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1、第二章第二章高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、一、一、高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱仪仪仪仪HPLCHPLC二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点feature of HPLCfeature of HPLC三、流程及主要部件三、流程及主要部件三、流程及主要部件三、流程及主要部件general process and general process and main assembly of HPLCmain assembly of HPLC第一节第一节第一节第一节高效液相色谱的高效液相色谱的高效液相色谱的高效液
2、相色谱的特点与仪器特点与仪器特点与仪器特点与仪器high performance liquid chromatographfeature and instrument of HPLC2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件色谱法的用途色谱法的用途用用途途：色色谱谱法法已已广广泛泛用用于于各各个个领域域，是是多多组分分混混合合物物首首选的的分分离离分分析析方方法法。以以中中国国药典典20052005版版为为例例，一一部部收收载中中药药11461146个个品品种种，用用薄薄层色色谱谱进进行行鉴鉴别别或或含含量量测测定定的的有有15231523项项，用用高高效效液液相相色
3、色谱谱进进行行定定量量分分析析的的有有479479种种518518项项，用用气气相相色色谱谱进进行行检检测测的的有有4747种种。二二部部收收载载的的有有19671967个个品品种种，采采用用高高效效液液相相色色谱谱法法的的品品种种有有848848种种。现在在色色谱法法已已形形成成一一门专门的的科学。科学。 2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件Richard Laurence Millington Sy
4、ngeRichard Laurence Millington Synge Archer John Porter MartinArcher John Porter Martin for their invention of partition chromatographyfor their invention of partition chromatography. . 19521952年诺贝尔化学奖得主年诺贝尔化学奖得主年诺贝尔化学奖得主年诺贝尔化学奖得主 2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件一、一、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of
5、 HPLCfeature of HPLC 特点：高压、高效、高速、高灵敏度特点：高压、高效、高速、高灵敏度 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件三、流程及主要部件三、流程及主要部件 process and main assembly of process and main assembly of HPLCHPLC1.1.流程流程2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件二、液相色谱仪器二、液相色谱仪器 high performance l
6、iquid chromatographhigh performance liquid chromatograph2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件液相色谱仪（液相色谱仪（2）2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件液相色谱仪（液相色谱仪（3）安捷仑公司安捷仑公司11001100 agilent1100Hplcagilent1100Hplc 瓦里安瓦里安瓦里安瓦里安Varian-Prostar230/325/363Varian-Prostar230/325/3632024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件液相
7、色谱仪（液相色谱仪（4）2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件2.主要部件主要部件(1) 高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：150350105 Pa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小小的的固固定定相相（ 甲酰胺甲酰胺 乙腈乙腈 甲醇甲醇 乙醇乙醇 丙醇丙醇 丙酮丙酮 二氧六环二氧六环 四氢呋喃四氢呋喃 甲乙酮甲乙酮 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 乙醚乙醚 异丙醚异丙醚 二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿溴乙烷溴乙烷苯苯四氯化碳四氯化碳二硫化碳二硫化碳环己烷环己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)2024/8/102024/8/10
8、液相色谱最新课件液相色谱最新课件4. 4. 4. 4. 选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉）试样在流动相中
9、应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。检测器时，流动相不应有紫外吸收。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件第二章第二章液相色谱分析法液相色谱分析法一、一、一、一、影响分离的因素影响分离的因素影响分离的因素影响分离的因素factors influenced separationfactors influenced separation二、分离类型的选择二、分离类型的选择二、分离类型的选择二、分离类型的选择choice o
10、f separation typeschoice of separation types三、液相色谱的应用三、液相色谱的应用三、液相色谱的应用三、液相色谱的应用application of HPLCapplication of HPLC四、液相制备色谱四、液相制备色谱四、液相制备色谱四、液相制备色谱preparative liquid preparative liquid chromatographychromatography第四节第四节第四节第四节影响分离的因素与操影响分离的因素与操影响分离的因素与操影响分离的因素与操作条件的选择作条件的选择作条件的选择作条件的选择high perform
11、ance liquid chromatograph factors influenced separation and choice of operation condition2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件一、影响分离的因素一、影响分离的因素一、影响分离的因素一、影响分离的因素 factors influenced separationfactors influenced separation1. 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径影响分离的因素与提高柱效的途径 在在高高效效液液相相色色谱谱中中, 液液体体的的扩扩散散系系数数仅仅为为气气体体的的万万分
12、分之之一一，则速率方程中的分子扩散项则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件 液液体体的的黏黏度度比比气气体体大大一一百百倍倍，密密度度为为气气体体的的一一千千倍倍，故故降低传质阻力是提高柱效主要途径。降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过液相色谱中，不可能通过增加柱温来改
13、善传质。恒温增加柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。改善分离的最直接的因素。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件图示图示2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件 2.2.2.2.流速流速流速流速 流速大于流速大于0.5 cm/s时时, Hu曲线是一段斜率不大的直线。曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。要可选择参数。 3.
14、3.3.3.固定相及分离柱固定相及分离柱固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件二、分离类型选择二、分离类型选择二、分离类型选择二、分离类型选择 choice of separation typeschoice of separation typ
15、es2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件三、三、 HPLC的的应用应用 application of HPLCapplication of HPLC 1. 1. 1. 1. 环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相固定相：薄壳型硅胶薄壳型硅胶(37 50 m) 流动相：正己烷流动相：正己烷 流流 速：速：1.5 mL/min 色谱柱：色谱柱：50cm 2.5mm(内径内径) 检测器：差示折光检测器检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中可对水果、蔬菜中可对水果、蔬菜中可对水果、蔬菜中的农药残
16、留量进行分析。的农药残留量进行分析。的农药残留量进行分析。的农药残留量进行分析。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件2. 2. 2. 2. 稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。 固定相固定相：十八烷基硅烷化键合相十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：20%甲醇甲醇-水水 100%甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/min 流流 速：速：1mL/min 柱柱 温：温：50 C 柱柱 压：压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器2
17、024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件四、制备型液相色谱四、制备型液相色谱 preparative liquid chromatographypreparative liquid chromatography 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 半制备柱（内径半制备柱（内径8mm，长度长度15 30cm），），一次制备量一次制备量.1mg；1.1.1.1.色谱柱的柱容量（柱负荷）色谱柱的柱容量（柱负荷）色谱柱的柱容量（柱负荷）色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱
18、：不影响收集物纯度时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降降低低10%为宜。为宜。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件2. 2. 2. 2. 液相制备色谱的方法液相制备色谱的方法液相制备色谱的方法液相制备色谱的方法收集组分时，通常有以下情况：收集组分时，通常有以下情况： （1）可获得良好分离，主峰）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率；使用制备柱，超
19、载提高效率； （2）两主成分之间的小组分；）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离为主成分（富集）后，再次分离制备。制备。 2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件3. 3. 3. 3. 制备型液相色谱制备型液相色谱制备型液相色谱制备型液相色谱 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。 制备柱：内径制备柱：内径2050mm，柱长柱长50cm。2024/8/102024/8/10液相色谱最新课件液相色谱最新课件
