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1、一、血红蛋白的提取和分离一、血红蛋白的提取和分离1 1、血液有哪些成分血液有哪些成分血血血血液液液液血浆血浆血浆血浆水水水水 分分分分固体物质：固体物质：固体物质：固体物质：血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等血细血细血细血细 胞胞胞胞白细胞白细胞白细胞白细胞血小板血小板血小板血小板红细胞红细胞红细胞红细胞（最多）（最多）（最多）（最多）血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白（90909090）两个两个两个两个肽链肽链肽链肽链两个两个两个两个一一一一肽链肽链肽链肽链四个亚铁红素基团四个亚铁红素基团四个亚铁红素
2、基团四个亚铁红素基团血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白两个两个两个两个肽链肽链肽链肽链两个两个两个两个一一一一肽链肽链肽链肽链四个亚铁四个亚铁四个亚铁四个亚铁血血红素基团红素基团红素基团红素基团每个肽链环绕一个每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，亚铁血红素基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧或一分子二一分子氧或一分子二氧化碳，氧化碳，血红蛋白因含有血红蛋白因含有血红素血红素而而呈呈红色。红色。2 2、血红蛋白的特点：、血红蛋白的特点：3 3、蛋白质分离和提取的原理：、蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、的形状
3、和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。4 4、蛋白质分离和提取的常用方法：、蛋白质分离和提取的常用方法：凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）电泳电泳（一）（一） 凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）1.概念： 根据被分离物质的蛋白质根据被分离物质的蛋白质相对相对分子质量分子质量的大的大 小，利用具有小，利用具有网状结构网状结构的凝胶，来进行分离。的凝胶，来进行分离。2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚
4、糖或琼脂糖）构成的多孔小球（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。体，内部有许多贯穿的通道。3.凝胶色谱法的原理 当相对分子量不同的蛋白质通过凝当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢慢; ; 而相对分子量较大的蛋白质无法进而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。不同的蛋白质
5、分子因此得以分离。 依据的特性是：蛋白质分子量的大依据的特性是：蛋白质分子量的大小。小。凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示（二）缓冲溶液（二）缓冲溶液 1. 1.概念概念: :2. 2.作用作用: : 在一定的范围内，凡是能够抵在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液液PHPH值基本保持不变的混合溶液。值基本保持不变的混合溶液。 能够抵制外界的酸和碱对溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液PHPH值的影响，维持值的影响，维持PHPH基本不变。基本不变。3.3.缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制: : 通常由通常由1 1
6、2 2 种缓冲剂溶解于水中配种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同制得在不同PHPH范围内使用的缓冲液。范围内使用的缓冲液。 4.4.提问：在本课题中使用的缓冲液是提问：在本课题中使用的缓冲液是: : _ _ , ,其目的是其目的是: : 利用缓冲液模拟细胞内的利用缓冲液模拟细胞内的PHPH环境，保环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察( (红色红色) )和科学研究和科学研究( (活性活性) )。磷酸缓冲液磷酸缓冲液样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定1. 1.样品处理：样品处
7、理：（一）蛋白质提取和分离步骤（一）蛋白质提取和分离步骤（二）操作过程（二）操作过程 本课题可选用猪、牛、羊或其他本课题可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来分离血红蛋白。哺乳动物的血液来分离血红蛋白。二、实验操作二、实验操作(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤: : 去除杂蛋白，以利于后续血红去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。 1 1、采集血样。、采集血样。 2 2、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果）细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效
8、果） 3 3、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。 4 4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.90.9的氯化的氯化钠溶液洗涤。钠溶液洗涤。 5 5、低速离心（低速短时间）、低速离心（低速短时间） 6 6、重复、重复4 4、5 5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。表明洗涤干净。洗涤目的洗涤目的: :洗涤操作：洗涤操作：(2)(2)(2)(2)血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积，再加加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积的甲苯体积的甲苯
9、，置于磁力搅拌器上充分搅拌，置于磁力搅拌器上充分搅拌1010分钟分钟（加速细胞破裂）（加速细胞破裂）, ,细胞破裂释放出血红蛋白。细胞破裂释放出血红蛋白。(3)(3)(3)(3)分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：过程：过程：过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，将搅拌好混合液转移到离心管内，2000r/min2000r/min的速度离心的速度离心10 min10 min。试管中溶液层次：试管中溶液层次：试管中溶液层次：试管中溶液层次：第第1 1层（最上层）：甲苯层（无色层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第透明）；第2 2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（
10、白色层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第薄层固体）；第3 3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第（红色透明液体）；第4 4层（最下层）：杂质沉淀层层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。（暗红色）。分离：分离：分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。甲苯层甲苯层甲苯层甲苯层（无色透明无色透明无色透明无色透明）白色薄层固体白色薄层固体白色薄层固体白色薄层固体红色透明液体红色透明液体红色透明液体红色透明液体杂质沉淀
11、层杂质沉淀层杂质沉淀层杂质沉淀层（暗红色暗红色暗红色暗红色）试管中溶液层次试管中溶液层次(4)(4)透透 析：析： 过程：过程：取取1ml1ml的血红蛋白溶液装入透析袋的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有中，将透析袋放入盛有300ml300ml的物质的量浓度的物质的量浓度为为20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液中（的磷酸缓冲液中（pHpH为为7.07.0），透），透析析1212小时。小时。 透析目的：透析目的：除去样品中分子量较小的除去样品中分子量较小的杂质。杂质。透析过程动画演示透析过程动画演示2.2.凝胶色谱操作凝胶色谱操作: :取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61
12、.6厘米的厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。玻璃管，两端需用砂纸磨平。底塞的制作：打孔底塞的制作：打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼龙网，覆盖尼龙网，再用再用100100目尼龙纱包好，插到玻璃管目尼龙纱包好，插到玻璃管的的一一端。端。顶塞的制作：打孔顶塞的制作：打孔安装玻璃管。安装玻璃管。组装：将上述三者按相应位置组装成组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。一个整体。安装其他附属结构安装其他附属结构（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填凝胶的选择：凝胶的选择：A A、材料：交联葡聚糖凝胶（、材料：交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）。）。B B、代表意义：、代表意义：
13、“G”G”表示凝胶的交联程度，表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。膨胀程度及分离范围。7575表示凝胶的得水表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.57.5克。克。凝胶的前处理：凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。配成凝胶悬浮液。 凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法：A A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。、固定：将色谱柱装置固定在支架上。B B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱
14、内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。装均匀。注意：注意：1 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。之间的空隙。 2 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果分离效果。 洗涤平衡：洗涤平衡：装填完毕装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，后，立即用缓冲液洗脱瓶，在在50cm50cm高的操作压下，高的操作压下，用用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的磷的磷酸缓冲液（酸缓冲液（p
15、HpH为为7.07.0）充）充分洗涤平衡分洗涤平衡1212小时。小时。注意：注意：1 1、液面不要低于凝胶表面，、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离终生物大分子物质的分离效果。效果。2 2、不能发生洗脱、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的液流干，露出凝胶颗粒的现象现象。50cm50cm高高高高（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱 调节缓冲液面：调节缓冲液面：调节缓冲液面：调节缓冲液面：打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。到与凝胶面平齐，
16、关闭出口。 滴加透析样品：滴加透析样品：滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱柱的顶端，滴加样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。凝胶面。 样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：加样后打开下端出口，使样品渗入凝加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。 洗脱：洗脱：洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 pH=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷
17、酸缓冲液到适当的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。 收集：收集：收集：收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每流出液，每5ml5ml收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功） 注意：注意：注意：注意：正确的加样操作：正确的加样操作：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管
18、壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱注意：注意：注意：注意：正确的加样操作是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。、贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。思考下面的问题：思考下面的问题： 让血红蛋白处在稳定的让血红蛋白处在稳定的pHpH范围内，维持结构和范围内，维持结构和功能正常。功能正常。 1 1 1 1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用
19、磷酸缓冲液处理的目的是什么？液处理的目的是什么？液处理的目的是什么？液处理的目的是什么？ 2 2 2 2、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？ 血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗
20、脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。验操作。 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即白溶液，即: :样品的处理；再经过透析去除分子量较小样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后的杂质，即样品的粗分离；然
21、后通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法将相将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即对分子质量较大的杂质蛋白除去，即: :样品的纯化；最样品的纯化；最后经后经聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。进行纯度鉴定。3 3、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？血红蛋白的提取和分离的过程：血红蛋白的提取和分离的过程：样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定红红细细胞胞的的洗洗涤涤血血红红蛋蛋白白的的释释放放分分离离血血红红蛋蛋白白溶溶液液分分离离血血红红蛋蛋白白溶溶液液透透析析凝凝胶胶色色谱谱柱
22、柱的的制制作作凝凝胶胶色色谱谱柱柱的的填填装装样样品品的的加加入入与与洗洗脱脱聚聚聚聚丙丙丙丙烯烯烯烯酰酰酰酰胺胺胺胺凝凝凝凝胶胶胶胶电电电电泳泳泳泳（三）（三） 电泳：电泳：1. 1.概念：概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的程。带电粒子在电场作用下发生迁移的程。 许多重要的生物大分子，如多肽、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的核酸等都具有可解离的基团，在一定的PHPH下，下，这些基团会带上正电或负电。这些基团会带上正电或负电。在电场的作用在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电极移动。电泳利用了待
23、分离样品中各种分电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。而实现样品中各种分子的分离。2. 2.原理：原理：3.3.类型类型: : 琼脂糖琼脂糖凝胶电泳、凝胶电泳、聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝胶电泳。凝胶电泳。 在电场的作用下，这些带电分子会向着在电场的作用下，这些带电分子会向着在电场的作用下，这些带电分子会向着在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动与其所带电荷相反的电极移动与其所带电荷相反的电极移动与其所
24、带电荷相反的电极移动琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 1、在测定蛋白质分子量时常用、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸十二烷基硫酸钠（钠（SDSSDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,NN,N- -亚甲基双丙亚甲基双丙烯酰胺在烯酰胺在引发剂引发剂和和催化剂催化剂的作用下聚合交联成的的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的凝胶。具有三维网状结构的凝胶。N,N-亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）丙烯酰
25、胺和交联剂丙烯酰胺和交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。（SDSSDS的作用）的作用）为了消除净电荷对迁移率的影响，为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入可以在凝胶中加入SDSSDS。2. 2.原理：原理： SDSSDSSDSSDS能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成。由几条肽链组成的蛋白质复合体在的蛋白质复合体在SDSSDS
26、的作用下会的作用下会解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链，因此测定的结果只是因此测定的结果只是单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量。SDSSDS能与各能与各种蛋白质形成种蛋白质形成蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质SDSSDSSDSSDS复合物复合物复合物复合物，SDSSDS所带负电荷所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量原有的电荷量原有的电荷量原有的电荷量。因而掩。因而掩盖了盖了不同种不同种不同种不同种蛋白质间的蛋白质间的蛋白质间的蛋白质间的电荷差别电荷差别电荷差别电荷差别，使电泳迁移率完，使电泳迁移率完全取决于分子的大小
27、。全取决于分子的大小。3. SDS3. SDS作用机理作用机理: : 观察你处理的血液样品离心后观察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书图（见教科书图5-5-1818），），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。的提取纯度。三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品的
28、处理？你能描述处、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？理后的样品发生了哪些变化吗？2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖例如蓝色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，或红
29、色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分如果红色区带歪曲、散乱、变宽
30、，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 3 3 3 3、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？果？果？果？（三）三）SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）2. 2. 2. 2.试剂的配制：试剂的配制：
31、试剂的配制：试剂的配制：鉴定血红蛋白纯度。鉴定血红蛋白纯度。1. 1. 1. 1.目的：目的：目的：目的：3.方法步骤：（略）方法步骤：（略）教学反馈教学反馈 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。 A分子的大小分子的大小 B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C带电荷的多少带电荷的多少 D溶解度溶解度2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（维持（ ）基本不变。）基本不变。 A温度温度 B pH C渗透压渗透压 D氧气浓度氧气浓度3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷电泳是
32、指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。）的电极移动。 A相同相同 B相反相反 C相对相对 D相向相向4. 哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（ ）与氧气的）与氧气的运输有关。运输有关。 A血红蛋白血红蛋白 B肌红蛋白肌红蛋白 C肌动蛋白肌动蛋白 D肌球蛋白肌球蛋白BBBA5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。的含量最多。 A白细胞白细胞 B血小板血小板 C红细胞红细胞 D淋巴细胞淋巴细胞6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（凝血剂（ ）。）。 A. NaCl B.甲苯甲苯 C.蒸馏水蒸馏水 D.柠檬酸钠柠檬酸钠7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为可以明显看到试管中的溶液分为4层，层， 其其中第中第3层是（层是（ ） A无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物其他杂质的暗红色沉淀物CDC
