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1、1药物的鉴别试验2主要内容主要内容 一一 、药物鉴别试验的定义与目的、药物鉴别试验的定义与目的 三、三、 鉴别方法鉴别方法 四、四、 鉴别试验的条件及方法验证鉴别试验的条件及方法验证 二、二、 药物试验的项目药物试验的项目3一、一、 药物鉴别试验的定义与目的药物鉴别试验的定义与目的p 根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断其物学方法来判断其真伪真伪。 p 鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的定性定性。 p
2、 鉴别试验方法应专属，每个品种一般鉴别试验方法应专属，每个品种一般2 23 3条条。性状项和物理常数确认性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的试验鉴别项下规定的试验 原原料料药药鉴鉴别别制制剂剂鉴鉴别别二、二、 药物试验的项目药物试验的项目性性 状状 （Description）定义：定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等物理常数等。外 观溶解度物理常数外观：外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。等性质。性性 状状 （Description）溶解度溶解度：药品的一种物理性质，药品的一种物
3、理性质，一定程度上反映了一定程度上反映了药品的药品的纯度纯度、晶型或粒度、晶型或粒度。药品在不同溶剂中的溶。药品在不同溶剂中的溶解性能用解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。来描述。物理常数物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。用于药品鉴别，反映其纯杂程度。 性性 状状 （Description）熔熔点点：多多数数固固体体有有机机药药物物的的重重要要物物理理常常数数。鉴鉴别别方法和纯度检查手段。方法和纯度检查手段。比比旋旋度度：反反映映手手性性药药物物特特性性及及其其纯纯度度的的主主要要指指标标
4、，可用区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。可用区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。吸吸收收系系数数：吸吸光光物物质质的的重重要要物物理理常常数数，用用于于考考查查原原料料药药的的质质量量，UV测测定定含含量量时时的的依依据据。测测定定方方法法应按药典规定方法进行。应按药典规定方法进行。是指依据某一类药物的共同的是指依据某一类药物的共同的化学结构化学结构或相同的或相同的理理化特性化特性，通过通过化学反应化学反应来鉴别药物的来鉴别药物的真伪真伪。一般鉴别试验一般鉴别试验有机药物有机药物-典型的典型的官能团官能团反应反应无机药物无机药物-阴离子、阳离子阴离子、阳离子中国药典中国药典20102010附
5、录收载一般鉴别试验附录收载一般鉴别试验： 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类 有机氟化物类、有机酸盐有机氟化物类、有机酸盐 无机酸盐无机酸盐 (Cl- 、 SO42- 、 NO3-) 无无机机金金属属盐盐类类（Na+, K+, Ca2+, Ba2+, Li+, Fe3+ , Al3+ , Zn2+,Cu 2+, Ag+, Hg2+等）等）101.有机氟化物有机氟化物一般鉴别试验一般鉴别试验有机氟有机氟氧瓶燃烧氧瓶燃烧无机氟离子无机氟离子pH4.3 茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈蓝紫色蓝紫色络合物络合物碱液吸收碱液吸收112. 有机酸盐有机酸盐(1)
6、水杨酸盐水杨酸盐水杨酸水杨酸 + FeCl3中性条件中性条件弱酸性条件弱酸性条件红色配位化合物红色配位化合物紫色配位化合物紫色配位化合物水杨酸盐水杨酸盐+稀盐酸稀盐酸水杨酸（白色沉淀）水杨酸（白色沉淀） 溶于醋酸铵溶于醋酸铵 鉴别方法二：鉴别方法二：鉴别方法一：鉴别方法一：(2) 酒石酸盐酒石酸盐供试品溶液（中性）供试品溶液（中性）+ 氨制硝酸银氨制硝酸银 水浴中水浴中银镜银镜12供供试试品品+ 稀盐酸稀盐酸0.1mol/L亚硝酸钠亚硝酸钠碱性碱性 - -萘酚试液萘酚试液橙黄色橙黄色到到猩红色猩红色沉淀沉淀3.芳香第一胺类芳香第一胺类13 4.托烷生物碱类托烷生物碱类此类生物碱中具有莨菪酸结构
7、，此类生物碱中具有莨菪酸结构，有有Vitali反应反应, 显紫显紫色色。 水解水解3HNO3HNO3 3三硝基衍生物三硝基衍生物KOHKOH(C(C2 2H H5 5OH)OH)KOHKOH深紫色深紫色莨菪酸莨菪酸托烷类托烷类145.无机金属盐无机金属盐（Na, K, Ca, NH4+)(1) (1) 钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应 焰色反应：焰色反应：Na显鲜黄色显鲜黄色；K显紫色显紫色；CaCa显砖红色显砖红色 Ba Ba：黄绿色黄绿色，自绿色玻璃中透视，火焰呈，自绿色玻璃中透视，火焰呈蓝色蓝色 供试品供试品 + NaOH 氨气氨气使湿润的使湿润的红色红色
8、石蕊石蕊试纸变试纸变蓝蓝使硝酸亚汞试液湿使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显润的滤纸显黑色黑色(2) (2) 铵盐铵盐156. 无机酸根无机酸根 氯化物：氯化物：Cl- + Ag+ AgCl 白色乳状白色乳状 Cl- + MnO2 Mn2+ + Cl2 硫酸盐：硫酸盐： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色白色 SO42- + Pb2+ PbSO4 白色白色 加盐酸，无白色沉淀加盐酸，无白色沉淀(与硫代硫酸盐区别与硫代硫酸盐区别) 硝酸盐硝酸盐: Cu + NO3- Cu(NO3)2+2NO（红棕色红棕色） Fe2+ +NO3- Fe 3+ +NO（棕色环棕色环） 区分区分 NO3- 、NO2-
9、H2SO4使湿润的使湿润的KI_ _淀淀粉试纸粉试纸变蓝变蓝KMnO4褪色褪色 NO2- 不褪色不褪色 NO3-H2SO4H2SO4在醋酸铵试液或在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中氢氧化钠试液中溶解溶解16是证实是证实某一种某一种药物的依据。药物的依据。根据一类药物中根据一类药物中每一种每一种药物化学结构的差异及理药物化学结构的差异及理化特性，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴化特性，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。别药物的真伪。一般鉴别试验依据某类药物共同的特点，区别不一般鉴别试验依据某类药物共同的特点，区别不同类药物。同类药物。专属鉴别试验在一般鉴别试验的基础上，利用各专属鉴别试
10、验在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，鉴别各个药物单体。种药物的化学结构差异，鉴别各个药物单体。专属鉴别试验专属鉴别试验17三、三、 鉴别方法鉴别方法1、化学鉴别法、化学鉴别法2、光谱鉴别法、光谱鉴别法3、色谱鉴别法、色谱鉴别法4、显微鉴别法、显微鉴别法5、生物学法、生物学法6、指纹图谱与特征图谱鉴别法、指纹图谱与特征图谱鉴别法18（一）化学鉴别法（一）化学鉴别法 供试品加入适当的试剂，在一定条件下，发生化学反应，通供试品加入适当的试剂，在一定条件下，发生化学反应，通过产生可观测到的明显现象，来鉴别药物真伪的方法。过产生可观测到的明显现象，来鉴别药物真伪的方法。包括：包括：1、
11、呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 2、沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 3、荧光反应鉴别法、荧光反应鉴别法 4、气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 5、使试剂褪色鉴别法使试剂褪色鉴别法 6、测定生成物的熔点测定生成物的熔点19化学鉴别法特点化学鉴别法特点反应原理应明确反应原理应明确操作简便、反应快速、实验成本低、应用广操作简便、反应快速、实验成本低、应用广但专属性比仪器分析法差但专属性比仪器分析法差20指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。应，生成易于观测的有色产物。呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 酚
12、羟基的三氯化铁呈色反应：酚羟基的三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基用于酚羟基或水解后产生酚羟基 有机氟化物的茜素氟蓝法有机氟化物的茜素氟蓝法 芳香第一胺类重氮化芳香第一胺类重氮化-偶合反应偶合反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基托烷生物碱类托烷生物碱类-Vitali反应反应肾上腺皮质激素类的四氮唑肾上腺皮质激素类的四氮唑含羰基结构的苯肼反应含羰基结构的苯肼反应氨基酸及氨基糖苷类的茚三酮呈色反应氨基酸及氨基糖苷类的茚三酮呈色反应双缩脲反应双缩脲反应21供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成沉淀供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成沉淀沉淀生成反应鉴别
13、法沉淀生成反应鉴别法 还原性基团的银镜反应（异烟肼）还原性基团的银镜反应（异烟肼）丙二酰脲类的硝酸银反应丙二酰脲类的硝酸银反应氯化物的银盐沉淀氯化物的银盐沉淀含氮杂环类与生物碱沉淀剂（碘化铋钾、硅钨酸）的沉淀含氮杂环类与生物碱沉淀剂（碘化铋钾、硅钨酸）的沉淀反应反应苯甲酸盐类的三氯化铁反应苯甲酸盐类的三氯化铁反应生成氧化亚铜红色沉淀反应（生成氧化亚铜红色沉淀反应（如肾上腺皮质激素类、葡萄糖如肾上腺皮质激素类、葡萄糖）与重金属离子的沉淀反应（利多卡因）与重金属离子的沉淀反应（利多卡因）磺胺类药物的铜盐反应磺胺类药物的铜盐反应22药物本身在可见光下发射荧光药物本身在可见光下发射荧光 如：硫酸奎宁溶
14、液显蓝色荧光如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光药物与适当试剂反应后发射荧光药物与适当试剂反应后发射荧光如：氯普噻吨如：氯普噻吨+HNO+HNO3 3后，紫外下显绿色后，紫外下显绿色荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 VB1硫色素（蓝色荧光）硫色素（蓝色荧光）碱性碱性K3Fe(CN)623大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物，大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后加热产生氨气。可经强碱处理后加热产生氨气。红色石蕊试纸变蓝红色石蕊试纸变蓝硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 化学结构含硫药物，可经强酸处理后加热产生硫化
15、氢气体化学结构含硫药物，可经强酸处理后加热产生硫化氢气体含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸汽含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸汽含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，加乙醇含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。可产生醋酸乙酯的香味。24使试剂褪色的鉴别法使试剂褪色的鉴别法 维生素维生素C的二氯靛酚反应的二氯靛酚反应氧烯洛尔的高锰酸钾反应氧烯洛尔的高锰酸钾反应司可巴比妥那的碘试液反应司可巴比妥那的碘试液反应测定生成物的熔点测定生成物的熔点制备衍生物测定熔点法制备衍生物测定熔点法操作繁琐费时间，应用较少。操作繁琐费时间，应用较少。25（二）光谱鉴别法（二）光谱鉴
16、别法 1、紫外光谱鉴别法、紫外光谱鉴别法 2、红外光谱鉴别法、红外光谱鉴别法 3、近红外光谱法、近红外光谱法 4、原子吸收法、原子吸收法 5、核磁共振法、核磁共振法 (NMR) 6、质谱鉴别法、质谱鉴别法 (MS) 7、X射线粉末衍射法射线粉末衍射法 26测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度；规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度；规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸光度比值法；规定吸收波长和吸光度比值法；经化学处理后经化学处理后, 测定其反应产物吸收光谱特性测定其反应产物
17、吸收光谱特性以上方法可单用，也可几个结合起来使用，以上方法可单用，也可几个结合起来使用，以提高专属性以提高专属性紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 紫外光谱法操作简便、快速。紫外光谱法操作简便、快速。用作鉴别的专属性远不如红外光谱法用作鉴别的专属性远不如红外光谱法。27l专属性强、准确度高的特点，应用广（固、液、气）专属性强、准确度高的特点，应用广（固、液、气）l主要用于组分单一、结构明确的原料药以及结构相主要用于组分单一、结构明确的原料药以及结构相近的同类物质。近的同类物质。红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 标准图谱法标准图谱法：中国药典中国药典要求按指定条件绘制供试品的红要求按指定条件绘制供试品的红
18、外光吸收图谱，与药品红外光谱集中的相应标准图谱外光吸收图谱，与药品红外光谱集中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。药物。对照品法对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造成的误差。成的误差。USP多采用对照品法。多采用对照品法。28 利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在
19、阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定量、定性分析。度进行定量、定性分析。 主要用于元素分析主要用于元素分析原子吸收法原子吸收法 29 通过测定供试品指定基团上的质子峰的化学位移通过测定供试品指定基团上的质子峰的化学位移和偶合常数进行鉴别。和偶合常数进行鉴别。 NMR技术已在技术已在BP和和USP中用于药物的鉴别。中用于药物的鉴别。核磁共振法核磁共振法 质谱鉴别法质谱鉴别法 (MS)X射线粉末衍射法射线粉末衍射法 30鉴鉴鉴鉴 别别别别 方方方方 法法法法化学鉴别法化学鉴别法化学鉴别法化学鉴别法光谱
20、鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法指纹图谱与特征图谱鉴别法指纹图谱与特征图谱鉴别法 色谱鉴别法色谱鉴别法 显微鉴别法显微鉴别法 生物学法生物学法 第三节第三节 鉴别方法鉴别方法薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 HPLC、GC鉴别法鉴别法31（三）色谱鉴别法（三）色谱鉴别法 利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特征利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（保留时间，比移值）色谱行为（保留时间，比移值）进行的鉴别试验。进行的鉴别试验。 常采用对比法常采用对比法（与对照品、已知药品，在相同条件与对照品、已知药品，在相同条件下进行色谱分离并比较。下进行色谱分离并比较。） 包括包括 ：
21、1、薄层色谱鉴别法、薄层色谱鉴别法 2、HPLC、GC鉴别法鉴别法32 薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。 在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法。在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法。 通过通过Rf值，斑点颜色进行定性。值，斑点颜色进行定性。薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 HPLC、GC鉴别法鉴别法 供试品和对照色谱峰供试品和对照色谱峰保留时间保留时间一致。一致。在鉴别试验中，通常含量测定同时用于鉴别的一种方法。在鉴别试验中，通常含量测定同时用于鉴别的一种方法。33色色谱谱谱谱鉴鉴别别法法小小结
22、结 适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别, ,具具有分离、分析同时进行的特点有分离、分析同时进行的特点. . 高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(HPLC)、气相色谱法、气相色谱法(GC)(GC)供试品和对照品色谱峰保留时间一致供试品和对照品色谱峰保留时间一致. . 薄层扫描法薄层扫描法(TLC)(TLC)对照品比较法，供试对照品比较法，供试品斑点与对照品的品斑点与对照品的R Rf f值及斑点的颜色应一致值及斑点的颜色应一致. .色谱法（色谱法（ HPLC GC TLC) HPLC GC TLC)34 主要用于主要用于中药及其制剂的鉴别中药及其制剂
23、的鉴别，通常采用显微镜对药，通常采用显微镜对药材的切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮材的切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。进行鉴别的一种方法。显微鉴别法显微鉴别法 35 利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别。的鉴别。生物学法生物学法 生物效应鉴别法生物效应鉴别法基因基因鉴别法鉴别法36中药指纹图谱：目的是通过对所得到的能够体现中
24、药整体中药指纹图谱：目的是通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。靠。特征图谱：指主要有效成分的特征峰谱图，而指纹图谱除特征图谱：指主要有效成分的特征峰谱图，而指纹图谱除了主要有效成分的特征峰外，还包括更多内容，更具专一了主要有效成分的特征峰外，还包括更多内容，更具专一性。性。指纹图谱与特征图谱鉴别法指纹图谱与特征图谱鉴别法 第三节第三节 鉴别试验的条件及方法验证鉴别试验的条件及方法验证（一）溶液的浓度
25、（一）溶液的浓度 溶液的浓度溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；（如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的温度（二）溶液的温度 温度温度过高过高可使产物分解，导致颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察可使产物分解，导致颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察 不到结果，故试验中应注意温度的控制。不到结果，故试验中应注意温度的控制。38 （三）溶液的酸碱度（三）溶液的酸碱度 许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下进行，溶液的酸许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下进行，溶液的酸碱
26、度能够使各反应物有足够的浓度处于活化状态、使反应产物处碱度能够使各反应物有足够的浓度处于活化状态、使反应产物处于稳定和易于观察状态。于稳定和易于观察状态。 （四）试验时间（四）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。第三节第三节 鉴别试验的条件及方法验证鉴别试验的条件及方法验证39 （五）（五）鉴别方法的验证鉴别方法的验证l专属性专属性: 是指其他成分（其他药物成分、杂质、降解产物、是指其他成分（其他药物成分、杂质、降解产物、辅料等）存在的情况的下，采用的鉴别方法也能正确地鉴辅料等）存在的情况的下，采用的鉴别方法也能正确
27、地鉴别出被测物质的特性。别出被测物质的特性。 每种鉴别方法都存在一定的局限性，一般至少采用两种以每种鉴别方法都存在一定的局限性，一般至少采用两种以上不同类型的方法，如化学法和光谱法。上不同类型的方法，如化学法和光谱法。l耐用性：测定条件发生小的变化时，不影响测定结果。耐用性：测定条件发生小的变化时，不影响测定结果。第三节第三节 鉴别试验的条件及方法验证鉴别试验的条件及方法验证40（一）鉴别方法选择的原则：（一）鉴别方法选择的原则： 方法要有一定的方法要有一定的专属性、灵敏性，便于推广专属性、灵敏性，便于推广。 采用一组试验项目全面评价一个药物，应既有采用一组试验项目全面评价一个药物，应既有母核
28、反应母核反应，又有，又有官能团反应官能团反应，既包括，既包括化学方法化学方法，又包括又包括仪器方法仪器方法，每种药品一般选用，每种药品一般选用2-42-4种种方法方法进行鉴别试验，互相取长补短，力求使结论正确进行鉴别试验，互相取长补短，力求使结论正确无误。无误。尽可能采取药典中收载的方法。尽可能采取药典中收载的方法。鉴别试验要求41小结小结 药物的鉴别试验药物的鉴别试验（identification test)v是根据药物的分子结构、理化性质是根据药物的分子结构、理化性质, ,采用化学、物理采用化学、物理 化学或生物学方法来化学或生物学方法来证明已知药物的真伪证明已知药物的真伪。v而而不是不是对未知物进行定性分析。对未知物进行定性分析。v是药检工作的是药检工作的首要任务首要任务，杂质检查、含量测定的，杂质检查、含量测定的前提前提。
