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1、真核生物真核生物RNA合成与加工合成与加工真真核核生生物物的的核核中中含含有有三三种种不不同同的的RNA聚聚合酶,他们转录不同的合酶,他们转录不同的RNA产物产物RNA聚合酶RNA聚合酶RNA聚合酶通过对-鹅膏蕈碱(-amanitin)不同的敏感程度可以区分RNA聚合酶的作用转录和加工II真核生物三种RNA聚合酶的比较转录和加工II真核生物的启动子真核生物的启动子RNA聚合酶聚合酶II识别的启动子识别的启动子lTATAbox位于起始点上游25-30bpl上游调控元件(UpstreamRegulatoryElementURE)lGCboxlCCAATbox转录和加工IIRNA聚合酶II启动子转录
2、和加工IITATAbox启动子上预起始复合物装配转录和加工IIRNA聚合酶聚合酶启动子启动子含有转录起始点的核心元件和上游控制元件(UCE)RNA聚合酶聚合酶启动子启动子上游和下游启动子顺序爪蟾5SrRNA启动子位于基因内转录和加工II5SrRNA基因内启动子的定位实验分析转录和加工II5SrRNA基因启动子在转录区内转录和加工II mRNA前体加工前体加工5加 帽 : 三 种 帽 子 结 构 ( Cap0,Cap,CapII)3切除与多聚腺苷酸化: 加尾信号AAUAAA加poly(A)尾甲基化在5-RRACX-3(R=purine)顺序中腺嘌呤甲基化(m6A)转录和加工II三种帽结构转录和加
3、工IImRNA5端帽结构形成过程转录和加工II初级转录物的切除与多聚腺苷酸化转录和加工II真核生物基因是断裂基因(真核生物基因是断裂基因(split gene)真核生物基因的核苷酸顺序不全部反映到蛋白质一级结构上,有部分顺序不是蛋白质所必须或者说真核生物基因中编码序列被称为内含子序列分割成几段,这样的基因称为断裂基因内含子(intron)相当于前体mRNA上切去部分的DNA外显子(exon)相当于前体mRNA保留下来的DNA转录和加工II-珠蛋白的mRNA与基因杂交-珠蛋白的pre-mRNA与基因的杂交转录和加工II鸡卵清蛋白mRNA与基因杂交图转录和加工II鸡卵清蛋白前体mRNA到成熟mRN
4、A的过程转录和加工II断裂基因转录出包含全部顺序的初始转录物,称为前体mRNA。通过剪接(splicing)作用除去不必要部分(内含子)剩下部分(外显子)连接成为成熟mRNA转录和加工II内含子剪接方式内含子剪接方式 四种剪接方式四种剪接方式group需鸟苷或鸟苷酸作为辅助因子,鸟苷酸3-OH作为亲核供体groupII内含子中腺苷酸残基2位羟基作为亲核供体去除的内含子形成套马索(Lariat)结构共同特点group和groupII内含子有自我剪接功能转录和加工II自我剪接与剪接体催化的剪接比较转录和加工IIGroupI内含子剪接转录和加工IIGroupII内含子剪接转录和加工II核酶核酶 (R
5、ibozyme)具有催化功能的RNA分子,能催化特殊的生物化学反应1982年,Cech在研究四膜虫大亚基rRNA剪接过程中发现内含子能自身除去,这个具有剪接功能的RNA称为核酶转录和加工II四膜虫rRNA的自我剪接转录和加工IIgroup核mRNA初级转录物中发现剪接需要小核核糖核蛋白质(smallnuclearribonucleoproteinsnRNP),含有snRNAU1,U2,U4,U5和U6剪接反应在“剪接体”(Spliceosome)中发生转录和加工IImRNA前体中内含子剪接有特殊的顺序作为剪接信号,几乎所有内含子5端有顺序5-GU-3,而3末端通常是5-AG-3转录和加工II真
6、核生物内含子5剪接位点和3剪接位点的保守顺序转录和加工IISnRNA参与的mRNA前体的剪接转录和加工IIgroupIV这种内含子剪接方式在某些tRNA中发现,剪接需多种酶(内切核酸酶,环化核苷酸二酯酶,激酶,逆接酶和磷酸酯酶)剪接需要ATP转录和加工II酵母中内含子剪接(GroupIV型)转录和加工IItRNA前体加工前体加工切除tRNA前体5端多余顺序切除3端多余顺序IVS除去末端添加碱基修饰转录和加工IItRNA的前体加工转录和加工IIRNaseP是一个内切核酸酶,由RNA分子与一个蛋白质分子组成大肠杆菌中的RNaseP由377个核苷酸和13.7kDa小蛋白质组成。单独RNA具有内切核酸
7、酶作用,因此这个RNA是具催化功能的RNA。转录和加工IIrRNA前体加工前体加工转录后加工不局限于mRNA,真核和原核细胞中rRNA来自较长的前体rRNAE.coli中16S、23S、5SrRNA来自30SrRNA前体哺乳动物45S前体rRNA转录子在核仁中加工形成18S、28S、5.8S、rRNA转录和加工II大肠杆菌rRNA的前体加工转录和加工II大肠杆菌初级rRNA23S区中的二级结构转录和加工II大肠杆菌30SrRNA前体加工转录和加工II哺乳动物45SrRNA前体加工转录和加工II不同加工模式使单个基因产生不同功能蛋白质,一个RNA初级转录物经不同加工产生两种不同激素:降钙素(Ca
8、lcitonin)在大鼠的甲状腺中和大鼠脑中的降钙素基因相关肽(Calcitonin-gene-relatedpeptideCGRP)剪接异常引起疾病(-地中海贫血)转录和加工II大鼠中降钙素基因转录子的加工转录和加工II剪接错误造成贫血病转录和加工IIRNA编辑(编辑(RNA editing)一种特殊的RNA加工形式初级转录物核苷酸顺序在RNA分子的特定点发生改变,插入或删去核苷酸转录和加工IIRNA的编辑(RNAediting)转录和加工II反转录反转录RNA指导的DNA聚合酶是反转录酶反转录现象的发现是对中心法则的发展某些反转录病毒引起癌症或AIDS转录和加工IIHIV的结构转录和加工IIHIV生活史转录和加工II反转录病毒的生活史转录和加工II反转录病毒基因组的结构和基因产物转录和加工II引起AIDS的病毒HIV的基因组转录和加工II转录和加工II