《DNA重组技术的基本工具sxh课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《DNA重组技术的基本工具sxh课件（20页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、DNA重组技术的基本工具sxhDNA重组技术的基本工具sxh限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶“分子手术刀分子手术刀”DNADNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”运载体运载体“分子运输车分子运输车”DNA重组技术的基本工具sxh分子手术刀分子手术刀限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶( (限制酶限制酶) )1.1.来源来源: :主要从原核生物中分离纯化主要从原核生物中分离纯化想一想想一想:1.1.这类酶在原核生物中起什么作用这类酶在原核生物中起什么作用? ?2.2.为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNADNA？2.2.作用作用: :4.4.识别序列识别序列:
2、:1、识别特定核苷酸序列；、识别特定核苷酸序列；2、切开特定部位的两个核苷酸之间的、切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键。3.3.切割后产生的切割后产生的DNADNA片段末端的形式：片段末端的形式：黏性末端黏性末端 或或平末端平末端一种一种限制酶限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列只能识别一种特定的核苷酸序列DNA重组技术的基本工具sxhEcoRI限制酶限制酶被同一种限制酶切断的几个被同一种限制酶切断的几个DNADNA是否具是否具有相同的黏性末端？有相同的黏性末端？黏性末端黏性末端是是一种一种限制酶限制酶只能识别一种特定的核苷酸只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割序列
3、，并在特定的切点上切割DNADNA分子。分子。DNA重组技术的基本工具sxh下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的是下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的是 A、 B、 C、 D、T C GA G C T T A AA GG T T C C AA G C T T C A G A A T T C GADNA重组技术的基本工具sxhDNA连接酶连接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种限制酶切割DNA重组技术
4、的基本工具sxh“分子缝合针分子缝合针”DNADNA连接酶连接酶 分类分类E.coliDNA连接酶连接酶T4DNA连接酶连接酶想一想想一想:DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶是一回事吗聚合酶是一回事吗?为什么为什么?DNA重组技术的基本工具sxhDNA聚合酶DNA连接酶区别区别1 1区别区别2 2相同点相同点寻根问底寻根问底DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶是一回事吗聚合酶是一回事吗?为什么为什么?1)1)只能将只能将单个核苷酸单个核苷酸连连接到已有的核酸片段上，接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键形成形成磷酸二酯键磷酸二酯键1)1)在在两个两个DNADNA片段之片段之间间形成磷
5、酸二酯键形成磷酸二酯键2)2)以以一条一条DNADNA链为模板链为模板，将将将将单个核苷酸单个核苷酸单个核苷酸单个核苷酸通过磷酸通过磷酸通过磷酸通过磷酸二酯键二酯键二酯键二酯键连接成一条互补连接成一条互补的的DNADNA链链2)2)将将DNADNA双链上的双链上的两个两个缺口同时连接缺口同时连接起来，起来，不需要模板不需要模板DNA重组技术的基本工具sxh作为载体的必要条件：作为载体的必要条件：1 1、能自我复制或整合到受体染色体能自我复制或整合到受体染色体DNADNA上上 随染色体随染色体DNADNA的复制而同步复制的复制而同步复制；2 2、有一或多个限制酶的切割位点有一或多个限制酶的切割位
6、点；3 3、必须带有标记基因必须带有标记基因；4 4、必须是安全的，不会对受体细胞有害必须是安全的，不会对受体细胞有害；5 5、大小应合适，以便提取和体外操作大小应合适，以便提取和体外操作。基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体DNA重组技术的基本工具sxh基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体 质粒存在于许质粒存在于许多细菌和酵母菌等多细菌和酵母菌等生物中生物中, ,是细胞染是细胞染色体外能够自主复色体外能够自主复制的很制的很小的环状小的环状DNADNA分子。分子。常用的运载体：常用的运载体： 质粒质粒、噬菌体的噬菌体的衍生物衍生物和和动植物病动植物病毒毒等。等。DNA重组技术的基本工具
7、sxh限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GGATCCGGATCC，限制性核酸内切酶，限制性核酸内切酶的识别的识别序列和切点是序列和切点是GATCGATC。在质粒上有酶。在质粒上有酶的一个切点，在目的基因的两侧各有一个的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶酶的切点。的切点。1 1、请画出质粒被限制性核酸内切酶、请画出质粒被限制性核酸内切酶切割切割 后所形成的黏性末端。后所形成的黏性末端。2 2、请画出目的基因两侧被限制性核酸内切、请画出目的基因两侧被限制性核酸内切 酶酶切割后所形成的黏性末端。切割后所形成的黏性末端。DNA重组技术的基本工具sxh1 1、下列不属
8、于基因工程的运载体的是（、下列不属于基因工程的运载体的是（ ） A A、质粒、质粒 B B、噬菌体、噬菌体 C C、细菌、细菌 D D、病毒、病毒C2、判断：、判断： A、限制酶的切口一定是、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列碱基序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、重组技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、重组技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、 运载体运载体3 3、在基因工程中，切割运载体和含有目的、在基因工程中，切割运载体和含有目的 基因的基因的DNADNA片段，需使用（片段，需使用（ ） A A、同种限制酶、同种限制酶 B B、两种限制酶、两种限制酶
9、C C、同种连接酶、同种连接酶 D D、两种连接酶、两种连接酶DNA重组技术的基本工具sxh原核生物容易受到自然界外源原核生物容易受到自然界外源DNADNA的入侵，但是，生物的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源具，当外源DNADNA侵入时，会利用限制酶将外源侵入时，会利用限制酶将外源DNADNA切割掉，切割掉，以保证自身的安全。所以，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起限制酶在原核生物中主要起到切割外
10、源到切割外源DNADNA、使之失效，从而达到保护自身的目的、使之失效，从而达到保护自身的目的。含有某种限制酶的细胞，含有某种限制酶的细胞，其其DNADNA分子中或者不具备这种分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 限制酶在原核生物中的作用DNA重组技术的基本工具sxh T磷磷酸酸二二酯酯键键1234512345 ADNA重组技术的基本工具sxhDNA重组技术的基本工具sxhEcoR黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端DNA重组技术的基本
11、工具sxhEcoR黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端DNA重组技术的基本工具sxhSma平末端平末端平末端平末端DNA重组技术的基本工具sxh 限制酶所识别的限制酶所识别的限制酶所识别的限制酶所识别的序列，无论是序列，无论是序列，无论是序列，无论是6 6个碱个碱个碱个碱基还是基还是基还是基还是4 4个碱基，都个碱基，都个碱基，都个碱基，都可以找到一条可以找到一条可以找到一条可以找到一条中轴线中轴线中轴线中轴线，中轴线两侧的双链中轴线两侧的双链中轴线两侧的双链中轴线两侧的双链DNADNA上的碱基是上的碱基是上的碱基是上的碱基是反反反反向对称、重复排列向对称、重复排列向对称、重复排列向对称、重复排列的。的。的。的。想一想限制酶所识别的序列有什么特点？想一想限制酶所识别的序列有什么特点？DNA重组技术的基本工具sxh
