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1、医学微生物学实 验 一 细菌形态学本次实验内容本次实验内容一、实验室规则一、实验室规则二、油镜的使用二、油镜的使用三、细菌的基本形态和特殊结构的观察三、细菌的基本形态和特殊结构的观察四、革兰氏染色法四、革兰氏染色法五、自然界中细菌的分布五、自然界中细菌的分布 （一）实验前要做好实验预习，进（一）实验前要做好实验预习，进实验室只带必要的文具、讲义，并穿实验室只带必要的文具、讲义，并穿工作服。工作服。 （二）实验室内应保持清洁、安（二）实验室内应保持清洁、安静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、饮食和开玩笑。饮食和开玩笑。一、实一、实 验验 室室 规规 则则 （三）爱护实
2、验器材，注意节约实（三）爱护实验器材，注意节约实验材料，实验室内任何物品不得带出室验材料，实验室内任何物品不得带出室外。外。 （四）注意安全，若带菌材料污染（四）注意安全，若带菌材料污染桌面、地板、书籍和衣物或误吸入口，桌面、地板、书籍和衣物或误吸入口，应立即报告教师进行处理。应立即报告教师进行处理。 （五）实验中待培养的材料（五）实验中待培养的材料应放在培养区；实验用过的带菌应放在培养区；实验用过的带菌材料如吸管、玻片等应放在消毒材料如吸管、玻片等应放在消毒缸、消毒箱等消毒区，不得放在缸、消毒箱等消毒区，不得放在桌上或冲洗于水槽内。桌上或冲洗于水槽内。 （六）实验完毕，桌面应整理（六）实验完
3、毕，桌面应整理清洁，洗手后方可离室。值日清洁，洗手后方可离室。值日同学负责湿性打扫实验室，并同学负责湿性打扫实验室，并关好水、电、门窗。关好水、电、门窗。 二、油镜的使用二、油镜的使用( (一一) )、油镜头的识别、油镜头的识别 油镜头的下缘，一般刻有一油镜头的下缘，一般刻有一黑圈，标有油黑圈，标有油 9090、100100、oeloel、oiloil等字样。等字样。 显微镜的接物镜有低倍镜头，显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油镜头的高倍镜头和油镜头，其中油镜头的放大倍数最大。放大倍数最大。 (二）油镜的原理：二）油镜的原理：滴镜油后可以滴镜油后可以增加油镜视野增加油镜视野的亮
4、度。的亮度。 （三）镜检要领（三）镜检要领 把载玻片固定于载物台上，使把载玻片固定于载物台上，使油镜头对准镜筒。于载玻片上滴一油镜头对准镜筒。于载玻片上滴一小滴液体石腊，眼睛从镜筒侧面看，小滴液体石腊，眼睛从镜筒侧面看，旋转粗调节器，使镜筒下降浸入镜旋转粗调节器，使镜筒下降浸入镜油并贴近标本，但勿触及玻片。油并贴近标本，但勿触及玻片。 镜检完毕后，把镜筒升高，镜检完毕后，把镜筒升高，用用擦镜纸擦镜纸把油镜头上的镜油擦净。把油镜头上的镜油擦净。 （四）油镜的保护办法（四）油镜的保护办法 细菌的基本形态可分为细菌的基本形态可分为球菌、球菌、杆菌、螺形菌杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。（包括弧菌）三类
5、。 三、细菌基本形态的观察三、细菌基本形态的观察1 1球菌球菌： 如如葡萄球菌葡萄球菌经结晶经结晶紫染色后为球状，常堆集紫染色后为球状，常堆集成葡萄串状，呈紫色。成葡萄串状，呈紫色。 葡萄球菌葡萄球菌肺炎球菌肺炎球菌链链 球球 菌菌2 2杆菌杆菌： 如如大肠杆菌大肠杆菌经番红染经番红染色后呈淡红色杆状，两端钝色后呈淡红色杆状，两端钝圆，散在排列。圆，散在排列。大肠杆菌大肠杆菌 3 3螺形菌螺形菌： 如如霍乱弧菌霍乱弧菌经稀释复红经稀释复红液染色后呈红色弧形，菌体微液染色后呈红色弧形，菌体微弯，如逗点状，或呈眉毛状，弯，如逗点状，或呈眉毛状，散在排列。散在排列。幽门螺杆菌幽门螺杆菌呈螺旋呈螺旋状
6、、状、U U状、状、S S状及海鸥展翅状。状及海鸥展翅状。幽门螺杆菌幽门螺杆菌 四、革兰氏染色四、革兰氏染色（一）细菌涂片的制作（一）细菌涂片的制作（二）染色：（二）染色： 单染色法单染色法 复染色法复染色法 革兰氏染色革兰氏染色法法 抗酸染色法抗酸染色法 （一）细菌涂片标本的制作（一）细菌涂片标本的制作 1 1涂片涂片： 取清洁无油载玻片一张，将接种取清洁无油载玻片一张，将接种环用火焰烧红灭菌，待冷后取一环菌环用火焰烧红灭菌，待冷后取一环菌液轻轻涂抹在玻片上，制成直径约液轻轻涂抹在玻片上，制成直径约1cm1cm大小薄层，然后将接种环灭菌。大小薄层，然后将接种环灭菌。 2 2干燥干燥： 涂片置
7、室温自然干燥，涂片置室温自然干燥，必要时可将标本面朝上，放必要时可将标本面朝上，放在离火焰较高处微微烘干，在离火焰较高处微微烘干，但切勿在火焰上直烤。但切勿在火焰上直烤。3 3固定固定： 标本面朝上，用钟摆标本面朝上，用钟摆样速度来回通过火焰三次。样速度来回通过火焰三次。（二）革兰氏染色法步骤（二）革兰氏染色法步骤 1 1初染初染：在上述已固定的涂片：在上述已固定的涂片 上，滴加上，滴加结晶紫结晶紫染液，染色染液，染色1 1分钟分钟，水，水洗。洗。 2 2媒染媒染：滴加：滴加革兰氏碘液革兰氏碘液，作用，作用1313分钟分钟，水洗。，水洗。 3 3脱色脱色：滴加：滴加 9595酒精酒精，并频，并
8、频频摇动玻片，至无紫色脱出为止频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约约2020秒秒），水洗。），水洗。 4 4复染复染：加：加番红染液番红染液，复染，复染半分半分钟钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。检查。1 1 初染初染: : 结晶紫结晶紫染色液染色液, 1, 1分钟分钟2 2 媒染媒染: : 革兰氏碘液革兰氏碘液, 1, 1分钟分钟3 3 脱色脱色: 95%: 95%酒精酒精, 15-20, 15-20秒秒4 4 复染复染: : 番红染色液番红染色液, 30, 30秒秒（三）革兰氏染色法（三）革兰氏染色法 1、结果观察：、结果观察： 革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌-兰紫色兰
9、紫色 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌-红色红色 2、原理、原理 3、意义、意义 五、细菌的特殊构造：五、细菌的特殊构造： 1 1、鞭毛、鞭毛 2 2、荚膜、荚膜 3 3、芽胞、芽胞 4、菌毛菌毛 鞭鞭 毛毛Flagellum化学组成：化学组成：功能：功能：鞭毛蛋白鞭毛蛋白运动器官运动器官与致病有关与致病有关鉴定分类细菌鉴定分类细菌变形杆菌（鞭毛）荚荚 膜膜化学组成：化学组成：功能：功能：产气荚膜杆菌 肺炎链球菌肺炎链球菌Capsule多糖或多肽多糖或多肽抗抗吞噬作用吞噬作用粘附作用粘附作用抗有害物质损伤作用抗有害物质损伤作用芽芽 胞胞功能与医学上意义：功能与医学上意义：Spore对对外界的抵抗力增加
10、外界的抵抗力增加可发芽成繁殖体有致病性可发芽成繁殖体有致病性有鉴别作用有鉴别作用应以杀死芽胞为灭菌效果应以杀死芽胞为灭菌效果的指标的指标目的要求目的要求 1 1通过实验对细菌在自然界通过实验对细菌在自然界的分布有一感性认识。的分布有一感性认识。 2 2初步建立无菌观念，认识初步建立无菌观念，认识到无菌操作技术在医疗实践和微到无菌操作技术在医疗实践和微生物学实验中的重要性。生物学实验中的重要性。六、自然界中细菌的分布六、自然界中细菌的分布( (一一) )、空气中细菌的检查、空气中细菌的检查( (二二) )、鼻腔中及书籍上细菌的检查、鼻腔中及书籍上细菌的检查 ( (三三) )、检查手指皮肤消毒前后的细菌、检查手指皮肤消毒前后的细菌作业：作业：1、请画图示意细菌的基本形态和特、请画图示意细菌的基本形态和特 殊结构。殊结构。 （标明标明：细菌名称、染色法、放：细菌名称、染色法、放 大倍数）大倍数）2、填空。、填空。1 1 初染初染: : 结晶紫结晶紫染色液染色液, 1, 1分钟分钟2 2 媒染媒染: : 革兰氏碘液革兰氏碘液, 1, 1分钟分钟3 3 脱色脱色: 95%: 95%酒精酒精, 15-20, 15-20秒秒4 4 复染复染: : 番红染色液番红染色液, 30, 30秒秒
