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1、一、显微鉴定的常用方法显微鉴定l组织鉴定:观察药材的切片或磨片,鉴别其组织特征,适合于完整的药材或粉末特征相似的同属药材的鉴别;l粉末鉴定:观察药材的粉末制片或解离片鉴别其细胞分子及内含物的特征,适合于破碎、粉末状药材或中成药的鉴别。l鉴定者:需具有植(动)物解剖的基本知识,掌握制片的基本技术。l鉴定时:根据观察的对象和目的,选择具有代表性的药材,制备不同的显微制片,依法进行鉴别。植物性生药 l根、根茎、茎藤、皮、叶等类,制作横切片观察,必要时制纵切片;l果实、种子类须作横切片及纵切片观察;l木类须观察横切、径向纵切及切向纵切三个面。 l鉴定叶、花、果实、种子、全草等类生药,可取叶片、萼片、花
2、冠、果皮、种皮制表面片,以观察各部位的表面(皮)特征。 l可将生药作粉末片进行观察。l可制解离组织片,以观察某些细胞组织,如纤维、石细胞、导管等。l对于中成药,可直接取目的物,选用不同试液制片,观察粉末的具有鉴别意义的组织、细胞及细胞后含物显微特征。 切片类型横切片或纵切片l切片方法l徒手切片:1020m,最为简便、快速,较为常用。l石蜡切片:便于教学用。l滑走切片:有专用机器切制。l冰冻切片:宜于科研,不利于教学,无法染色。l解离组织片:可用氢氧化钾法,使细胞间质溶解,细胞分离后观察目的物。l表面片:叶、花、果实、种皮等多用,可观察各部位的表皮特征。l粉末片:l水合氯醛透化片;l水合氯醛不透
3、化片;l醋酸甘油片或稀甘油片或水装片。l磨片:观察矿物药,相当于固定 片。目镜测微尺l观察细胞和后含物时,常需要测量其直径、长短(以m计),作为鉴定依据之一,测量可用目镜测微尺进行。l先将目镜测微尺用载台测微尺标化,计算出每一小格的m数,应用时将测得物的小格数,乘以每一小格的m数,即得所欲测定物的大小。 二、显微鉴定要点(一)根类生药1、根类生药的组织构造l双子叶植物: l多为次生构造,表层为木栓组织;l皮层一般已不存在;栓内层发达呈皮层样,称次生皮层;l韧皮部较发达;形成层环多明显;l木质部由导管、管胞、木纤维、木薄璧细胞及木射线组成;l中央大多无髓。l少数为初生构造,皮层宽,中柱小,木质部
4、束及韧皮部束数目少,相间排列,初生木质部呈星芒状,一般无髓。有异常构造(三生构造):l何首乌根的形成层环外方有数个复合维管束;l牛膝根有数轮同心排列的维管束(维管束环的束间形成层不明显);l商陆根有数轮同心排列的形成层环及其所形成的三生构造; l单子叶植物 l无木栓组织,其表皮细胞外壁有时增厚,也有表皮发育成数列根被细胞,壁木栓化或木化;l皮层宽广,占根的大部分,内皮层凯氏点通常明显;l中柱小,木质部束及韧皮部束数目多,相间排列成一圈。l中央有髓。 l根类生药常有分泌组织,大多分布于韧皮部,有乳管、树脂道、油室或油管、油细胞等。 l根类生药中常有各种草酸钙结晶,如簇晶、方晶、砂晶或针晶等,兼有
5、簇晶与针晶或砂晶与簇晶共生。l纤维、石细胞及淀粉粒、菊糖的有无及其形状亦应注意。2、根类粉末生药的观察l木栓组织:多见,注意木栓细胞表面观的形状、颜色、壁的厚度,有的可见木栓石细胞(如党参)。l导管:一般较粗,注意其类型、直径、导管分子的长度及末端壁的穿孔的形状及排列等。石细胞:应注意形状、大小、细胞壁增厚形态和程度、纹孔形状及大小、孔沟密度等特征。 纤维:观察时注意纤维的类型、形状、长短粗细等;注意纤维束的周围细胞是否含结晶形成晶鞘纤维。分泌组织:注意分泌细胞、分泌腔(室)、分泌管(道)及乳汁管等类型、形状、颜色、周围细胞的排列及形态等特征。结晶:大多为草酸钙结晶,偶有含硅质块的,应注意结晶
6、的类型、大小、排列及含晶细胞的形态等。淀粉粒:一般较小,应注意淀粉粒的多少、形状、类型、大小、脐点形状及位置、层纹等特征。 (二)根茎类生药 1、根茎类生药的组织构造 l根据中柱、维管束的类型,区别其为蕨类植物、双子叶植物或单子叶植物的根茎。l蕨类植物根茎:外层为厚壁性的表皮及下皮细胞,基本组织较发达。中柱的类型有:原生中柱、双韧管状中柱及网状中柱等。 l双子叶植物根茎:有木栓组织;皮层中有时可见根迹维管束;中柱维管束无限外韧型;中心有髓。少数种类有三生构造,髓部有复合维管束。l单子叶植物根茎:外层为表皮;皮层中有叶迹维管束;内皮层明显;中柱中散有多数有限外韧维管束,也有周木维管束(如菖蒲);
7、多含草酸钙针晶束,存在于黏液细胞中。 2、根茎类粉末生药的观察:l注意鳞茎、块茎、球茎常含多量较大的淀粉粒,其形状、大小、脐点、层纹以及复粒等特征是鉴别的重要依据;l鳞茎的鳞叶表皮常可察见气孔;l单子叶植物根茎较易见到环纹导管;l蕨类植物根茎一般只有管胞,无导管。 (三)茎藤类生药 1茎藤类生药的组织构造 l根据维管束的类型及排列:l双子叶植物茎l单子叶植物茎l双子叶植物茎:l草质茎:有表皮;皮层为初生皮层,有的可见内皮层;中柱鞘常分化为纤维或夹杂有石细胞;束中形成层明显;次生韧皮部大多成束状或板状,少数呈筒状;髓射线较宽;髓较大。 l木质茎:外层为木栓组织;皮层多为次生皮层;中柱鞘厚壁组织多
8、连续成环或断续;形成层环明显;次生韧皮部及次生木质部呈筒状结构;射线较窄,细胞壁常木化;髓较小。 l单子叶植物茎:l最外层为表皮,基本组织中散生多数有限外韧维管束,中央无髓。l裸子植物茎:l木质部主为管胞,通常无导管。 l2藤茎类粉末生药的观察l除了无叶肉组织外,其它组织一般都可能存在。 (四)皮类生药 1皮类生药的组织构造 l皮类生药:指裸子植物和双子叶植物的形成层以外的部分,以茎干皮的种类较多,根皮、枝皮的种类较少。l木栓组织:注意层数、颜色、细胞壁的增厚程度;l皮层及韧皮部:有厚壁组织存在,是为鉴定特征,要注意纤维和石细胞的形状、大小、壁的厚度、排列形式等。l皮类生药常有树脂道、油细胞、
9、乳管等分泌组织以及草酸钙结晶。l2皮类粉末生药的观察l主要有木栓细胞、纤维、石细胞、分泌组织及草酸钙结晶等,都有鉴别意义。 (五)木类生药 1木类生药的组织构造 l从三个切面观察组织构造:l横切面:年轮、木射线宽度(细胞列数)、密度,导管等;l径向纵切面:木射线的高度、长度及细胞类型等;l切向纵切面:观察木射线的形状(梭形或线状)、宽度、高度及类型(单列或多列),同时观察导管、木纤维等。 l、木类粉末生药的观察l以导管、韧型纤维、纤维管胞、木薄壁细胞的形态特征以及细胞后含物为主要鉴别点。 (六)叶类生药 1叶类生药的组织构造 l横切片观察:l表皮:要注意上、下表皮细胞的形状、大小、外壁、气孔、
10、角质层厚度,以及有无内含物,特别是毛茸的类型及其特征。l叶肉:注意栅栏组织细胞的形状、大小、层数及所占叶肉的比例和分布;l叶脉:观察维管组织的形状、类型以及周围或韧皮部外侧有无纤维层。2叶的表面制片 l主要观察表皮细胞、气孔及各种毛茸的全形。l注意上、下表皮细胞的形状,垂周壁及有无纹孔,角质层纹理,气孔的类型及副卫细胞数。l3叶类粉末生药的观察l与叶的表面制片基本一致,但毛茸多碎断,粉末中还可见到叶片的横断面及晶体。 (七)花类生药 1花类生药的显微鉴定 l根据不同的生药,将苞片、花萼、花冠、雄蕊或雌蕊等分别作表面制片,或将完整的花作表面制片观察。l苞片、花萼的构造,与叶相似。 2花类粉末生药
11、的观察l花粉粒:是鉴别花类生药的主要特征,注意其形状、大小、萌发孔形态、外壁构造及纹饰(理)等特征。l花粉囊内壁细胞,毛茸;l注意草酸钙结晶、分泌组织及色素细胞等。(八)果实类生药 1果实类生药的组织构造 l观察果皮的组织特征,由子房壁分化和增大形成的真果的果皮,可分为:l外果皮:相当于叶的表皮,为1列表皮细胞,需注意的问题同叶类。l中果皮:相当于叶肉,为多列薄壁细胞,有细小维管束散布。l内果皮:相当于叶的表皮,变异较大,有的为1层薄壁细胞,有的散在石细胞,有的为结晶细胞层,也有分化为纤维层。2果实类粉末生药的观察l外果皮细胞的形状、垂周壁的增厚状况、角质层纹理以及非腺毛、腺毛的有无及中果皮、
12、内果皮的细胞形态等特征。 (九)种子类生药 1种子类生药的组织构造l重点观察l种皮的构造,有的种皮只有1层细胞,多数的种皮由数种不同的细胞组织构成;l种子的外胚乳、内胚乳或子叶细胞的形状、细胞壁增厚状况;l所含脂肪油、糊粉粒或淀粉粒等。2种子类粉末生药的观察l注意种皮的表面观及断面观形态特征;l注意种皮支持细胞、油细胞、色素细胞的有无和形态;l有无毛茸、草酸钙结晶、淀粉粒、分泌组织碎片等。 (十)全草类生药 l大多为草本植物的地上部分,少数为带根的全株。l全草类包括了草本植物药的各个部位,其显微鉴定可参照以上各类生药的鉴别特征。 (十一)菌类生药 l大多以子实体或菌核的形式入药。l观察时应注意
13、菌丝的形状、有无分枝、颜色、大小;l团块、孢子的形态;l结晶的有无及形态、大小与类型;l应无淀粉粒和高等植物的显微特征出现。(十二)动物类生药 因药用部位不同,可分为:l动物体:应注意皮肤碎片细胞的形状与色素颗粒的颜色;刚毛的形态、大小及颜色;体壁碎片、骨碎片等特征。 l分泌物、病理产物:注意团块的颜色及其包埋物的性质特征,表皮脱落组织,毛茸及其它细胞的形状、大小、颜色等特征,如麝香、牛黄等。 l角甲类:l注意碎块的形状、颜色、横断面和纵断面观的形态特征及色素颗粒颜色,如羚羊角等。(十三)矿物类生药 主要应注意:l晶体的大小、直径或长径;晶形的棱角、锐角或钝角;l色泽、透明度、表面纹理及方向、
14、光洁度;l偏光显微镜下的特征,如朱砂、石膏等。 (十四)中成药显微鉴别要点 中药丸散锭丹等成方制剂,大多直接用各种粉末生药及生药浸膏配制而成。 l显微鉴定是鉴定中成药丸散锭丹和制定品质标志的科学方法之一,对保证中成药的质量,有一定的科学意义和应用价值。 生药的粉末鉴定研究对于中成药的科学鉴定有重要作用。 l1了解组方生药、剂型和制法 l熟悉处方中组成药物的显微特征是中成药鉴别的基础。l中成药的显微鉴别要比中药材粉末鉴别复杂得多,制备方法及辅料等会产生一定的影响和干扰。 l2. 根据处方明确专属特征 l中成药显微鉴定,一般根据处方,对各组成生药粉末特征作分析比较,选取各药具专属性的显微特征,作为
15、鉴别依据。l六味地黄丸是由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味药组成,每味药都有数个显微特征,大部分特征又有横向类别的交叉。选取六味药各具专属性的显微特征,这样六味药物均可鉴别。 三、扫描电镜等的应用 1偏振光显微镜(偏光显微镜 )l在偏光显微镜下,生药的鉴别要素在色彩上表现出一定的变化,可作为大多数植物、动物、矿物类生药的显微鉴别依据之一。 l例如:l淀粉:在偏光显微镜下呈现黑十字现象,不同类型的淀粉其黑十字形象不同;l草酸钙结晶:类型多样,在偏光显微镜下呈不同的多彩颜色;l石细胞:在植物体内广泛分布,其细胞壁在偏光显微镜下呈亮黄色或亮橙黄色;l纤维、导管、矿物类物质:在偏光显微镜下则呈强弱不同的色彩;l动物的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也呈现出不同的偏光特性。 l2扫描电子显微镜(扫描电镜)l扫描电镜分辨率高,放大倍率5倍10万倍,能使物质的图像呈现显著的表面立体结构(三维空间)的特征,观察的样品制备操作又较简易,所以在生药鉴定,特别在同科属种间的表面结构的鉴别比较上,成为一种新的手段。