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1、第三章第三章 消毒灭菌与病原微生物实消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全验室生物安全 细菌的生命活动与环境密切相关.适宜的环境,能促进细菌的生长繁殖.环境不适宜时,可引起细菌的变异或抑制其生长,甚至杀灭细菌.制作人：蒋小平制作人：蒋小平 微生物无处不在，医疗中如微生物无处不在，医疗中如 何创造无菌的条件？何创造无菌的条件？第一节第一节 消毒灭菌消毒灭菌一一、概念：、概念： 1、 消毒消毒消毒消毒（disinfectiondisinfection）：）：）：）： 2、 灭菌灭菌灭菌灭菌（sterilizationsterilization）：）：）：）：杀灭物体上所有微生物的方法杀灭物体上所有微生
2、物的方法杀灭物体上所有微生物的方法杀灭物体上所有微生物的方法 3、 防腐（防腐（防腐（防腐（antisepsisantisepsis）：防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法方法方法方法 ，不一定杀死微生物不一定杀死微生物: 杀死物体上或环境中的病原微杀死物体上或环境中的病原微杀死物体上或环境中的病原微杀死物体上或环境中的病原微生物生物生物生物, ,不能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法不能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法不能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法不能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法第一节第一
3、节 消毒灭菌消毒灭菌一、概念：一、概念：4、 无菌（无菌（无菌（无菌（asepsisasepsis）：无菌是无菌是无菌是无菌是无无无无活菌的意思，多是灭菌的结果活菌的意思，多是灭菌的结果活菌的意思，多是灭菌的结果活菌的意思，多是灭菌的结果 。5、 无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作：防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。 热力灭菌法热力灭菌法热力灭菌法热力灭菌法 辐射灭菌法辐射灭菌法辐射灭菌法辐射灭菌法物理方法物理方法 滤过除菌法滤过除菌法滤过除菌法滤过除菌法 超声波杀菌法超声波杀菌
4、法超声波杀菌法超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法等干燥和低温抑菌法等干燥和低温抑菌法等干燥和低温抑菌法等 高效消毒剂高效消毒剂高效消毒剂高效消毒剂- -含氯、醛类消毒剂含氯、醛类消毒剂含氯、醛类消毒剂含氯、醛类消毒剂 环氧乙烷环氧乙烷环氧乙烷环氧乙烷 等等等等化学方法化学方法 中效消毒剂中效消毒剂中效消毒剂中效消毒剂- -含碘消毒剂含碘消毒剂含碘消毒剂含碘消毒剂 醇类（异丙醇）醇类（异丙醇）醇类（异丙醇）醇类（异丙醇） 低效消毒剂低效消毒剂低效消毒剂低效消毒剂- -季铵盐类季铵盐类季铵盐类季铵盐类 氯已定氯已定氯已定氯已定 高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾 第二节第二节 消毒灭菌的方法消毒灭菌的方
5、法第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：二、物理消毒灭菌法：（一）热力消毒灭菌法：1、干热灭菌法：焚烧烧灼干烤第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：二、物理消毒灭菌法：（一）热力消毒灭菌法：2、湿热消毒灭菌法：巴氏消毒法 61.1/62.8 15-30min71.715-30秒 煮沸法1005分钟间歇蒸气消毒法1001530分钟过夜（循环3次）高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：最有效的灭菌方法，为一密闭最有效的灭菌方法，为一密闭容器中，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。容器中，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌高压蒸汽灭菌基本原理：高
6、压蒸汽灭菌基本原理： 加热密闭容器中水至沸腾产生蒸汽，排尽原锅内的加热密闭容器中水至沸腾产生蒸汽，排尽原锅内的冷空气后，闭阀升压，使水沸点升高，从而导致菌冷空气后，闭阀升压，使水沸点升高，从而导致菌体蛋白质凝固变性失活。体蛋白质凝固变性失活。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌 高压蒸汽灭菌主要对象：高压蒸汽灭菌主要对象： 牛肉膏蛋白胨、营养肉汤等培养基、生理盐水、手牛肉膏蛋白胨、营养肉汤等培养基、生理盐水、手术器械及耐高温、湿热的物品。术器械及耐高温、湿热的物品。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌同温度下湿热灭菌较干热效果好的原因：同温度下湿热灭菌较干热效果好的原因：（1）湿热中菌体吸水，蛋白
7、质易凝固，因蛋白质含）湿热中菌体吸水，蛋白质易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固点降低。水量增加，所需凝固点降低。（2）湿热穿透力明显大于干热。）湿热穿透力明显大于干热。（3）湿热蒸汽有潜热存在，能迅速提高被灭物体的）湿热蒸汽有潜热存在，能迅速提高被灭物体的温度，从而增加灭菌效力。温度，从而增加灭菌效力。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌 高压灭菌几点注意事项：高压灭菌几点注意事项：第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：二、物理消毒灭菌法：（二）电磁波辐射杀菌法： 紫外线波长在265-266nm杀菌能力最强,它能干扰DNA复制,导致细菌变异或死亡,但穿透力弱,故只能用于房间空气
8、和物品表面的消毒.1、日光与紫外线：2、电离辐射、电离辐射 包括包括包括包括 和和和和 射线，电离射线具有较高的能量，对各种射线，电离射线具有较高的能量，对各种射线，电离射线具有较高的能量，对各种射线，电离射线具有较高的能量，对各种细菌均有致死作用，机制是干扰细菌均有致死作用，机制是干扰细菌均有致死作用，机制是干扰细菌均有致死作用，机制是干扰DNADNA合成、破坏细合成、破坏细合成、破坏细合成、破坏细胞膜、引起酶系统紊乱等，主要用于一次性医用塑胞膜、引起酶系统紊乱等，主要用于一次性医用塑胞膜、引起酶系统紊乱等，主要用于一次性医用塑胞膜、引起酶系统紊乱等，主要用于一次性医用塑料制品消毒，食品、药
9、品等消毒灭菌，而不破坏其料制品消毒，食品、药品等消毒灭菌，而不破坏其料制品消毒，食品、药品等消毒灭菌，而不破坏其料制品消毒，食品、药品等消毒灭菌，而不破坏其营养。营养。营养。营养。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌3、微波、微波 波长波长波长波长1-1000mm1-1000mm的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和塑的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和塑的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和塑的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和塑料，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属料，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属料，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属料，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属器械、检验室用品等消毒，原
10、理是极性分子摩擦生器械、检验室用品等消毒，原理是极性分子摩擦生器械、检验室用品等消毒，原理是极性分子摩擦生器械、检验室用品等消毒，原理是极性分子摩擦生热，内外升温达到杀毒灭菌的目的。热，内外升温达到杀毒灭菌的目的。热，内外升温达到杀毒灭菌的目的。热，内外升温达到杀毒灭菌的目的。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌二、物理消毒灭菌法：二、物理消毒灭菌法：（三）滤过除菌法： 主要用于不耐高温的血清、抗毒素、抗生素、药液的除菌。第二节第二节 消毒与灭菌消毒与灭菌三、化学消毒灭法：（一）常用化学消毒剂的种类及用途（二）化学消毒剂的杀菌机制： 1、使菌体蛋白变性或凝固；
11、2、干扰微生物的酶系统和代谢； 3、损伤细胞膜；种种种种 类类类类常用浓度常用浓度常用浓度常用浓度用用用用 途途途途作用机制作用机制作用机制作用机制1. 1.高效消毒剂高效消毒剂高效消毒剂高效消毒剂含氯含氯含氯含氯消毒剂；消毒剂；消毒剂；消毒剂；漂白粉漂白粉漂白粉漂白粉 次氯酸钠次氯酸钠次氯酸钠次氯酸钠 过氧乙酸过氧乙酸过氧乙酸过氧乙酸 过氧化氢过氧化氢过氧化氢过氧化氢 戊二醛戊二醛戊二醛戊二醛甲醛（福尔马甲醛（福尔马甲醛（福尔马甲醛（福尔马林）林）林）林）有效氯量有效氯量有效氯量有效氯量:4g/L:4g/L有效氯量有效氯量有效氯量有效氯量:100-:100-1000g/L1000g/L0.2
12、%-1%0.2%-1%3%-25%3%-25% 2%2%35%-40%35%-40%饮水消毒饮水消毒饮水消毒饮水消毒皮肤、物体表面、皮肤、物体表面、皮肤、物体表面、皮肤、物体表面、排泄物、污水排泄物、污水排泄物、污水排泄物、污水皮肤、物表面、皮肤、物表面、皮肤、物表面、皮肤、物表面、空气空气空气空气皮肤、物表面、皮肤、物表面、皮肤、物表面、皮肤、物表面、空气空气空气空气医疗器械医疗器械医疗器械医疗器械医疗，防腐医疗，防腐医疗，防腐医疗，防腐氧化作用氧化作用氧化作用氧化作用, ,蛋蛋蛋蛋白质变性与白质变性与白质变性与白质变性与沉淀沉淀沉淀沉淀, ,灭活酶灭活酶灭活酶灭活酶类类类类 氧化作用氧化作
13、用氧化作用氧化作用, ,蛋蛋蛋蛋白质沉淀白质沉淀白质沉淀白质沉淀菌体蛋白质菌体蛋白质菌体蛋白质菌体蛋白质及核酸烷基及核酸烷基及核酸烷基及核酸烷基化化化化常用消毒剂的种类、浓度、用途及作用机制常用消毒剂的种类、浓度、用途及作用机制常用消毒剂的种类、浓度、用途及作用机制（一）种种种种 类类类类常用浓度常用浓度常用浓度常用浓度用用用用 途途途途作用机制作用机制作用机制作用机制2. 2.中效消毒剂中效消毒剂中效消毒剂中效消毒剂 乙醇乙醇乙醇乙醇 碘酊碘酊碘酊碘酊 碘伏碘伏碘伏碘伏3. 3.低效消毒剂低效消毒剂低效消毒剂低效消毒剂苯扎溴铵（新洁苯扎溴铵（新洁苯扎溴铵（新洁苯扎溴铵（新洁尔灭）尔灭）尔灭）
14、尔灭）氯已定（洗必泰）氯已定（洗必泰）氯已定（洗必泰）氯已定（洗必泰）高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾 70%-75% 70%-75% 20g20g碘碘碘碘/L75%/L75%乙醇乙醇乙醇乙醇1-2mg1-2mg游离游离游离游离/L/L0.4%-1.6%0.4%-1.6%溶液溶液溶液溶液0.5%-4.0%0.5%-4.0%1-10g/L1-10g/L医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物表面皮肤、黏膜、物体表皮肤、黏膜、物体表皮肤、黏膜、
15、物体表皮肤、黏膜、物体表面面面面皮肤、黏膜、物体表皮肤、黏膜、物体表皮肤、黏膜、物体表皮肤、黏膜、物体表面面面面皮肤、黏膜、食具、皮肤、黏膜、食具、皮肤、黏膜、食具、皮肤、黏膜、食具、蔬菜、水果蔬菜、水果蔬菜、水果蔬菜、水果蛋白质变性蛋白质变性蛋白质变性蛋白质变性凝固、干扰凝固、干扰凝固、干扰凝固、干扰代谢代谢代谢代谢第三节第三节 消毒灭菌的运用消毒灭菌的运用 皮肤、黏膜、空气、饮水、环境、医皮肤、黏膜、空气、饮水、环境、医疗器械、病人污染物品、病人排泄物与分疗器械、病人污染物品、病人排泄物与分泌物的消毒灭菌。（具体自己看书）泌物的消毒灭菌。（具体自己看书）影响消毒灭菌效果的因素：影响消毒灭菌
16、效果的因素：1、消毒剂的性质、浓度和作用时间、消毒剂的性质、浓度和作用时间2、细菌的种类与生活状态（、细菌的种类与生活状态（P44）3、温度、温度4、酸碱度、酸碱度5、有机物、有机物第四节第四节 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素第五节 病原微生物实验室生物安全 一、一、生物安全（生物安全（biosafety）即生物技术安全即生物技术安全（safety of biotechnology） 指与生物有关指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。态环境所产生的危害或潜在风险。 在安全的实验室内使用安全的方法从在安全的
17、实验室内使用安全的方法从事与病原微生物菌（毒）种、样本有关事与病原微生物菌（毒）种、样本有关的教学、检测、诊断、研究等活动，达的教学、检测、诊断、研究等活动，达到保护实验室工作人员和公众健康的目到保护实验室工作人员和公众健康的目的。的。 核心是核心是防感染防感染和和防扩散防扩散！二、病原微生物的分类二、病原微生物的分类 根根据据传传染染性性和和危危害害程程度度，病病原原微微生生物物分分为四类：为四类： 第第第第一一一一类类类类是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物非非非非常常常常严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病的的的的微微微微生生生生物
18、物物物，以以以以及及及及我我我我国国国国尚尚尚尚未未未未发发发发现现现现或或或或者者者者已已已已经经经经宣宣宣宣布布布布消消消消灭的微生物。灭的微生物。灭的微生物。灭的微生物。 第第第第二二二二类类类类是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人类类类类或或或或者者者者动动动动物物物物严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病，比比比比较较较较容容容容易易易易直直直直接接接接或或或或者者者者间间间间接接接接在在在在人人人人与与与与人人人人、动动动动物物物物与与与与人人人人、动动动动物与动物间传播的微生物。物与动物间传播的微生物。物与动物间传播的微生物。物与动物间传播的微生物。 第第第第三三三
19、三类类类类是是是是指指指指能能能能够够够够引引引引起起起起人人人人或或或或动动动动物物物物疾疾疾疾病病病病，但但但但一一一一般般般般情情情情况况况况下下下下对对对对人人人人、动动动动物物物物或或或或环环环环境境境境不不不不构构构构成成成成严严严严重重重重危危危危害害害害，传传传传播播播播风风风风险险险险有有有有限限限限，实实实实验验验验室室室室感感感感染染染染后后后后很很很很少少少少引引引引起起起起严严严严重重重重疾疾疾疾病病病病，并并并并且且且且具备有效治疗和预防措施的微生物。具备有效治疗和预防措施的微生物。具备有效治疗和预防措施的微生物。具备有效治疗和预防措施的微生物。 第第第第四四四四类
20、类类类是是是是指指指指在在在在通通通通常常常常情情情情况况况况下下下下不不不不会会会会引引引引起起起起人人人人或或或或动动动动物物物物疾疾疾疾病的微生物。病的微生物。病的微生物。病的微生物。病病原微生物实验原微生物实验室生物安全防护水平（室生物安全防护水平（BSLBSL）分）分级级级别级别级别级别安全装备安全装备安全装备安全装备处理对象处理对象处理对象处理对象一级一级一级一级无特别需求，开放无特别需求，开放无特别需求，开放无特别需求，开放式实验桌、洗手槽式实验桌、洗手槽式实验桌、洗手槽式实验桌、洗手槽对人体、动植物或环境危害较低，不具有对对人体、动植物或环境危害较低，不具有对对人体、动植物或环
21、境危害较低，不具有对对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子健康成人、动植物致病的致病因子健康成人、动植物致病的致病因子健康成人、动植物致病的致病因子。二级二级二级二级一级或二级生物安一级或二级生物安一级或二级生物安一级或二级生物安全柜、灭菌压力锅、全柜、灭菌压力锅、全柜、灭菌压力锅、全柜、灭菌压力锅、防护衣、手套、面防护衣、手套、面防护衣、手套、面防护衣、手套、面罩等罩等罩等罩等对人体、动植物或环境具有中等危害或具有对人体、动植物或环境具有中等危害或具有对人体、动植物或环境具有中等危害或具有对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植
22、物潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，和环境不会造成严重危害，和环境不会造成严重危害，和环境不会造成严重危害，具具具具有有效的预防有有效的预防有有效的预防有有效的预防和治疗措施和治疗措施和治疗措施和治疗措施。三级三级三级三级除上述，还增加特除上述，还增加特除上述，还增加特除上述，还增加特殊防护衣、进入管殊防护衣、进入管殊防护衣、进入管殊防护衣、进入管制、定向气流制、定向气流制、定向气流制、定向气流对人体、动植物或环境具有高度危险性，主对人体、动植物或环境具有高度危险性，主对人体、动植物或环境具
23、有高度危险性，主对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施的致病因子。通常有预防治疗措施的致病因子。通常有预防治疗措施的致病因子。通常有预防治疗措施。四级四级四级四级 三级生物安全柜，三级生物安全柜，三级生物安全柜，三级生物安全柜，隔离区域，有送风、隔离区域，有送风、隔
24、离区域，有送风、隔离区域，有送风、排风、真空、消毒排风、真空、消毒排风、真空、消毒排风、真空、消毒系统，正压防护衣系统，正压防护衣系统，正压防护衣系统，正压防护衣对人体、动植物或环境具有高度危险性，通对人体、动植物或环境具有高度危险性，通对人体、动植物或环境具有高度危险性，通对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施危险的致病因子。没有预防治疗措施危险的致病因子。没有预防治疗措施危险的致病因子。没有预防治疗措施。复习
25、思考题复习思考题1. 1.杀灭芽孢最常用和有效的方法是（杀灭芽孢最常用和有效的方法是（杀灭芽孢最常用和有效的方法是（杀灭芽孢最常用和有效的方法是（ ）A A 、紫外线照射、紫外线照射、紫外线照射、紫外线照射 B B、煮沸、煮沸、煮沸、煮沸5min5minC C、巴氏消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法 D D、高压蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法2. 2.灭菌方法错误的是（灭菌方法错误的是（灭菌方法错误的是（灭菌方法错误的是（ ）A A、手术室空气、手术室空气、手术室空气、手术室空气- -紫外线紫外线紫外线紫外线 B B、排泄物、排泄物、排泄物、排泄物- -漂白
26、粉漂白粉漂白粉漂白粉C C、饮水、饮水、饮水、饮水- -氯气氯气氯气氯气 D D、含血清培养基、含血清培养基、含血清培养基、含血清培养基- -高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌D DD D3.常用于基础培养基灭菌（常用于基础培养基灭菌（ ）A、高压蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法 B、紫外线照射法、紫外线照射法C、滤过除菌法、滤过除菌法 D、巴氏消毒法、巴氏消毒法4、常用于手术器械的灭菌（、常用于手术器械的灭菌（ ）A、紫外线照射法、紫外线照射法 B、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌C、滤过除菌法、滤过除菌法 D、巴氏消毒法、巴氏消毒法A AB B5.关于紫外线，说法错误的是关于紫外线，说法
27、错误的是_。(第第03章章)a.其杀菌作用与波长有关其杀菌作用与波长有关b.可损坏细菌的可损坏细菌的DNA构型构型c.265-266nm杀菌作用最强杀菌作用最强d.其穿透力弱，故对人体无损害其穿透力弱，故对人体无损害e.紫外线适用空气和物体表面的消毒紫外线适用空气和物体表面的消毒6.常用于空气或物体表面的消毒常用于空气或物体表面的消毒_。(第第03章章)a.高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法紫外线照射法c.滤过除菌法滤过除菌法 d.巴氏消毒法巴氏消毒法 e.干烤法干烤法 d db b7.将牛奶加热将牛奶加热6230分钟的目的是分钟的目的是_。a.使牛奶中的蛋白质变性，易于吸收使牛奶
28、中的蛋白质变性，易于吸收b.杀灭牛奶中的所有微生物杀灭牛奶中的所有微生物c.杀死牛奶中的病原菌杀死牛奶中的病原菌d.使牛奶不含活菌使牛奶不含活菌e.防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖8.乙醇消毒剂常用的浓度是：乙醇消毒剂常用的浓度是： _。a.100 b.95 c.75d.50e.30c cc c1、解释热原质、菌群失调、消毒、灭菌、防腐、无菌操作等、解释热原质、菌群失调、消毒、灭菌、防腐、无菌操作等概念概念;2、细菌有哪些代谢产物？它们分别有哪些医学意义？、细菌有哪些代谢产物？它们分别有哪些医学意义？3、了解细菌的分布与护理工作有什么关系？、了解细菌的分布与护理工作有什么关系？4、何种情况下正常菌群可转变为条件致病菌或菌群调？、何种情况下正常菌群可转变为条件致病菌或菌群调？5、请为下列物品或部位选取一种最理想的消毒灭菌方法：手、请为下列物品或部位选取一种最理想的消毒灭菌方法：手术室术室 、手术器械、注射器、饮水、受轻微污染的血清、浓痰、手术器械、注射器、饮水、受轻微污染的血清、浓痰、碗筷、牛奶、门诊大厅。碗筷、牛奶、门诊大厅。
