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1、会计学1手足手足(shuz)口病的实验室检测口病的实验室检测第一页，共19页。n n手足口病的诊断一般是通过临床标本进行病毒分离和病毒鉴定。也可以通过手足口病的诊断一般是通过临床标本进行病毒分离和病毒鉴定。也可以通过血清学试验来检测血清中的中和抗体，或直接从临床标本中检测病毒的核酸血清学试验来检测血清中的中和抗体，或直接从临床标本中检测病毒的核酸来诊断。来诊断。n n能引起能引起(ynq)(ynq)手足口病的肠道病毒有很多血清型，不同细胞系对不同病毒的手足口病的肠道病毒有很多血清型，不同细胞系对不同病毒的敏感性是有所不同的。通常用于肠道病毒分离的细胞系为敏感性是有所不同的。通常用于肠道病毒分离
2、的细胞系为RDRD细胞（对细胞（对CA16CA16和和EV71EV71敏感）、敏感）、HEp-2HEp-2细胞（对某些柯萨奇细胞（对某些柯萨奇B B组病毒敏感）及组病毒敏感）及VeroVero细胞等。细胞等。总总 则则第1页/共18页第二页，共19页。n n使用血清型特异性的中和抗血清进行的中和试验是肠道病毒鉴定的基本方法，如果使用了适当(shdng)的抗血清，实验结果是比较可靠的。因为肠道病毒包括若干个血清型，通常使用组合抗血清进行鉴定。第2页/共18页第三页，共19页。n n当无法进行病毒分离或得不到适用于病毒分离用的标本时，血清学检测可以为肠道病毒的感染(gnrn)提供一个间接的证据。一
3、般用急性期血清与恢复期血清的检测结果进行比较，抗体滴度呈四倍或以上增高证明有急性感染(gnrn)。但是，无症状的肠道病毒感染(gnrn)也是常见的，所以对检测结果的解释要慎重一些。第3页/共18页第四页，共19页。n n为了提高检测速度，也为了辅助中和实验法进行毒株鉴定，最近很多实验室都使用分子生物学方法。目前，用分子生物学方法对肠道病毒进行定型还没有统一的标准(biozhn)，而且要根据检测目的选择使用适用的方法。第4页/共18页第五页，共19页。一、一、一、一、病原学病原学病原学病原学n n引引起起手手足足口口病病的的主主要要为为小小RNARNA病病毒毒科科、肠肠道道病病毒毒属属的的柯柯萨
4、萨奇奇病病毒毒(Coxasckie (Coxasckie virus) virus) A A组组1616、4 4、5 5、7 7、9 9、10 10 型型， B B组组2 2、5 5、 13 13 型型 ； 埃埃 可可 病病 毒毒 （ ECHO ECHO virusesviruses） 和和 肠肠 道道 病病 毒毒 7171型型（EV71EV71），其其中中以以EV71EV71及及Cox Cox Al6Al6型型最最为为常常见见。肠肠道道病病毒毒适适合合在在湿湿、热热的的环环境境下下生生存存与与传传播播，对对乙乙醚醚、去去氯氯胆胆酸酸盐盐等等不不敏敏感感，75%75%酒酒精精和和5%5%来来苏
5、苏(li (li s)s)亦亦不不能能将将其其灭灭活活，但但对对紫紫外外线线及及干干燥燥敏敏感感。各各种种氧氧化化剂剂( (高高锰锰酸酸钾钾、漂漂白白粉粉等等) )、甲甲醛醛、碘碘酒酒都都能能灭灭活活病病毒毒。病病毒毒在在5050可可被被迅迅速速灭灭活活，但但1mol1mol浓浓度度二二价价阳阳离离子子环环境境可可提提高高病病毒毒对对热热灭灭活活的的抵抵抗抗力力，病病毒毒在在44可可存存活活1 1年年，在在-20-20可可长长期期保保存存，在在外外环环境境中中病病毒毒可可长长期期存存活。活。第5页/共18页第六页，共19页。二、实验室诊断二、实验室诊断(zhndun)病例病例根据手、足、口等部
6、位典型皮疹即可作出HFMD临床诊断，流行病学接触史有助于诊断，临床诊断病例中符合下列之一，即为实验室诊断病例： 1病毒分离自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液或疱疹液、以及(yj)脑、肺、脾、淋巴结等组织标本中分离到肠道病毒。第6页/共18页第七页，共19页。n n2 2血清学检验血清学检验n n病病人人(bngrn)(bngrn)血血清清中中特特异异性性IgMIgM抗抗体体阳阳性性，或或急急性性期期与与恢恢复复期期血血清清IgGIgG抗体有抗体有4 4倍以上的升高。倍以上的升高。n n3 3核酸检验核酸检验 n n自自病病人人(bngrn)(bngrn)血血清清、咽咽拭拭子子或或咽咽喉喉
7、洗洗液液、粪粪便便或或肛肛拭拭子子、脑脑脊脊液液或或疱疱疹疹液液以以及及脑脑、肺肺、脾脾、淋淋巴巴结结组组织织等等的的标标本本中中检检测测到到病病毒毒核核酸。酸。第7页/共18页第八页，共19页。三、检测三、检测(jin c)结结果的评价果的评价如果从临床标本中分离到肠道病毒，尤其是分离自脑脊液、疱疹液，那么很如果从临床标本中分离到肠道病毒，尤其是分离自脑脊液、疱疹液，那么很可能该病毒就是病因病原。当无法进行病毒分离或未分离到病毒时，血可能该病毒就是病因病原。当无法进行病毒分离或未分离到病毒时，血清学诊断方法可以作为病毒感染的间接证据。对于难以清学诊断方法可以作为病毒感染的间接证据。对于难以(
8、nny)(nny)分离到分离到的肠道病毒，分子生物学方法如的肠道病毒，分子生物学方法如RT-PCRRT-PCR是很有用的。肠道病毒有时引起是很有用的。肠道病毒有时引起无症状感染，所以实验结果的实际意义应结合临床过程和流行病学资料无症状感染，所以实验结果的实际意义应结合临床过程和流行病学资料进行解释。进行解释。第8页/共18页第九页，共19页。四、标本四、标本(biobn)(biobn)采集对象采集对象 出出现现手手足足口口病病暴暴发发疫疫情情的的所所在在社社区区（村村）的的临临床床诊诊断断病病例例和和与与之之相相邻邻的的无无病病例例社社区区（村村）的的托托幼幼机机构构5 5岁岁以以下下儿儿童童
9、的健康对照人群。的健康对照人群。 标标本本包包括括粪粪便便、咽咽拭拭子子和和疱疱疹疹液液，如如果果(rgu)(rgu)患患者者出出现现神神经经系系统统症症状状，可可以以采采集集脑脑脊脊液液标标本本。对对于于血血清清学学诊诊断断，需需要要在在急急性性期期和和恢恢复复期期采采集集双双份份血血清清标标本本。临临床床标标本本在在运运输输和和贮贮存存过过程程中中要要避避免免反反复复冻冻融融，如如果果(rgu)(rgu)不不能能确确保保-20-20的的条条件件，应应该该在在0808运运输输和和保保存存。标标本本应应冷冷冻冻运输，运输时要附有必要的信息。运输，运输时要附有必要的信息。第9页/共18页第十页，
10、共19页。五、标本五、标本(biobn)种类及采集、运送种类及采集、运送n n（一）粪便(fnbin)标本n n采集病人发病7日内的粪便(fnbin)标本，用于病原检测。粪便(fnbin)标本采集量58g/份，采集后立即放入无菌采便管内，4暂存立即(12h内)送达实验室，20以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于70冰箱。第10页/共18页第十一页，共19页。n n（二）咽拭子标本（二）咽拭子标本n n采采集集病病人人发发病病3 3日日内内的的咽咽拭拭子子标标本本，用用于于病病原原检检测测。用用专专用用采采样样棉棉签签，适适度度用用力力拭拭抹抹咽咽后后壁壁和和两两侧侧扁扁桃桃体体部部位位，应应
11、避避免免触触及及舌舌部部；迅迅速速将将棉棉签签放放入入装装有有35ml35ml保保存存液液（维维持持液液或或生生理理盐盐水水）的的采采样样管管中中，在在靠靠近近顶顶端端(dngdun)(dngdun)处处折折断断棉棉签签杆杆，旋旋紧紧管管盖盖并并密密封封，以以防防干干燥燥。44暂暂存存立立即即（12h12h内内）送送达达实实验室，验室，2020以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于7070冰箱。冰箱。 第11页/共18页第十二页，共19页。n n（三）血清标本n n采集急性期（发病0-3d）和恢复期（发病14-30d）双份配对血清用于抗体检测。静脉采集35
12、ml全血，置于真空无菌采血管中，分 离 血 清 ， 将 血 清 置 于 20以 下(yxi)冷冻保存。 第12页/共18页第十三页，共19页。n n（四）疱疹液（四）疱疹液n n在在手手足足口口病病的的实实验验室室诊诊断断中中，从从疱疱疹疹液液中中分分离离到到病病毒毒具具有有很很高高的的诊诊断断价价值值(jizh)(jizh)，可可同同时时采采集集多多个个疱疱疹疹作作为为一一份份标标本本。先先用用75%75%的的酒酒精精对对疱疱疹疹周周围围的的皮皮肤肤进进行行消消毒毒，然然后后用用消消毒毒针针将将疱疱疹疹挑挑破破用用棉棉签签蘸蘸取取疱疱疹疹液液，迅迅速速将将棉棉签签放放入入内内装装有有35ml
13、35ml保保存存液液（维维持持液液或或生生理理盐盐水水）的的采采样样管管中中，在在靠靠近近顶顶端端处处折折断断棉棉签签杆杆，旋旋紧紧管管盖盖并并密密封封。所所采采集集标标本本44暂暂存存立立即即（12h12h内内）送送达达实实验验室室，2020以以下下低低温温冷冷冻冻保保藏藏，需需长长期期保保存存的的标本存于标本存于7070冰箱。冰箱。第13页/共18页第十四页，共19页。n n（五）脑脊液标本（五）脑脊液标本n n出出现现神神经经系系统统(shnjngxtng)(shnjngxtng)症症状状的的病病例例，要要采采集集脑脑脊脊液液标标本本，进进行行病病原原和和抗抗体体检检测测，从从脑脑脊脊液
14、液中中分分离离病病毒毒也也具具有有很很高高的的诊诊断断价价值值。采采集集时时间间为为出出现现神神经经系系统统(shnjngxtng)(shnjngxtng)症症状状后后3 3天天内内，采采集集量量为为。采采集集后后立立即即装装入入无无菌菌带带垫垫圈圈的的冻冻存存管管中中，44暂暂存存立立即即(12h(12h内内) )送送达达实实验验室室，2020以以下下低低温温冷冷冻冻保保藏藏，需需长期保存的标本存于长期保存的标本存于7070冰箱。冰箱。第14页/共18页第十五页，共19页。n n（六）病例密切接触者的标本采集n n选择典型病例所在(suzi)的托幼机构、或所在(suzi)村，以新发病例密切接
15、触者为采样对象，采集单份粪便和血清标本。n n（七）健康对照的标本采集n n选择患儿发病所在(suzi)社区（村）的临近无病例的社区（村）或托幼机构。采集5岁以下的儿童单份粪便和血清标本。第15页/共18页第十六页，共19页。六、标本六、标本(biobn)采集注意事项采集注意事项n n在在手手足足口口病病的的实实验验室室诊诊断断中中，从从疱疱疹疹液液或或脑脑脊脊液液中中分分离离病病毒毒具具有有很很高高的的诊诊断断价价值值，但但对对于于不不同同血血清清型型的的肠肠道道病病毒毒，脑脑脊脊液液中中的的病病毒毒分分离离率率是是大大不不相相同同的的。用用于于采采集集咽咽拭拭子子的的无无菌菌拭拭子子要要放
16、放在在适适当当的的保保存存液液中中，如如维维持持液液或或生生理理盐盐水水，以以防防干干燥燥。用用于于分分子子生生物物学学诊诊断断的的标标本本采采集集与与病病毒毒分分离离标标本本的的采采集集方方法法一一样样。为为了了保保证证检检测测结结果果的的准准确确性性和和有有效效性性，标标本本应应在在病病例例发发病病后后尽尽早早采采集集，尽尽快快检检测测。不不能能立立即即检检测测的的标标本本应应冷冷冻冻保保存存。对对于于血血清清学学诊诊断断，急急性性期期血血清清应应该该(ynggi)(ynggi)在在发发病病后后尽尽早早采采集集，恢恢复复期血清在发病两周后采集。期血清在发病两周后采集。第16页/共18页第十七页，共19页。谢谢(xixie)大家第17页/共18页第十八页，共19页。内容(nirng)总结会计学。能引起手足口病的肠道病毒(bngd)有很多血清型，不同细胞系对不同病毒(bngd)的敏感性是有所不同的。为了提高检测速度，也为了辅助中和实验法进行毒株鉴定，最近很多实验室都使用分子生物学方法。对于难以分离到的肠道病毒(bngd)，分子生物学方法如RT-PCR是很有用的。标本应冷冻运输，运输时要附有必要的信息。用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部。谢谢大家第十九页，共19页。
