免疫学：4-2抗体

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1、4.6 4.6 4.6 4.6 抗体的产生和制备抗体的产生和制备抗体的产生和制备抗体的产生和制备4.6.1 抗体生物合成的一般性和特殊性抗体生物合成的一般性和特殊性 1、一一般般性性：Ab属属蛋蛋白白质质，故故其其生生物物合合成成符符合合蛋蛋白白质质合合成的一般规律。成的一般规律。 2、特特殊殊性性：在在Ig的的合合成成中中，须须先先有有抗抗原原的的剌剌激激和和抗抗原原提提呈呈细细胞胞、T-C、B-C等等多多种种细细胞胞的的相相互互作作用用，抗抗原原选选择择相相应应的的B-C克克隆隆，使使之之激激活活、增增殖殖、最最终终分分化化为为浆浆细细胞胞、合成和分泌合成和分泌Ab。抗体合成过程抗体合成过

2、程1、在在DNA转转录录及及mRNA剪剪接接之之后后，携携带带遗遗传传信信息息的的mRNA移移至至粗粗面面内内质质网网上上的的核核糖糖体体，轻轻链链在在190-200S小小多多聚聚核核糖糖体体（含含4-5个个核核糖糖体体）上上合合成成；重重链链在在270-300S大大多多聚聚核核糖糖体体（含含11-18个个核核糖体）上合成。糖体）上合成。 2、重链、轻链从粗面内质网进入光滑内质网中，装配为四肽链。、重链、轻链从粗面内质网进入光滑内质网中，装配为四肽链。 H+LHL；HL+HLH2L2 或或 H+HH2、L+LL2；H2+L2H2L23、装配好的装配好的Ig分子进入高尔基体，然后向细胞膜移动，在

3、移动过分子进入高尔基体，然后向细胞膜移动，在移动过程中加糖，形成完整的程中加糖，形成完整的Ig分子后，分泌到细胞外。分子后，分泌到细胞外。 抗体的生物合成过程抗体的生物合成过程抗体的生物合成过程抗体的生物合成过程 日本科学家利根川进在日本科学家利根川进在2020世纪世纪7070年代阐明了年代阐明了免疫球蛋白的基因结构，证实了其基因的重排和免疫球蛋白的基因结构，证实了其基因的重排和突变是抗体多样性的原因突变是抗体多样性的原因，使免疫球蛋白多样性使免疫球蛋白多样性的遗传控制找到了依据。的遗传控制找到了依据。19871987年获得诺贝尔生理年获得诺贝尔生理和医学奖。和医学奖。4.6.2 4.6.2

4、4.6.2 4.6.2 抗体产生多样性的分子生物学基础抗体产生多样性的分子生物学基础抗体产生多样性的分子生物学基础抗体产生多样性的分子生物学基础n 人人类类有有三三个个Ig基基因因库库，即即H(重重链链)、和和(轻轻链链)基基因因库库。编编码码一一条条Ig多多肽肽链链的的基基因因是是由由各各个个分分隔隔开开的的DNA片片段段经经剪剪接接重重排排而而成成。重重链链由由V、D、J和和C四四个个基基因片段编码，轻链由因片段编码，轻链由V、J、C三个基因片段编码三个基因片段编码 。 免疫球蛋白基因定位免疫球蛋白基因定位n n 编码的肽链编码的肽链 基因符号基因符号 基因定位（染色体编号）基因定位（染色

5、体编号）n n 人人 小鼠小鼠n n H链链 IGH 第第14号号 第第12号号n n 链链 IGK 第第2号号 第第6号号n n 链链 IGL 第第22号号 第第16号号 人的人的Ig的基因组成的基因组成 链：链：V(约约100个个)、 J(5个个)、 C(1个个) 链：链：V(约约30个个)、 J-C(4个个) H链：链： V基因基因(约约95个个) D基因基因(27个个) J基因基因(6个个) C基因基因(9个个)轻轻链链与与重重链链基基因因结结构构轻轻链链基基因因的的重重排排重重链链基基因因的的重重排排 重链类别转换重链类别转换 先重组的先重组的 VHDHJH 基因片段可在不同的基因片

6、段可在不同的CH 基因基因之间转换，使之间转换，使 B 细胞经过同一抗原刺激后合成具有细胞经过同一抗原刺激后合成具有不同不同 C 区的各种类别区的各种类别 Ig，并可介导不同的效应功能。并可介导不同的效应功能。 Ig的类别转换（的类别转换（class switching） B 细胞最初表达细胞最初表达 IgM 和和/或或 IgD，然后然后 DNA 进进一步重组。一步重组。一个一个B细胞克隆在分化过程中细胞克隆在分化过程中V-D-J功能功能性基因片段保持不变，而发生性基因片段保持不变，而发生C基因重排，使其表基因重排，使其表达的抗体分子发生达的抗体分子发生H链类的改变，称为类别转换。链类的改变，

7、称为类别转换。 B细胞克隆细胞克隆 IgM IgGIFN- IL-4IgE抗体类别转换抗体类别转换抗体产生多样性的途径抗体产生多样性的途径一、一、在在DNA水平上：水平上： 1. 胚原性基因片段及其组合的多样性（小鼠为例）：胚原性基因片段及其组合的多样性（小鼠为例）： 轻链基因：轻链基因：300个个V基因、基因、4个个J基因基因 重链基因：重链基因：500多个多个V基因、基因、4个个J基因、和基因、和20个个D基因。基因。 Ig 轻链和重链的轻链和重链的 V 区分别由区分别由 2 个（个（ VL、 JL ）或或 3 个个（ VH、JH 、 DH ）基因片段编码，基因片段编码，而且每个基因片段具

8、有而且每个基因片段具有多样性，各种基因片段又可以随机组合，不同的轻链和重多样性，各种基因片段又可以随机组合，不同的轻链和重链的链的 V 区的组合，最终可产生的组合可达区的组合，最终可产生的组合可达107 种种Ig。基因片段基因片段 重链重链 轻链轻链( 组合组合) H V基因基因 100-1,000 100 10D基因基因 20 0 0J基因基因 6 5 6V J(D)基因基因 12,000-120,000 500 60重链轻链组合重链轻链组合 H 6106-6107 H 7.2105-7.2106人人免疫球蛋白各组成成分的多样性估量免疫球蛋白各组成成分的多样性估量2、重组基因连接的多样性、重

9、组基因连接的多样性 由于在由于在 DH-JH、VH-DH、JH 和和 VL、JL 的交接处的交接处出现的连接方式不够明确出现的连接方式不够明确，则可能会进一步增加，则可能会进一步增加 Ig 的多样性的多样性 核苷酸核苷酸密码子内密码子内发生的发生的连接位置的多样性连接位置的多样性 由于连接方式不明确直接导致由于连接方式不明确直接导致读码框架移动读码框架移动 在基因连接过程中由于在基因连接过程中由于额外核苷酸的插入额外核苷酸的插入增加了增加了 重链的多样性重链的多样性D regionTGGCCCPro TrpC C C C C CV geneTGGD regionC C C C C CV gen

10、eTGGCGGCCCPro ArgC C C C C CV geneTGGD regionCGCCCCPro Pro密码子内发生的连接位置的多样性密码子内发生的连接位置的多样性CAGCGATCAGCAG C CG GAT CAG由于连接方式不明确，导致读码框架移动由于连接方式不明确，导致读码框架移动-GTCAATG-GTCAATG-+Break DNAN region insertionIntronJDJJJDDD N区区 核核 苷苷 酸酸 插插 入入（V D J 衔接点的插入方式之一）衔接点的插入方式之一）3、体细胞基因突变、体细胞基因突变 只改变只改变VJ或或VDJ单个片段的个别核苷酸单个

11、片段的个别核苷酸 二、在蛋白质水平上：二、在蛋白质水平上：由轻链和重链的随机选择和配对引起由轻链和重链的随机选择和配对引起4.6.3 4.6.3 4.6.3 4.6.3 抗体产生的一般规律抗体产生的一般规律抗体产生的一般规律抗体产生的一般规律 1、初次反应、初次反应 过程：过程：潜伏期潜伏期开始形成开始形成Ab高潮高潮下降下降消消 失（抗原失（抗原抗原提呈细胞抗原提呈细胞Th-CB-C Ab）。）。 特点：特点：抗体产生抗体产生 慢慢；抗体量；抗体量 少少；维持时间；维持时间 短。短。 颗粒体颗粒体Ag：一周开始产生一周开始产生Ab，2-3周达到高潮。周达到高潮。 可溶性可溶性Ag：2-3周开

12、始产生周开始产生Ab，一个月或一个月或40天达天达 到高潮。到高潮。2、二次反应（、二次反应（second reaction） 过程：过程：潜伏期潜伏期Ab下降下降Ab量开始回升量开始回升高高 潮潮下降下降消失。消失。 特点：特点：抗体产生抗体产生快；快；抗体量抗体量多；多；维持时维持时长；长； 在初次反应的在初次反应的Ab未消失前进行的免疫。未消失前进行的免疫。3、回忆反应（、回忆反应（anamnestic reaction） 过程：过程：潜伏期潜伏期Ab量开始产生量开始产生高潮高潮下降下降 消失。消失。 特点：特点：抗体产生抗体产生快；快；抗体量抗体量多；多；维持时间维持时间长长 ； 在初

13、次反应的在初次反应的Ab消失后进行免疫。消失后进行免疫。 二二次次反反应应和和回回忆忆反反应应比比初初次次反反应应产产生生Ab又又快快又又多多的的原原因因在在于于，前前者者省省去去了了抗抗原原提提呈呈细细胞胞（APC）和和Th-C的加工、激活作用的过程的加工、激活作用的过程：n 初初次次进进入入机机体体Ag提提呈呈细细胞胞吞吞噬噬、加加工工提提呈呈Ag 静止淋巴细胞静止淋巴细胞效应效应B-C。n 同同一一Ag再再次次进进入入机机体体 Ag特特异异性性记记忆忆细细胞胞 效应效应B-C。抗体产生的一般规律抗体产生的一般规律抗体产生的一般规律抗体产生的一般规律4.6.4 4.6.4 抗体产生的机理抗

14、体产生的机理4.6.4.1 模板学说（诱导学说，模板学说（诱导学说，template theory） Ab产生细胞在接触产生细胞在接触Ag前无针对前无针对Ag的特异性，在的特异性，在接触接触 Ag 后，才后，才诱导诱导该细胞合成针对该该细胞合成针对该Ag的的Ab。n n 1、直接模板学说：直接模板学说：以以Ag为模板，产生相应的抗体。为模板，产生相应的抗体。n n 2、间间接接模模板板学学说说：Ag使使核核酸酸变变化化合合成成Ig的的酶酶，此此学学说说只只能能说说明明特特异异性性，但但不不能能说说明明识识别别能能力力，耐耐受受性性及及回忆反应等。回忆反应等。4.6.4.2 选择学说选择学说（s

15、elective theory） 机机体体在在接接触触Ag前前，就就具具备备有有针针对对各各种种特特异异性性Ag受受体体的的免免疫活性细胞，并激发相应细胞分化增殖，产生疫活性细胞，并激发相应细胞分化增殖，产生Ab。n n 侧侧链链学学说说自自然然选选择择学学说说克克隆隆选选择择学学说说（clonal selective theory）（无无性性繁繁殖殖系系选选择择学学说说或或细细胞胞选选择择学学说说）亚亚细细胞胞选择学说。选择学说。n n 自自然然选选择择学学说说：机机体体内内存存在在不不同同的的天天然然抗抗体体抗抗原原选选择择相相应应抗体抗体作用相应形成细胞作用相应形成细胞产生抗体。产生抗体

16、。n n 克隆选择学说克隆选择学说 ：(Burnet) 机体事先具有带各种机体事先具有带各种Ig受体的细胞受体的细胞系系经抗原选择经抗原选择激发分化增殖激发分化增殖产生抗体。产生抗体。 克隆选择学说基本论点（基本要点）克隆选择学说基本论点（基本要点）A A A A、体内存在体内存在体内存在体内存在101010106-76-76-76-7种免疫活性细胞系，有各种种免疫活性细胞系，有各种种免疫活性细胞系，有各种种免疫活性细胞系，有各种抗体样受体抗体样受体抗体样受体抗体样受体。 抗抗抗抗原原原原按按按按其其其其决决决决定定定定簇簇簇簇的的的的特特特特异异异异性性性性选选选选择择择择免免免免疫疫疫疫活

17、活活活性性性性细细细细胞胞胞胞，免免免免疫疫疫疫活活活活性性性性细细细细胞胞胞胞按按按按其其其其表表表表面面面面受受受受体体体体识识识识别别别别“自己自己自己自己”和和和和“异已异已异已异已”。B B B B、部分产生部分产生部分产生部分产生AbAbAbAb的免疫活性细胞不分化，变为的免疫活性细胞不分化，变为的免疫活性细胞不分化，变为的免疫活性细胞不分化，变为记忆细胞。记忆细胞。记忆细胞。记忆细胞。C C C C、各细胞系在胚胎期高度突变各细胞系在胚胎期高度突变各细胞系在胚胎期高度突变各细胞系在胚胎期高度突变，（，（，（，（AbAbAbAb多样性）。多样性）。多样性）。多样性）。D D D D

18、、天天天天然然然然免免免免疫疫疫疫耐耐耐耐受受受受及及及及人人人人工工工工免免免免疫疫疫疫耐耐耐耐受受受受是是是是由由由由于于于于胚胚胚胚胎胎胎胎期期期期或或或或新新新新生生生生期期期期免免免免疫疫疫疫细细细细胞胞胞胞自自自自然然然然或或或或人人人人为为为为接接接接触过自身体或外来触过自身体或外来触过自身体或外来触过自身体或外来AgAgAgAgE E E E、自身免疫病，由于自身免疫病，由于自身免疫病，由于自身免疫病，由于“禁株禁株禁株禁株”复活、突变株而形成。复活、突变株而形成。复活、突变株而形成。复活、突变株而形成。 澳澳澳澳大大大大利利利利亚亚亚亚科科科科学学学学家家家家BurnetBu

19、rnetBurnetBurnet由由由由于于于于提提提提出出出出了了了了以以以以上上上上克克克克隆隆隆隆选选选选择择择择学学学学说说说说而而而而获获获获得得得得1960196019601960年年年年诺诺诺诺贝贝贝贝尔生理和医学奖。尔生理和医学奖。尔生理和医学奖。尔生理和医学奖。克隆选择学说的证据克隆选择学说的证据n通过动物模型实验：通过动物模型实验：n n 先先将将新新生生小小鼠鼠切切除除胸胸腺腺，成成年年后后再再用用亚亚致致死死剂剂量量的的X射射线线照照射射，则则失失去去对对任任何何抗抗原原产产生生免免疫疫反反应应的的能能力力，这这种种动动物物在在输输入入同同系系正正常常的的淋淋巴巴细细胞

20、胞后后，可可恢恢复复对对各各种种抗抗原原产产生生免疫反应的能力。免疫反应的能力。n选选择择性性的的去去除除某某细细胞胞株株后后，再再经经相相应应抗抗原原剌剌激激而而不不能能发发生生相应免疫反应：相应免疫反应： n n 使使正正常常动动物物淋淋巴巴细细胞胞通通过过装装有有抗抗原原A的的免免疫疫吸吸附附柱柱，或或与与高高放放射射性性标标记记的的抗抗原原A起起作作用用，并并特特异异除除去去或或杀杀死死与与抗抗原原A的的特特异异性性结结合合的的细细胞胞，把把经经过过这这样样处处理理的的淋淋巴巴细细胞胞注注入入无无免免疫疫力力的的动动物物体体内内，抗抗原原A剌剌激激而而不不能能发发生生相相应应免免疫疫反

21、反应应，其它抗原剌激可产生免疫反应。其它抗原剌激可产生免疫反应。克隆选择学说克隆选择学说克隆选择学说克隆选择学说亚细胞选择学说亚细胞选择学说亚细胞选择学说亚细胞选择学说 从从分分子子水水平平上上解解释释克克隆隆选选择择学学说说（无无性性繁繁殖系选择学说）殖系选择学说） ： A、淋巴细胞的核内淋巴细胞的核内DNA上有产生特定抗体上有产生特定抗体 的基因。的基因。 B、无性繁殖中核苷酸互换造成无性繁殖中核苷酸互换造成Ab多样性。多样性。 C、特异性由基因上组成特异性由基因上组成IgV区密码的核酸序区密码的核酸序 列所决定。列所决定。4.6.5 影响抗体生成的因素4.6.5.1 机体的免疫功能机体的

22、免疫功能 1）、遗传因素（应答者）、遗传因素（应答者） A、种类的影响：种类的影响： 肺炎球菌多糖肺炎球菌多糖 小鼠小鼠有反应有反应 肺炎球菌多糖肺炎球菌多糖 豚鼠豚鼠无反应无反应 艾滋病毒艾滋病毒某些人类某些人类有反应有反应 艾滋病毒艾滋病毒非洲绿猴非洲绿猴无反应无反应 B、品系的影响：品系的影响： 多聚多聚L赖氨酸赖氨酸豚鼠豚鼠2系系有反应有反应 多聚多聚L赖氨酸赖氨酸豚鼠豚鼠13系系无反应无反应C、个体免疫差异个体免疫差异 艾滋病毒艾滋病毒一部分人一部分人有反应有反应 艾滋病毒艾滋病毒另一部分人另一部分人无反应无反应 如肯尼亚如肯尼亚“买春女买春女“无反应无反应n 2）、）、 生理因素：

23、生理因素： 年年龄龄、营营养养、健健康康状状况况和和激激素素水水平平（神神经经与与内内分分泌泌系系统统对对免疫功能的影响）。免疫功能的影响）。 神经与内分泌系统对免疫功能的影响神经与内分泌系统对免疫功能的影响n3）、）、病理因素：病理因素： 肿瘤、病毒病；艾滋病毒能使肿瘤、病毒病；艾滋病毒能使T-C（CD4）失活。失活。n4）、）、 外源性理化因素：外源性理化因素： 不利因素：不利因素：X射线、某一射线粒子、噪音、免疫抑制剂。射线、某一射线粒子、噪音、免疫抑制剂。 有利因素：音乐、佐剂、某些中药（党参、灵芝）。有利因素：音乐、佐剂、某些中药（党参、灵芝）。4.6.5.2 4.6.5.2 抗原的

24、性质和剂量抗原的性质和剂量 1、抗原的性质、抗原的性质（应具有构成免疫原的条件）（应具有构成免疫原的条件）n n菌体表面抗原（含糖脂质多）菌体表面抗原（含糖脂质多） IgM，出现早、多。出现早、多。n n病毒、类毒素球蛋白等病毒、类毒素球蛋白等 IgG多、多、IgM少。少。n n颗颗粒粒态态抗抗原原（或或聚聚合合态态可可溶溶性性Ag） IgG多多、IgM多多、早。早。2、Ag 剂量：剂量： Ag剂量过多、过少，产生免疫耐受剂量过多、过少，产生免疫耐受 。 过过多多：Ab4抑抑制制Ab3，Ab2抑抑制制Ab1及及免免疫疫细细胞胞受受体体，使使 征对征对Ag的的Ab1的增长受到限制。的增长受到限制

25、。 过过少少：Ab2抑抑制制Ab1及及免免疫疫活活细细胞胞受受体体，使使征征对对Ag的的Ab1的增长受到限制。的增长受到限制。 适适量量：Ab3抑抑制制Ab2，则则Ab1和和免免疫疫活活性性细细胞胞较较少少受受到到抑制，抑制，Ab1正常增加。正常增加。 剂剂量量多多少少与与抗抗原原性性强强弱弱、动动物物种种类类、大大小小及及免免疫疫途途径径等有关，如：等有关，如：Bt 家兔家兔 ，0.53.0ml（310亿亿/ml） 蛋白质类蛋白质类Ag 家兔，家兔，0.52.0mg/kg n抗抗原原性性强强、无无毒毒性性的的颗颗粒粒性性抗抗原原（如如Bt等等），用用量量少少，反应快；反应快；n抗原性相对较弱

26、的抗原性相对较弱的Ag（血清等），用量大，反应慢。血清等），用量大，反应慢。n抗抗原原性性相相对对较较弱弱的的可可溶溶性性Ag（血血清清等等），注注射射时时需需加加佐佐剂。剂。4.6.5.34.6.5.3 免疫次数、间隔时间免疫次数、间隔时间免疫次数、间隔时间免疫次数、间隔时间 可引起再次反应和回忆反应可引起再次反应和回忆反应，IgM IgG 颗粒性颗粒性Ag：如如BtH-Ag：46次次 间隔间隔23天。天。 可可溶溶性性Ag：牛牛血血清清白白蛋蛋白白Ag：24次次 间间隔隔710天（多者可天（多者可 达一个月）。达一个月）。 4.6.5.4 4.6.5.4 免疫途径免疫途径免疫途径免疫途径n

27、一般非经口，但有些疫苗可口服、饮水、气雾。一般非经口，但有些疫苗可口服、饮水、气雾。n 免疫途径有：静脉（尾、耳、颈）、皮下、免疫途径有：静脉（尾、耳、颈）、皮下、n 皮内、肌肉、腹腔、皮内、肌肉、腹腔、脚掌、淋巴结、脾脏脚掌、淋巴结、脾脏等。等。n离体细胞免疫离体细胞免疫: 饲养细胞、培养液、饲养细胞、培养液、Ag、脾淋巴细胞（、脾淋巴细胞（B-C）。）。n 多途径（但一般每次不超过两种），多部位。多途径（但一般每次不超过两种），多部位。 4.6.5.5 混合混合Ag免疫免疫 竞竞争性、抑制性、协同作用、或相加作用争性、抑制性、协同作用、或相加作用1、 协同作用：协同作用：n 人人的的百百、

28、白白、破破三三联联苗苗，百百日日咳咳杆杆菌菌糖糖脂脂质质起起到到佐剂作用。佐剂作用。n 狗的狂犬病等狗的狂犬病等6联疫苗。联疫苗。n 卡卡介介苗苗中中加加入入20种种细细菌菌、病病毒毒和和寄寄生生虫虫等等抗抗原原基基因表达产物（匹兹堡大学研究小组）。因表达产物（匹兹堡大学研究小组）。 2、不同种属微生物的鉴定可考虑混合免疫、不同种属微生物的鉴定可考虑混合免疫 如：病毒如：病毒+ 细菌；细菌； 快速鉴定新快速鉴定新Ag，如用一种待测如用一种待测Ag 与数种混合与数种混合Ab反应。反应。4.6.6 4.6.6 抗血清的制备抗血清的制备抗血清的制备抗血清的制备4.6.6.1 抗血清制备的目的抗血清制

29、备的目的1、被动免疫预防和治疗、被动免疫预防和治疗 预预防防：研研究究人人员员、消消防防人人员员及及战战斗斗人人员员预预先先注注射射抗抗破破伤伤风风抗体。抗体。 治治疗疗：1989年年，英英国国曾曾报报道道，利利用用人人血血清清中中的的抗抗艾艾滋滋病病毒毒Ab治治疗疗艾艾滋滋病病；用用抗抗血血清清治治疗疗被被剧剧毒毒蛇蛇咬咬伤伤的的人人员员；抗抗白喉抗血清白喉抗血清治疗白喉病。治疗白喉病。2、免疫学诊断试剂、免疫学诊断试剂 如如抗抗甲甲型型肝肝炎炎病病毒毒表表面面抗抗原原Ab、抗抗艾艾滋滋病病毒抗血清等。毒抗血清等。3、鉴定用、鉴定用Ab E.coli、Bt、根根瘤瘤菌菌等等的的标标准准抗抗血

30、血清清，血血型型鉴鉴定用的抗血清。定用的抗血清。1、动物选择、动物选择 商品制剂用：商品制剂用：马马 等大动物等大动物 实实验验室室用用：中中、小小动动物物：羊羊、兔兔、豚豚鼠鼠、大大白白鼠鼠、小白鼠、鸡等。小白鼠、鸡等。 品品系系：兔兔（大大耳耳白白），23 kg、健健康康公公兔兔、或或未未孕雌兔；小白鼠孕雌兔；小白鼠（BALB/C等），同一胎。等），同一胎。 2、抗原制备、抗原制备 BtH-Ag、O-Ag制备；病毒制备；病毒-Ag等制备等制备。4.6.6.2 4.6.6.2 抗血清制备的过程抗血清制备的过程3、免疫：、免疫： Bt-Ag 兔兔耳耳静静脉脉、肌肌肉肉、皮皮下下等等，4-6次次

31、，间间隔隔2-3天，每次天，每次1-3ml（3-10亿亿/ml）；）； 体外培养体外培养脾脾B-C + Ag 45天产生天产生Ab。4、采血、保存：采血、保存： 末末次次注注射射一一周周后后 静静脉脉（耳耳静静脉脉、颈颈静静脉脉、尾尾静静脉脉）、动动脉脉（颈颈动动脉脉、股股动动脉脉）、心心脏脏、眼眼囊囊等等部部位位采采血血 血血液液斜斜置置一一小小时时 冰冰箱箱（4C0）过过夜夜 血血清清分分离离 加加腐腐剂剂、分分装装 保保存存（-20 -40C0）。）。4.6.7 4.6.7 佐剂（佐剂（佐剂（佐剂（adjuvantadjuvant） 4.6.7.1 佐剂的定义：佐剂的定义： 和和抗抗原原

32、一一同同注注射射或或预预先先注注射射，能能增增强强抗抗原原的免疫原性或改变免疫应答类型的物质。的免疫原性或改变免疫应答类型的物质。4.6.7.2 佐剂的优缺点佐剂的优缺点优点：优点：1、增强弱免疫原的免疫原性增强弱免疫原的免疫原性 2、增加循环抗体的水平、增加循环抗体的水平 3、保护、保护Ag不被体内酶分解不被体内酶分解缺点：缺点：1、引起细胞介导的超敏反应、引起细胞介导的超敏反应 2、产生实验性自身免疫疾病、产生实验性自身免疫疾病 （肿块，溃疡等佐剂病）（肿块，溃疡等佐剂病） 3、诱发肿瘤、诱发肿瘤 （新研制的一些佐剂可克服上述缺点）（新研制的一些佐剂可克服上述缺点）1、复合佐剂、复合佐剂

33、主要指弗氏佐主要指弗氏佐剂（剂（Freund adjuvant） 包括：包括： A、不完全弗氏佐剂（不完全弗氏佐剂（incomplete Freund adjuvant，IFA） B、完全弗氏佐剂（完全弗氏佐剂（complete Freund adjuvant，CFA）4.6.7.3 4.6.7.3 佐剂的种类佐剂的种类2、生物佐剂（微生物及代谢产物）、生物佐剂（微生物及代谢产物） 分分支支杆杆菌菌（结结核核杆杆菌菌或或卡卡介介苗苗）、革革兰兰氏氏阴阴性性杆杆菌菌的的内内毒毒素素（脂脂多多糖糖）等等、百百日日咳咳菌菌苗苗、酵母菌细胞壁成分、植物血凝素等。酵母菌细胞壁成分、植物血凝素等。3、化合

34、物佐剂、化合物佐剂 氢氧化铝、明矾、甲基纤维素、维生素氢氧化铝、明矾、甲基纤维素、维生素A、磷酸钾、多聚肌苷酸、多聚胞苷酸（磷酸钾、多聚肌苷酸、多聚胞苷酸（PolyI c、PolyA u）、）、干扰素、左旋咪唑等。干扰素、左旋咪唑等。 （佐剂（佐剂65，是用于人的免疫佐剂，使用时较安，是用于人的免疫佐剂，使用时较安全，含有花生油、单硬脂酸铝和单磷酸脂质全，含有花生油、单硬脂酸铝和单磷酸脂质A (ArlacelA） 1、作用于抗原、作用于抗原 A、增强抗原性：增强抗原性：浓集浓集Ag。 B、延长延长Ag剌激机体的时间：剌激机体的时间：“油包水油包水”的的“Ag贮贮 存库存库”，绶慢释放，持续时间

35、长。，绶慢释放，持续时间长。 C、保护保护Ag：不易被体液、血液中的蛋白酶水解。不易被体液、血液中的蛋白酶水解。 2、作用于机体、作用于机体 A、非特异性剌激非特异性剌激 M、淋巴细胞增殖。淋巴细胞增殖。 B、皮下形成皮下形成“肉芽肿肉芽肿” 出现出现M、淋巴细胞、淋巴细胞、 浆细胞聚集浆细胞聚集 加速加速Ab形成。形成。4.6.7.4 4.6.7.4 佐剂的作用及作用机理佐剂的作用及作用机理1、弗氏佐剂、弗氏佐剂 A、完全弗氏佐剂完全弗氏佐剂 配方：石蜡油配方：石蜡油 36份份 羊毛脂羊毛脂 1份份 卡介苗卡介苗 35mg /ml 配配制制方方法法：石石蜡蜡油油+羊羊毛毛脂脂（溶溶化化按按比

36、比例例吸吸取取）+卡介苗卡介苗 混合混合 分装分装 保存。保存。 B、不完全弗氏佐剂不完全弗氏佐剂 配方：不完全弗氏佐剂不加卡介苗，配方：不完全弗氏佐剂不加卡介苗， 配制方法同上配制方法同上4.6.7.5 4.6.7.5 佐剂的配方及配制方法佐剂的配方及配制方法2 2、氢氧化铝佐剂、氢氧化铝佐剂 在在AgAg免疫动物前，加适当浓度的硫酸铝钾溶免疫动物前，加适当浓度的硫酸铝钾溶液与抗原混匀，再加低浓度的氢氧化铵中和，便液与抗原混匀，再加低浓度的氢氧化铵中和，便可形成大量的氢氧化铝絮状沉淀，抗原被吸附于可形成大量的氢氧化铝絮状沉淀，抗原被吸附于沉淀中形成聚集状的颗粒抗原。沉淀中形成聚集状的颗粒抗原

37、。4.7 4.7 4.7 4.7 抗体的分离和提纯抗体的分离和提纯抗体的分离和提纯抗体的分离和提纯4.7.1 分离提纯的目的：分离提纯的目的： 1）浓集）浓集Ab，提高效价提高效价 2）为制备抗抗体而准备）为制备抗抗体而准备Ig抗原抗原 3）用于免疫标记（如提取）用于免疫标记（如提取IgG） 分离的原因：血清中有分离的原因：血清中有100多种蛋白质，多种蛋白质， IgG只占只占18%，体液中更少，其它，体液中更少，其它Ig更少。更少。4.7.2 4.7.2 提取方式：提取方式： 1、生生物物化化学学方方法法：离离子子交交换换吸吸附附；透透析析；分分子子筛；盐析；凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶等）。筛

38、；盐析；凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶等）。 2、免疫亲和层析法 常常用用载载体体：纤纤维维素素；聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶；琼琼脂脂糖糖凝凝胶胶；交交联联琼琼脂脂糖糖（由由交交联联剂剂2，3-二二溴溴丙丙醇醇的的交交联联而而成成）；聚聚丙丙烯烯酰胺酰胺-琼脂糖凝胶；葡聚糖凝胶；多孔玻璃球。琼脂糖凝胶；葡聚糖凝胶；多孔玻璃球。 常常用用配配基基：用用于于亲亲和和层层析析的的配配基基有有酶酶的的底底物物类类似似物物、效效应应物物、酶酶的的辅辅助助因因子子、抗抗体体或或抗抗原原，Protein A和和Protein G等。等。免疫亲和层析法免疫亲和层析法几种免疫亲和层析法：几种免疫亲和层析法： 吸附法

39、；载体偶联法；直接偶联法；网络法。吸附法；载体偶联法；直接偶联法；网络法。 原理：原理：采用化学方法将抗原或抗体偶联到固相载体采用化学方法将抗原或抗体偶联到固相载体 上，使之成为不溶性结构。再经层析法吸附液上，使之成为不溶性结构。再经层析法吸附液 体中的相应抗体或抗原，成为抗原抗体复合物。体中的相应抗体或抗原，成为抗原抗体复合物。 然后改变条件，使该免疫复合物解离，洗脱得然后改变条件，使该免疫复合物解离，洗脱得 到纯化的相应抗体或抗原。到纯化的相应抗体或抗原。过程：过程：吸附吸附 洗涤洗涤 洗脱洗脱 免疫亲合层析法原理图免疫亲合层析法原理图固相载体固相载体 亲和基团亲和基团配体配体 思考题思考题 一一. 简答题简答题1.1.影响抗体影响抗体产产生的因素有哪些，如何生的因素有哪些，如何获获得高效价的抗血清？得高效价的抗血清？ 2.2.简述抗体产生的一般规律和特点。简述抗体产生的一般规律和特点。