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1、p53基因治疗的基础与临床研究基因治疗的基础与临床研究2007年年11月月基础与临床北京大学临床肿瘤学院 P53基因基因结构：结构：p53基因定位于人染色体基因定位于人染色体17p13.1区位，区位，全长全长1620kb,有有11个外显子和个外显子和10个内含子，个内含子，分子量为分子量为53KD的磷酸核蛋白，含的磷酸核蛋白，含393个氨基个氨基酸。酸。功能：具功能：具转录因子转录因子的功能。野生型的功能。野生型p53具细具细胞周期检查点功能，使受损细胞阻滞于胞周期检查点功能，使受损细胞阻滞于G1期期（或（或G2期）并引导细胞凋亡。突变型期）并引导细胞凋亡。突变型p53即即丧失该功能，起癌基因
2、作用。丧失该功能，起癌基因作用。基础与临床北京大学临床肿瘤学院p53p53基因染色体定位基因染色体定位基础与临床北京大学临床肿瘤学院p53p53基因结构基因结构基础与临床北京大学临床肿瘤学院功能：基因组保护神功能：基因组保护神基础与临床北京大学临床肿瘤学院 第一部分研究第一部分研究 p53对人胃癌细胞放射对人胃癌细胞放射敏感性和热敏感性的作用敏感性和热敏感性的作用基础与临床北京大学临床肿瘤学院 国家自然科学基因课题（国家自然科学基因课题（95规划）规划） 4种种不不同同p53状状况况胃胃癌癌细细胞胞4Gy剂剂量量照照射射后后，仅仅wtp53细细胞胞出出现现了了明明显显的的G1期期阻阻滞滞(分分
3、别别占占原原细细胞胞总总数数的的67.967.9和和61.161.1) )，和和细细胞胞凋凋亡亡 (比比例例分分别别达达13.0%和和15.3%)。而而其其他他3种种p53异异常常的的细细胞胞都都没没有有出出现现明明显显的的G1期阻滞和凋亡效应。期阻滞和凋亡效应。基础与临床北京大学临床肿瘤学院4种胃癌细胞种胃癌细胞4Gy照射后照射后w细胞、细胞、M细胞、细胞、neo细胞和细胞和823细胞生存率分别为细胞生存率分别为0.108 0.006、0.155 0.004、0.147 0.007和和0.140 0.013,W细胞生存率显著地低于后三种细胞细胞生存率显著地低于后三种细胞（p0.05）4种胃癌
4、细胞肿瘤种胃癌细胞肿瘤10Gy照射后体积抑制曲线：照射后体积抑制曲线：w细胞肿瘤放射反应曲细胞肿瘤放射反应曲线明显受到抑制线明显受到抑制基础与临床北京大学临床肿瘤学院p53对人胃癌细胞热敏感性的作用对人胃癌细胞热敏感性的作用4 4种不同种不同p53p53状况胃癌细胞在状况胃癌细胞在42C 42C 2 h 2 h 或或43C 30min43C 30min后后8h8h，仅，仅W W细细胞胞S S期比例明显增加期比例明显增加（P0.05P0.05）分）分别占别占53.553.5或或50.050.0，凋亡比率凋亡比率分别达分别达10.5%10.5%和和12.3%12.3%。而其他。而其他3 3种种细胞
5、的细胞的S S期比例无明显增高期比例无明显增高 ，凋，凋亡比例都为亡比例都为0 (p0.05)0 (p0.05)。基础与临床北京大学临床肿瘤学院4 4种细胞种植肿瘤两次种细胞种植肿瘤两次43C 20min加热后，加热后， w细胞细胞肿瘤抑制曲线增长缓慢，到肿瘤抑制曲线增长缓慢，到20天时仅增大了天时仅增大了1倍倍，而其他而其他3种细胞肿瘤增长迅速，到种细胞肿瘤增长迅速，到20天时增大了天时增大了2.7 3.6倍倍,生长速度显著地高于生长速度显著地高于W细胞细胞（P0.05）。基础与临床北京大学临床肿瘤学院第二部分研究第二部分研究重组人重组人p53腺病毒对人胃癌细胞腺病毒对人胃癌细胞放射敏感性和
6、热敏感性作用放射敏感性和热敏感性作用基础与临床北京大学临床肿瘤学院作用机制作用机制Bax凋亡凋亡坏死坏死基础与临床北京大学临床肿瘤学院重组腺病毒颗粒重组腺病毒颗粒重组腺病毒颗粒重组腺病毒颗粒激活免疫系统激活免疫系统产生细胞因子和淋巴细胞产生细胞因子和淋巴细胞提高抗肿瘤体液免疫和细胞免疫力提高抗肿瘤体液免疫和细胞免疫力免疫系统免疫系统作用机制作用机制基础与临床北京大学临床肿瘤学院转染率与病毒剂量转染率与病毒剂量 病毒量为病毒量为50 MOI时，四种胃癌细时，四种胃癌细胞感染率胞感染率40%左右；左右；100 MOI时，时，感染率达感染率达8090%（multiplicity of infecti
7、on, MOI,效靶比）。效靶比）。基础与临床北京大学临床肿瘤学院Adp53表达定位表达定位1:100MOI效靶比效靶比Adp53产生产生细胞高转染率（细胞高转染率（100）和）和p53基因在基因在细胞内高表达细胞内高表达，产，产生生G2/M期阻滞和凋亡增加和期阻滞和凋亡增加和细胞增殖抑制细胞增殖抑制基础与临床北京大学临床肿瘤学院图1 100MOI Adp53感染感染4种种胃癌胃癌细胞胞48小小时后后p53蛋白的蛋白的免疫免疫组化染色。化染色。Adp53感染感染细胞核着棕色。胞核着棕色。显示示p53表达在表达在细胞核内并达胞核内并达到到100转染。染。1. Marker 2. W+Adp53
8、3. W control 4. M+Adp53 5. M control 6.neo+Adp53 7. neo control 8. 823+Adp53 9. 823 control图2：Western blot印印记法法显示示4种胃癌种胃癌细胞胞100MOIAdp53感染感染后后48小小时，在，在53KD位置上均有位置上均有一条清晰的一条清晰的杂交交带，表明，表明 p53蛋蛋白高表达。白高表达。 Wt Mut Neo BGC-823基础与临床北京大学临床肿瘤学院图3 . 4种胃癌种胃癌细胞胞100MOIAdp53感染后感染后48小小时TUNEL法染色法染色显示示高比率凋亡高比率凋亡细胞被染成
9、棕胞被染成棕色。色。基础与临床北京大学临床肿瘤学院表表1 Adp53结合合4Gy照射胃癌照射胃癌细胞存活率胞存活率 存活分数存活分数 细胞系胞系 Ad-p53组 4Gy组 p53+4Gy组 Wtp53 0.6260.019 0.1170.013 0.0940.001 Mutp53 0.3690.024 0.1690.002 0.0760.009 Neo 0.5180.016 0.1520.004 0.1100.005 823 0.5260.023 0.1500.005 0.1080.025 注: 采用Hotelling T2 检验表明Ad-p53+4Gy组存活分数显著低于4Gy组（P0.001
10、）Adp53结合放射实验结合放射实验基础与临床北京大学临床肿瘤学院 表表2 Adp53结合合4Gy照射照射对4种胃癌种胃癌细胞的胞的细胞周期和凋亡的影响（胞周期和凋亡的影响（FCM法）法）细胞系胞系 条件条件 G1 S G2/M Sub-G1 凋亡率比凋亡率比值Wtp53 对照组 48.25.0 29.64.0 22.24.0 4.91.1 Adp53 43.612.0 31.810.5 24.616.5 10.61.6 4Gy 61.04.2 25.19.9 13.97.5 13.42.0 Adp534Gy 41.512.0 21.76.5 36.8 15.5 39.9 5.0 3.0#Mu
11、tp53 对照组 48.512.0 39.55.5 12.010.0 5.52.0 Adp53 40.32.0 38.716.0 21.010.0 17.93.2 4Gy 40.514.0 44.516.0 14.03.0 12.74.0 Adp534Gy 34.84.0 34.316.5 30.8 11.0 45.5 10.0 3.6Neo 对照组 44.05.0 33.36.5 22.75.0 7.02.5 Adp53 39.25.5 34.76.5 26.17.5 18.02.9 4Gy 43.09.0 30.27.5 26.86.5 11.45.0 Adp534Gy 29.78.0 3
12、6.27.5 34.1 9.5 25.1 2.5 2.2823 对照组 52.03.0 34.85.5 13.24.0 5.13.0 Adp53 42.54.0 39.82.0 21.66.0 15.84.8 4Gy 53.612.5 29.510.5 16.92.0 11.83.0 Adp534Gy 40.82.5 1.39.0 27.9 7.0 29.8 6.3 2.5基础与临床北京大学临床肿瘤学院 表表3 Adp53结合合4Gy照射照射4种胃癌种胃癌细胞的凋亡率胞的凋亡率( TUNEL法法) 凋亡率（凋亡率（%） 细胞系胞系 对照照组 Ad-53 4Gy p53+4Gy 凋亡率比凋亡率比
13、值 Wt-p53 1.0 18.0 0.5 12.0 2.0 40.0 2.5 3.3* Mut-p53 0.0 28.0 2.0 3.0 1.0 48.0 3.5 16.0 Neo 0.0 26.0 3.0 5.5 0.5 36.0 0.5 6.5 BGC823 0.0 25.0 4.0 5.0 1.0 35.0 1.5 7.0 *凋亡率比凋亡率比值Adp534Gy的凋亡率的凋亡率/单纯4Gy的凋亡率的凋亡率基础与临床北京大学临床肿瘤学院nW细胞肿瘤细胞肿瘤Adp53对对6Gy照射的抑瘤率比值为照射的抑瘤率比值为1.41,而而对对M细胞肿瘤为细胞肿瘤为1.91。 图图5.2示示Adp53结合
14、结合6Gy照照射对射对M细胞肿瘤的抑制作用细胞肿瘤的抑制作用 图图5.1示示Adp53结结合合6Gy照照射射对对W细胞肿瘤的抑制作用细胞肿瘤的抑制作用相对体积基础与临床北京大学临床肿瘤学院相相对体体积 表表1 Adp53结合加温合加温对W细胞周期和凋亡的作用（胞周期和凋亡的作用（FCM）条件条件 G1 S G2/M Sub-G1 热增效比增效比对照 38.76.2 39.37.3 22.01.6 2.61.7Adp53 38.52.4 26.82.7 34.71.0 8.50.742C 2h 36.85.0 37.83.9 25.36.0 6.54.843C 0.5h 42.07.1 34.0
15、4.7 24.04.3 14.212.2Adp53+42C 2h 44.85.1 21.86.7 34.0 2.9 21.4 9.8 3.3Adp53+43C0.5h 35.82.1 40.57.6 23.8 7.1 22.5 12.2 1.6 表表2 Adp53结合加温合加温对M细胞周期和凋亡的作用（胞周期和凋亡的作用（FCM）条件条件 G1 S G2/M Sub-G1 热增效比增效比对照 45.81.5 34.80.5 20.00.8 2.21.5Adp53 41.32.4 33.56.2 25.87.8 8.25.242C 2h 41.35.0 36.512.2 22.05.9 4.71
16、.543C 0.5h 43.83.9 38.54.7 17.55.1 7.512.2Adp53+42C 2h 42.510.8 32.03.3 25.3 13.4 9.8 2.4 2.1Adp53+43C0.5h 41.52.5 36.39.9 22.5 12.5 13.3 0.5 1.8基础与临床北京大学临床肿瘤学院 时间（天）时间（天）图图6.1 Adp53结合结合43 C0.5h W细细胞肿瘤抑制曲线胞肿瘤抑制曲线 时间（天）时间（天）图图6.2 Adp53结合结合43 C0.5h W细细胞肿瘤抑制曲线胞肿瘤抑制曲线相相对对体体积积 W细胞种植肿瘤相对生长曲线细胞种植肿瘤相对生长曲线(见
17、图见图6.1)：单纯：单纯43 C 0.5h加温、单纯加温、单纯Adp53和和Adp53结合结合43 C 0.5h，肿瘤抑制率分别为，肿瘤抑制率分别为15.8%、21.8%和和27.2%,Adp53的热增效比为的热增效比为1.7。M细胞种植肿瘤相对生长曲线（见图细胞种植肿瘤相对生长曲线（见图6.2）：单纯加温、单纯）：单纯加温、单纯Adp53和和Adp53结合加温，肿瘤抑制率分别为结合加温，肿瘤抑制率分别为24.2%、31.0%和和37.8%，Adp53的热的热增效比为增效比为1.6。基础与临床北京大学临床肿瘤学院临床研究临床研究Gene Therapy dream基础与临床北京大学临床肿瘤学
18、院p53 基因放疗基因放疗 野生型野生型p53p53促进放射线引发的细促进放射线引发的细胞周期阻滞和凋亡。而变异胞周期阻滞和凋亡。而变异p53 p53 减弱甚至取消这种效应减弱甚至取消这种效应腺病毒介导腺病毒介导p53p53恢复肿瘤细胞内恢复肿瘤细胞内p53p53的功能，提高肿瘤细胞放射的功能，提高肿瘤细胞放射敏感性。敏感性。基础与临床北京大学临床肿瘤学院 试验材料试验材料重组人重组人p53腺病毒注射液（今又生）腺病毒注射液（今又生）今又生结构：今又生结构：E1基因缺失的携带人野基因缺失的携带人野生型生型p53基因的基因的5型腺病毒型腺病毒基础与临床北京大学临床肿瘤学院基础与临床北京大学临床肿
19、瘤学院Adp53 structure Gendicine is an E1 substituted replication-incompetent recombinant adenovirus encoding the human p53 gene.E1A/E1Bdeletionp53Structural proteinsE4E2E3基础与临床北京大学临床肿瘤学院病毒表面的蛋白质与细病毒表面的蛋白质与细胞表面的蛋白质通过胞表面的蛋白质通过“配子与配体配子与配体”结合的方结合的方式，整个病毒颗粒被细式，整个病毒颗粒被细胞吞噬入细胞内。在细胞吞噬入细胞内。在细胞浆内，病毒外壳与内胞浆内，病毒外壳与
20、内核的核的DNA分离，其中外分离，其中外壳蛋白质被降解；壳蛋白质被降解；DNA进入细胞核。在核内，进入细胞核。在核内，DNA转录出转录出RNA（mRNA), mRNA从胞核出来进入细胞浆；从胞核出来进入细胞浆；在胞浆翻译出在胞浆翻译出 p53蛋白蛋白质质， p53蛋白质通过内蛋白质通过内质网系统再进入到细胞质网系统再进入到细胞核与核内的核与核内的DNA结合，结合，以调节以调节DNA（基因）表（基因）表达。达。基础与临床北京大学临床肿瘤学院P53基因治疗的临床机理瘤内注射今又生瘤内注射今又生p53基因及其靶基基因及其靶基因的表达因的表达治疗治疗P53基因基因上调上调P21基因及基因及Bax基因基
21、因下调下调VEGF基因基因方法：方法：IHC和和RTPCR及测序及测序基础与临床北京大学临床肿瘤学院免疫组化法评价今又生瘤内注射后免疫组化法评价今又生瘤内注射后p53基因表达基因表达.张子苑张子苑NPC例，注药前例，注药前p53Adp53注射后注射后p53 +75%基础与临床北京大学临床肿瘤学院刘凯恶性神经鞘瘤例刘凯恶性神经鞘瘤例 注药前注药前P53+75%,PCR+P53基基因因表表达达基础与临床北京大学临床肿瘤学院张沂择舌癌例，注药前张沂择舌癌例，注药前P21张沂择注药后张沂择注药后P2150丁先进丁先进NPC例，注药前例，注药前P21丁先进注药后丁先进注药后P21 25P21基基因因表表
22、达达基础与临床北京大学临床肿瘤学院丁先进丁先进NPC，注药前，注药前Bax丁先进注药后丁先进注药后Bax2550郑昌华郑昌华NPC例，注药前例，注药前Bax郑昌华例注药后郑昌华例注药后Bax50%张沂择例注药后张沂择例注药后Bax25-50张沂择舌癌例注药前张沂择舌癌例注药前Bax基础与临床北京大学临床肿瘤学院丁先进丁先进NPC例注药前例注药前VEGF75丁先进例注药后丁先进例注药后VEGF马冰清平滑肌肉瘤例注药前马冰清平滑肌肉瘤例注药前VEGF75%马冰清例注药后马冰清例注药后VEGF张子苑例注药后张子苑例注药后VEGF25-50%张子苑张子苑NPC例注药前例注药前VEGF75%基础与临床北
23、京大学临床肿瘤学院胃体癌，低分化腺癌（上图，疗前）胃体癌，低分化腺癌（上图，疗前）VEGFP53灌注热灌注热化疗化疗后手术，胃角残后手术，胃角残存肿瘤，镜下仅见间质内散在存肿瘤，镜下仅见间质内散在稀少变性癌细胞稀少变性癌细胞VEGF基础与临床北京大学临床肿瘤学院今又生特有今又生特有p53序列序列 331bp基础与临床北京大学临床肿瘤学院马冰清，平滑肌肉瘤，马冰清，平滑肌肉瘤，IHC法示：用药前法示：用药前+75%,用药后用药后+75% PCR法示：用药前，用药后法示：用药前，用药后注药前仅注药前仅38吻合（如上图），注药后与吻合（如上图），注药后与p53专有序列比较专有序列比较100吻合吻合（
24、如下图）（如下图）基础与临床北京大学临床肿瘤学院马冰清注药前马冰清注药前与与p53专有序列图比较专有序列图比较仅仅38吻合吻合马冰清注药后马冰清注药后与与p53专有序列图比较专有序列图比较达达100吻合吻合基础与临床北京大学临床肿瘤学院例例2： (龚兆洪龚兆洪NPC, IHC示示)注今又生前注今又生前样品样品p53与今又生专有与今又生专有p53序列序列仅有仅有38吻合吻合0720290_G1_P53F_B06_0721708:DNAMAN2 identity= 38%5 GTGGTGGTGCCCTATGAGCCGCCTGAGGTTGGCTCTGACTGTACCACCATCCA CT ACAAC
25、 41 GTGGTGAGGCTCCCCTTTCTT GCGGAGATTCTCTTCC TCTGTGCGCCGGTCTCTC CCAGG65 TACATGTGTAACAGTTCCTGCATGGGCGGCATGAACCGGAGGCCCATCCTCACCATCATC101 ACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCGTCCCAGTAGATTACCACTGGAGTCTTC125 ACACTGGAAGACTCCAGTGGTAATCTACTGGGACGGAACAGCTTTGAGGTGCGTGTTTGT 161 CAGTGTGATGATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATG
26、CCGCCCATGCAGGAACTGTTACA185 GCCTGTCCTGGGAGAGACCGGCGCACAGAGGAAGAGAATCTCCGCAAGAAAGGGGAGCCT221 CATGTAGTTGTAGTGGATGGTGGTACAGTCAGAGCCAACCTCAGGCGGCTCATAGGGCAC245 CACCACGAGCTGCCCCCAGGGAGCACTAAGCGAGCACTGCCCAACAA 281 CACCACACTATGTCGAAAAGTGTTTCTGTCATCCAAATACTCCACAC基础与临床北京大学临床肿瘤学院例例1：注药后注药后样品样品p53与今又生专有与今又生专有p5
27、3序列序列100吻合（吻合（IHC示）示）0720299_G23_P53R_D09_0724712:DNAMAN1 identity= 100%1 CTCGTGGTGAGGCTCCCCTTTCTTGCGGAGATTCTCTTCCTCTGTGCGCCGGTCTCTCCC38 CTCGTGGTGAGGCTCCCCTTTCTTGCGGAGATTCTCTTCCTCTGTGCGCCGGTCTCTCCC61 AGGACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCGTCCCAGTAGATTACCACTGGAGTC 98 AGGACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCG
28、TCCCAGTAGATTACCACTGGAGTC121 TTCCAGTGTGATGATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATGCCGCCCATGCAGGAACTGTT 158 TTCCAGTGTGATGATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATGCCGCCCATGCAGGAACTGTT181 ACACATGTAGTTGTAGTGGATGGTGGTACAGTCAGAGCCAACCTCAGGCGGCTCATAGGG218 ACACATGTAGTTGTAGTGGATGGTGGTACAGTCAGAGCCAACCTCAGGCGGCTCATAGGG241 CACCACCACACTATG
29、TCGAAAAGTGTTTCTGTCATCCAAATACTCCACACGCAA 278 CACCACCACACTATGTCGAAAAGTGTTTCTGTCATCCAAATACTCCACACGCAA基础与临床北京大学临床肿瘤学院P53表达表达 IHC法法 12/25(48%) RT-PCR+测序测序法法 16/17 (94.1% ) P21表达表达 IHC法法 11/25(44%)Bax表达表达 IHC法法 9/24(37.5%) VEGF表达表达 IHC11/24(45.7%)瘤内注射瘤内注射Adp53后后P53及其靶基因表达情况及其靶基因表达情况基础与临床北京大学临床肿瘤学院重组人重组人P5
30、3腺病毒制剂临床试验腺病毒制剂临床试验1998年年2000年年1月完成临床月完成临床I期试期试验验2001年年10月月2003年年5月完成月完成II/III期临床试验期临床试验北京肿瘤医院为牵头单位北京肿瘤医院为牵头单位基础与临床北京大学临床肿瘤学院李利华，鼻咽癌，李利华，鼻咽癌，右颈转移右颈转移 ,T2N2M0右上颈转右上颈转移淋巴结移淋巴结6.1cm2纤维鼻咽纤维鼻咽镜可见右镜可见右鼻咽顶鼻咽顶3cm肿物肿物疗前疗前CT示示右鼻咽顶右鼻咽顶肿物肿物5.5cm2病理：低分病理：低分化鳞癌化鳞癌方法1基础与临床北京大学临床肿瘤学院右上颈肿物右上颈肿物B超探查超探查右上颈肿物注射部位右上颈肿物注
31、射部位大小大小 6.1cm2右上颈肿右上颈肿物，物，6.8 cm2，注，注射今又生射今又生基础与临床北京大学临床肿瘤学院B超引导下，右上颈肿物穿刺注射今又生超引导下，右上颈肿物穿刺注射今又生可见针尖可见针尖位置在瘤位置在瘤内内注药后即注药后即刻在瘤内刻在瘤内形成一片形成一片强回声区强回声区基础与临床北京大学临床肿瘤学院方法方法2左：左侧鼻咽顶肿瘤左：左侧鼻咽顶肿瘤 右：直接瘤内注射今又生右：直接瘤内注射今又生光纤鼻咽内镜引导下瘤内注射光纤鼻咽内镜引导下瘤内注射今又生今又生左下图：左下图：60Gy，8次注今次注今又生，鼻内镜见左鼻咽顶又生，鼻内镜见左鼻咽顶肿瘤消失肿瘤消失基础与临床北京大学临床肿
32、瘤学院 各种各种给药给药途径途径基础与临床北京大学临床肿瘤学院瘤内注射的意义1.避免免疫攻击避免免疫攻击2.腺病毒感染快腺病毒感染快而广而广3.高感染率致高高感染率致高疗效疗效基础与临床北京大学临床肿瘤学院分组方案分组方案多中心随机对照多中心随机对照II/IIIII/III期临床期临床试验试验基因放疗组（基因放疗组（GTRTGTRT）单纯放疗组（单纯放疗组（RTRT）基础与临床北京大学临床肿瘤学院方案方案 基因放疗组基因放疗组（GTRTGTRT）每周每周5 5瘤内注射今瘤内注射今又生又生10101212VP/VP/次，次，第三天第三天放疗，病灶区采放疗，病灶区采用与用与RTRT组相同照射组相同
33、照射, ,予予70Gy/35f/770Gy/35f/78w, 8w, 第五周第五周(40Gy) (40Gy) ，第八周，第八周(70Gy) (70Gy) ，疗后，疗后2 2个月为疗效确认，以个月为疗效确认，以CTCT测量肿瘤体积，测量肿瘤体积，计算计算40Gy40Gy、70Gy70Gy、和确认时肿瘤缩小率、和确认时肿瘤缩小率（）（）. .按按WHOWHO实体肿瘤客观疗效评定标准，疗效实体肿瘤客观疗效评定标准，疗效评定为评定为CRCR、PRPR、SDSD、PDPD。 基础与临床北京大学临床肿瘤学院实验室特殊检查实验室特殊检查肿瘤组织肿瘤组织p53p53蛋白检测（蛋白检测（IHCIHC法和法和测序
34、法）测序法）病毒抗体检测（病毒抗体检测（ELASAELASA法）法）基础与临床北京大学临床肿瘤学院临床常规检验临床常规检验每周血、尿、便每周血、尿、便每月血生化（每月血生化（BUN,Cr,AST,ALT)BUN,Cr,AST,ALT)每月心电图、胸片每月心电图、胸片基础与临床北京大学临床肿瘤学院毒性反应毒性反应按按WHOWHO常见毒性分级标准评价毒付反常见毒性分级标准评价毒付反应，按轻应，按轻、中、中、重、重、威胁生、威胁生命命评价和记录。重点观察体温变评价和记录。重点观察体温变化。一般在注射今又生后几小时内化。一般在注射今又生后几小时内出现短暂的自限性发热出现短暂的自限性发热（self-se
35、lf-limited feverlimited fever），），3838 C C以上发烧以上发烧者可酌情给予退烧药（消炎痛栓或者可酌情给予退烧药（消炎痛栓或柴胡注射液）。柴胡注射液）。基础与临床北京大学临床肿瘤学院统计学分析统计学分析全部数据的统计分析，采用全部数据的统计分析，采用SPSS11.0 SPSS11.0 统计软件，瘤灶缩小统计软件，瘤灶缩小率比较采用率比较采用t t检验（两组方差不检验（两组方差不齐时，用齐时，用tt检验），疗效比较检验），疗效比较采用采用PearsonPearson卡方检验，不良反卡方检验，不良反应测定值与基线比较采用应测定值与基线比较采用Dunnett-tDu
36、nnett-t检验。检验。基础与临床北京大学临床肿瘤学院GTRT group ( n=26)RT group ( n=27 )Gender (n) Male FemaleAge ( y ) Median RangeHistologic type KeratinizingUndifferentiated UICC stage (n) I II III IV (M0)17948.5 12.4197042208 (30.8)8 (30.8)10 (38.4)19851.6 11.3287132409 (33.3)10 (37.1)8 (29.6)Table 1. Comparison of pati
37、ent characteristics between GTRT and RT groups* Data presented as the number of patients, with the percentages of the total in parentheses. 基础与临床北京大学临床肿瘤学院表表2 鼻咽癌鼻咽癌GTRT组26例和例和RTRT组27例瘤灶大小（例瘤灶大小（mm2）比）比较组别瘤灶数瘤灶数肿瘤大小瘤大小GTRT组组26 676.15 437.84mm2RTRT组组44 645.91 448.97mm2GTRT组瘤灶大于瘤灶大于RT组，但成，但成组t检验：Z=-0.
38、271 , p=0.787 , 两两组瘤灶大小差瘤灶大小差别无无统计学意学意义，说明两明两组疗效具有可比性。效具有可比性。基础与临床北京大学临床肿瘤学院GTRT组与组与GT组具可比性组具可比性性别构成、年龄、病理、肿瘤大性别构成、年龄、病理、肿瘤大小、临床分期均无显著差别小、临床分期均无显著差别基础与临床北京大学临床肿瘤学院鼻咽癌鼻咽癌T2N2M0, III, 疗前前肿瘤瘤 23.5cm2 充充满鼻咽和鼻咽和鼻腔鼻腔照射照射40Gy 结合合 6 次注射今次注射今又生后又生后肿瘤完瘤完全消失全消失基础与临床北京大学临床肿瘤学院Left upper fig： NPC stage IV pretre
39、atmet Nasopharyngeal tumorNaso-endoscope photoUpper fig: pretreatInferior fig: at 44Gy and 5 times injection tumor disappeared. CT imaging at 70GY and Gendicine 8 times，nasopharynx tructure normal基础与临床北京大学临床肿瘤学院Table 3. Tumor shrinkage rates (%) of Gendicine-injected tumors of GTRT group as compared
40、 with RT group 40Gy 70Gy ValidationGTRT 64.50 17.78# 84.3516.97# 90.2721.15# RT 41.53 24.59# 56.60 28.01# 72.50 23.17# RER*1.551.49 1.25# Tumor shrinkage rate (%) ( X S)Radio-enhancement ratio ( RER ) tumor shrinkage rate of Gendicine-injected tumor of GTRT group/tumor shrinkage rate of tumor of RT
41、groupP0.01 for each treatment point at 40Gy, 70Gy and validation.基础与临床北京大学临床肿瘤学院Table 4. Response rate (%) of GTRT group as compared with RT groupgroup40Gy70GyValidationaFNCRPRSDPDFNCRPRSDPDFNCRPRSDPDGTRT26 2186026916102616910RT44 019250473251902881460aFN: tumor focus number. P 0.001 for each treatm
42、ent point at 40Gy, 70Gy and validation. At validation the CR rate were 16/26 (61.5%) for GTRT-tumors and 8/28 (28.6%) for RT-tumors, respectively. *At validation time point, the CR rate of GTRT group was 2.15 times to that of RT group (61.5%/28.6%) 基础与临床北京大学临床肿瘤学院今又生的坏死效应今又生的坏死效应注射注射Adp53Adp53部位肿瘤部位
43、肿瘤B B超显示肿瘤超显示肿瘤血供迅速减少甚至消失，血供迅速减少甚至消失，CTCT显显示肿瘤内示肿瘤内CTCT值明显下降，坏死值明显下降，坏死明显。有明显。有3 3例在例在40Gy40Gy时穿刺病理时穿刺病理证实未见癌细胞（证实未见癌细胞（1-101-10侯凤才、侯凤才、1 11414李文花、李文花、1 11616邱礼斌）邱礼斌）基础与临床北京大学临床肿瘤学院候凤才，鼻咽癌，左上颈淋巴结转移候凤才，鼻咽癌，左上颈淋巴结转移左外上后为注左外上后为注P53，5.7cm2，注射后，注射后弥散好；左内前下为对照，弥散好；左内前下为对照，5.7cm240Gy,前前LN，对照，对照，2.9cm2,缩缩40
44、后后LN1 cm2，注，注P53,缩小缩小72，空洞坏死，空洞坏死， 针吸未见癌细胞针吸未见癌细胞第六次注射第六次注射 p53，LN，50Gy，活检病理：大部，活检病理：大部分坏死，残存少许纤维分坏死，残存少许纤维组织及横纹肌。组织及横纹肌。基础与临床北京大学临床肿瘤学院Adverse Events骨髓、肝、肾、肺、心功能骨髓、肝、肾、肺、心功能 今又生注射前今又生注射前后都保持在正常范围后都保持在正常范围 107 病例病例 the incidence of fever was 78.5%, grade 1( less than 38 C ) fever 43% grade 2 ( range 38 C 40 C ) 35.5%.大多数发生自限性发烧（大多数发生自限性发烧（self-limited fever)基础与临床北京大学临床肿瘤学院
