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1、第一节第一节第一课时第一课时微生物微生物包括哪五类包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物特点特点：结构都相当简单：结构都相当简单,多数个体十分微小多数个体十分微小(o.1mm)的生物的总称。的生物的总称。 通常要用光学显微镜通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用不能进行光合作用. 原核原核 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界真核真核病毒病毒 SARS病毒病毒 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（朊病毒（蛋白质病毒）蛋白质病毒）真菌真菌如图是
2、酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉 了解有关培养基的基础知识，进行无了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。菌技术的操作，进行微生物的培养。 一、课题目标：一、课题目标： 掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板划线法平板划线法等基本操作技术，熟练、规范等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：（2）按培养基）按培养基的物理形的物理形态
3、分：分：液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基一一 基础知识基础知识:（3）按培养基的）按培养基的功能分：功能分： P12基础培养基基础培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基（1）按培养基的）按培养基的化学成分分：化学成分分：天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基半半合成培养基合成培养基阅读课本阅读课本P8第三段第三段分别说出它们的优点、分别说出它们的优点、缺点。缺点。各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？答：不管哪种培养基，一般都含有答：不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、 无机无机盐等等营养物养物质。 注注：另外另外还需要
4、需要满足微生物生足微生物生长对pH、特、特殊殊营养物养物质,例如例如:生生长因子因子(即即细菌生菌生长必需，而必需，而自身不能合成的化合物自身不能合成的化合物,如如维生素、某些氨基酸、生素、某些氨基酸、嘌呤、呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要等的要求。求。 二二 无菌技术无菌技术：无菌操作泛指在培养微生物的无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。操作中，所有防止杂菌污染的方法。阅读P8-P9说出消毒和出消毒和灭菌有何不同？菌有何不同？1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70
5、-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法: :用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)常用消毒的方法：常用消毒的方法：1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌: :2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)常用灭菌的方法：常用灭菌的方法：分
6、类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子无菌技术：无菌技术：常常识识1 无菌技无菌技术包括：包括：
7、（1）对实验操作空操作空间、操作者的衣着和手、操作者的衣着和手进行行 清清洁和消毒和消毒 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行行 灭菌菌 ；（3）为避免周避免周围微生物微生物污染，染，实验操作操作应在在 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 旁旁进行；行；（4）避免已）避免已灭菌菌处理的材料用具与理的材料用具与 周周围物品物品 相接触。相接触。2 消毒方法：消毒方法：（1）日常生活）日常生活经常用到的是常用到的是 煮沸煮沸 消毒法；消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，一些不耐高温的液体，则使用使用 巴氏巴氏 消毒法（作消毒法（作简要介要介绍）；）；（3）对
8、接种室、接种箱或超接种室、接种箱或超净工作台首先工作台首先喷洒洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等等溶液以增溶液以增强消毒效果，然后使用消毒效果，然后使用 紫外紫外线 进行物理消毒。行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用操作者的双手使用 酒精酒精 进行消毒；行消毒；（5）饮水水源用水水源用 氯气气 进行消毒。行消毒。3灭菌方法：菌方法：（1）接种）接种环、接种、接种针、试管口等使用管口等使用 灼灼烧 灭菌法；菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用）玻璃器皿、金属用具等使用 干干热 灭菌法，所用器械是菌法，所用器械是 干干热灭菌箱菌箱 ；（3）培养基、无菌水等使用）培养基、无菌水等使用 高高压蒸汽
9、蒸汽 灭菌法菌法，所用器械是，所用器械是 高高压蒸蒸汽汽灭菌菌锅 。（4）表面）表面灭菌和空气菌和空气灭菌等使用菌等使用 紫外紫外线 灭菌法，所用器械是菌法，所用器械是 紫外紫外灯灯 。三、实验操作三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）【补充】培养基的配制原则：目的要明确目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。营养要养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比41时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为31时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pH要适宜要适宜：细菌培养基pH中性
10、或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。1 1配制：计算、称量配制：计算、称量、熔、熔化化2 2调节调节pHpH：用：用3%3%的的HCI/HCI/NaOHNaOH调节调节 pH 7pH 70- 723 3分装：分装过程中注意不要使培养基沾分装：分装过程中注意不要使培养基沾 在在 管口或瓶口上，以免沾污管口或瓶口上，以免沾污棉塞棉塞 而引起污染。分装三角烧瓶的而引起污染。分装三角烧瓶的量量 以不超过三角烧瓶容积的一半为以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。宜。4 4包扎：包扎：操作步骤操作步骤: 5 5灭菌灭菌: : 将将50ml50ml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包
11、上牛皮纸，再放入塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气高压蒸气灭菌灭菌锅，在压力为锅，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。 将将培养皿培养皿用旧报纸包裹，放入用旧报纸包裹，放入干热灭菌干热灭菌箱箱内，在内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2h2h。 6 6倒平板倒平板: : 待培养基待培养基冷却到冷却到50 50 左右时，在酒精灯左右时，在酒精灯附近倒平板。附近倒平板。2d2d后观察平板，无杂菌污染才可用后观察平板，无杂菌污染才可用来接种来接种. . 7 7无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37
12、37的温室中培养的温室中培养24244848小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。倒平板倒平板:菌种的保存菌种的保存菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的
13、温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。物污染培养基。注意注意:3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，
14、凝答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。板培养微生物。选择培养基加入加入青霉素青霉素的培养基的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高加入高浓度度食食盐的培养基的培养基:
15、 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的不加氮源的无氮无氮培养基培养基: 分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的不加含碳有机物的无碳无碳培养基培养基: 分离自养型微生物分离自养型微生物加入加入青霉素等抗生素青霉素等抗生素的培养基的培养基: 分离分离导入了目的基因的受体入了目的基因的受体细胞胞加入加入氨基喋呤、次黄氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺呤和胸腺嘧啶核苷核苷的培养的培养基基: 分离分离杂交瘤交瘤细胞胞2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌: :接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法: :通过接种环在琼脂固体培养通过接种环在琼脂固体培
16、养基表面连续画线的操作基表面连续画线的操作, ,将聚集的菌钟逐步将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面稀释分散到培养基的表面. . 在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体, ,这就是这就是菌落菌落. .微生物的接种技术微生物的接种技术划线后划线后 培养一段时间后培养一段时间后微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接
17、种环吗？为什么？需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时以便得到菌落。
18、划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。感染操作者。 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端线条起始处要少，每次从上一次划线的末端
19、开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。来的菌落。四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大
20、小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的
21、变化。这一步的要求主要是培养学察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。生良好的科学态度与习惯。本课题知识小结本课题知识小结: :【典例解析典例解析】 例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是: :A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分
22、析。对于要针对微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如同时是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；作为自养型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可
23、作为自养型微生物的，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于D D选项，无选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如机氮源提供能量的情况还是存在的，如NHNH3 3可为硝化细菌提可为硝化细菌提供能量和氮源。供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是: :A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：解析：灭菌是
24、微生物发酵过程的一个重要环节。灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。全部微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有设备是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接和物质
25、都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。所接菌种也杀死。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培养基成分，请据此回答：培养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培）右表培养基可培养的微
26、生物类型是养的微生物类型是 （2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . .用于培养用于培养 金黄色葡萄金黄色葡萄球菌球菌. 自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2O O），），该培养基可用于培养该培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是溶化后分装前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）
27、右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是该增加的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 解析解析： 对于一个培养基，它能培养何种微生物，于一个培养基，它能培养何种微生物，要看它的化学成分。当然要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基，只适用于合成培养基，如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物养
28、物质的的类型出型出发。右表中的。右表中的营养物养物质有水、有水、无机无机盐、氮源三、氮源三类，缺乏碳源和特殊，缺乏碳源和特殊营养物养物质。对特殊特殊营养物养物质，有的微生物是不需要的，但没，有的微生物是不需要的，但没有微生物是不需要碳源的。有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源，培养基中没有碳源，说明培养的微生物是从空气中明培养的微生物是从空气中获得碳源的，即可得碳源的，即可培养的微生物就是自养型微生物了。培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中培养基中加入了加入了过量食量食盐，就可以成，就可以成为金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌鉴别培养基，但金黄色葡萄球菌是异养型微生物，培养基，但金黄色葡萄球菌是异养型微生物，这个培养基就个培养基就还需要加入有机碳源。需要加入有机碳源。该培养基若培养基若加入（加入（CH2O），培养基中就有了碳源，但除去成），培养基中就有了碳源，但除去成分分，却使培养基中没有了氮源，却使培养基中没有了氮源，这时就只能用就只能用于培养固氮微生物了。于培养固氮微生物了。对于菌种于菌种鉴定，往往用的定，往往用的是固体培养基，而表中没有凝固是固体培养基，而表中没有凝固剂，需要加入常，需要加入常见的凝固的凝固剂琼脂。脂。
