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1、运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 实验六实验六 血糖的测定与应用血糖的测定与应用 (葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法过氧化物酶法) 运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 掌握掌握掌握掌握葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶法过氧化物酶法过氧化物酶法过氧化物酶法测定血
2、糖含量的测定血糖含量的测定血糖含量的测定血糖含量的原理和方法；原理和方法；原理和方法；原理和方法；了解运动训练中血糖的变化。了解运动训练中血糖的变化。了解运动训练中血糖的变化。了解运动训练中血糖的变化。一、一、 实验目的实验目的 运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 葡萄糖能被葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，葡萄糖能被葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，后者与苯酚及并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替氨基安替比林在过氧化物酶的作用下产生红色
3、酸类化比林在过氧化物酶的作用下产生红色酸类化合物，其颜色深浅与葡萄糖浓度成正比。合物，其颜色深浅与葡萄糖浓度成正比。 二、实验原理二、实验原理 运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 三、试剂三、试剂葡萄糖标准贮存液（葡萄糖标准贮存液（葡萄糖标准贮存液（葡萄糖标准贮存液（10mg=1mL10mg=1mL）：精确称取无水葡萄糖）：精确称取无水葡萄糖）：精确称取无水葡萄糖）：精确称取无水葡萄糖1 g1 g，用，用，用，用12mmol/L12mmol/L苯
4、甲酸溶液溶解，移至苯甲酸溶液溶解，移至苯甲酸溶液溶解，移至苯甲酸溶液溶解，移至100ml100ml容量瓶中，再以容量瓶中，再以容量瓶中，再以容量瓶中，再以12mmol/L12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中，冰苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中，冰苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中，冰苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中，冰箱内保存。箱内保存。箱内保存。箱内保存。葡萄糖标准应用液（葡萄糖标准应用液（葡萄糖标准应用液（葡萄糖标准应用液（ 1mL=10mg 1mL=10mg ）：吸取葡萄糖标准贮存液）：吸取葡萄糖标准贮存液）：吸取葡萄糖标准贮存液）：吸取葡萄糖标
5、准贮存液5.0ml5.0ml，置于，置于，置于，置于100ml100ml容量瓶中，再以容量瓶中，再以容量瓶中，再以容量瓶中，再以12mmol/L12mmol/L甲苯酸溶液稀甲苯酸溶液稀甲苯酸溶液稀甲苯酸溶液稀释至刻度。释至刻度。释至刻度。释至刻度。酶制剂（市售药盒）。酶制剂（市售药盒）。酶制剂（市售药盒）。酶制剂（市售药盒）。1%1%苯酚溶液。苯酚溶液。苯酚溶液。苯酚溶液。 运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 用蒸馏水将用蒸馏水将用蒸馏水将用蒸馏
6、水将1%1%1%1%苯酚稀释至苯酚稀释至苯酚稀释至苯酚稀释至0.1%0.1%0.1%0.1%。酶酚混合液的制备：将酶酚混合液的制备：将酶酚混合液的制备：将酶酚混合液的制备：将0.1%0.1%0.1%0.1%苯酚溶液与等量的酶苯酚溶液与等量的酶苯酚溶液与等量的酶苯酚溶液与等量的酶制剂混合。制剂混合。制剂混合。制剂混合。取取取取3 3 3 3支大试管，编号，按下表操作：支大试管，编号，按下表操作：支大试管，编号，按下表操作：支大试管，编号，按下表操作：四、实验操作四、实验操作 运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大
7、学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 加入物（mL）测定管标准管空白管血清0.02葡萄糖标准应用液0.02酶酚混合液3.03.03.0混匀，置沸水浴中煮沸混匀，置沸水浴中煮沸混匀，置沸水浴中煮沸混匀，置沸水浴中煮沸1212分钟，取出置流水中冷却分钟，取出置流水中冷却分钟，取出置流水中冷却分钟，取出置流水中冷却5 5分钟分钟分钟分钟用分光光度计用分光光度计用分光光度计用分光光度计630nm630nm，以空白调零，读取各管吸光度。，以空白调零，读取各管吸光度。，以空白调零，读取各管吸光度。，以空白调零，读取各管吸光度。 血糖测定运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西
8、师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 计算公式： ODOD测测测测葡萄糖（葡萄糖（葡萄糖（葡萄糖（mmolmmol/L/L） = - 5.55= - 5.55 OD OD标标标标五、实验结果五、实验结果 运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 本法对葡萄糖有特异性，不受其他糖存在的影响，异可用于尿糖本法对葡萄糖有特异性，不受其他糖存在的影响，异可用
9、于尿糖本法对葡萄糖有特异性，不受其他糖存在的影响，异可用于尿糖本法对葡萄糖有特异性，不受其他糖存在的影响，异可用于尿糖测定。测定。测定。测定。 本法标本用量小，取样时力求准确。本法标本用量小，取样时力求准确。本法标本用量小，取样时力求准确。本法标本用量小，取样时力求准确。由于糖酵解仍可在全血中以每小时由于糖酵解仍可在全血中以每小时由于糖酵解仍可在全血中以每小时由于糖酵解仍可在全血中以每小时7%7%的速率进行，所以应在取样的速率进行，所以应在取样的速率进行，所以应在取样的速率进行，所以应在取样后后后后30min30min内分离血清，且应避免溶血，防止内分离血清，且应避免溶血，防止内分离血清，且应
10、避免溶血，防止内分离血清，且应避免溶血，防止RBCRBC中葡萄糖中葡萄糖中葡萄糖中葡萄糖-6-6-磷酸磷酸磷酸磷酸溶入血清，影响结果。溶入血清，影响结果。溶入血清，影响结果。溶入血清，影响结果。分离后的血清样本在分离后的血清样本在分离后的血清样本在分离后的血清样本在2828 可保存可保存可保存可保存24h24h，-20 -20 下可存下可存下可存下可存1 1个月。个月。个月。个月。六、注意事项六、注意事项运动生物化学实验课件运动生物化学实验课件陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 正常人
11、空腹血糖浓度为正常人空腹血糖浓度为正常人空腹血糖浓度为正常人空腹血糖浓度为4.44.6mmol/L4.44.6mmol/L（80120mg%80120mg%），低于），低于），低于），低于3.8mmol/L3.8mmol/L称低血糖。运动员安静时与普通人血糖正常值无差异，称低血糖。运动员安静时与普通人血糖正常值无差异，称低血糖。运动员安静时与普通人血糖正常值无差异，称低血糖。运动员安静时与普通人血糖正常值无差异，运动时会随运动强度和持续时间出现变化。运动时会随运动强度和持续时间出现变化。运动时会随运动强度和持续时间出现变化。运动时会随运动强度和持续时间出现变化。短时间剧烈运动时，主要依靠肌糖原
12、分解供能，血糖供能少，血短时间剧烈运动时，主要依靠肌糖原分解供能，血糖供能少，血短时间剧烈运动时，主要依靠肌糖原分解供能，血糖供能少，血短时间剧烈运动时，主要依靠肌糖原分解供能，血糖供能少，血糖值变化不大；长时间运动时骨骼肌吸收利用血糖的过程加强、糖值变化不大；长时间运动时骨骼肌吸收利用血糖的过程加强、糖值变化不大；长时间运动时骨骼肌吸收利用血糖的过程加强、糖值变化不大；长时间运动时骨骼肌吸收利用血糖的过程加强、速度加快，血糖下降。速度加快，血糖下降。速度加快，血糖下降。速度加快，血糖下降。因此可根据血糖的变化，及时补糖，维持血糖平衡有利于推迟运因此可根据血糖的变化，及时补糖，维持血糖平衡有利于推迟运因此可根据血糖的变化，及时补糖，维持血糖平衡有利于推迟运因此可根据血糖的变化，及时补糖，维持血糖平衡有利于推迟运动性疲劳的发生。动性疲劳的发生。动性疲劳的发生。动性疲劳的发生。七、指标应用七、指标应用
