《ELSD检测器的选择和主要的应用介绍实用教案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ELSD检测器的选择和主要的应用介绍实用教案（87页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、AWENCE AWENCE 从分析从分析(fnx)(fnx)到制备的解决方到制备的解决方案案HPLC和GC柱，配件(pijin)和仪器硅胶基色谱(s p)填料HPLC毛细柱和微径柱 HPLC柱和小型仪器 制备级和工业级LC柱和装柱服务 生物分离专用HPLC柱和填料 AWENCEHPLC液相系统及输液泵第1页/共86页第一页，共87页。大纲(dgng)常规检测器的回顾ELSD的检测原理ELSD与常规检测器的比较ELSD在分析上的优点Alltech ELSD的介绍(jisho)ELSD的维护质量保证总结AWENCE第2页/共86页第二页，共87页。其它其它(qt)(qt)检测器的介绍检测器的介绍-
2、 紫外可见(kjin)UV/Vis- 示差折光RI- 荧光Fluorescence- 质谱Mass Spectrometry检测器是高效液相色谱（HPLC）的核心部件之一，被喻为HPLC的眼睛。它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化(binhu)转换为可供观测的信号，通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析。AWENCE第3页/共86页第三页，共87页。检测器的应用检测器的应用(yngyng)分布分布紫外可见(kjin) 65%示差和蒸发(zhngf)光10%电化学10%荧光8%质谱4%其它3%AWENCE第4页/共86页第四页，共87页。紫外紫外/ /可见可见(kjin)(kj
3、in)检测器检测器UV/VISUV/VIS优点：优点： 易于操作易于操作 可靠性可靠性 费用费用(fi yong)(fi yong)相对低廉相对低廉 溶剂梯度兼容溶剂梯度兼容 对样品没有破坏性对样品没有破坏性 相对灵敏度高相对灵敏度高局限性： 没有好的发光基团(j tun) 的化合物响应较差 溶剂的使用上受紫外截止波长的限制AWENCE第5页/共86页第五页，共87页。荧光荧光(ynggung)(ynggung)检测器检测器FluorescenceFluorescence优点优点(yudin)：很好的灵敏度很好的灵敏度很好的选择性很好的选择性受流速和温度的受流速和温度的变化影响很小变化影响很小
4、局限性：线性范围窄操作复杂-需要对化合物和仪器的变化了解透彻某些物质(wzh)如氧气会熄灭荧光-必须严格脱气能够自然产生荧光的化合物不是很多衍生方法复杂AWENCE第6页/共86页第六页，共87页。示差折光示差折光(zhgung)(zhgung)检测器检测器RIRI优点：优点：通用性通用性- -对几乎所对几乎所有有(suyu)(suyu)的物的物质具有相应质具有相应宽的动态线性范围宽的动态线性范围-104-104易于操作易于操作局限性:检测灵敏度不高对于温度和压力(yl)的波动敏感平衡慢检测既有正峰也有负峰不能进行梯度洗脱流动相预先混合后的效果好于泵在线混合的AWENCE第7页/共86页第七页
5、，共87页。质谱质谱 MSMS优点优点:灵敏度高灵敏度高选择性好选择性好提供化学结构提供化学结构(jigu)信息信息局限性:购买(gumi)费用高操作复杂需要经常维护定量分析困难AWENCE第8页/共86页第八页，共87页。蒸发蒸发(zhngf)(zhngf)光散射检测器光散射检测器ELSDELSD发展历史检测原理(yunl)局限性优点在分析中的应用AWENCE第9页/共86页第九页，共87页。发展发展(fzhn)历史历史:第一台商业化的产品出现(chxin)在80年代初期最早的应用集中在聚合物的分析上90年代初期，更多其它方面的应用目前,应用在广泛的领域AWENCE第10页/共86页第十页，
6、共87页。ELSD行业超过行业超过(chogu)26年的领先年的领先制造经验制造经验:500 型2000 型800 型2000ES型3300 型AWENCE第11页/共86页第十一页，共87页。独特的检测独特的检测(jin c)(jin c)方法：方法：检测(jin c)三部曲:雾化溶剂的蒸发检测(jin c)ELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出准确检测(jin c)，而与被检测(jin c)物质的化学基团关系不大，物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的质量成正比。AWENCE第12页/共86页第十二页，共87页。第一步：雾化第一步：雾化(w hu)(w hu)色谱色谱(s p)(
7、s p)柱流出柱流出物通过喷雾器针孔物通过喷雾器针孔与氮气混合与氮气混合形成均匀的雾状液滴形成均匀的雾状液滴( (气溶胶气溶胶) )AWENCE第13页/共86页第十三页，共87页。第二步：溶剂第二步：溶剂(rngj)(rngj)的蒸发的蒸发液滴通过加热的漂移管液滴通过加热的漂移管流动相蒸发流动相蒸发干燥的样品干燥的样品(yngpn)(yngpn)颗粒保留颗粒保留AWENCE第14页/共86页第十四页，共87页。第三步：检测第三步：检测(jin c)(jin c)样品颗粒通过流动池样品颗粒通过流动池激光激光“撞击撞击”颗粒被散射颗粒被散射光电二极管检测散射光光电二极管检测散射光检测角度为检测角
8、度为9090，避免，避免(bmin)(bmin)虚假虚假信号信号(90(90折射折射/ /衍射光；衍射光；9090反射光反射光) )AWENCE第15页/共86页第十五页，共87页。两种类型两种类型(lixng)(lixng)气溶胶处理方式：气溶胶处理方式：A型-所有(suyu)液滴进入漂移管及流动池(又称为“无气溶胶分流 No Aerosol Splitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分进入漂移管及流动池(“气溶胶分流Aerosol Splitting”)AWENCE第16页/共86页第十六页，共87页。A A型型ELSD-ELSD-气溶胶不分流气溶胶不分流(fn (fn li)
9、li)操作操作所有样品从喷雾器进入漂移管及流动(lidng)池需要较高温度才能完全蒸发流动(lidng)相；A型ELSD只有不分流一种操作模式AWENCE第17页/共86页第十七页，共87页。B型ELSD-气溶胶分流(fn li)操作部分样品被排掉较低的温度(wnd)已足够蒸发所有溶剂B型ELSD只有分流一种操作模式AWENCE第18页/共86页第十八页，共87页。Alltech 2000(ES)型ELSD唯一提供两种操作模式(msh)的ELSD，在任何流动相及样品分析条件下均达到最佳结果AWENCE第19页/共86页第十九页，共87页。一台仪器，两种操作一台仪器，两种操作(cozu)(coz
10、u)模模式：式：撞击器(Impactor)关-所有液滴进入漂移管及流动池(A型ELSD-无分流)撞击器(Impactor)开-部分液滴被排除，只有一部分进入漂移管及流动池(B型ELSD-气溶胶分流)采用(ciyng)新型专利“气溶胶分流技术” US Patent #6229605 AWENCE第20页/共86页第二十页，共87页。撞击器关模式(msh)撞击器与气溶胶流向平行所有样品(yngpn)流过漂移管到达流通池最适用于非挥发性样品(yngpn)及挥发性溶剂(大部分为有机)DriveShaftNebulizerOpticsImpactorOffNebulizerDriveShaftImpac
11、torOffOpticsExhaustDriftTubeNebulizerImpactorDrainAWENCE第21页/共86页第二十一页，共87页。撞击器开模式(msh)撞击器垂直于气溶胶流向，部分液滴碰上撞击器从废液管排掉;其余穿过撞击器，经过漂移管到达流动池最适用于半挥发性样品(yngpn)及低挥发性溶剂(大部分为水溶液)DriveShaftNebulizerImpactorOnOpticsNebulizerDriveShaftImpactorOnNebulizerDrainImpactorDriftTubeExhaustOpticsAWENCE第22页/共86页第二十二页，共87页。
12、撞击器关撞击器关- -最适合最适合(shh)(shh)非挥发非挥发性样品性样品Column:Alltech700CHCarbohydrateColumn10m,300x6.5mmMobilePhase:100%WaterFlowrate:0.5mL/min1.蜜三糖(50g/mL)2.乳糖(rtn)(50g/mL)3.葡萄糖(50g/mL)4.甘露糖(50g/mL)Column:Alltech700CHCarbohydrateColumn10m,300x6.5mmMobilePhase:100%WaterFlowrate:0.5mL/min#9206#9205ImpactorOnImpacto
13、rOff碳水化合物非挥发性样品非挥发性样品(yngpn)在撞击器在撞击器“关关”的情况下也不挥发，全部进的情况下也不挥发，全部进入流动池，得到最高灵敏度入流动池，得到最高灵敏度AWENCE第23页/共86页第二十三页，共87页。撞击器关撞击器关- -最适合最适合(shh)(shh)挥发性挥发性溶剂溶剂有机溶剂在较低温度蒸发，在撞击器“关”的情况下，也会完全蒸发，B型ELSD 任何条件下均分流，造成样品损失(snsh)，降低检测灵敏度Column:AlltechEconosphere,C18,5m,150x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrat
14、e:0.8mL/minColumn:AlltechEconosphere,C18,5m,150x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/min1.n-癸基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)2.n-辛基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)3.n-十二(shr)烷基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)葡萄糖苷分析ImpactorOnImpactorOff#9180#9179AWENCE第24页/共86页第二十四页，共87页。撞击器开撞击器开- -最适合最适合(shh)(shh)半挥发半挥发性样品性样品在撞击器开情况下，可以较低温蒸发溶剂，防止
15、(fngzh)半挥发性样品蒸发防腐剂分析(fnx)Column:AlltechEconosphere,C18,5m,150x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn:AlltechEconosphere,C18,5m,150x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/min1.羟基苯甲酸甲酯2.羟基苯甲酸乙酯3.羟基苯甲酸丙酯4.羟基苯甲酸丁酯#9202ImpactorOffImpactorOn#9201AWENCE第25页/共86页第二十五页，共
16、87页。撞击器开撞击器开- -在几乎室温下检测半挥发在几乎室温下检测半挥发(huf)(huf)样品样品Column:PrevailCarbohydrateES,5m,250x4.6mmMobilePhase:Acetonitrile:0.04%AmmoniumHydroxide(80:20)Flowrate:1.0mL/min1.Glycerol甘油(nyu)AWENCE第26页/共86页第二十六页，共87页。ELSDELSD的局限性的局限性1.只能使用只能使用(shyng)挥发性的流动相挥发性的流动相2.样品的挥发性必须要小于流动相样品的挥发性必须要小于流动相3.检测器响应是非线性的检测器响
17、应是非线性的AWENCE第27页/共86页第二十七页，共87页。挥发性的流动挥发性的流动(lidng)(lidng)相改性剂相改性剂#1#1Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPAcidsTrifluoroacetic Acid三氟乙酸三氟乙酸0.313.7072.4CFormic Acid甲酸甲酸3.7510.25100.7CAcetic Acid醋酸醋酸4.759.25116.0CCarbonic Acid碳酸碳酸6.377.63BasesAmmonia氨水氨水9.254.75-33.35CMethylamine甲胺甲胺10.81
18、3.1916.6CEthylamine二乙胺二乙胺10.663.34-6.3CTriethylamine三乙胺三乙胺11.012.9989.3CBuffersAmmonium Formate甲酸胺甲酸胺3.0-5.0120CPyridinium Formate甲酸吡啶翁甲酸吡啶翁3.0-5.0Ammonium Acetate乙酸胺乙酸胺3.8-5.8111CPyridinium Acetate乙酸吡啶翁乙酸吡啶翁4.0-6.0Ammonium Carbonate (for reverse phase)碳酸胺碳酸胺(用于反相用于反相)8.0(adjusted)Ammonium Carbonate
19、碳酸胺碳酸胺5.5-7.5and9.3-11.3AWENCE第28页/共86页第二十八页，共87页。挥发性的流动挥发性的流动(lidng)(lidng)相改性剂相改性剂#2#2Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPIon-Pair ReagentsPentafluoropropionicAcid五氟丙酸0.696-97CHeptafluorobutyricAcid七氟丁酸0.6120CNonafluoropentanoicAcid九氟戊酸140CPentadecafluoroocatanoicAcid十五氟辛酸0.6189CTride
20、cafluoroheptanoicAcid十三氟庚酸0.6175CAWENCE第29页/共86页第二十九页，共87页。载气流速与漂移(pio y)管温度载气流速和漂移管温度是ELSD中可以调节的两个(lin )重要参数，建立适当的HPLC-ELSD分析方法需要对这两个(lin )参数进行优化。优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽量提高信噪比。AWENCE第30页/共86页第三十页，共87页。载气流速(li s)与漂移管温度漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的规律性。低于某一温度，基线水平较高，因为低于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加入将会提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的
21、温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同时还有可能导致溶质的部分(b fen)挥发，降低信噪比。故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度AWENCE第31页/共86页第三十一页，共87页。载气流速与漂移(pio y)管温度一一般般来来说说，在在其其它它条条件件不不变变的的情情况况下下，载载气气流流速速越越小小，形形成成的的物物质质粒粒子子半半径径越越大大，对对激激光光的的散散射射能能力力越越强强，相相应应(xingyng)(xingyng)的的响响应应信信号号越越大大。但但并并不不是是载载气气流流速速越越小
22、小越越好好，因因为为当当载载气气流流速速太太小小时时，流流动动相相不不能能完完全全挥挥发发，背景噪音会增加，信噪比也会降低。背景噪音会增加，信噪比也会降低。最最优优载载气气流流速速应应是是在在可可接接受受噪噪音音的的基基础础上上，产产生生最最大大检检测响应值时的最低流速。测响应值时的最低流速。AWENCE第32页/共86页第三十二页，共87页。如何如何(rh)应对非线性响应的检测器？应对非线性响应的检测器？-选择2阶方程或者幂指曲线方程-使用曲线的仅仅线性部分-使用log/log 双对数方法产生线性曲线- 即:对照品的浓度和面积(min j)同时取对数,至少两个点得到直线方程-在中国药典200
23、5版中，中药计算采用两点双对 数方法,抗生素计算采用三点双对数方法散射光的响应值与粒子质量的关系(gun x)： Ikmb取对数： lgIblgmlgk m：待测组分的粒子质量和 I： 待测组分所产生的散射光光强 k,b：常数AWENCE第33页/共86页第三十三页，共87页。Log-Log线性方程线性方程(xinxnfnchn)AWENCE第34页/共86页第三十四页，共87页。ELSD-ELSD-功能强大的功能强大的HPLCHPLC检测器检测器通用性高通用性高- -可检测任何挥发性低于流动可检测任何挥发性低于流动相相 的化合物的化合物灵敏度好灵敏度好- -比示差及低波长紫外灵敏比示差及低波
24、长紫外灵敏一致的响应一致的响应- -给出准确的样品浓度给出准确的样品浓度用途用途(yngt)(yngt)广泛广泛- -梯度相容，改善分梯度相容，改善分离及缩短分析时间离及缩短分析时间AWENCE第35页/共86页第三十五页，共87页。ELSDELSD响应响应(xingyng)(xingyng)因子的一致因子的一致性性不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具有相同的响应因子，这种响应因子的一致有相同的响应因子，这种响应因子的一致性，使纯度分析结果和多组分物质的相对性，使纯度分析结果和多组分物质的相对比例测定结果更准确。比例测定结果更准确。在无合适对照品的情况下，采
25、用在无合适对照品的情况下，采用(ciyng)(ciyng)另外一种含量已知的物质作内另外一种含量已知的物质作内标，测定未知物含量成为可能。这一点对标，测定未知物含量成为可能。这一点对组合分子库、无紫外发色团物质的新药基组合分子库、无紫外发色团物质的新药基准品的建立尤为有用。准品的建立尤为有用。AWENCE第36页/共86页第三十六页，共87页。ELSDELSD比较其它比较其它(qt)(qt)几种检测器的优势几种检测器的优势示差 RI紫外可见(kjin) UV/Vis荧光Fluorescence 质谱MSAWENCE第37页/共86页第三十七页，共87页。ELSDELSD相比相比(xin b)(
26、xin b)示差的优势示差的优势: :示差检测器的限制示差检测器的限制(xinzh)ELSD优点优点温度变化会引起(ynq)基线不稳定不受环境温度影响可能出现负峰均是正峰不可以用梯度洗脱梯度洗脱兼容受溶剂峰干扰溶剂无响应，无溶剂峰灵敏度差ng级的检测限AWENCE第38页/共86页第三十八页，共87页。ELSD不会(b hu)出负峰五糖五糖,1.5mg/mLELSDRIRI (反转(fn zhun)极性)AWENCE第39页/共86页第三十九页，共87页。ELSDELSD相对相对(xingdu)RI(xingdu)RI，提高了检测灵敏度和，提高了检测灵敏度和基线稳定性基线稳定性RIELSD10
27、277102781.Fructose果糖(gutng)2.Glucose葡萄糖3.Sucrose蔗糖Column:PrevailCarbohydrateES,5m,53x7mm(PartNo.35104)MobilePhase:Acetonitrile:Water(75:25)Flowrate:2.0mL/minColumnTemp:30CAWENCE第40页/共86页第四十页，共87页。碳水化合物的梯度(t d)洗脱#7576(Isocratic)1.核糖2.木糖3.果糖(gutng)4.葡萄糖5.蔗糖6.麦芽糖7.乳糖8.棉子糖1.果糖(gutng)2.葡萄糖3.蔗糖4.麦芽糖5.乳糖#7
28、570(Gradient)CarbohydratesAWENCE第41页/共86页第四十一页，共87页。ELSD相比(xin b)紫外检测器的优势: UV的局限性 ELSD的优点(yudin)只能检测吸收紫外或可见光检测挥发性低于溶剂的任的化合物何化合物检测基于样品的消光系数检测基于样品浓度低波长紫外检测作梯度洗脱时梯度洗脱时基线稳定出现基线漂移溶剂峰会干扰(gnro)溶剂没有响应，无溶剂峰溶剂选择受其紫外末端吸收限制可用任何挥发性的溶剂AWENCE第42页/共86页第四十二页，共87页。甾体化合物#79411.雌酮-3-硫酸钠,100ng2.b-雌二醇-17-b-D-葡萄糖苷酸钠,100ng
29、3.5b-孕烷-3a,20a-二醇-葡萄糖酸苷,220ng#7940Column:AlltimaC18,5m,150x2.1mm(PartNo.88370)MobilePhase:A:0.1%TFAinWaterB:0.1%TFAinMethanolGradient:Time:01018%B:60100100FlowRate:0.2mL/minAWENCE第43页/共86页第四十三页，共87页。10446ELSD显示(xinsh)在UV谱图中未检测到的成分LotrimimAFTopicalSolution1.PEG2.ClotrimazoleColumn:AlltimaC18,5m,150x4
30、.6mm(PartNo.88302)MobilePhase:A: Water B: MethanolGradient:Time:08102025%B:305010010030FlowRate: 1.0mL/minColumnTemp.: 40C#10446#10447AWENCE第44页/共86页第四十四页，共87页。ELSD比比UV更能准确更能准确(zhnqu)反映样反映样品实际的量品实际的量1:1混合物1.Ephedrine麻黄素2.Caffeine咖啡因1045010449Column:AlltimaHPEPSC18,5m,150x4.6mm(PartNo.87715)MobilePha
31、se:1%AceticAcid:Methanol:Acetonitrile(70:20:10)FlowRate:1.0mL/minAWENCE第45页/共86页第四十五页，共87页。ELSD检测检测(jinc)没有发光团的化合物不需要衍没有发光团的化合物不需要衍生生1.lauricAcid2.MyristicAcid3.PalmiticAcid4.StearicAcid5.ArachidicAcid6.BehenicAcid9539Column:PrevailOrganicAcid,5m,150x4.6mm(PartNo.88640)MobilePhase:(75:25)Acetonitril
32、e:MethanolFlowRate:1.0mL/min脂肪酸AWENCE第46页/共86页第四十六页，共87页。ELSD在分离使用在分离使用(shyng)的溶剂选择上有特点的溶剂选择上有特点1.LGG2.LGL3.LLL4.OGL5.PGL6.OLL7.OGO+PLL8.OOO10047Column:AlltimaC18,5m,250x4.6mm(PartNo.88056)MobilePhase:A:AcetonitrileB:DichloromethaneGradient:Time:040%B:3050FlowRate: 1.0mL/minTriglyceridesinEveningPri
33、moseOil 月见草油中的甘油三酯二氯甲烷对于(duy)高分子量的甘油三酯溶解度高.AWENCE第47页/共86页第四十七页，共87页。荧光(ynggung)检测器的局限性大多需要(xyo)柱前或柱後衍生无需(wx)衍生荧光检测器的限制 ELSD的优点AWENCE第48页/共86页第四十八页，共87页。柱前衍生(yn shn)法分析氨基酸紫外&荧光1.天门冬氨酸2. 谷氨酸3. 丝氨酸4.甘氨酸5. 组氨酸6.苏氨酸7.丙氨酸8.精氨酸9. 脯氨酸10.酪氨酸11.蛋氨酸12.缬氨酸13.半胱氨酸14.异亮氨酸15.亮氨酸16. 苯丙氨酸17. 赖氨酸 #7596#5164AWENCE第49
34、页/共86页第四十九页，共87页。1.Gly2.Ser/Asn3.Asp4.Gln5.Ala/Thr6.Glu7.Cys/Lys8.His9.Pro10.Arg11.Val12.Met13.Tyr14.Ile15.Leu16.Phe17.TrpColumn:PrevailC18,5m,250x4.6mm(PartNo.99210)MobilePhase:A:5mMHeptafluorobutyricAcid,pH1.0w/0.7%TFAB:AcetonitrileGradient:Time:06825%B:001535FlowRate:1.0mL/minELSD对无衍生(yn shn)氨基酸分
35、析AWENCE第50页/共86页第五十页，共87页。虽然虽然MSMS是通用性的检测器，是通用性的检测器，ELSDELSD也有自己也有自己(zj)(zj)的优势的优势1.投入和操作的成本低投入和操作的成本低2.操作容易操作容易3.维护简单维护简单(jindn)4.定量相比更准确定量相比更准确5.对于色谱条件的要求在对于色谱条件的要求在ELSD和和MS上是相似的，所以上是相似的，所以ELSD方法能够方便的应用在方法能够方便的应用在MS上上不需要修改。不需要修改。6.在在ELSD上进行上进行MS的方法研究，能够节省的方法研究，能够节省MS用于实际样品的分析用于实际样品的分析7.AWENCE第51页/
36、共86页第五十一页，共87页。并联使用并联使用UV/ELSD/MS能够得到最多的结构和浓度能够得到最多的结构和浓度(nngd)信息信息1.Aspartame2.Hydrocortisone3.Reserpine4.TerfenadineColumn:ZORBAXStableBondC18,3.5m,50x4.6mm(PartNo.835975-902)MobilePhase:A:0.025%FormicAcidinWaterB:0.025%FormicAcidinAcetonitrileGradient:Time:0155.1%B:250025FlowRate:1.0mL/minColumnT
37、emp:30CChrom#10456#10458#10457AWENCE第52页/共86页第五十二页，共87页。总结总结: :用用ELSDELSD替代替代(tdi)(tdi)或补充现有检测或补充现有检测器的益处器的益处消除衍生简化方法比RI有更好的灵敏度和稳定性给其它检测器作补充，能够看到哪些物质(wzh)没有检测到能够比UV&MS得到更准确的样品量的信息AWENCE第53页/共86页第五十三页，共87页。ELSDELSD更多的优点更多的优点(yudin)(yudin)：通用性的检测器通用性的检测器: :- - 可以使用微径柱来提高可以使用微径柱来提高(t go)(t go)灵敏度灵敏度- -
38、 条件方便放大到制备条件方便放大到制备- - 在极端的梯度条件下进行快速分离在极端的梯度条件下进行快速分离检测没有发光团的化合物的理想选择检测没有发光团的化合物的理想选择: :- Lipids- Lipids磷脂磷脂- Polymers- Polymers聚合物聚合物- Surfactants- Surfactants表面活性剂表面活性剂- Carbohydrates- Carbohydrates碳水化合物碳水化合物AWENCE第54页/共86页第五十四页，共87页。在在ELSDELSD上用上用(shn yn)(shn yn)微径柱检测微径柱检测1.VitaminA(100ngon-colum
39、n)2.VitaminE(160ngon-column)3.VitaminK1(130ngon-column)Column:AlltimaC18,3m,150x1mm(PartNo.88384)MobilePhase:Methanol:Chloroform(90:10)FlowRate:50L/min#10279AWENCE第55页/共86页第五十五页，共87页。制备时通过制备时通过ELSD控制馏分控制馏分(lifn)收集器，过滤收集器，过滤UV无吸收化无吸收化合物合物Column:AlltimaC18,5m,150x10mm(PartNo.81102)MobilePhase:Water:Ac
40、etonitrile(55:45)FlowRate: 5.0mL/minColumnTemp.:25C1.Ethinamate(5.0mg/mL)#10438AWENCE第56页/共86页第五十六页，共87页。ELSD对流动相的组成改变对流动相的组成改变(gibin)不响应，允许在极端梯不响应，允许在极端梯度条件下的快速分离度条件下的快速分离1.Ephedrine2.Acetylsalicylicacid3.Diphenhydramine4.TrimipramineColumn:AlltechAlltimaHPC18,3m,33x7.0mm(PartNo.87671)MobilePhase:A
41、:0.1%TFAinWaterB:0.1%TFAinAcetonitrileGradient:Time:03%B:1090FlowRate:2.5mL/minColumnTemp:30C#10451AWENCE第57页/共86页第五十七页，共87页。主要主要(zhyo)的应用领域的应用领域Pharmaceuticals 药物Non-chromophoric drugs 没有(mi yu)发光团的药品Excipients 赋性剂Impurities 杂质Amino acids氨基酸Aminoglycoside antibiotics 氨基糖甙类Nutraceuticals 天然(tinrn)产物
42、Ginseng 人参Astragaloside IV 黄芪甲苷Ginkgolides 银杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合物/表面活性剂PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids 脂类Phospholipids磷脂Triglycerides 甘油三酸酯Fatty acids 脂肪酸Carbohydrates碳水化合物Simple sugars单糖Oligomers 寡糖Sugar alcohols糖醇AWENCE第58页/共86页第五十八页，共87页。2005版中国版中国(zhnu)
43、药典中用药典中用ELSD检测的药检测的药品名称品名称序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码1地肤子地肤子皂苷甲醇水冰醋酸=85:15:0.2一部P812路路通路路通酸甲醇水冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黄芪黄芪甲苷 C18柱，乙腈：水=32：68 一部P2124炙黄芪黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68 一部P2135银杏叶萜类内酯 白果内酯 C18柱，甲醇:四氢呋喃：水=25：10：65一部P2206银杏叶提取物萜类内酯 白果内酯C18柱， 正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P2827知母拔契皂苷元C18柱，甲醇：水=95：5 一部P1 488意苡仁甘油三油酸酯C18柱，乙
44、腈：二氯甲烷=65：35 一部P2609浙贝母贝母素C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3一部P20510乙肝宁颗粒黄芪甲苷甲醇水=75:25一部P29011玉屏风口服液黄芪甲苷乙腈水=35:65一部P40912补中益气丸（水丸）黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65 一部P48013银杏叶片萜类内酯 白果内酯C18柱， 正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P597AWENCE第59页/共86页第五十九页，共87页。2005版中国药典中用版中国药典中用(zhngyng)ELSD检测的检测的药品名称药品名称序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码13硫酸卡那霉素卡那霉素C18柱，0.2
45、mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5二部P72414硫酸庆大霉素庆大霉素 小诺霉素C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P73015硫酸依替米星依替米星 奈替米星 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16 二部P740 16硫酸小诺霉素小诺霉素/庆大霉素C1a C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6 二部P718AWENCE第60页/共86页第六十页，共87页。ELSD对氨基对氨基(nj)葡萄糖有比葡萄糖有比RI和和UV更好的响应更好的响应Column:PrevailCarbohydrateES,5m,150x4.6mm(PartNo.35
46、102)MobilePhase:Acetonitrile:Water(65:35)FlowRate:1.0mL/min1.Glucosamine(1mg/mL)#10412#10413#10411AWENCE第61页/共86页第六十一页，共87页。使用使用ELSDELSD可以梯度洗脱完全分离可以梯度洗脱完全分离(fnl)(fnl)多种磷脂多种磷脂, ,灵敏度灵敏度高高1.Cholesterol胆固醇2.Palmiticacid棕榈(zngl)酸3.Phosphatidylethanolamine磷脂酰乙醇胺4.Phosphatidylserine磷脂酰丝氨酸5.Phosphatidylchol
47、ine卵磷脂6.Sphingomyelin神经鞘磷脂Column:AlltechAllsphereSilica,3m,100x4.6mm(PartNo.778382)MobilePhase:A:IPAB:HexaneC:WaterGradient:Time:0715%B:404040%C:288FlowRate:1.25mL/minAWENCE第62页/共86页第六十二页，共87页。ELSDELSD检测糖醇检测糖醇- -高灵敏度和稳定高灵敏度和稳定(wndng)(wndng)的基线的基线Column:PrevailCarbohydrateES,5m,250x4.6mm(PartNo.35101
48、)MobilePhase:Acetonitrile:Water(70:30)FlowRate:1.0mL/min1.iso-Erythritol异赤藻糖醇2.Xylitol木糖醇3.Mannitol甘露醇4.Maltitol麦芽糖醇#9352糖醇AWENCE第63页/共86页第六十三页，共87页。ELSDELSD轻松检测轻松检测(jin c)(jin c)困难化合物困难化合物-Tween 80Tween 805%Tween80Column:AlltechAlltimaC18,5m,250x4.6mm(PartNo.88056)MobilePhase:Water:Methanol(60:40)F
49、lowRate:1.0mL/minAWENCE第64页/共86页第六十四页，共87页。ELSDELSD梯度洗脱梯度洗脱(x tu)(x tu)分离玉米糖浆低分离玉米糖浆低聚糖聚糖1.Dextrose2.Maltose3.Maltotriose4.Maltotetraose5.Maltopentaose6.Maltohexaose7.Maltoheptaose8.Maltooctaose9.Maltononaose10.Maltodecaose11.Maltoundecaose12.Maltododecaose13.Maltotridecaose14.Maltotetradecaose15.Ma
50、ltopentadecaoseColumn:AlltechPrevailCarbohydratesES300A,5m,250x4.6mm(PartNo.35101)MobilePhase:A:AcetonitrileB:WaterGradient:Time:015%B:3550FlowRate:1.0mL/minAWENCE第65页/共86页第六十五页，共87页。无需无需(wx)(wx)衍生检测橄榄油中的甘油三酯衍生检测橄榄油中的甘油三酯1.1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-glycerol(LLO)2.1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glyce
51、rol(LLP)3.1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol(OOL)4.1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol(POL)5.1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol(PPL)6.Triolein(OOO)7.1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol(OOP)8.1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol(PPO)9.1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol(OOS) Column:AlltechA
52、lltimaC18,3m,150x4.6mm(PartNo.91387)MobilePhase:A:DichloromethaneB:AcetonitrileGradient:Time:0101820%B:70557070FlowRate:1.5mL/min脂肪和油一般(ybn)含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鉴定脂肪和油的品种.AWENCE第66页/共86页第六十六页，共87页。掺有植物油的橄榄油的鉴定掺有植物油的橄榄油的鉴定(jindng)(jindng)分析分析1.LLL2.LLO3.LLP4.OOL5.POL6.OOO7.OOP8.PPO9.OOSC o l u m n :All
53、timaC18,3m,150x4.6mmMobilePhase:A: D i c h l o ro m e t h a n e B:AcetonitrileG r a d i e n t :Time:01018 20%B:70 5570 70Flowrate:1.5mL/minDetector :E L S D 2 0 0 0橄榄油含有大量(dling)的油酸甘油三酯,而不含亚麻酸甘油三酯.后者却存在于菜油中,显示于掺有菜油的橄榄油谱图中.AWENCE第67页/共86页第六十七页，共87页。生物柴油生物柴油(chiyu)(Biodiesel Poster)(chiyu)(Biodiesel P
54、oster)生产中的生产中的反应和质量监控反应和质量监控生物柴油是一种可再生、生物可降解和无毒燃料,它可以(ky)通过动植物油的转酯反应来制备.作为天然柴油的替代物.目前国内外学者广泛采用的转酯法,即三甘油酯在酸、碱或酶等催化剂作用下经转酯反应制备生物柴油MAGs, DAGs和未反应的TAGs会造成污染影响生物柴油的品质AWENCE第68页/共86页第六十八页，共87页。Biodiesel Contaminated with Mono-, Di- and TriacylglycerolsUnreacted Tryacylglycerols (豆油(duyu)Soy Oil) Column:Al
55、ltima HP C18-HL, 5m, 250 X 4.6mmMobile Phase: A: Acetonitrile B: DichloromethaneGradient:Time05303235% B01570700Flow rate:1.0 ml/minAWENCE第69页/共86页第六十九页，共87页。氨基糖苷氨基糖苷(tnggn)(tnggn)类抗生素的类抗生素的ELSDELSD分析分析( (中国药典中国药典2005)2005)Column:ApolloC18,5m,250x4.6mmMobilePhase:0.2MTrifluoroaceticAcid:Methanol(94:
56、6)FlowRate: 0.6mL/min1.Sulfate2.GentamicinC1a3.GentamicinC24.GentamicinC2b5.GentamicinC2a6.GentamicinC1#10425庆大霉素C组分(zfn) *中检所抗生素室AWENCE第70页/共86页第七十页，共87页。银杏叶提出物中内酯含量的银杏叶提出物中内酯含量的ELSDELSD测定测定( (中国中国(zhn u)(zhn u)药典药典2005)2005)银杏叶提出物的内酯类成份决定了其药理作用，HPLC-RI法灵敏度与稳定性均不理想(lxing)；若采用紫外分析因为内酯类成份吸收差，最大吸收波长在2
57、19nm，受试剂末端吸收影响很大。1. 银杏(ynxng)苦内酯C2. 白果内酯3. 银杏(ynxng)苦内酯A4. 银杏(ynxng)苦内酯BColumn:PlatinumC18,5m,250x4.6mmMobilePhase:H2O:MeOH:THF=75:20:10FlowRate:1.0mL/minAWENCE第71页/共86页第七十一页，共87页。黄芪黄芪(hungq)(hungq)中黄芪中黄芪(hungq)(hungq)甲苷的甲苷的ELSDELSD分析分析(CHP2005)(CHP2005)黄芪甲苷常作为指标性成份用于黄芪药材的质量监控，因为只在220nm有弱的末端吸收，过去未能使
58、用HPLC法定量，ELSD有通用(tngyng)响应，使用HPLC-ELSD法干扰少，分离度高.1. 黄芪(hungq)甲苷Column:ApolloC18,5m,250x4.6mmMobilePhase:CAN:H2O=(32:68)FlowRate:1.0mL/minAWENCE第72页/共86页第七十二页，共87页。三七三七(sn q)(sn q)药材及其制剂中药材及其制剂中三七三七(sn q)(sn q)皂苷皂苷R1,R1,人参皂苷人参皂苷Rg1Rg1及及Rb1Rb1的含量的含量 图 三七药材及血塞通注射液HPLC色谱图a.对照(duzho)品b.三七药材c.血塞通注射液 1.三七皂苷
59、R1 2.人参皂苷Rg13. 人参皂苷Rb1Column:AlltechAlltimaC18,5m,150x4.6mmMobilePhase:A:WaterB:AcetonitrileGradient:Time:021%B:3060FlowRate:0.6mL/minAWENCE第73页/共86页第七十三页，共87页。AlltechELSD2000ES光路和电子元件进行更新光路和电子元件进行更新布儒斯特角光阱布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹增加光阱尾吹30mW的激光光源的激光光源光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层降低背景噪音降低背景噪音(zoyn)，比，比2000ELSD提高一个
60、数量级提高一个数量级的灵敏度的灵敏度AWENCE第74页/共86页第七十四页，共87页。关于关于(guny)(guny)布儒斯特角布儒斯特角当反射光线和折射(zhsh)光线的传播方向互相垂直时,入射光线的偏振角称为布儒斯特角.当透镜只能通过垂直方向的偏振光时,便可挡住部分散射的光线.自然光在两种各向同性媒质分界面上反射、折射(zhsh)时，反射光和折射(zhsh)光都是部分偏振光。反射光中垂直振动多于平行振动，折射(zhsh)光中平行振动多于垂直振动。 AWENCE第75页/共86页第七十五页，共87页。ELSD2000ES性能性能(xngnng)更新更新灵敏度的挑战灵敏度的挑战一种措施是仅仅
61、增加光强，但是同时会增加基线一种措施是仅仅增加光强，但是同时会增加基线的噪音，导致的噪音，导致LODLOD和信噪比没有变化。和信噪比没有变化。ELSD 2000ES ELSD 2000ES 克服这种障碍，专利设计克服这种障碍，专利设计(shj)(shj)的布儒斯特角光阱，当光强增加时，信号的增强的布儒斯特角光阱，当光强增加时，信号的增强远大于噪音的增加。远大于噪音的增加。2000ES2000ES结合布儒斯特角光阱结合布儒斯特角光阱和和30mW30mW的光源为一体。的光源为一体。AWENCE第76页/共86页第七十六页，共87页。ELSD2000ES灵敏度更新灵敏度更新(gngxn)对相同的浓度
62、的样品有多于(du y)10倍的信噪比(S/N)增长增强最小检出限 (LOD)AWENCE第77页/共86页第七十七页，共87页。灵敏度比较灵敏度比较(bjio)2000ESvs20002000ES对相同(xin tn)量的氢化可的松增加灵敏度1.Hydrocortisone(100ngoncolumn)Column:AlltimaC18,5m,4.6x250mm(PartNo.88056)MobilePhase:Water:Acetonitrile(55:45)FlowRate:1.0mL/minAWENCE第78页/共86页第七十八页，共87页。灵敏度比较灵敏度比较(bjio)表表与其它品
63、牌的与其它品牌的ELSDAlltech 2000(ES)ELSD具有(jyu)专利保护的分流不分流双模式, 用户可根据应用自行选择操作模式;其它品牌的ELSD均为单一的强制分流模式;AWENCE第79页/共86页第七十九页，共87页。前面板的设计方便了喷雾头和漂移(pio y)管的清洗 和维护液体(yt)入口废液出口(ch ku)高灵敏度:相当于2000ES的灵敏度, 高于其它品牌Alltech Model 3300 ELSD 基于Windows的LCD 方法向导一步步地输入分析条件后自动设定仪器参数 屏幕上显示谱图 出错和服务记录包括中文在内的7种语言选择 直接连接Aglient 1200
64、ChemStation工作站无需A/D转换AWENCE第80页/共86页第八十页，共87页。TechnicalStatus-MechanicalNebulizer:Modifiedtoincorporatequickconnectgasinletandforeasyremoval/installationwithoutanytoolsImpactor:Mountedonaremovablecartridgeinsert.Byremovingthenebulizerandthecartridge,thedrifttubecanbecleanedfromthefrontthroughanacces
65、sdoor.Technical OverviewNext Generation ELSDAWENCE第81页/共86页第八十一页，共87页。TechnicalStatusMechanical(Cont.)Exhaust/LiquidWasteLine:Redesignedforacleanerlook.Thecondensedexhaustvaporiscombinedwiththeliquidwastethroughinternaltubing.Theexhaustvaporisventedtothebackoftheunit.Thiseliminatestheneedforacondens
66、ationflask.DriftTube:0.07coppersleevedstainlesssteelforimprovedtemperaturestability.Technical OverviewNext Generation ELSDAWENCE第82页/共86页第八十二页，共87页。ELSDELSD清洗清洗(qngx)(qngx)需要对流路进行清洗需要对流路进行清洗- Drift tube- Drift tube漂移管漂移管- Nebulizer- Nebulizer雾化器雾化器- Optics windows- Optics windows光池光池- Light trap- Li
67、ght trap光阱光阱多长时间多长时间- - 根据根据(gnj)(gnj)样品，方法和使用频率而定样品，方法和使用频率而定- - 通常每半年一次通常每半年一次AWENCE第83页/共86页第八十三页，共87页。Qualification Qualification 认证认证(rnzhng)(rnzhng)InstallationQualification(IQ)安装认证安装认证Siterequirements场地要求场地要求Unpackingandinspection拆箱及检查拆箱及检查Instrumentsetup仪器安装仪器安装OperationalQualification(OQ)操作
68、认证操作认证Gasflowtest气流测试气流测试Drifttubetemperaturetest漂移管温度测试漂移管温度测试Backgroundscatterorlaserpowertest背景散射光或激光功率测试背景散射光或激光功率测试PerformanceQualification(PQ)性能认证性能认证Driftandnoiseevaluation漂移和噪音的评估漂移和噪音的评估Reproducibility重复性重复性Sensitivity灵敏度灵敏度-推荐每年推荐每年(minin)进行一次进行一次-在在ELSD2000ES包装中随机带有认证文件包装中随机带有认证文件AWENCE第8
69、4页/共86页第八十四页，共87页。总结总结:ELSD:ELSD用于分析用于分析(fnx)(fnx)的优势的优势通用性通用性- - 分析样品中几乎所有的峰都能检测到分析样品中几乎所有的峰都能检测到- - 改进定量方法改进定量方法- - 更精确的评估更精确的评估(pn )(pn )峰纯度峰纯度 灵敏度灵敏度- - 检出限达到检出限达到ngng级级 (2000ES (2000ES更优更优) ) 梯度兼容性梯度兼容性 - - 在坡度梯度中保持稳定的基线在坡度梯度中保持稳定的基线AWENCE第85页/共86页第八十五页，共87页。感谢您的欣赏(xnshng)！第86页/共86页第八十六页，共87页。内容(nirng)总结AWENCE 从分析到制备的解决方案。最适用于非挥发性样品及挥发性溶剂(大部分为有机)。最适用于半挥发性样品及低挥发性溶剂(大部分为水溶液)。选择2阶方程或者(huzh)幂指曲线方程。二氯甲烷对于高分子量的甘油三酯溶解度高.。C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8。C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6。三七药材及其制剂中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1及Rb1的含量。感谢您的欣赏第八十七页，共87页。
