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1、 第九章第九章 维生素类药物的分析维生素类药物的分析 (Analysis of Vitamin)1.前言(Preface) 维生素是人们生活中必需的营养要素，是一些具有调节和管制新陈代谢过程的生物活性物质。中国药典2005年版收载了维生素A、B1、B6、B12、C、D2、D3、E、K1、叶酸、烟酸、烟酰胺。ABCDEKF 水溶性 脂溶性 公元前一千年我国周汉时代古书记载瘘厥、缓风、湿痒、肿等脚气病的综合症状，到晋代取名为脚气。1911年从米糠中分离出抗脚气病因子，将此成分命名为维生素(Vitamin)。此后，分离出各种营养因子，统称为维生素，发展至今，已有60多种。干眼症、夜盲症缺Vitami
2、n A佝偻病、软骨化症缺Vitamin DVitamin E 有还原性，可作抗氧剂 存在于豆类、 蔬菜、麦胚油中与生育有关，防治习惯性流产、不育症、牙周炎等；也用于心血管疾患、脂肪肝，新生儿硬肿症的辅助治疗。Vitamin K存在于绿色植物中凝血作用，新生儿出血症的防治Vitamin B1治疗脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病 存在于米糠、麦麸和酵母中Vitamin C化学合成物参与机体代谢，可帮助酶将胆固醇转化为胆酸而排泄，减低毛细管的脆性，增加机体的抵抗力。防治坏血病，预防冠心病，大量静脉注射用于克山病的治疗2. Vitamin A (鱼肝油中)(3)(4)(2)(1) UV吸收(32532
3、8nm)易氧化变质与SbCl3呈蓝色不溶于水，溶于CHCl3、乙醚、环己烷 鉴别？Identification(1)SbCl3反应即Carr-price反应加饱和无水SbCl3无醇CHCl3溶液 蓝色紫红色TLC法(2)(3)UV法取Vit A 加无水乙醇盐酸(100:1)溶液溶解，立即在300400nm波长范围内紫外扫描，应仅在326nm出有单一吸收峰。水浴加热30秒，迅速冷却，同法扫描，则应在348，367和389nm波长处有三个尖锐的吸收峰，且在波长332nm处有较低的吸收峰或拐点。 (nm)A(1%,1cm)12 389 367 348 326含量？AssayGC法HPLC法荧光法Vi
4、t A的无水乙醇溶液能产生绿色荧光。可测定血液或动物组织中Vit A含量SbCl3比色法加SbCl3无水CHCl3溶液，在618620nm波长处有最大吸收，符合Beer定律。(5)(4)(3)(2)(1)UV法(三点校正法)三点校正法测三点校正法测Vit A1. 原理： (1)杂质吸收在310340nm内呈直线，且随波长的增大吸收度变小； (2)物质对光的吸收有加和性。2.怎样选择三点波长： (1)第1点：选择Vit A的最大吸收波长(1) ; (2)第2点和第3点：在最大吸收波长的两侧各选一点(2和3); a.等波长差法：在1的左右各选一点2 和3 ，使3 1 1 2如ChP测Vit A醋酸
5、酯时，规定1=328nm, 2=316nm, 3=340nmb.等吸光度法：在1的左右各选一点2 和3 ，使A2=A3=6/7A1如ChP测Vit A醇时，规定1=325nm, 2=310nm, 3=334nm3. 杂质的吸收(1)Vit A2(3去氢维生素A)和Vit A3(去水维生素A) Vit A2在345350nm波长范围内有吸收；(2)Vit A的氧化产物：环氧化物、VA醛和酸；(3)光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇；(4)Vit A的异构体；(5)合成时产生的中间体。 4.测定方法(1)第一法(适用于VA醋酸酯)VA醋酸酯 环己烷在300,316,328,340,360nm波长处
6、测A值(max=328nm),计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度之比值。(max326329nm)差值0.02，直接在328nm处测A328 差值0.02，A328(校正)3.52(2A328-A316-A340)-15%-3%+3%0 皂化法 皂化法A328(校正)A328直接算算效价(IU/g)：算VA醋酸酯胶丸占标示量的百分含量：占标示量的百分含量%胶丸的平均内容物重量W 内容物重量D 稀释倍数L 比色池厚度(cm)(2)第二法(适用于VA醇) 皂化法 Vit A 醇KOH乙醇溶液回流乙醚提取干燥异丙醇溶解在300,310,325,334nm处测A值确定max求算如max 3
7、23327nm 而且A300/A3250.73 按下列方法处理0-3%+3%A校A校A325占标示量的百分含量%A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334求效价:3. Vitamin E (药典收载： -生育酚醋酸酯) (3)(2)(1)易水解成游离生育酚H+或OH-Ce(SO4)2滴定检 查游离生育酚UV吸收max 284溶于乙醇、丙酮、醋酸乙酯、石油醚中，不溶于水Vit E 鉴别Identification(1)(4)(3)(2) 硝酸反应(无水乙醇硝酸，750C显橙红色)UV法(284)TLC法水解后氧化反应 加KOH醇试液，加热，加水、乙醚，取乙醚液再
8、加2,2-联吡啶的乙醇溶液和FeCl3的乙醇液，应显血红色。 Vit E 含量=? Assay(1)(6)(5)(4)(3)(2)GC法 HPLC法 UV法95%乙醇溶解，max292nm荧光法羟肟酸铁比色法盐酸羟胺+FeCl3生成羟肟酸铁络合物，于480及510nm处有最大吸收，测A值。铈量法 用硫酸加热回流，水解成生育酚，用Ce(SO4)2定量地氧化为对生育醌，过量的Ce(SO4)2氧化二苯胺指示剂而指示终点。4. Vitamin B1(硫胺Thiamine)(1)(4)(3)(2)溶于水不溶于乙醚 UV吸收(mmax246nm)沉淀反应碘化汞钾或硅钨酸等反应生成碱性中遇氧化剂(铁氰化钾)
9、产生有荧光的硫色素 鉴别试验TLCVit B1 含量?Assay 非水碱量法冰HAc和Hg(Ac)2HClO4滴定硅钨酸重量法(H+)硫色素荧光法(VB1专属反应)OHK3Fe(CN)6硫色素异丁醇提取365nm照射蓝色荧光比较荧光强度含量 UV法(max 246nm)酸性染料比色法 盐酸硫胺与酸性染料(溴麝香草酚蓝)形成盐，在420nm处测A值。HPLC法流动注射法(FIA)离子选择性电极法制剂中VB1用铅离 子电极直接测定示波极谱滴定法1236895475. Vitamin C (抗坏血酸Ascorbic acid)(4)(3)(2)(1)旋光性溶于水，酸性强还原性 UV吸收 max245nmVit C 鉴别鉴别15432 UV法 溶于盐酸中 (max 243nm)AgNO3反应黑色沉淀 (Ag )2,6-二氯靛酚反应(颜色消失)与别的氧化剂反应使KMnO4、亚甲蓝等褪色糖类性质反应加HCl水解、脱羧、失水后变为糠醛，再加吡咯500C加热变蓝色VC含量含量=? 碘量法(直接滴定法)2,6-二氯吲哚酚滴定法 用于含VC制剂及食品分析12345678910溴丁二酰亚胺滴定法由于N溴丁二酰亚胺具有弱氧化性，如有还原性干扰物质时首先氧化VC反应定量进行 (I2-KI指示剂)旋光度法HPLC法GC法流动注射法(FIA)原子吸收光谱法UV法荧光法
