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1、抗肿瘤药的药效Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望2 抗肿瘤新药的主要抗肿瘤新药的主要 药效学和毒理学研究药效学和毒理学研究李李李李李李 波波波波波波中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所国家药物安全评价监测中心国家药物安全评价监测中心国家药物安全评价监测中心国家药物安全评价监测中心国家药物安全评价监测中心国家药物安全评价监测中心3 新药的开发过程新药的开发过程$600 mill
2、ions6 to 12 YearsDrug DiscoveryNon-ClinicalDevelopment Clinical TrialsPhase IIIPhase IIPhase IMarket LaunchCSFHDPDSubmissionamToxicology/ADME4抗肿瘤药物分类(1)细胞毒类药物细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等(2) 生物反应调节剂生物反应调节剂(biological response modifier)(3) 肿
3、瘤耐药逆转剂肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)(4) 肿瘤治疗增敏剂肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)(5) 肿瘤血管生成抑制剂肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)(6) 分化诱导剂分化诱导剂(differentiation inducing agent)(7)生长因子抑制剂生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)(8)反义寡核苷酸反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 5抗肿瘤药物药效学n包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验n评价药物的抗癌
4、活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。nI类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。 6体外抗肿瘤活性试验体外抗肿瘤活性试验试验目的 n 对候选化合物进行初步筛选n了解候选化合物的抗瘤谱n为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等 7 试验方法试验方法n选用选用10-15株人癌细胞株株人癌细胞株n根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养按常规细胞培养法进行培养n推荐使用四氮唑盐推荐使用四氮唑盐MTT还原法、还原法、XTT 还原法、磺酰罗还原法、磺酰罗丹明丹明B(SRB)染色
5、法、或染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。测定药物的抗癌作用。n药物与细胞共培养时间一般为药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞小时，贴壁细胞需先贴壁需先贴壁24 小时后再给药。小时后再给药。n试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。 8测定细胞生长和存活方法测定细胞生长和存活方法nMTT法法 和和 XTT法法 是是 代代 谢谢 测测 定定 法法 ， 没没 有有 颜颜 色色 的的tetrazolium salt (MT
6、T 和和XTT)被被细细胞胞还还原原，产产生生具具有颜色的与活细胞数成比例的有颜色的与活细胞数成比例的formazan， 比色测定。比色测定。n为了简化为了简化MTT solubilization步骤，发展了步骤，发展了XTT tetrazolium测定方法，测定方法，MTT还原产生不溶性还原产生不溶性formazan ,比色测定前溶解于比色测定前溶解于DMSO，XTT试剂可被试剂可被活细胞直接代谢成水溶性活细胞直接代谢成水溶性formazan，不需进一步处理，不需进一步处理培养细胞，便可以立即读取光密度。方便简单，其缺培养细胞，便可以立即读取光密度。方便简单，其缺点是可产生相对比较高的背景数
7、据，同时也具有点是可产生相对比较高的背景数据，同时也具有MTT的不稳定终点特性。的不稳定终点特性。 9测定细胞生长和存活方法测定细胞生长和存活方法n对对系系列列蛋蛋白白质质染染色色剂剂进进行行实实验验，发发现现磺磺酰酰 罗罗 丹丹 明明 B （ sulforhodamine B）(SRB)可可替替代代tetrazolium assay方方法法， 具具有有最最好好的的燃燃料料结结合合强强度度，信信噪噪比比率率，并并且且和和细细胞胞数数具具有有很很好好的的线线形形关关系系，SRB是是一一亮亮粉粉色色染染料料，在在稀稀醋醋酸酸中中，可可结结合合于于TCA固固定定细细胞胞的的碱碱性性氨氨基基酸酸上上。
8、具有十分稳定的终点具有十分稳定的终点 。10评价标准评价标准n以以同同一一样样品品不不同同浓浓度度对对肿肿瘤瘤细细胞胞抑抑制制率率作图可得到剂量效应曲线作图可得到剂量效应曲线n采采用用Logit法法计计算算半半数数有有效效浓浓度度(IC50值值或或EC50值值)。n体外试验至少重复一次。体外试验至少重复一次。11体内抗肿瘤试验体内抗肿瘤试验n体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型n动物肿瘤移植模型动物肿瘤移植模型n人类肿瘤裸鼠移植瘤模型人类肿瘤裸鼠移植瘤模型n重复试验重复试验 鼓鼓励励使使用用人人类类肿肿瘤瘤裸裸鼠鼠移移植植瘤瘤模模型型和和多多种种类类的的
9、移移植植瘤瘤模模型型、原原位位接接种种模模型型和和中中空空纤纤维维测测定定(hollow-fiber assay)等等 方法。方法。12动物动物n动物要求健康，符合等级动物要求，有动物要求健康，符合等级动物要求，有实验动物合格证。实验动物合格证。n雌雄均可，但同一批实验中动物性别必雌雄均可，但同一批实验中动物性别必须相同。须相同。n小鼠鼠龄为小鼠鼠龄为5-6周，体重为周，体重为18-22克。克。n评价同一物质的活性时，不同批次的实评价同一物质的活性时，不同批次的实验必须采用同一品系的小鼠。验必须采用同一品系的小鼠。 13肿瘤模型肿瘤模型n小鼠肿瘤模型小鼠肿瘤模型 淋巴细胞白血病腹水瘤淋巴细胞白
10、血病腹水瘤L1210和和P388、白血、白血病病L-615、宫颈癌、宫颈癌U14、肝癌、肝癌H22、Lewis肺肺癌、黑色素瘤癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤、网织细胞瘤M5076、肠、肠癌癌26、肠腺癌、肠腺癌38、乳腺癌、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水、艾氏腹水瘤（瘤（EAC）、肉瘤）、肉瘤-180等，以及各种小鼠肿等，以及各种小鼠肿瘤的亚型和耐药株等。瘤的亚型和耐药株等。 14肿瘤模型肿瘤模型n人类肿瘤裸鼠移植模型人类肿瘤裸鼠移植模型 n应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗人类肿瘤裸鼠移植试验。人类肿瘤裸鼠移植试验。 15缺点缺点部分模型很难构建，部分模型很难构
11、建，皮下抑制肿瘤很少转皮下抑制肿瘤很少转移，生存时间不适合移，生存时间不适合作为试验终点作为试验终点优点优点n可预测细胞毒类可预测细胞毒类化合物的活性化合物的活性n有助于筛选化合有助于筛选化合物，为临床用药物，为临床用药程序和联合用药程序和联合用药方案提供参考方案提供参考n可用于研究获得可用于研究获得性药物抗性性药物抗性人癌移植模型人癌移植模型16人癌人癌移植移植模型模型NCI回顾性研究：回顾性研究：多个人癌移植模型试验的阳性结果可在一定多个人癌移植模型试验的阳性结果可在一定程度上提示临床有效性程度上提示临床有效性非小细胞肺癌移植模型具有临床相关性非小细胞肺癌移植模型具有临床相关性 通常移植临
12、床拟治疗的肿瘤细胞通常移植临床拟治疗的肿瘤细胞17人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点 1.移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立，移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立，对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。2.移植瘤复苏后一般应传移植瘤复苏后一般应传2-3代后再用于体内代后再用于体内抗肿瘤试验。抗肿瘤试验。3.对模型生长情况应全面了解，尤其是生长对模型生长情况应全面了解，尤其是生长快的模型快的模型4.为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性，为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性，复苏后移植瘤体内传代应少于复苏后移植瘤体内传代应少于
13、15-20代代 18人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点n细胞要求达到最低质量保证标准（支原体、细胞要求达到最低质量保证标准（支原体、MAP、人类同功酶、核型和体内致瘤性的检查）、人类同功酶、核型和体内致瘤性的检查）、适应同一培养液以及具有可重复的生长和药、适应同一培养液以及具有可重复的生长和药物敏感特性。制备大量的保种细胞，并冷冻保物敏感特性。制备大量的保种细胞，并冷冻保存，用于药物筛选过程中细胞经存，用于药物筛选过程中细胞经20代传代后的代传代后的替换。所有细胞在筛选过程中均要进行详细特替换。所有细胞在筛选过程中均要进行详细特性确认，如组织病理、超微结构、免
14、疫细胞化性确认，如组织病理、超微结构、免疫细胞化学，以确定和证明组织和肿瘤类型。学，以确定和证明组织和肿瘤类型。 19肿瘤模型产生免疫原性的表现q近近交交系系动动物物的的遗遗传传特特性性发发生生漂漂移移，对对肿肿瘤瘤模模型型产生免疫性。产生免疫性。n产生免疫性的表现有：产生免疫性的表现有：n1.在在传传代代和和对对照照组组中中出出现现肿肿瘤瘤消消退退，假假如如肿肿瘤瘤出出现现溃溃疡疡、消消退退和和再再生生长长，可可能能是是感感染染造造成成，如如果果是是溃溃疡疡、消消退退，并并且且不不再再生生长长，通通常常是是由由于于免免疫疫原原性性引引起起。如如果果用用60mg的的同同种种肿肿瘤瘤攻攻击击动动
15、物物，结结果果没没有有生生长长，基基本本可可以以肯肯定定产产生生了了免疫性。免疫性。20肿瘤模型产生免疫原性的表现2.在在化化疗疗实实验验中中有有大大于于2个个剂剂量量水水平平的的治治愈愈时，应怀疑有免疫原性在起作用。时，应怀疑有免疫原性在起作用。3.在在生生命命延延长长期期实实验验中中，存存活活动动物物的的生生命命延延长长增增长长百百分分率率应应小小于于250%，如如果果大大于于250%应怀疑有免疫原性在起作用。应怀疑有免疫原性在起作用。4.缺缺乏乏明明显显的的侵侵袭袭性性和和转转移移，可可能能是是由由于于肿肿瘤瘤的的恶恶性性程程度度比比较较低低，也也可可能能是是由由于于免疫性问题造成。免疫
16、性问题造成。21肿瘤模型产生免疫原性的表现n5.对药物反应性的改变表明免疫原性的形成。对药物反应性的改变表明免疫原性的形成。n6.肿肿瘤瘤在在后后期期阶阶段段比比早早期期阶阶段段的的反反应应更更好好，肯肯定定表表明明是是免免疫疫性性参参与与，对对于于均均质质性性的的肿肿瘤瘤模模型型而而言言，开开始始给给药药的的时时间间越越早早，肿肿瘤瘤反反应应越越好好，免疫反应要经对抗原的识别和处理后才能产生。免疫反应要经对抗原的识别和处理后才能产生。n给给予予小小鼠鼠两两次次用用X-射射线线杀杀死死的的肿肿瘤瘤细细胞胞，间间隔隔10天天，再再10天天后后，给给处处理理和和没没有有处处理理的的小小鼠鼠移移植植
17、活活的的肿肿瘤瘤细细胞胞，检检测测免免疫疫性性的的产产生生是是一一种种很好方法，费时、费力。很好方法，费时、费力。22试验过程试验过程肿瘤接种方法肿瘤接种方法n皮下接种皮下接种n腹腔接种腹腔接种n原位接种原位接种 23皮下肿瘤模型皮下肿瘤模型n选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠，颈椎选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成1.5 mm3左右，左右，用套管针接种于动物一侧或双侧腋
18、窝皮下；或用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下；或制成细胞悬液，然后按一定比例加入无菌生理制成细胞悬液，然后按一定比例加入无菌生理盐水，一般每只小鼠接种肿瘤细胞数量为（盐水，一般每只小鼠接种肿瘤细胞数量为（1-5）106。 24腹水瘤模型n无无菌菌条条件件下下，消消毒毒动动物物皮皮肤肤，吸吸取取生生长长良良好好的的动动物物腹腹水水，以以生生理理盐盐水水按按一一定定比比例例稀稀释释后后接接种种于于动动物物腹腹腔腔，接接种种细细胞胞数数量一般为（量一般为（1-5）106。25原位接种模型n原位接种是指将来源于某脏器的肿瘤接种在动原位接种是指将来源于某脏器的肿瘤接种在动物的某脏器，如将人肝癌接种在裸
19、小鼠的肝脏。物的某脏器，如将人肝癌接种在裸小鼠的肝脏。原位接种不是常规的方法，但有其优越性，是原位接种不是常规的方法，但有其优越性，是鼓励使用的方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳鼓励使用的方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳腺、颅内等原位接种方法腺、颅内等原位接种方法 26实验设计实验设计n试试验验设设阴阴性性对对照照组组、阳阳性性对对照照组组、治治疗疗组。组。n治治疗疗组组设设高高、中中、低低三三个个剂剂量量组组。小小鼠鼠肿肿瘤瘤和和腹腹水水瘤瘤接接种种后后次次日日将将动动物物随随机机分分组组，裸裸鼠鼠移移植植瘤瘤用用游游标标卡卡尺尺测测量量移移植植瘤瘤直直径径，待待肿肿瘤瘤生生长长至至100300m
20、m3后后将动物随机分组。将动物随机分组。n动物数普通小鼠每组动物数普通小鼠每组10只，裸鼠只，裸鼠6只。只。 27剂量设置剂量设置n治疗组设高、中、低剂量治疗组，一般按治疗组设高、中、低剂量治疗组，一般按4:2:1设置，高剂量使用最大耐受量或设置，高剂量使用最大耐受量或LD10的的剂量。剂量。n阴性对照组给予相应的溶剂；阴性对照组给予相应的溶剂；n阳性对照药选用对该动物敏感的、临床应用的阳性对照药选用对该动物敏感的、临床应用的抗肿瘤药物，抗肿瘤药物，n如受试物为一抗癌药物的衍生物或类似物时，如受试物为一抗癌药物的衍生物或类似物时，必须选用该抗癌药物作为阳性对照药。必须选用该抗癌药物作为阳性对照
21、药。 28阳性对照药选择原则阳性对照药选择原则n疗效确切疗效确切n与被试物质化学结构类似与被试物质化学结构类似n与被试物质有类似的作用机理。与被试物质有类似的作用机理。29药物配制药物配制n溶溶于于水水的的药药物物，用用生生理理盐盐水水或或蒸蒸馏馏水水配配制制；如如用用酸酸、碱碱溶溶解解者者，可可先先用用小小量量酸酸(0.1-0.5N HCl)或或碱碱(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶溶解解，调调节节pH在在4.5-9.0的的范范围围内内。用用乙乙醇醇、丙丙二二醇醇、吐吐温温80、DMSO助助溶溶的的药药物物，或或用用吐吐温温60、吐吐温温80、2-3%淀淀粉粉、0.5%羧羧甲甲基基纤
22、纤维维素素制制成成混混悬悬液液的的药药物物，可可腹腹腔腔注注射射或或口口服服，但但必必须须设设相相同同浓浓度度的的溶溶剂剂对对照照组组。用用注注射射用用花花生生油油配配制的溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。制的溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。30给药方案和给药途径给药方案和给药途径n分分组组当当日日开开始始给给药药，根根据据不不同同药药物物的的代代谢谢动动力力学和毒性反应等确定给药方案。学和毒性反应等确定给药方案。n给药途径应与推荐临床用药的途径相同。给药途径应与推荐临床用药的途径相同。 n给给药药次次数数较较多多，或或被被试试物物质质溶溶解解性性较较差差，静静脉脉给给药药有有困困难难时时，
23、可可考考虑虑使使用用腹腹腔腔给给药药，但但在在评评价药效时要注意这两种给药途径是有差别的。价药效时要注意这两种给药途径是有差别的。n 可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药途径。可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药途径。n腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径。31评价标准评价标准 腹水瘤模型腹水瘤模型n接种给药后，观察和记录动物死亡时间，接种给药后，观察和记录动物死亡时间，计算生存天数。如阴性对照组计算生存天数。如阴性对照组20%动物动物存活时间超过存活时间超过4周，表明腹水瘤生长不良，周，表明腹水瘤生长不良，实验作废实验作废。32评价标准评价标准 裸鼠移植瘤模型裸鼠
24、移植瘤模型n推荐使用测量瘤径的方法，动态观察受推荐使用测量瘤径的方法，动态观察受试物抗肿瘤的效应。试物抗肿瘤的效应。n肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定，一般为每周情况而定，一般为每周2-3次次,每次测量每次测量同时还需称鼠重同时还需称鼠重。33评价标准评价标准n肿瘤体积肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：的计算公式为：V = 1/2ab2 或或/6abcn其中其中a、b、c分别表示长宽高。两公式的相关分别表示长宽高。两公式的相关性极好，可采用任一公式。性极好，可采用任一公式。n根据测量结果计算出相对肿瘤体积（根据测量结果计算出相对
25、肿瘤体积（relative tumor volume，RTV），）， RTV = Vt / V0。n其中其中V0为分笼给药时为分笼给药时(即即d0)测量所得肿瘤体积，测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积为每一次测量时的肿瘤体积。34评价标准n抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C（%） TRTVT/C % = 100% CRTVnTRTV：治疗组：治疗组RTV ；CRTV：阴性对照组：阴性对照组RTV。n疗疗效效评评价价标标准准：T/C % 60 %为为无无效效；T/C % 60（42？）%，并经统计学处理，并经统计学处理P0.05为有效。为有效。
26、 35评价标准（小鼠肿瘤模型）n生生长长较较慢慢小小鼠鼠肿肿瘤瘤采采用用与与裸裸鼠鼠移移植植瘤瘤同同样样的的测测量瘤径的评价方法。量瘤径的评价方法。n生生长长较较快快小小鼠鼠肿肿瘤瘤可可采采用用称称瘤瘤重重的的方方法法评评价价。试试验验结结束束后后处处死死动动物物，称称体体重重，解解剖剖剥剥离离瘤瘤块块，称称瘤瘤重重。阴阴性性对对照照组组肿肿瘤瘤平平均均瘤瘤重重小小于于1克克，或或20%肿肿瘤瘤重重量量小小于于400毫毫克克，表表示示肿肿瘤瘤生生长不良，试验作废。长不良，试验作废。36评价标准（小鼠肿瘤模型）n疗效评价公式：疗效评价公式： 给药组平均瘤重给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重阴性对
27、照组平均瘤重肿瘤生长抑制率肿瘤生长抑制率 = 100% 阴性对照组平均瘤重阴性对照组平均瘤重 n评价标准评价标准 肿瘤生长抑制率肿瘤生长抑制率40%为无效；肿瘤生长抑制率为无效；肿瘤生长抑制率40%，并经统计学处理并经统计学处理P50%n细细胞胞形形态态学学观观察察：可可在在光光学学显显微微镜镜与与电电镜镜下下观观察察候候选选化化合合物物作作用用后后细细胞胞的的形形态态学学变变化化，对对照照组组的的早早幼幼粒粒细细胞胞应应90%-95%，候候选选化化合合物物组组细细胞胞分分化化，成成熟熟粒粒细胞占比例越高，说明该化合物的分化效果越好细胞占比例越高，说明该化合物的分化效果越好 55分化诱导剂n实
28、体瘤细胞的分化诱导实体瘤细胞的分化诱导 n常用细胞株、试验方法及评价标准常用细胞株、试验方法及评价标准 ： 人肝癌人肝癌HepG2、SMMC7721 主主要要测测定定细细胞胞的的甲甲胎胎蛋蛋白白(AFP)、白白蛋蛋白白含含量量，-谷谷氨氨酸酸转转移移酶酶(-GT)、酪酪氨氨酸酸转转氨氨酶酶 ( TAT ) 活性及观察细胞形态。活性及观察细胞形态。 分分化化细细胞胞AFP含含量量、TAT和和-GT活活性性明明显显降降低低，白蛋白含量增加，细胞胞质增加、核缩小。白蛋白含量增加，细胞胞质增加、核缩小。56分化诱导剂n体内试验体内试验 n常用人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试验、常用人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试
29、验、小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞裸小鼠移植瘤模型等。裸小鼠移植瘤模型等。n可选两种模型，根据肿瘤鼠生存时间、可选两种模型，根据肿瘤鼠生存时间、肿瘤的体积及形态变化，观察分化诱导肿瘤的体积及形态变化，观察分化诱导效果。效果。n重复试验一次重复试验一次 57肿瘤治疗增敏剂n增增敏敏剂剂主主要要是是指指放放射射治治疗疗增增敏敏剂剂，能能增增加加临临床床上上恶恶性性肿肿瘤瘤放放射射治治疗疗或或其其它它治治疗疗的疗效及降低治疗后的复发率。的疗效及降低治疗后的复发率。n药效学试验分为体外和体内试验：药效学试验分为体外和体内试验：58肿瘤治疗增敏剂n体外试验体外试验
30、n分别选择对放射、化疗药物具有中、低分别选择对放射、化疗药物具有中、低度敏感的人肿瘤细胞株，度敏感的人肿瘤细胞株，n采用采用MTT、SRB或细胞集落形成方法进或细胞集落形成方法进行化合物的细胞毒性试验，以行化合物的细胞毒性试验，以IC50值作值作为评价指标。为评价指标。 59肿瘤治疗增敏剂n体内试验体内试验 n选用对射线及化疗药物敏感性较小的三种实体选用对射线及化疗药物敏感性较小的三种实体瘤模型进行试验，其中至少有一种人癌裸鼠移瘤模型进行试验，其中至少有一种人癌裸鼠移植瘤模型。植瘤模型。 n由强致癌物或病毒等因素诱发的肿瘤，或者不由强致癌物或病毒等因素诱发的肿瘤，或者不是在同一品系动物身上移植
31、传代的肿瘤往往会是在同一品系动物身上移植传代的肿瘤往往会出现免疫反应，因此都不能用于肿瘤治疗增敏出现免疫反应，因此都不能用于肿瘤治疗增敏剂研究。剂研究。n疗效评价可参照体内抗肿瘤试验疗效评价可参照体内抗肿瘤试验 60 抗肿瘤药物的安全性评价抗肿瘤药物的安全性评价61非临床安全性评价的目的非临床安全性评价的目的药物筛选和临床研究间的过渡药物筛选和临床研究间的过渡n预测药物在人体中的安全性预测药物在人体中的安全性n预测药物的毒性靶器官和可逆性预测药物的毒性靶器官和可逆性n判断药物是否可进入临床研究判断药物是否可进入临床研究n为为 I I 期临床研究的起始剂量和临床研究方案提期临床研究的起始剂量和临
32、床研究方案提供参考供参考62细胞毒类抗肿瘤药毒性特点细胞毒类抗肿瘤药毒性特点n骨髓抑制：骨髓抑制：5-FU，Taxoln肝脏毒性肝脏毒性: 甲氨喋呤，甲氨喋呤，6-6-巯基嘌呤巯基嘌呤n胃肠道毒性：胃肠道毒性： 5-FU，长春新碱，长春新碱n肾毒性：顺铂，甲氨喋呤肾毒性：顺铂，甲氨喋呤n心脏毒性：白消安，阿霉素心脏毒性：白消安，阿霉素n呼吸系统毒性：甲氨喋呤，环膦酰胺呼吸系统毒性：甲氨喋呤，环膦酰胺n神经毒性：神经毒性：5-FU，Taxol举例：举例：63安全性评价的主要内容安全性评价的主要内容n安全性药理学试验安全性药理学试验n急性毒性试验急性毒性试验n长期给药毒性试验长期给药毒性试验n遗传
33、毒性试验遗传毒性试验n生殖毒性试验生殖毒性试验n致癌性试验致癌性试验64安全性药理学试验安全性药理学试验 新作用机制的细胞毒类抗肿瘤药应进行安全性新作用机制的细胞毒类抗肿瘤药应进行安全性药理学试验药理学试验（ICH）65 试验设计关注点：试验设计关注点：n一般应测定啮齿类和非啮齿类动物的一般应测定啮齿类和非啮齿类动物的MTD或啮齿类或啮齿类动物的动物的STD10n应采用临床拟用给药途径应采用临床拟用给药途径n尽量采用临床拟用剂型尽量采用临床拟用剂型n试验恢复期一般应为试验恢复期一般应为24周周nFDA：至少一种动物应进行一般行为、摄食量血液：至少一种动物应进行一般行为、摄食量血液学、血液生化学
34、和组织病理学检查学、血液生化学和组织病理学检查n建议测定最大耐受剂量下的建议测定最大耐受剂量下的AUC 急性毒性试验急性毒性试验66 推算临床起始剂量（按体表面积计算）推算临床起始剂量（按体表面积计算）：nEMEA: 以最敏感动物的以最敏感动物的MTD的的1/10为为I期临床研期临床研究的起始剂量究的起始剂量nFDA: （1）若若啮啮齿齿类类动动物物STD10的的1/10不不引引起起非非啮啮齿齿类类动动物物产产生生毒毒性性，以以啮啮齿齿类类动动物物STD10的的1/10作作为为I期期临临床床研研究究的的起起始始剂剂量量；（2）若若引引起起毒毒性性，以以不不引引起起非非啮啮齿齿类类动动物物出出现
35、现严严重重、不不可可逆逆毒毒性的剂量的性的剂量的1/6作为作为I期临床研究的起始剂量期临床研究的起始剂量n有文献（有文献（1986年）：年）：1/10LD10为为I期临床研究的期临床研究的起始剂量起始剂量急性毒性试验急性毒性试验67n叶酸抑制剂不宜使用啮齿类动物叶酸抑制剂不宜使用啮齿类动物n铂类化合物有时不宜使用犬铂类化合物有时不宜使用犬急性毒性急性毒性试验试验相关动物：相关动物：68n采用啮齿类和非啮齿类动物采用啮齿类和非啮齿类动物n给药频率尽量与临床一致给药频率尽量与临床一致n给药期限为给药期限为4周（周（12个治疗周期）的长期个治疗周期）的长期毒性研究可支持药物进行毒性研究可支持药物进行
36、I期和等周期的期和等周期的II期期临床试验临床试验n给药期限一般最长不超过给药期限一般最长不超过6个月个月n恢复期多为恢复期多为68周周长期毒性试验长期毒性试验69遗传毒性、生殖毒性和致癌性试验遗传毒性、生殖毒性和致癌性试验一般不需要在临床研究前完成遗传毒性试验一般不需要在临床研究前完成遗传毒性试验一般不需要进行致癌性试验一般不需要进行致癌性试验不一定要求上市前提供生殖毒性试验资料不一定要求上市前提供生殖毒性试验资料70细胞毒抗肿瘤药非临床研究技术要求的相关文献细胞毒抗肿瘤药非临床研究技术要求的相关文献n美国美国（1）The current toxicology protocol of the
37、 National Cancer Institute (Lowe MC., et al, Fundamentals of Cancer Chemotherapy, McGraw-Hill, 1984)（2）Regulatory Considerations for Preclinical developmental of anticancer drugs (DeGeorge JJ., et al, Cancer Chemother Pharmacol, 1998)n欧盟欧盟 Note for guidance on the preclinical evaluation of anticance
38、r medicinal products CPMP/SWP/997/96 (effective: Jan 99)n中国中国 细胞毒类抗肿瘤药药效学和毒理学研究技术指导原则细胞毒类抗肿瘤药药效学和毒理学研究技术指导原则 卫生部卫生部/1993.7/1993.7n日本日本正制定指导原则草案，现有“关于支持抗癌药临床试验和上市注册的毒关于支持抗癌药临床试验和上市注册的毒性试验的问题和解答性试验的问题和解答”/厚生劳动省/2004.871技术要求比较（技术要求比较（1）毒理研究内容毒理研究内容美国美国欧盟欧盟日本日本一般药理一般药理急性毒性急性毒性-Rodent-Non Rodent 长期毒性长期毒性
39、（较短给药期）（较短给药期）a a-Rodent-Non Rodent长期毒性长期毒性- Rodent (6-monthb)-Non Rodent (6-monthb)-Non Rodent (9-month)ICH-Phase I（新机制）Phase IPhase IPhase I/IIPhase I/IIPhase III/注册Phase III/注册不要求ICH-Phase I（新机制）Phase IPhase IPhase IaPhase IaPhase II/III/注册Phase II/III/注册不要求ICH-Phase I（新机制）Phase IPhase I同ICH同ICH同
40、ICH-可小于9个月a 2weeksto1monthor1to2cyclesbmaximumof6monthsor6to8cycles72技术要求比较（技术要求比较（2）毒理研究内容毒理研究内容美国美国欧盟欧盟日本日本遗传毒性遗传毒性致癌性致癌性生殖毒性生殖毒性-Seg I-Seg II-Seg III注册不要求不要求Phase III/注册不要求 Phase III/注册不要求不要求推 荐不要求Phase II不要求Phase I ？Phase I ？Phase III ？73小小 结结n由于恶性肿瘤危及生命和细胞毒抗肿瘤由于恶性肿瘤危及生命和细胞毒抗肿瘤药性质，其非临床评价具有鲜明的特点药
41、性质，其非临床评价具有鲜明的特点n其非临床研究可在较大程度上预测临床其非临床研究可在较大程度上预测临床不良反应及其可逆性不良反应及其可逆性n非非临临床床安安全全性性研研究究对对确确定定安安全全、有有效效的的临临床床起起始始剂剂量量（通通过过MTD MTD 或或STDSTD1010) )和和临临床床试验方案有重要的作用试验方案有重要的作用n应应从从利利弊弊权权衡衡角角度度来来把把握握与与其其研研究究和和评评价的灵活性价的灵活性74从肿瘤患者利益（快、挽救生命）出发，结合临床研究阶段，从肿瘤患者利益（快、挽救生命）出发，结合临床研究阶段，权衡其有效性（权衡其有效性（ ）和安全性（）和安全性（ ）（
42、利和弊），）（利和弊），决策非临床研究内容、阶段性，判断是否可进入各期临床研究决策非临床研究内容、阶段性，判断是否可进入各期临床研究利弊权衡利弊权衡- -有效性和安全性联系n亲，福冠堂专注于抗癌抗肿瘤近十年，曾经帮助过无数癌症患者走上康复之路，患者和家属的信赖就是我们最大的动力！n目前店内所有药物均特价优惠中，买五送一，还支持货到付款哦！n康复热线：020-8769 4851 或020-8765 1353（莫小姐）n康复QQ：451311811n网址：http:/n实体店地址：广州市越秀区先烈南路23号之A1铺n癌症须要及时治疗，切莫等之又等，看了这个又看那个，错过了治疗的好时机，那就为时晚矣！现在赶快拿起电话拨打我们的康复热线吧！
