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1、实验实验二二 产胞外淀粉酶细菌产胞外淀粉酶细菌的分离筛选的分离筛选第二模块第二模块 功能微生物的筛选和选育功能微生物的筛选和选育实验目的1.掌握固体平板的配制（倒平板）；2.了解单菌落划线分离菌种技术、进一步掌握稀释涂布分离菌种技术；3.掌握分离、鉴定产淀粉酶细菌的方法（水解圈）；实验原理 在自然界的土壤中存在产淀粉酶的细菌，通过土样悬液稀释涂布和平板划线分离于含有淀粉的培养基上，诱导产生淀粉酶。产淀粉酶的细菌可在菌落周围水解淀粉生成小分子界限糊精、麦芽糖和葡萄糖，滴加碘液，未水解的淀粉呈蓝色，水解圈无色，在淀粉平板上，产淀粉酶菌落周围会出现水解圈。实验原理透明圈（H）与菌落直径（C）比值的大
2、小在一定程度上反映了菌株产生淀粉酶的能力：H/CH/C值值越大，表明分泌的淀粉酶越多，水解淀粉的能力也就越强。实验材料l样品：新鲜土壤样品（同学自备）。l培养基：淀粉培养基。l无菌水：带有玻璃珠装有20mL无菌水三角瓶。l其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌离心管、电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴。实验步骤一、制备淀粉培养基平板：一、制备淀粉培养基平板：每组制5块淀粉培养基平板。具体制法为：倒入融化好的淀粉培养基（温度为不烫手为宜）并轻轻摇晃混匀，置于桌面冷却平板。在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 二、制备土壤稀释液：二、制备土壤稀释液：称取土壤2g，放入18mL带有玻璃
3、珠的无菌水三角瓶中，振荡5min，即为稀释101的土壤悬液。然后在离心管中依次稀释至103、104稀释度。实验步骤三、稀释涂布：三、稀释涂布：无菌操作法分别吸取103、104土壤稀释液各0.1mL，分别加在已制好的2块淀粉平板培养基上；用玻璃涂布棒将稀释液在培养机上充分混匀铺平，静置5min；倒置于30恒温箱培养24小时。四、划线分离四、划线分离将101土壤稀释液用接种环挑取一环，在一块淀粉培养基上进行划线分离（每人一块）；倒置于房间30恒温箱培养24小时。实验步骤平板划线的操作方法实验步骤五、挑选单菌落转接划线五、挑选单菌落转接划线24小时后，在之前稀释涂布和划线的3块淀粉培养基上选取典型细菌菌落（尽量选取边缘整齐和规则的菌落），并用记号笔进行编号。然后将编号后的菌落用无菌牙签挑取，在另1块淀粉培养基平板上分别划短线。实验步骤六、六、观察水解圈和察水解圈和测量量H/CH/C值在3块淀粉培养基上加碘液，观察是否有水解圈的产生，并测量其半径，计算H/C值。对照划线平板和编号菌落的水解圈大小，挑取水解圈最大的一个菌斑，用记号笔将其勾选出来，并在划线平板上标记好。将划线平板置于培养箱30培养。实验结果1.拍照纪录筛选培养基平板上的水解圈；2.列表记录单菌落数量、无水解圈菌落数量、有水解圈菌落数量；3.选取若干个(6个左右)有水解圈的测量其大小及菌落直径，计算H/C值。
