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1、油脂检测实验油脂检测实验油脂检测实验油脂检测实验油脂中黄酮含量的测定油脂中黄酮含量的测定油脂中黄酮含量的测定油脂中黄酮含量的测定吸光光度法吸光光度法 是基于被测物质的是基于被测物质的是基于被测物质的是基于被测物质的分子分子分子分子 对对对对光光光光 具具具具有有有有选择吸收选择吸收选择吸收选择吸收 的特性而建立的分析方法。的特性而建立的分析方法。的特性而建立的分析方法。的特性而建立的分析方法。光的电磁波性质光的电磁波性质光的电磁波性质光的电磁波性质 射射线线x射射线线紫紫外外光光红红外外光光微微波波无无线线电电波波10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm 0.1 cm 10cm
2、103 cm 105 cm可可 见见 光光一、物质对光的吸收与吸收光谱一、物质对光的吸收与吸收光谱 光作用于物质时，物质吸收了可见光，光作用于物质时，物质吸收了可见光，光作用于物质时，物质吸收了可见光，光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的而显示出特征的颜色，这一过程与物质的而显示出特征的颜色，这一过程与物质的而显示出特征的颜色，这一过程与物质的 性质及光的性质有关。性质及光的性质有关。性质及光的性质有关。性质及光的性质有关。 物质对光物质对光物质对光物质对光的吸收的吸收的吸收的吸收物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足物质对光的吸收满足Plan
3、k Plank 条件条件条件条件h S2S1S0S3E2E0E1E3h h h 吸收光谱吸收光谱 Absorption Spectrum纯纯纯纯电子能态电子能态电子能态电子能态间跃迁间跃迁间跃迁间跃迁S2S1S0S3h E2E0E1E3S2S1S0h A h h h 分子内电子跃迁分子内电子跃迁带状光谱带状光谱锐线光谱锐线光谱锐线光谱锐线光谱 A定性分析与定量分析的基础定性分析与定量分析的基础定性分析基础定性分析基础定量分析基础定量分析基础 物质对光物质对光的选择吸收的选择吸收ABA 在一定的实验在一定的实验条件下，物质对条件下，物质对光的吸收与物质光的吸收与物质的浓度成正比。的浓度成正比。A
4、 C增增大大二、溶液的吸光定律二、溶液的吸光定律 透光率透光率 （透射比）（透射比）透光率定义：透光率定义：T 取值为取值为0.0 % 100.0 %全部吸收全部吸收T = 0.0 %全部透射全部透射T = 100.0 %入射光入射光 I0透射光透射光 ItLambert Beer Law:K K：吸光系数吸光系数入射光波长入射光波长物质的性质物质的性质温度温度吸收定律与吸收光谱的关系吸收定律与吸收光谱的关系AC吸吸光光定定律律A或或 吸吸收收光光谱谱A C max吸光度的加合性吸光度的加合性 多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具有加
5、合性，即度具有加合性，即对吸收定律偏离对吸收定律偏离AC主要原因主要原因非单色光非单色光吸光质点的相互作用吸光质点的相互作用三、吸光分析仪的基本构造三、吸光分析仪的基本构造0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示I0It参比参比样品样品入射光入射光 I0透射光透射光 It请注意与定义比较请注意与定义比较未未考虑吸收池和溶剂对光子的作用考虑吸收池和溶剂对光子的作用单波长单光束分光光度计单波长单光束分光光度计0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示单波长双光束分光光度计单波长双光束分光光度计比值比值光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示光束
6、分裂器光束分裂器实验七实验七 黄酮类物质含量的测定黄酮类物质含量的测定一一 黄酮的功效黄酮的功效1、它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的溢出2、黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。3、黄酮可以增进伤口愈合和止痛，二二 原理提要原理提要黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4位羰基，且呈现黄色。黄酮类化合物的3羟基、4羟基或5羟基、4羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分
7、光光度法于510nm波长下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。三、器材与试剂 仪器仪器：分光光度计，恒温水浴，分光光度计，恒温水浴，50ml具塞试管，具塞试管，10ml试管，移液器，试管，移液器，漏斗，滤纸、漏斗，滤纸、125ml分液漏斗等。分液漏斗等。 试剂试剂： 氯仿，氯仿， 20% Na2CO3， 5%亚硝酸钠，亚硝酸钠， 10% 硝酸铝，硝酸铝，4氢氧化钠，氢氧化钠， 30%乙醇等。乙醇等。四操作步骤四操作步骤（1 1）样品处理）样品处理 1 1）固体样品：）固体样品： 称取称取1 12g2g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器干燥的固体样品，用滤纸包紧
8、，置于索氏提取器中，加入中，加入5050100ml70100ml70乙醇溶液浸润后，在乙醇溶液浸润后，在8080水浴下回流水浴下回流3h3h，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量2525乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在5050下减压蒸馏，除去下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶液，用液，用30ml30ml热水分热水分3 3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗中，以中，以75ml 75
9、ml 氯仿分氯仿分3 3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下层水溶液并定容至层水溶液并定容至50ml50ml。2 2）液体样品：）液体样品： 准确吸取准确吸取1.0ml1.0ml样品，定容至样品，定容至50ml50ml后，直接以后，直接以75ml 75ml 氯仿分氯仿分3 3次萃取脱脂，其余步骤同上。次萃取脱脂，其余步骤同上。（2 2）标准曲线的绘制：）标准曲线的绘制： 准准确确吸吸取取（0.1mg/ml0.1mg/ml）芦芦丁丁标标准准溶溶液液0 0、0.500.50、1.001.00、2.002.00、3.003.00、00ml00ml（相相当当于于芦芦
10、丁丁0 0、5050、100100、200200、300300、400ug400ug），移移入入10ml10ml刻刻度度比比色色管管中中，加加入入3030乙乙醇醇溶溶液液至至5ml5ml，各各加加5 5亚亚硝硝酸酸钠钠溶溶液液0.5ml0.5ml，振振摇摇后后放放置置5min5min，加加入入1010硝硝酸酸铝铝溶溶液液0.5ml0.5ml摇摇匀匀后后放放置置6min6min，加加1.0mol1.0molL L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液2ml2ml，用用3030乙乙醇醇定定容容至至刻刻度度。摇摇匀匀，放放置置15min15min，于于510nm510nm波波长长处处测测定定吸吸光光度度，以以零零
11、管管为为空空白白，以以芦芦丁丁含含量量（ugug）为为横横坐坐标标，以以吸吸光光度度为为纵纵坐标绘制标准曲线。坐标绘制标准曲线。（3 3）样品测定：）样品测定： 根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤于待测液，按标准曲线制备操作步骤于510nm510nm处进行吸光度的测定（样液如有沉淀，应处进行吸光度的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。过滤后测定）。五五. .结果计算结果计算根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含量。量。黄酮含量黄酮含量（g/gg/g）= X= XV /mV
12、/mX X为由吸光度按标准曲线查的结果；为由吸光度按标准曲线查的结果；V V为粗提液总体积为粗提液总体积(ml)(ml)；m m为称样质量为称样质量(g) (g) 黄酮的标准曲线：黄酮的标准曲线：y=0.8965x y=0.8965x 0.0014 R2 =0.9997 0.0014 R2 =0.9997六、黄酮含量的测定流程图取3支10ml具塞试管（2支测定管，一支空白管）3支测定管加入粗提液 5ml，1支空白管加同量30乙醇 各管加0.5ml 5% NaNO2， 摇匀，静置5min加0.5ml 10% Al(NO3)3，摇匀，静置6 min 加2ml 4 NaOH用30%乙醇定容，混匀，放置15min 510nm下测定吸光度（以芦丁为标样制作标准曲线）以芦丁为标样制作标准曲线）黄酮铝络合物易黄酮铝络合物易受受CO2作用使颜作用使颜色有所变化，要色有所变化，要求短时间完成操求短时间完成操作，中间盖塞作，中间盖塞 结果记录：记载表老师检查 用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去 值日生负责注意值日生负责注意: 清理分光光度计、比色皿、台面。清理分光光度计、比色皿、台面。下一个实验：油脂中黄曲霉的测定
