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1、会计学1实验实验(shyn)一牛乳中细菌的检查一牛乳中细菌的检查第一页，共15页。一、目的一、目的(md)(md)要求要求1、了解牛乳的细菌学检查、了解牛乳的细菌学检查方法方法2、学习、学习(xux)牛乳的巴斯牛乳的巴斯德消毒法德消毒法第1页/共14页第二页，共15页。二、基本原理二、基本原理uu 从健康母牛体内从健康母牛体内(tni)(tni)刚挤出的牛奶，刚挤出的牛奶，含有少量的正常起始微生物。含有少量的正常起始微生物。uu 在分装与运输过程中，会被污染。在分装与运输过程中，会被污染。uu 牛奶营养丰富，其中的微生物会快速繁殖。牛奶营养丰富，其中的微生物会快速繁殖。uu牛乳样品的细菌含量可
2、反映母牛的健康状牛乳样品的细菌含量可反映母牛的健康状况和牛乳生产与保藏条件况和牛乳生产与保藏条件第2页/共14页第三页，共15页。牛乳牛乳(nir)(nir)的细菌学检查方法：的细菌学检查方法：1.1.1.1.显微镜直接计数法显微镜直接计数法涂片面积与视野面涂片面积与视野面积之比估算法。（不精确）积之比估算法。（不精确）2.2.2.2.美兰还原酶试验美兰还原酶试验(shyn)(shyn)法。法。3.3.3.3.标准平板法。标准平板法。第3页/共14页第四页，共15页。uu美兰是一种氧化还原指示剂，在厌氧环境中，它将被还美兰是一种氧化还原指示剂，在厌氧环境中，它将被还美兰是一种氧化还原指示剂，在
3、厌氧环境中，它将被还美兰是一种氧化还原指示剂，在厌氧环境中，它将被还原成无色。原成无色。原成无色。原成无色。uu如果牛乳中有细菌生长繁殖，必将造成其中溶解氧的减如果牛乳中有细菌生长繁殖，必将造成其中溶解氧的减如果牛乳中有细菌生长繁殖，必将造成其中溶解氧的减如果牛乳中有细菌生长繁殖，必将造成其中溶解氧的减少，牛乳样品中的氧化少，牛乳样品中的氧化少，牛乳样品中的氧化少，牛乳样品中的氧化- - - -还原电势降低。通过还原电势降低。通过还原电势降低。通过还原电势降低。通过(tnggu)(tnggu)(tnggu)(tnggu)加入其中美兰颜色的变化速度，可鉴定该牛乳的质量。加入其中美兰颜色的变化速度
4、，可鉴定该牛乳的质量。加入其中美兰颜色的变化速度，可鉴定该牛乳的质量。加入其中美兰颜色的变化速度，可鉴定该牛乳的质量。uu 在在在在30303030分钟内美兰被还原成无色的样品为分钟内美兰被还原成无色的样品为分钟内美兰被还原成无色的样品为分钟内美兰被还原成无色的样品为“很差很差很差很差”；在；在；在；在30min2h30min2h30min2h30min2h之间被还原为之间被还原为之间被还原为之间被还原为“差质量差质量差质量差质量”；在；在；在；在26h26h26h26h之间被还原之间被还原之间被还原之间被还原为为为为“尚好尚好尚好尚好”或或或或“中等中等中等中等”；在；在；在；在68h68h
5、68h68h之间被还原者，为之间被还原者，为之间被还原者，为之间被还原者，为“好好好好质量质量质量质量”。美兰还原酶试验美兰还原酶试验(shyn)(shyn)法：法：第4页/共14页第五页，共15页。uu在在在在30min30min30min30min内美兰被还原内美兰被还原内美兰被还原内美兰被还原(hunyun)(hunyun)(hunyun)(hunyun)成无色的成无色的成无色的成无色的样品为样品为样品为样品为“很差很差很差很差”；uu在在在在30min2h30min2h30min2h30min2h之间被还原之间被还原之间被还原之间被还原(hunyun)(hunyun)(hunyun)(
6、hunyun)为为为为“差质差质差质差质量量量量”；uu在在在在26h26h26h26h之间被还原之间被还原之间被还原之间被还原(hunyun)(hunyun)(hunyun)(hunyun)为为为为“尚好尚好尚好尚好”或或或或“中等中等中等中等”；uu在在在在68h68h68h68h之间被还原之间被还原之间被还原之间被还原(hunyun)(hunyun)(hunyun)(hunyun)者，为者，为者，为者，为“好质好质好质好质量量量量”。美兰还原酶试验美兰还原酶试验(shyn)(shyn)法：法：第5页/共14页第六页，共15页。uu广泛应用的常规方法。广泛应用的常规方法。广泛应用的常规方法
7、。广泛应用的常规方法。uu此方法较为敏感，牛乳此方法较为敏感，牛乳此方法较为敏感，牛乳此方法较为敏感，牛乳(nir)(nir)(nir)(nir)中含有少量细菌中含有少量细菌中含有少量细菌中含有少量细菌时，能得出比较正确的结果。我国消毒牛乳时，能得出比较正确的结果。我国消毒牛乳时，能得出比较正确的结果。我国消毒牛乳时，能得出比较正确的结果。我国消毒牛乳(ni(ni(ni(nir)r)r)r)的卫生标准是细菌总数的卫生标准是细菌总数的卫生标准是细菌总数的卫生标准是细菌总数30000300003000030000个个个个/ml/ml/ml/ml。标准标准(biozhn)(biozhn)平板计平板计
8、数法：数法：第6页/共14页第七页，共15页。1.1.1.1.牛乳样品和培养基牛乳样品和培养基牛乳样品和培养基牛乳样品和培养基2.2.2.2.亚奥特巴氏消毒牛奶样品亚奥特巴氏消毒牛奶样品亚奥特巴氏消毒牛奶样品亚奥特巴氏消毒牛奶样品3.3.3.3.溶液或试剂溶液或试剂溶液或试剂溶液或试剂4.4.4.4.美兰溶液（美兰溶液（美兰溶液（美兰溶液（1 1 1 1：250000250000250000250000），无菌水），无菌水），无菌水），无菌水等等等等5.5.5.5.仪器或其他仪器或其他仪器或其他仪器或其他(qt)(qt)(qt)(qt)用具用具用具用具三、器材三、器材(qci)(qci)第7页
9、/共14页第八页，共15页。1.1.1.1.美兰还原酶试验法美兰还原酶试验法2.2.2.2.标记标记2 2个无菌试管个无菌试管1 1、2 23.3.3.3.分别向分别向2 2个试管中加入个试管中加入5ml5ml的的牛乳样品牛乳样品(yngpn)(yngpn)（1 1号亚号亚奥特奥特- -变质，变质，2 2号亚奥特号亚奥特- -新）新）4.4.4.4.分别向试管中各加入分别向试管中各加入1ml1ml美兰，美兰，盖紧管塞盖紧管塞四、操作步骤四、操作步骤第8页/共14页第九页，共15页。uu轻轻倒转试管约轻轻倒转试管约轻轻倒转试管约轻轻倒转试管约4 4 4 4次，置于次，置于次，置于次，置于3737
10、3737水浴水浴水浴水浴(shuy)(shuy)(shuy)(shuy)中，中，中，中，并记录培养时间并记录培养时间并记录培养时间并记录培养时间uu测试管在水浴测试管在水浴测试管在水浴测试管在水浴(shuy)(shuy)(shuy)(shuy)中稳定中稳定中稳定中稳定5min5min5min5min中后，取出，轻中后，取出，轻中后，取出，轻中后，取出，轻轻倒转一次后再放回水浴轻倒转一次后再放回水浴轻倒转一次后再放回水浴轻倒转一次后再放回水浴(shuy)(shuy)(shuy)(shuy)中中中中uu每隔每隔每隔每隔30min30min30min30min观察记录试管中美兰颜色的变化，直至观察记
11、录试管中美兰颜色的变化，直至观察记录试管中美兰颜色的变化，直至观察记录试管中美兰颜色的变化，直至36h36h36h36h1 1、美兰还原酶试验、美兰还原酶试验、美兰还原酶试验、美兰还原酶试验(shyn)(shyn)法法法法第9页/共14页第十页，共15页。uu将水浴锅的温度调至将水浴锅的温度调至将水浴锅的温度调至将水浴锅的温度调至80808080uu将牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布将牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布将牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布将牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布uu用灭菌的用灭菌的用灭菌的用灭菌的10ml10ml10ml10ml吸管吸取吸管吸取吸管吸取吸管
12、吸取5ml5ml5ml5ml生牛乳样品放入灭菌试管内，然后将生牛乳样品放入灭菌试管内，然后将生牛乳样品放入灭菌试管内，然后将生牛乳样品放入灭菌试管内，然后将试管放入调好温度的水浴锅中，水面要超过牛乳表面试管放入调好温度的水浴锅中，水面要超过牛乳表面试管放入调好温度的水浴锅中，水面要超过牛乳表面试管放入调好温度的水浴锅中，水面要超过牛乳表面uu保持保持保持保持15min15min15min15min，并不时摇动，并不时摇动，并不时摇动，并不时摇动(yodng)(yodng)(yodng)(yodng)uu一到一到一到一到15min15min15min15min立刻取出试管，用流水冲试管外壁，使其
13、中的牛乳迅立刻取出试管，用流水冲试管外壁，使其中的牛乳迅立刻取出试管，用流水冲试管外壁，使其中的牛乳迅立刻取出试管，用流水冲试管外壁，使其中的牛乳迅速冷却。速冷却。速冷却。速冷却。2 2、巴斯德法消毒、巴斯德法消毒、巴斯德法消毒、巴斯德法消毒(xio d)(xio d)牛乳牛乳牛乳牛乳第10页/共14页第十一页，共15页。uu将牛乳样品充分摇匀，系列将牛乳样品充分摇匀，系列将牛乳样品充分摇匀，系列将牛乳样品充分摇匀，系列(xli)(xli)(xli)(xli)稀释至稀释至稀释至稀释至10-210-210-210-2、10-310-310-310-3和和和和10-410-410-410-4。uu
14、用用用用1ml1ml1ml1ml无菌吸管从三个梯度分别取无菌吸管从三个梯度分别取无菌吸管从三个梯度分别取无菌吸管从三个梯度分别取1ml1ml1ml1ml注入空白平注入空白平注入空白平注入空白平板内板内板内板内uu各平板倾注约各平板倾注约各平板倾注约各平板倾注约15ml15ml15ml15ml已经融化并冷却至已经融化并冷却至已经融化并冷却至已经融化并冷却至45454545左右的左右的左右的左右的牛肉膏蛋白胨培琼脂，立即放到桌上摇匀牛肉膏蛋白胨培琼脂，立即放到桌上摇匀牛肉膏蛋白胨培琼脂，立即放到桌上摇匀牛肉膏蛋白胨培琼脂，立即放到桌上摇匀uu凝固后，倒置于凝固后，倒置于凝固后，倒置于凝固后，倒置于
15、37373737培养箱内，培养培养箱内，培养培养箱内，培养培养箱内，培养24h24h24h24h。3 3、标准、标准、标准、标准(biozhn)(biozhn)平板计数法平板计数法平板计数法平板计数法第11页/共14页第十二页，共15页。uu选择长有选择长有选择长有选择长有30300303003030030300个菌落的平板计数，并计算个菌落的平板计数，并计算个菌落的平板计数，并计算个菌落的平板计数，并计算出出出出1ml1ml1ml1ml牛乳中的细菌牛乳中的细菌牛乳中的细菌牛乳中的细菌(xjn)(xjn)(xjn)(xjn)总数。总数。总数。总数。uu普通生牛乳样品中的检查同上法，但稀释度普通
16、生牛乳样品中的检查同上法，但稀释度普通生牛乳样品中的检查同上法，但稀释度普通生牛乳样品中的检查同上法，但稀释度为为为为10-310-310-310-3、10-410-410-410-4和和和和10-510-510-510-5。3 3、标准、标准、标准、标准(biozhn)(biozhn)平板计数法平板计数法平板计数法平板计数法第12页/共14页第十三页，共15页。1.1.1.1.记录实验结果记录实验结果记录实验结果记录实验结果2.2.2.2.美兰还原酶试验法：美兰还原酶试验法：美兰还原酶试验法：美兰还原酶试验法：3.3.3.3.标准平板计数法标准平板计数法标准平板计数法标准平板计数法4.4.4
17、.4.思考题思考题思考题思考题5.5.5.5.1111、根据你所检查的、根据你所检查的、根据你所检查的、根据你所检查的2 2 2 2份牛奶样品的结果，说明巴份牛奶样品的结果，说明巴份牛奶样品的结果，说明巴份牛奶样品的结果，说明巴氏消毒的效果，其细菌总数是否合乎卫生标准？分析出现氏消毒的效果，其细菌总数是否合乎卫生标准？分析出现氏消毒的效果，其细菌总数是否合乎卫生标准？分析出现氏消毒的效果，其细菌总数是否合乎卫生标准？分析出现(chxin)(chxin)(chxin)(chxin)此结果的原因。此结果的原因。此结果的原因。此结果的原因。6.6.6.6.2 2 2 2、巴氏消毒的牛乳自然发酵的结果
18、与生牛乳自然发酵的结、巴氏消毒的牛乳自然发酵的结果与生牛乳自然发酵的结、巴氏消毒的牛乳自然发酵的结果与生牛乳自然发酵的结、巴氏消毒的牛乳自然发酵的结果与生牛乳自然发酵的结果有何不同？根据此原理，说明实验样品一（变质）形成果有何不同？根据此原理，说明实验样品一（变质）形成果有何不同？根据此原理，说明实验样品一（变质）形成果有何不同？根据此原理，说明实验样品一（变质）形成的原因。的原因。的原因。的原因。五、实验报告五、实验报告第13页/共14页第十四页，共15页。内容(nirng)总结会计学。从健康母牛体内刚挤出的牛奶(ni ni)，含有少量的正常起始微生物。第2页/共14页。通过加入其中美兰颜色的变化速度，可鉴定该牛乳的质量。在26h之间被还原为“尚好”或“中等”。标记2个无菌试管1、2。第10页/共14页。将牛乳样品充分摇匀，系列稀释至10-2、10-3和10 -4。用1ml无菌吸管从三个梯度分别取1ml注入空白平板内。选择长有30300个菌落的平板计数，并计算出1ml牛乳中的细菌总数。五、实验报告第十五页，共15页。
