记录数据，计算后填入下表 表-2不同途径给胰岛素家兔血糖浓度变化分组分组药物剂量药物剂量血糖浓度（血糖浓度（mmol/L）（单位：）（单位
9、：min）-150153060120180240i0.75ml/kgii0.75ml/kgiii50liv50lv0.25ml/kgvi0.25ml/kg预期结果及结果分析预期结果及结果分析预期期结果果 ：皮下注射胰岛素1h后血糖下降较前明显，用药后24h后达高峰，半衰期为2h，血糖浓度最大可下降50%以上，维持时间为57h。相比之下，为3种给药方法中效果最好的一种。用胰岛素经眼给药和皮下注射相比，前0.5h血糖下降程度无显著性差异。0.5h以后，经眼给药降糖幅度显著大于静脉注射。用药2h后血糖下降50%，维持时间45h9，并且可使血糖降至正常范围内。胰岛素口腔黏膜喷雾给药效果不如皮下注射，作
10、用强度及达峰浓度均低于后者，但其体内药物保持的有效浓度和作用时间均较持久。口腔黏膜给药0.5h后血糖下降明显，1h后达高峰，药效可维持56h。预期结果及结果分析预期结果及结果分析结果分析：果分析： 3 3种种给药给药途径途径给给予胰予胰岛岛素素对对正常家兔及四氧正常家兔及四氧嘧啶嘧啶糖尿病模型家兔血糖尿病模型家兔血糖降低均有作用。糖降低均有作用。 胰胰岛岛素作素作为为一种蛋白一种蛋白质质，普通制，普通制剂剂易易为为消化消化酶酶所破坏，口服无效，所破坏，口服无效，必必须经须经注射注射给药给药。皮下注射吸收快，半衰期。皮下注射吸收快，半衰期较长较长，作用可，作用可维维持数小持数小时时，但起效但起效
11、时间较长时间较长。是目前最常用的胰。是目前最常用的胰岛岛素素给药给药方法。但方法。但对对机体机体带带来了来了诸诸多不便，同多不便，同时较经时较经眼眼给给眼和舌下黏膜眼和舌下黏膜给药给药途径起效慢。途径起效慢。 胰胰岛岛素滴眼素滴眼剂剂是一种是一种简简便易行的便易行的剂剂型，胰型，胰岛岛素素经经滴眼滴眼给药给药主要通主要通过过眼眼结结膜和鼻泪管黏膜吸收膜和鼻泪管黏膜吸收进进入体循入体循环环而达到降糖效果。但是，而达到降糖效果。但是，经经眼眼给药时药给药时药物物损损失量失量较较大，且作用大，且作用时间时间短，生物利用率低。短，生物利用率低。 胰胰岛岛素素经经舌下黏膜舌下黏膜给药给药后，由于舌下黏膜
12、有丰富的末梢血管后，由于舌下黏膜有丰富的末梢血管丛丛，一部分一部分药药物能迅速物能迅速进进入体内，但由于黏膜吸收的入体内，但由于黏膜吸收的“饱饱和关卡效和关卡效应应”和和黏膜上皮黏膜上皮对药对药物的吸附作用，加之胰物的吸附作用，加之胰岛岛素之素之间间有很有很强强的聚合力的聚合力1010，可能使一部分胰可能使一部分胰岛岛素以多分子聚合物形式在口腔内蓄素以多分子聚合物形式在口腔内蓄积积滞留。因此，滞留。因此，效果效果较较皮下注射及滴眼皮下注射及滴眼给药给药略低。略低。研究结论研究结论近年来，糖尿病的发病率持续上升，已成为全世界发病率和死亡率最高的疾病之一。注射恐惧症和每日多次注射的压力导致了研究和
13、开发新的给药途径。当前改进胰岛素治疗的关键，在于找的代替给患者带来痛苦和麻烦的皮下注射胰岛素的方法。本实验通过对家兔进行不同途径给胰岛素，了解其对血糖的影响，从而可以正确高效的使用胰岛素治疗糖尿病，同时有助于促进对胰岛素非注射途径的研究与发展。注意事项注意事项1.如家兔注射胰岛素后发生低血糖休克，可提前采血。2.葡萄糖氧化酶法测血糖浓度应在取血后2h内完成。3.配制溶液时注意严格控制剂量，避免因剂量误差导致实验结果不准确。4.操作完毕应立即比色，久置颗粒变粗影响结果。参考文献参考文献1张文玉；张路晗 胰岛素滴眼液促吸收剂的研究 中国药科大学学报 1997，275（5）2孙爽；吕邵娃；王锐；夏畅
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