《《医学微生物学》教学课件：第十六章 病毒感染的检查方法及防治原则》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《医学微生物学》教学课件：第十六章 病毒感染的检查方法及防治原则（30页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、病毒感染的检查方法及防治原则教学大纲 熟悉病毒的防治原则 了解病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法临床确诊 流行病学调查 一、标本采集与送检：原则：尽早采取 、部位适宜、冷藏速送：冰块或干冰、 50%的甘油缓冲盐水 、抗生素双份血清标本：急性期、恢复期双份血清 3.无菌操作 无菌操作，对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 的标本，应使用抗生素。一般加青霉素、链霉素霉素(100g/ml) 4.标本应低温保存并尽快送检 病毒在室温中易失去活性，故采取标本后应立即送实验室，如标本需较长时间运送，可用保温瓶 (内放冰块和食盐，或固态二氧化碳和酒精) 存放。 5.血清学诊断标本的采取 应
2、在发病初期和病后各取1份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。血清抗体标本应保存在-20 （一一）光光学学显显微微镜镜-大大病病毒毒或或者者检检查查包包涵涵体体（二）电子显微镜（二）电子显微镜 电镜和免疫电镜 二、快速检查方法二、快速检查方法（三）检查病毒性抗原及抗体（三）检查病毒性抗原及抗体的方法的方法1 1、检检测测抗抗原原：近近年年来来，采采用用标标记记技技术术，即即用用荧荧光光素素、放放射射性性同同位位素素、过过氧氧化化物物酶酶特特异异标标记记的的抗抗体体，检检测测标标本本中中相相应应的的抗抗原原，此此方方法法具具有有敏敏感、特异、快速等优点。感、特异、快速等优点。 2 2、检检测
3、测抗抗体体：用用病病毒毒特特异异性性抗抗原原可可以以检检测测感感染染者者血血清清中中的的IgMIgM，检检测测病病毒毒特特异异性性IgMIgM抗抗体体可可诊诊断断急急性性感感染染，特特别别是是IgMIgM抗抗体体的的存存在在对对证证实实孕孕妇妇感感染染风风疹疹病病毒毒尤尤为为重重。 另另外外，检检测测早早期期抗抗体体可可以以快快速速诊诊断病原体断病原体. . 利利用用特特异异抗抗原原检检测测IgGIgG类类抗抗体体，则则需需早早期期和和恢恢复复期期双双份份血血清清，且且抗抗体体效效价价4 4倍倍以上增高方有诊断意义。以上增高方有诊断意义。 （四）（四） 检测病毒的核酸的方法检测病毒的核酸的方法
4、 利用病毒基因作为探针用核酸杂交的方法检测标本中有无相应的病毒核酸 ，进行疾病的诊断 1、 核酸杂交技术 双链DNADNA在高温及碱性溶液中，碱基对间的氢键被破坏，两链分开变成单链的过程叫变性；在中性盐溶液中，当温度慢慢冷却至室温时单链DNADNA又重新组合成双链的过程叫复性。核酸分子杂交技术的原理就是利用DNADNA可以变性、复性的特性，制成用同位素或非同位素标记的单链DNADNA片段基因探针 与固定在硝酸纤维素膜上待测的变性DNADNA杂交，再用放射自显影技术或其他显色法来确定与探针DNADNA同源的DNA DNA 2、核酸扩增法 PCR，这一技术能使核酸在短时间内扩增百万倍而被检出。已被
5、广泛应用于病毒性感染的诊断与研究中 对以测定基因核酸序列的病毒，设计相应的病毒基因的引物,作多聚酶链反应( PCR), 通过扩增病毒基因片段可诊断标本中是否存在病毒核酸。 检测病毒核酸的缺点是：核酸阳性不等于标本中有活病毒,不能检测不了解核酸序列的病毒光镜光镜-包涵体包涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交杂交Southern blotPCRNorthern blot三、病毒的分离培养三、病毒的分离培养检验标本检验标本杀灭杂菌杀灭杂菌( (青链霉素青链霉素) )接种接种病毒分离的一般程序：病毒分离的一般程序：动物接种动物接种出现病状出现病状鸡胚接种鸡胚接种病变或
6、死亡病变或死亡细胞培养细胞培养细胞病变细胞病变 鉴定病毒种型鉴定病毒种型2、常规分离与鉴定、常规分离与鉴定动物接种动物接种-动物模型动物模型鸡胚接种鸡胚接种组织培养组织培养器官培养器官培养移植培养移植培养 细胞培养细胞培养 原代细胞培养原代细胞培养二倍体细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养传代细胞培养三三大大培培养养方方法法病毒在细胞内增殖的指标病毒在细胞内增殖的指标正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞病毒感染的防治原则一. 人工主动免疫：接种疫苗 灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、 核酸疫苗；合成肽疫苗、抗独特型疫苗；二. 人工被动免疫：如，免疫血清，胎盘球蛋白，丙球， 转移因子等。灭活疫苗：灭
7、活疫苗：乙脑疫苗乙脑疫苗 狂犬疫苗狂犬疫苗 流感灭活疫苗流感灭活疫苗等等减毒活疫苗：减毒活疫苗：脊髓灰质炎疫苗脊髓灰质炎疫苗麻疹疫苗麻疹疫苗腮腺炎疫苗腮腺炎疫苗风疹疫苗风疹疫苗HAV疫苗疫苗 其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 ，亚单位疫苗等，亚单位疫苗等人工被动免疫人工被动免疫常用制剂有：常用制剂有：抗病毒免疫血清，现有抗麻疹、抗病毒免疫血清，现有抗麻疹、 抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，这些免疫血清具有显著的预防作用；这些免疫血清具有显著的预防作用； 人免疫球蛋白制剂，包括人血清丙人免疫球蛋白制剂，包括人血清丙种球蛋白、胎盘球蛋
8、白种球蛋白、胎盘球蛋白 特异性免疫球蛋白特异性免疫球蛋白 三、药物防治抗病毒治疗原则：抗病毒治疗原则： - - 抑制病毒复制；抑制病毒复制； - - 增强机体免疫应答能力，促进消灭病毒感染的细胞；增强机体免疫应答能力，促进消灭病毒感染的细胞；抗病毒药作用机理：抗病毒药作用机理：与病毒竞争细胞表面的受体，阻止病毒的吸附；与病毒竞争细胞表面的受体，阻止病毒的吸附；阻碍病毒穿入或脱壳；金刚烷安阻碍病毒穿入或脱壳；金刚烷安阻碍病毒生物合成；阻碍病毒生物合成；增强宿主抗病能力的物质；增强宿主抗病能力的物质；中草药具有清热解毒功效，有抗病毒作用；中草药具有清热解毒功效，有抗病毒作用； 如大青叶、板蓝根如大
9、青叶、板蓝根 抗病毒药物或制剂 病毒为严格细胞内寄生性微生物，所以，抗病毒药物必须对病毒有选择性抑制作用而又不损伤宿主细胞或机体。从理论上讲，病毒复制的任何一个环节都可以是抗病毒药物发挥作用的靶位置，但是要区别病毒复制与宿主细胞的正常生理过程确实是很困难的 尽管近年来随着分子病毒学发展而尽管近年来随着分子病毒学发展而研制出许多抗病毒新药，但是，大多数研制出许多抗病毒新药，但是，大多数抗病毒药物的应用都有一定的限制，甚抗病毒药物的应用都有一定的限制，甚至有时可对机体有毒性作用，也未被临至有时可对机体有毒性作用，也未被临床采用。床采用。 对抑制病毒基因复制、转录及转译对抑制病毒基因复制、转录及转译
10、的药物和剂制是开发病毒药物的热点的药物和剂制是开发病毒药物的热点 。目前常用的有以下几类：目前常用的有以下几类： ( (一一) ) 核苷类似物核苷类似物 核核苷苷类类似似物物是是最最早早用用于于临临床床的的抗抗病病毒毒药药物物，他他是是用用合合成成的的异异常常嘧嘧啶啶取取代代病病毒毒DNADNA前前体体的的胸胸腺腺嘧嘧啶啶，通通过过使使异异常常嘧嘧啶啶掺掺入入到到子子代代DNADNA中中，阻阻抑抑子子代代病病毒毒基基因因的的合合成成与与表表达达，从从而而抑抑制制病病毒毒的的复复制制或或复复制制出出的的病病毒毒失失去去感感染性染性 1 1 碘碘尿尿苷苷（IDUIDU，疱疱疹疹净净）用用于于治治疗
11、疗眼眼疱疱疹疹病病毒毒感感染染。除除可可作作用用于于病病毒毒DNADNA，同同时时也也掺入细胞的掺入细胞的DNADNA组织，具有一定的毒性组织，具有一定的毒性 2.2.无环鸟苷无环鸟苷（ACVACV，阿昔洛韦阿昔洛韦) )和和丙氧丙氧鸟苷鸟苷 ( (DHPG)DHPG)，是新一代核苷类似物。是新一代核苷类似物。 由于正常细胞中无无环鸟苷。因此，由于正常细胞中无无环鸟苷。因此，仅在有病毒感染的细胞中发挥抗病毒作用，仅在有病毒感染的细胞中发挥抗病毒作用，对病毒具有选择性，对宿主细胞毒性很小，对病毒具有选择性，对宿主细胞毒性很小，主要用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹、主要用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹
12、、生殖器疱疹及带状疱疹。生殖器疱疹及带状疱疹。 （二）（二） 病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶抑制物 有些病毒本身除可编码病毒复制和转录后有些病毒本身除可编码病毒复制和转录后剪接、加工酶外，还可有降解大分子病毒蛋白剪接、加工酶外，还可有降解大分子病毒蛋白的酶，因此根据病毒蛋白酶的结构进行设计并的酶，因此根据病毒蛋白酶的结构进行设计并研制病毒蛋白酶抑制剂。研制病毒蛋白酶抑制剂。 在在HIVHIV中已设计出针对逆转录病酶及蛋白酶中已设计出针对逆转录病酶及蛋白酶活性位点的抑制剂，其商品名为英迪纳瓦活性位点的抑制剂，其商品名为英迪纳瓦intonavirintonavir及瑞托纳瓦及瑞托纳瓦ritonavir
13、ritonavir。华裔美国科华裔美国科学家用学家用3 3TCTC加蛋白酶抑制剂联合治疗加蛋白酶抑制剂联合治疗HIVHIV，被称被称为为“鸡尾酒鸡尾酒”治疗方案，可较长期抑制病毒复治疗方案，可较长期抑制病毒复制，受到普遍重视制，受到普遍重视 三三 其他其他 干干扰扰素素和和干干扰扰素素诱诱生生剂剂以以及及细细胞胞因因子子IL-12IL-12，TNFTNF和和一一批批中中药药等等天天然然药药物物如如黄黄芪芪、板板蓝蓝根根、大大青青叶叶等等也也具具有有抑抑制制病病毒毒复复制制的的作用。作用。 IFNIFN治疗乙型及丙型肝炎也有效。治疗乙型及丙型肝炎也有效。 中中药药对对肠肠道道病病毒毒、呼呼吸吸道
14、道病病毒毒、虫虫媒媒病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用。病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用。 四 抗病毒基因治疗 选择病毒基因组中的靶基因，然后设计互补的DNA序列片段，通过反义寡核苷酸与病毒关键基因结合后，可阻碍DNA的复制与RNA的转录。 对RNA的反义寡核苷酸通过与靶基因mRNA 互补结合后，阻碍病毒 mRNA与核糖体结合而阻碍转译病毒蛋白等。 这类抗病毒制剂主要问题是成本费高，制剂不稳定。迄今被批准用于临床的只有针对抗巨细胞病毒的反义核酸，局部用于巨细胞病毒感染的脉络膜和视网膜炎。1 1、核苷类药物、核苷类药物 无环鸟苷无环鸟苷(ACV)(ACV)，叠氮胸苷，叠氮胸苷(AZT)(AZT)，
15、碘苷碘苷(IDU(IDU，疱疹净疱疹净) )，病毒唑病毒唑( (三氮唑核苷三氮唑核苷) ) 2 2、 病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶抑制物 沙喹那韦沙喹那韦( (saquinavirsaquinavir) )，利托那韦利托那韦( (ritonavirritonavir) ) 吲哚那韦吲哚那韦( (indinavirindinavir) , ) , 奈非那韦奈非那韦( (nelfinavirnelfinavir) ) 3 3、 IFNIFN、IFNIFN诱生剂、细胞因子、中草药诱生剂、细胞因子、中草药4 4、基因治疗、基因治疗 反义寡脱氧核酸反义寡脱氧核酸( (asODNasODN) )； 反义寡核苷酸（反义寡核苷酸（asONasON，反义反义RNARNA）；）； 核酶（核酶（ribozymeribozyme）
