《《微生物学》教学课件：第七章 微生物的遗传变异和育种 (2)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《微生物学》教学课件：第七章 微生物的遗传变异和育种 (2)（152页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、SunYat-senUniversity曹理想曹理想中山大学生命科学学院中山大学生命科学学院第七章第七章 微生物的遗传变异和育种微生物的遗传变异和育种SunYat-senUniversity人类流感大劫难档案人类流感大劫难档案公元前公元前412年，年，“现代医学之父现代医学之父”古希腊的希波克拉底就已经记古希腊的希波克拉底就已经记述了类似流感的症状。述了类似流感的症状。1580年，菲利普二世统治西班牙期间，才有明确的流感大流行的记录。年，菲利普二世统治西班牙期间，才有明确的流感大流行的记录。1658年，意大利威尼斯城的一次流感大流行使年，意大利威尼斯城的一次流感大流行使6万人死亡，惊慌的人万人
2、死亡，惊慌的人们认为这是上帝的惩罚，所以将这种病命名为们认为这是上帝的惩罚，所以将这种病命名为“Influenza”，意即，意即“魔鬼魔鬼”。1742年至年至1743年，由流行性感冒引起的流行病曾影响年，由流行性感冒引起的流行病曾影响90%的东欧人。的东欧人。1837年年1月，在欧洲暴发的流感非常严重，在柏林，流感造成的死亡月，在欧洲暴发的流感非常严重，在柏林，流感造成的死亡人数超过了出生人数；巴塞罗那所有的公共商业活动停止。人数超过了出生人数；巴塞罗那所有的公共商业活动停止。1889年年1894年，这几年发生的流感席卷了整个西欧，发病广泛，年，这几年发生的流感席卷了整个西欧，发病广泛，死亡率
3、高，造成严重影响。死亡率高，造成严重影响。SunYat-senUniversity1918年，世界上暴发了历史上最著名的严重流感大流行年，世界上暴发了历史上最著名的严重流感大流行“西班牙西班牙流感流感”。1957年，暴发了年，暴发了“亚洲流感亚洲流感”(病毒类型病毒类型H2N2)，全球仍然有，全球仍然有200多多万人遭遇厄运。万人遭遇厄运。1968年年7月，由甲型流感病毒月，由甲型流感病毒(H3N2)所致的所致的“香港流感香港流感”在香港大规在香港大规模暴发，据统计，美国共有模暴发，据统计，美国共有3.4万人因感染致死。万人因感染致死。1977年年1月，月，“俄罗斯流感俄罗斯流感”(病毒类型病
4、毒类型H1N1)在前苏联出现并流行。在前苏联出现并流行。1997年，开始出现禽流感病毒年，开始出现禽流感病毒(H5N1)，尽管该病毒很少感染人，但，尽管该病毒很少感染人，但仍然夺去了仍然夺去了18个人的生命，这些人大都与家禽有过直接接触。个人的生命，这些人大都与家禽有过直接接触。2009年年4月，墨西哥、美国等多个国家和地区相继暴发甲型月，墨西哥、美国等多个国家和地区相继暴发甲型H1N1流流感。感。2014年年5月月17日从广东省卫生计生委获悉，梅州和中山各日从广东省卫生计生委获悉，梅州和中山各新增一例人感染新增一例人感染H7N9禽流感确诊病例。禽流感确诊病例。SunYat-senUniver
5、sity大流行病毒大流行病毒禽病毒禽病毒人病毒禽重组病毒禽重组病毒禽禽病毒病毒在猪中重组在猪中重组在人中重组在人中重组可能导致大流行的禽人重组病毒的产生可能导致大流行的禽人重组病毒的产生SunYat-senUniversity耐药耐药淋病淋病双球菌双球菌2013-5-7瑞典病原性瑞典病原性淋病淋病双球菌参考实验双球菌参考实验室的乌内莫与日本学者合作在京都采集的室的乌内莫与日本学者合作在京都采集的检体样本中发现检体样本中发现H041。这种菌株是在日本。这种菌株是在日本一名性工作者咽喉首先发现，而它对一名性工作者咽喉首先发现，而它对ceftriaxone的抗药力，比迄今所知任何菌的抗药力，比迄今所
6、知任何菌株高出株高出4到到8倍。把倍。把H041与其他淋病菌株放与其他淋病菌株放在一起培养，因此出现的基因重组更使这在一起培养，因此出现的基因重组更使这些菌株的抗药性增加多达些菌株的抗药性增加多达500倍。倍。SunYat-senUniversity研究发现，研究发现，H041对治疗淋病的最后防线头对治疗淋病的最后防线头孢菌素抗生素具有极强的抗药性。科学家孢菌素抗生素具有极强的抗药性。科学家认为，现有各种淋病疗法，对新变种的认为，现有各种淋病疗法，对新变种的H041淋病双球菌均无可奈何，可能迫使医淋病双球菌均无可奈何，可能迫使医学界以号称历来最强效的碳青霉烯类抗生学界以号称历来最强效的碳青霉烯
7、类抗生素尝试治疗。乌内莫强调，这种药效果有素尝试治疗。乌内莫强调，这种药效果有待观察。待观察。SunYat-senUniversity2011年年6月，有月，有2000多人感染，表现为出血性多人感染，表现为出血性肠炎，肠炎，500多人并发严重的溶血尿毒综合征，多人并发严重的溶血尿毒综合征，20余人死亡。近余人死亡。近30年来，引起出血性肠炎的病年来，引起出血性肠炎的病原菌主要是大肠杆菌原菌主要是大肠杆菌O157：H7，所以德国最，所以德国最初认为这场腹泻疫情仍是大肠杆菌初认为这场腹泻疫情仍是大肠杆菌O157：H7所致。导致这次欧洲腹泻疫情的祸首原来是另所致。导致这次欧洲腹泻疫情的祸首原来是另一
8、型大肠杆菌一型大肠杆菌O104 H4。大肠杆菌。大肠杆菌O104 H4是从哪里来的？是从哪里来的？耐药大肠杆菌耐药大肠杆菌SunYat-senUniversitySunYat-senUniversity致病菌引起的中毒致病菌引起的中毒1994年美国沙门氏菌病暴发；年美国沙门氏菌病暴发；1996年日本芽菜大肠杆菌使人们认识到了细菌年日本芽菜大肠杆菌使人们认识到了细菌O-157中毒中毒的危害；的危害；2006年美国开始陆续发生一些菠菜引起的中毒，年美国开始陆续发生一些菠菜引起的中毒，后来还发生西红柿中毒；后来还发生西红柿中毒；2006年是大肠杆菌年是大肠杆菌O-157；2010年美国又发生千人以上
9、沙门氏菌感染；年美国又发生千人以上沙门氏菌感染；2011年德国大肠杆菌也波及了年德国大肠杆菌也波及了16个国家；个国家；2013年美国又发现了年美国又发现了15个大肠杆菌个大肠杆菌O-121，导致，导致27个人受个人受到感染；到感染；2014年年1月月3日，美国报告由乳制品引起的斯坦利沙门氏日，美国报告由乳制品引起的斯坦利沙门氏病例；苏格兰病例；苏格兰2月月6日有日有15个人感染了大肠杆菌个人感染了大肠杆菌O-157。SunYat-senUniversity主要内容：主要内容：SunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversit
10、ySunYat-senUniversitySunYat-senUniversity表型饰变：表型饰变：表型的差异只与环境有关特点：暂时性、不可遗传性、表现为全部个体的行为粘质沙雷氏菌粘质沙雷氏菌2525产深红色灵杆菌素，产深红色灵杆菌素，3737不产色素，降到不产色素，降到2525恢复产色。恢复产色。 遗传型变异（基因变异、基因突变）遗传型变异（基因变异、基因突变）：遗传物质改变，导致表型改变特点：遗传性、群体中极少数个体的行为 （自发突变频率通常为10-6-10-9）SunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySun
11、Yat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversity 选选用用TMVTMV和和霍霍氏氏车车前前花花叶叶病病毒毒（HRVHRV），分分别别拆拆分分取取得得各各自自的的RNARNA和和蛋蛋白白质质，将将两两种种RNARNA分分别别与与对对方方的的蛋蛋白白质质外壳重建形成两种杂合病毒外壳重建形成两种杂合病毒： （1 1）RNARNA（TMVTMV） 蛋白质蛋白质（HRVHRV）（2 2）RNARNA（HRVHRV） 蛋白质（蛋白质（TMVTMV）用两种杂合病毒
12、感染寄主：用两种杂合病毒感染寄主： （1 1）表现）表现TMVTMV的典型症状病分离到的典型症状病分离到 正常正常TMVTMV粒子粒子 （2 2）表现）表现HRVHRV的典型症状病分离到的典型症状病分离到正常正常HRVHRV粒子。粒子。上述结果说明，在上述结果说明，在RNARNA病毒中，遗传的物病毒中，遗传的物质基础也是核酸。质基础也是核酸。MTV HRVHRV MTVSunYat-senUniversity朊病毒的发现与思考朊病毒的发现与思考亚病毒的一种：具有传染性的蛋白质致病因子，迄今为止尚未 发现该蛋白内含有核酸。其致病作用是由于动物体内正常的蛋白质PrP c改变折叠状态为PrP sc所
13、致，而这二种蛋白质的一级结构并没有改变。SunYat-senUniversity人的库鲁病(kuru)、克雅氏病(Creutzfeldt Jakob disease, CJD)等羊搔痒症(scrapie)牛海绵状脑病(spongiform encephalopathy)SunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYa
14、t-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYa
15、t-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYa
16、t-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYa
17、t-senUniversitySunYat-senUniversity诱变剂和诱变处理诱变剂和诱变处理物物理理诱诱变变剂剂：射射线线如如紫紫外外线线、X射射线线、射线，快中子；射线，快中子；物物理理因因素素中中目目前前使使用用得得最最方方便便而而且且十十分分有有效效的的是是紫紫外外线线。许许多多高高产产菌菌株株的的选选育育都都用用过过紫紫外外线线，对对于于一一般般实实验验室室、中中小小型型工工厂厂都都适适用用，也也很很安安全。全。其其他他的的几几种种射射线线都都是是电电离离性性质质的的，有有一一定定的的穿穿透透力力，一一般般都都由由专专业业人人员员在在专专门门的的设设备备中中使使用用，否则有一
18、定危险性。否则有一定危险性。SunYat-senUniversity化学诱变剂：化学诱变剂：化学因子如碱基类似物、化学因子如碱基类似物、55氟尿嘧啶、烷化剂等。氟尿嘧啶、烷化剂等。化学诱变剂中使用最多、最有效的是烷化剂。化学诱变剂中使用最多、最有效的是烷化剂。使用化学诱变剂的优缺点：使用化学诱变剂的优缺点：1 1、大大多多数数情情况况下下，就就突突变变数数量量而而言言，要要比比电电离离辐辐射射更有效。更有效。 SunYat-senUniversity2 2、化化学学诱诱变变剂剂是是很很经经济济的的，因因为为只只需需要要少少量量的的合合适适的的诱诱变变剂剂，设设备备是是实实验验室室的的一一般般玻
19、玻璃璃器器皿皿，一一个个蒸蒸气气罩罩。而而用用电电离离辐辐射射行行工工作作时时，设设备备费用大，并要注意安全性。费用大，并要注意安全性。3 3、大大部部分分诱诱变变剂剂是是致致癌癌剂剂，所所以以在在使使用用中中必必须须非非常常谨谨慎慎，要要避避免免化化学学诱诱变变剂剂与与皮皮肤肤接接触触，且且切切勿勿吸吸入入其其蒸蒸气气，有有人人对对某某些些诱诱变变剂剂极极其其敏敏感，甚至未直接接触就会过敏，这就更要当心。感，甚至未直接接触就会过敏，这就更要当心。SunYat-senUniversity诱变剂的选择1 1碱碱基基类类似似物物和和羟羟胺胺具具有有很很高高的的特特异异性性，但但很很少少使使用，回复
20、突变率高，效果不大。用，回复突变率高，效果不大。2 2亚亚硝硝酸酸和和烷烷化化剂剂应应用用的的范范围围较较广广，造造成成的的遗遗传传损损伤伤较较多多。其其中中亚亚硝硝基基胍胍和和甲甲基基磺磺酸酸乙乙酯酯常常被被称称为为“超超诱诱变变剂剂”，甲甲基基磺磺酸酸乙乙酯酯是是毒毒性性最最小小的的诱诱变变剂之一。剂之一。SunYat-senUniversity3 3吖吖啶啶类类诱诱变变剂剂可可以以造造成成生生化化代代谢谢途途径径的的完完全全中断。中断。4 4紫紫外外线线仍仍十十分分有有效效。电电离离辐辐射射是是造造成成染染色色体体巨巨大大损损伤伤的的最最好好诱诱变变剂剂，它它能能造造成成不不可可回回复复
21、的的缺突变。但它可能影响邻近基因的性能。缺突变。但它可能影响邻近基因的性能。SunYat-senUniversity二、诱变育种步骤二、诱变育种步骤出发菌株的选择处理菌悬液的制备诱变处理中间培养分离和筛选SunYat-senUniversity(一)出发菌株的选择1自自然然界界新新分分离离的的野野生生型型菌菌株株，对对诱诱变变处处理理较较敏感，容易达到好的效果。敏感，容易达到好的效果。2在在生生产产中中经经生生产产选选种种得得到到的的菌菌株株与与野野生生型型较较相像，也是良好的出发菌株。相像，也是良好的出发菌株。3每每次次诱诱变变处处理理都都有有一一定定提提高高的的菌菌株株，往往往往多多次诱变
22、能积累较多的提高。次诱变能积累较多的提高。4出出发发菌菌株株开开始始时时可可以以同同时时选选23株株，在在处处理理比较后，将更适合的出发菌株留作继续诱变。比较后，将更适合的出发菌株留作继续诱变。SunYat-senUniversity5要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细胞体来作出发诱变细胞，这是由于变异性状大部胞体来作出发诱变细胞，这是由于变异性状大部分是隐性的，特别是高产基因。分是隐性的，特别是高产基因。6根据采用的诱变剂或根据细胞生理状态或诱根据采用的诱变剂或根据细胞生理状态或诱变谱选择诱变剂，因为同一诱变剂的重复处理会变谱选择诱变剂，因为同一诱变
23、剂的重复处理会使细胞产生抗性，使诱变效果下降。有的诱变剂使细胞产生抗性，使诱变效果下降。有的诱变剂是作用于营养细胞，就要选对数期的细胞：有的是作用于营养细胞，就要选对数期的细胞：有的作用于休止期，就可选用孢子。作用于休止期，就可选用孢子。SunYat-senUniversity(二)处理菌悬液的制备这这一一步步骤骤的的关关键键是是制制备备单单细细胞胞和和单单孢孢子子状状态态的的、活活力力类类似似的的菌菌悬悬液液，为为此此要要进进行行合合适适培培养养基基的的培养，并要离心，洗涤，过滤。培养，并要离心，洗涤，过滤。SunYat-senUniversity(三)诱变处理根根据据前前面面有有关关诱诱变
24、变剂剂及及诱诱变变处处理理的的介介绍绍，结合诱变对象的实际，设计诱变处理方案。结合诱变对象的实际，设计诱变处理方案。SunYat-senUniversity(四)中间培养 由由于于在在发发生生了了突突变变尚尚未未表表现现出出来来之之前前，有有一一个个表表现现延延迟迟的的过过程程，即即细细胞胞内内原原有有酶酶量量的的稀稀释释过过程程( (生生理理延延迟迟) )，需需3 3代代以以上上的的繁繁殖殖才才能能将将突突变变性性状状表表现现出出来来。这这个个过过程程对对今今后后的的筛筛选选和和获得稳定菌株都是极为重要的。获得稳定菌株都是极为重要的。SunYat-senUniversity 方法：方法： 让
25、让变变异异处处理理后后细细胞胞在在液液体体培培养养基基中中培培养养几几小小时时，以以让让细细胞胞的的遗遗传传物物质质复复制制，让让细细胞胞繁繁殖殖几几代代，以以得得到到纯纯的的变变异异细细胞胞。这这样样，隐隐性性的的变变异异就就会会显显现现出出来来，若若不不经经液液体体培培养养基基的的中中间间培培养养，直直接接在在平平皿皿上上分分离离就就会会出出现现变变异异和和不不变变异异细细胞胞同同时时存存在在于于一一个个菌菌落落内内的的可可能能，形形成成混混杂杂菌菌落落，以致造成筛选结果的不稳定和将来的菌株退化。以致造成筛选结果的不稳定和将来的菌株退化。SunYat-senUniversity(五)分离和
26、筛选筛筛选选分分初初筛筛和和复复筛筛。初初筛筛以以迅迅速速筛筛出出大大量量的的达达到到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。初步要求的分离菌落为目的，以量为主。复复筛筛则则是是精精选选，以以质质为为主主，也也就就是是以以精精确确度度为为主主。因此在具体方法上就有差异因此在具体方法上就有差异. . 例例如如初初筛筛可可以以在在平平皿皿上上直直接接以以菌菌落落的的代代谢谢产产物物与与某某些些染染料料或或基基质质的的作作用用形形成成的的变变色色圈圈或或透透明明圈圈的的大大小小来来挑挑取取参参加加复复筛筛者者，而而将将90%90%的的菌菌落落淘淘汰汰。在在数数量量减减少少后后就就要要仔仔细细比比较较参参
27、加加复复筛筛和和再再复复筛筛的的菌菌株株，最最后后才才能能选选得得优优秀秀菌菌株株。在在以以后后的的复复筛筛阶阶段，还应不断结合自然分离，纯化菌株。段，还应不断结合自然分离，纯化菌株。SunYat-senUniversity紫外线的诱变育种紫紫外外线线诱诱变变一一般般采采用用15W紫紫外外线线杀杀菌菌灯灯，波波长长为为253.7nm灯灯与与处处理理物物的的距距离离为为1530cm，照照射射时时间间依依菌菌种种而而异异，一一般般为为几几秒秒至至几几十十分分钟钟。一一般般我我们们常常以以细细胞胞的的死死亡亡率率表表示示，希希望望照照射射的的剂剂量量死亡率控制在死亡率控制在7080%为宜。为宜。Su
28、nYat-senUniversity被照射的菌悬液细胞数，细菌为被照射的菌悬液细胞数，细菌为106个个ml左左右，霉菌孢子和酵母细胞为右，霉菌孢子和酵母细胞为106107个个ml。由于紫外线穿透力不强，要求照射液不要太深，由于紫外线穿透力不强，要求照射液不要太深，约约0.51.0cm厚，同时要用电磁搅拌器或手工厚，同时要用电磁搅拌器或手工进行搅拌，使照射均匀。进行搅拌，使照射均匀。由于紫外线照射后有光复活效应，所以照射时由于紫外线照射后有光复活效应，所以照射时和照射后的处理应在红灯下进行。和照射后的处理应在红灯下进行。SunYat-senUniversity亚硝基胍诱变曲霉菌N甲甲基基N-硝硝
29、基基-N-亚亚硝硝基基胍胍(NGN，MNNG或或TG)对对真真核核或或原原核核微微生生物物都都有有强强烈烈的的诱诱变变作作用用。其其精精确确的的作作用用机机制制尚尚不不很很清清楚楚，据据认认为为是是伴伴随随着着重重氮氮甲甲烷烷的的生生成成及及在在酸酸性性条条件件下下生生成成亚亚硝硝酸酸，直直接接作作用用于于细细胞胞内内的的DNA复复制制系系统统，从从而而诱诱发发了了变变异。异。MNNG的诱变作用随的诱变作用随pH的升高而增强。的升高而增强。SunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversitySunYat-senUniversi
30、tySunYat-senUniversityAmes实验实验SunYat-senUniversity“生物化学统一性生物化学统一性”法则： 人和细菌在DNA的结构及特性方面是一致的，能使微生物发生突变的诱变剂必然也会作用于人的DNA，使其发生突变，最后造成癌变或其他不良的后果。SunYat-senUniversity 诱变剂的共性原则：化学药剂对细菌的诱变率与其对动物的致癌性成正比 超过95%的致癌物质对微生物有诱变作用90%以上的非致癌物质对微生物没有诱变作用SunYat-senUniversity回复突变(reverse mutation或back mutation)：突变体失去的野生型性
31、状，可以通过第二次突变得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。美国加利福尼亚大学的Bruce Ames教授于1966年发明，因此称为Ames试验具体操作：检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmurium)组氨酸营养缺陷型菌株(his-)的回复突变率SunYat-senUniversityAmes试验SunYat-senUniversity证明Ames试验重要性的应用实例：国外曾开发了一种降低妇女妊娠反应的药物“反应停”，由于其药效显著，在60-70年代十分流行但随后人们就发现畸形儿的出生率明显增高，而且生产畸形儿的妇女大多曾服用“反应停”，后来采用Ames试验发现这种物质的确具有很
32、强的致突变作用，因此这种药物被禁止使用但如果能在这种药物上市之前就进行Ames试验检测，那么这种大量出生畸形儿的悲剧完全可以避免SunYat-senUniversity诱变剂与致癌物质Ames试验由于生物体内、体外可能存在的差异，可在体外加入哺乳动物（如大鼠）微粒体酶系统，使待测物活化，使Ames试验的准确率达80-90%。SunYat-senUniversity1 1 菌种的衰退与复壮的概念菌种的衰退与复壮的概念(1).(1).衰退（衰退（degenerationdegeneration） ：菌种在培养或保藏过菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生程中，由于自发突变的
33、存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。的衰退。衰退的原因：衰退的原因：基因突变，基因突变，分离现象。分离现象。常见的衰退现象：常见的衰退现象：菌落和细胞形态的改变；菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少；生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。抵抗力、抗不良环境能力减弱等。代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；菌种的衰退、复壮及保藏菌种的衰退、复壮及保藏SunYat-senUniversity(2) (2) 菌种的复壮（菌种的复壮（rej
34、uvenationrejuvenation）：）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的狭义的复壮复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广广义的复壮义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变生产
35、性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种。（正变）不断地从生产中选种。菌种的复壮措施：菌种的复壮措施：纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 通过寄主体内生长进行复壮（如通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus Bacillus thuringiensisthuringiensis的复壮）的复壮） ； 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。的已衰退个体）。采
36、用有效的菌种保藏方法。采用有效的菌种保藏方法。SunYat-senUniversity(3)(3)防止菌种衰退的方法：防止菌种衰退的方法： 控制传代次数（一般在控制传代次数（一般在DNADNA的复制过程中，碱基的错的复制过程中，碱基的错配率是配率是5x105x10-4-4，自发突变的频率为自发突变的频率为1010-8-81010-9-9，采用良好的，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的数）；菌种保藏方法，可以减少移种和传代的数）； 选择合适的培养条件；选择合适的培养条件； 采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物而言，采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子
37、进行接种）；通常采用稳定的单核孢子进行接种）； 采用有效的菌种保藏方法。采用有效的菌种保藏方法。SunYat-senUniversity性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。影响微生物菌种稳定性的因素：a）变异；变异；b）污染；污染；c）死亡；死亡；SunYat-senUniversity5.2、菌种保藏：(1) 目的：存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种(2) 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营
38、养 以及添加保护剂等）SunYat-senUniversity在一定时间内使菌种不死、不变、不乱在一定时间内使菌种不死、不变、不乱（参见P19）菌种保藏基本要求：基本方法：生活态休眠态培养基传代培养寄主传代培养冷冻干燥斜面、平板液氮、低温冰箱沙土管、冷冻真空干燥SunYat-senUniversity1冷冻保藏冷冷冻冻保保藏藏为为保保藏藏微微生生物物菌菌种种的的最最简简单单而而有有效效的的方法。方法。通通过过冷冷冻冻，使使微微生生物物代代谢谢活活动动停停止止。一一般般而而言言，冷冷冻冻温温度度愈愈低低，效效果果愈愈好好。为为了了获获得得满满意意的的冷冷冻冻结结果果，通通常常应应在在培培养养物物
39、中中加加入入一一定定的的冷冷冻冻保保护护剂剂。冷冷冻冻保保藏藏时时温温度度要要求求在在-20以以下下，同同时应认真掌握好冷冻速度和解冻速变。时应认真掌握好冷冻速度和解冻速变。冷冻深藏的缺点之一是培养物运输较困难。冷冻深藏的缺点之一是培养物运输较困难。SunYat-senUniversity冷冻保藏种类一、普通冷冻保藏技术一、普通冷冻保藏技术(-20)二、超低温冷冻保藏技术二、超低温冷冻保藏技术(-60一一-80)三、液氮冷冻保藏技术三、液氮冷冻保藏技术SunYat-senUniversity普通冷冻保藏技术(-20)将将液液体体培培养养物物或或从从琼琼脂脂斜斜面面培培养养物物收收获获的的细细胞
40、胞分分接接到到试试管管或或指指管管肉肉，然然后后贮贮藏藏于于一一冰冰箱箱的的冷冷藏藏室室中中，或或于于温温度度范范围围在在-5-5-20-20的的普普通通冰冰箱箱(-20)(-20)中中。或或者者，将将菌菌种种培培养养在在小小的的试试管管或或培培养养瓶瓶斜斜面面上上，待待生生长长适适度度后后，将将试试管管或或瓶瓶口口用用橡橡胶胶塞塞严严格格封封好好，同同上置于冰箱中保存。上置于冰箱中保存。用此方法可以维持若干微生物的活力用此方法可以维持若干微生物的活力1212年。年。SunYat-senUniversity应应注注意意的的是是经经过过一一次次解解冻冻的的菌菌株株培培养养物物不不宜宜再再用来保藏
41、。用来保藏。保保藏藏过过程程中中应应注注意意控控制制保保藏藏温温度度，培培养养瓶瓶或或试试管应严格密封。管应严格密封。这这一一方方法法虽虽简简便便易易行行，但但不不适适宜宜多多数数微微生生物物的的长期保藏。长期保藏。SunYat-senUniversity二、超低温冷冻保藏技术(-60一-80)要要求求长长期期保保藏藏的的微微生生物物菌菌种种，一一般般都都要要求求在在-60以下进行保藏。以下进行保藏。在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是：在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是：1离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞；离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞；2用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；用
42、新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；3加入等体积的加入等体积的20甘油或甘油或10二甲亚砜；二甲亚砜；4混混匀匀后后分分装装入入冷冷冻冻指指管管或或安安瓿瓿中中，于于-70超超低温冰箱中保藏。低温冰箱中保藏。SunYat-senUniversity如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含1010甘甘油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰箱的油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰箱的冷冻速度一般控制在冷冻速度一般控制在1-21-2minmin。若干细菌和真若干细菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏菌菌种可通过此保藏方法保藏5 5年而活力不受影响。年而活力不受影响。SunY
43、at-senUniversity三、液氮冷冻保藏技术(一一)冷冻保护剂冷冻保护剂在在液液氮氮冷冷冻冻保保藏藏中中，最最常常用用的的冷冷冻冻保保护护剂剂是是二二甲甲亚亚砜砜和和甘甘油油，最最终终使使用用浓浓度度一一般般为为甘甘油油10、二二甲甲亚亚砜砜5。所所使使用用的的甘甘油油般般用用高高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。SunYat-senUniversity( (二二) )液氮冷冻保藏微生物菌种的步骤液氮冷冻保藏微生物菌种的步骤 1 1待冷冻保藏菌种悬液的制备待冷冻保藏菌种悬液的制备 (1)(1)从生长斜面制备菌悬液：每一斜面加入从生长斜面制备菌悬
44、液：每一斜面加入5ml5ml含含1010甘油的营养液体培养；用巴氏吸管吹吸斜面制甘油的营养液体培养；用巴氏吸管吹吸斜面制成孢子及菌体细胞悬液；成孢子及菌体细胞悬液；0.50.5lmllml分装玻璃安瓿或分装玻璃安瓿或液氮冷藏专用塑料瓶，液氮冷藏专用塑料瓶， SunYat-senUniversity(2)(2)从浸没培养物制备菌悬液：从浸没培养物制备菌悬液： 在浸没培养液中加入等体积在浸没培养液中加入等体积20%20%无菌甘油；无菌甘油；轻轻振荡混匀培养液，如果菌体絮凝较紧，则轻轻振荡混匀培养液，如果菌体絮凝较紧，则需先用玻璃珠打散；需先用玻璃珠打散；0.5-lml0.5-lml分装玻璃安瓿或液
45、分装玻璃安瓿或液氮冷藏专用塑料瓶，玻璃安瓿用酒精喷灯封口；氮冷藏专用塑料瓶，玻璃安瓿用酒精喷灯封口；将所有封好的安瓿置于将所有封好的安瓿置于55冰箱中冰箱中3min3min，以使细以使细胞和悬浮培养基之间达到平衡。胞和悬浮培养基之间达到平衡。SunYat-senUniversity 2 2控速冷冻控速冷冻 (1)(1)将将安安瓿瓿或或液液氮氮瓶瓶置置于于铝铝盒盒或或布布袋袋中中，然然后后置置于于一较大的金属容器中；一较大的金属容器中；(2)(2)将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室中；将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室中；(3)(3)以以1-2/min1-2/min的的致致冷冷速速度度降降温温，
46、直直到到温温度度达达到到相相对温度之上几度的细胞冻结点对温度之上几度的细胞冻结点( (通常为通常为-30)-30)；(4)(4)补补加加一一定定量量的的液液氮氮至至系系统统中中，使使细细胞胞在在冻冻结结点点时尽可能快地发生相变；时尽可能快地发生相变；SunYat-senUniversity(5)(5)细细胞胞冻冻结结后后，将将致致冷冷速速度度降降为为1/min1/min，直直到到温度达温度达-50-50；(6)(6)将将安安瓿瓿迅迅速速移移入入液液氮氮罐罐中中于于液液相相(-196)(-196)或或 气相气相(-156)(-156)中保存。中保存。 如如果果无无控控速速冷冷冻冻机机，则则一一般
47、般可可将将安安瓿瓿或或液液氮氮瓶瓶置置于于一一7070冰冰箱箱中中冷冷冻冻4h4h，然然后后迅迅速速移移入入液液氮氮罐中保存。罐中保存。SunYat-senUniversity(三三)复苏复苏1从液氮罐中取出所需的安瓿，立即置于冰浴中；从液氮罐中取出所需的安瓿，立即置于冰浴中；2迅迅速速将将安安瓿瓿置置于于37-40水水浴浴中中，并并轻轻轻轻摇摇动动以加速解；以加速解；3用巴氏吸管将安瓿中贮存培养物移接入含有用巴氏吸管将安瓿中贮存培养物移接入含有2m1无菌液体培养基的试管中，用同一支吸管反无菌液体培养基的试管中，用同一支吸管反复抽吸数次，然后取复抽吸数次，然后取0.1-0.2ml(约约4、8滴
48、滴)转接转接入琼脂斜面上。入琼脂斜面上。SunYat-senUniversity2.2冻干保藏冷冷冻冻干干燥燥的的基基本本方方法法：是是通通过过在在减减压压条条件件下下使使冻冻结结的的细细胞胞悬悬液液中中的的水水分分升升华华，使使培培养养物物干干燥燥。此此法法是是微微生生物物菌菌种种长长期期保保藏藏的的最最为为有有效效的的方方法法之一。之一。冷冷冻冻干干燥燥过过程程中中必必须须使使用用冷冷冻冻保保护护剂剂，目目前前国国内内常常用用脱脱脂脂乳乳和和蔗蔗糖糖，国国外外尚尚有有运运用用动动物物血血清清等的。等的。大大部部分分微微生生物物菌菌种种可可以以在在冻冻干干状状态态下下保保藏藏10年年之之久久
49、而而不不丧丧失失活活力力。而而且且经经冻冻干干后后的的菌菌株株无无需进行冷冻保藏，便于运输。需进行冷冻保藏，便于运输。SunYat-senUniversity培养物的冻干过程培养物的冻干过程SunYat-senUniversity冻干菌种的保藏与再生1 1保保藏藏：冷冷冻冻干干燥燥后后的的培培养养物物在在低低于于55下下保保藏藏。较较低低的的保保藏藏温温度度(-20(-20-70)-70)对对于于培培养养物物的的长长期期稳定更好。稳定更好。2 2复苏：复苏：(1)(1)在在超超净净工工作作台台中中用用7070酒酒精精棉棉球球擦擦洗洗安安瓿瓿，然然后用砂轮在安瓿中锉一道沟。后用砂轮在安瓿中锉一道
50、沟。(2)(2)用用无无菌菌纱纱布布或或无无菌菌毛毛巾巾包包好好安安瓿瓿，然然后后用用手手掰掰开安瓿开安瓿SunYat-senUniversity(3)(3)在在安安瓿瓿中中加加入入0.50.51ml1ml营营养养液液体体培培养养基基，慢慢慢慢旋旋转转安安瓿瓿，使使冻冻干干菌菌种种复复水水。然然后后将将此此转转接接到到一一含含有有再再生生培培养养基基的的无无菌菌试试管管中中，或或直直接接接接种种琼脂斜面或涂布平板。琼脂斜面或涂布平板。(4)(4)在在指指管管中中冻冻干干的的菌菌种种通通常常为为絮絮粉粉状状，可可以以将将此此直直接接振振落落入入盛盛有有l l2ml2ml液液体体培培养养基基的的试
51、试管管中中，轻轻轻轻振振荡荡5 5l0minl0min，然然后后用用此此悬悬液液接接种种适适宜宜的的再生培养基。再生培养基。SunYat-senUniversity矿物油中浸没保藏将将琼琼脂脂斜斜面面或或液液体体培培养养物物浸浸入入矿矿物物油油中中于于室室温下保藏，此方法简便有效。温下保藏，此方法简便有效。可可用用于于丝丝状状真真菌菌、酵酵母母、细细菌菌和和放放线线菌菌的的保保藏藏。特特别别对对难难于于冷冷冻冻干干燥燥的的丝丝状状真真菌菌和和难难以以在在固固体体培培养养基基上上形形成成孢孢子子的的担担子子菌菌等等的的保保藏藏更为有效。更为有效。SunYat-senUniversity浸浸没没保
52、保藏藏的的操操作作要要点点是是首首先先让让待待保保藏藏菌菌种种在在适适宜宜的的培培养养基基上上生生长长，然然后后注注入入经经170下下灭灭菌菌1-2h的矿物油，矿物油的用量以高出培养物的矿物油，矿物油的用量以高出培养物1cm为宜。为宜。以以液液体体石石蜡蜡作作为为保保藏藏方方法法时时，应应对对需需保保藏藏的的菌菌株株预预先先作作试试验验。因因为为某某些些菌菌株株在在液液体体石石蜡蜡下下生生长长还还十十分分明明显显，有有些些菌菌株株如如某某些些假假丝丝酵酵母母还还会会同同化化液液体体石石蜡蜡，也也有有的的对对液液体体石石蜡蜡保保藏藏敏敏感感。所所有有这这些些菌菌株株都都不不能能用用液液体体石石蜡
53、蜡保保藏藏。为为了了预预防防不不测测，一一般保藏株般保藏株23年也应做一次存活试验。年也应做一次存活试验。SunYat-senUniversity干燥保藏干燥保藏微微生生物物生生长长需需要要水水分分，干干燥燥法法是是使使菌菌处处于于干干燥燥条条件件下下停停止止生生长长及及处处于于休休眠眠状状态态，达达到到较较长长期期保保藏藏的的目目的的。此此法法用用于于细细菌菌芽芽孢孢或或产产分分生生孢孢子子的的菌菌种种，是是现现在在发发酵酵工工业业生生产产中中较较常常用用的的菌菌种种保保藏藏方方法法。为为了了转转接接方方便便，控控制制接接种种量量以以及及对对菌菌种种的的保保护护作作用用，通通常常将将菌菌种种
54、的的分分生生孢孢子子、芽芽孢孢，甚甚至至菌菌丝丝体体吸吸附附于于一一些些载载体体表表面面放放至至干干燥燥容容器器里里进进行行常常压压干干燥燥或或真真空空干干燥燥，所所用用载载体体有有沙沙土土、滤纸、硅胶及大滤纸、硅胶及大( (小小) )米等。米等。SunYat-senUniversity沙土管法沙土管法 取取河河( (海海) )沙沙，过过0.78mm(240.78mm(24目目) )筛筛，用用1010盐盐酸酸浸浸泡泡24h24h，倒倒去去盐盐酸酸用用清清水水冲冲洗洗至至pHpH呈呈中中性性，去去水水烘烘干干或或晒晒干干。取取菜菜园园或或果果园园土土粉粉碎碎过过筛筛，把把烘烘干干的的沙沙土土按按
55、3 3：2 2或或1 1：1 1混混合合装装入入指指形形管管或或高高100mm100mm，直直径径为为10mm10mm的的小小试试管管中中，高高约约1cm(1cm(约约2g)2g)，塞塞棉棉塞塞121121灭灭菌菌1h1h，也也可可用用1702h1702h干干热热灭灭菌菌( (或或蒸蒸汽汽三三次次间间歇歇灭灭菌菌) )，蒸蒸汽汽灭灭菌菌后后需需烘烘干干。经经肉肉汤汤检检查查确确实实证证明明无无菌菌即即可可使使用用。将将要要保保存存的的斜斜面面菌菌种种制制成成浓浓孢孢子子悬悬液液( (10106 6/ml)/ml)，用用灭灭菌菌滴滴管管或或吸吸管管吸吸取取孢孢子子悬悬液液滴滴入入无无菌沙土上，每
56、管约菌沙土上，每管约0.30.30.5ml0.5ml，用接种环将其混合均匀。用接种环将其混合均匀。SunYat-senUniversity沙土管法沙土管法也也可可将将真真菌菌分分生生孢孢子子用用接接种种环环从从斜斜面面直直接接挑挑取取放放入入沙沙土土中中。然然后后将将沙沙土土管管抽抽真真空空干干燥燥。这这时时管管内内砂砂土土松松散散，表表明明已已干干燥燥。将将干干燥燥的的砂砂土土管管放放置置在在干干燥燥器器或或密密闭闭容容器器内内、干干燥燥器器下下部部放放置置变变色色硅硅胶胶等等干干燥燥剂剂，于于44下下保保存存。从从斜斜面面取取出出的的孢孢子子放放入入沙沙土土管管中中混混匀匀后后，可可以以不
57、不抽抽真真空空直直接接放放干干燥燥器器内内保保存。存。SunYat-senUniversity沙土管法沙土管法在在沙沙土土保保藏藏初初期期，菌菌死死亡亡率率高高，以以后后逐逐渐渐减减慢慢，存存活活下下来来的的孢孢子子在在以以后后保保存存期期间间稳稳定定性性较较好好，保保藏藏的的有有效效时时间间与与菌菌种种存存活活率率的的关关系系见见图图2-102-10。 用用沙沙土土管管保保藏藏的的某某些些抗抗生生素素产产生生菌菌保保藏藏期期可可达达1818年年( (土土霉霉素素和和链链霉霉素素产产生生菌菌) )到到2222年年( (新新霉霉素素产产生生菌菌) )，但但对对利利福福霉霉素素、卡卡那那霉霉素素、
58、四四环环素素等等容容易易产产生生变变异异的的菌菌种种，就就不不适适合合作作长长期期的的沙沙土管保存。土管保存。SunYat-senUniversity沙土管法沙土管法SunYat-senUniversity滤纸保藏法滤纸保藏法本本法法是是将将要要要要保保藏藏的的微微生生物物细细胞胞或或孢孢子子吸吸附附在在灭灭菌菌滤滤纸纸上上，干干燥燥后后冷冷藏藏。其其方方法法是是3#3#滤滤纸纸剪剪成成5mm5mm50mm50mm的的小小条条，放放入入干干燥燥的的培培养养皿皿中中灭灭菌菌。将将培培养养好好的的菌菌种种用用灭灭菌菌脱脱脂脂乳乳或或奶奶粉粉复复原原乳乳制制成成孢孢子子悬悬液液，用用灭灭菌菌镊镊子子
59、将将准准备备好好的的滤滤纸纸条条在在灭灭菌菌操操作作下下浸浸入入菌菌悬悬液液中中，充充分分吸吸附附菌菌细细胞胞，取取出出后后放放入入灭灭菌菌小小试试管管或或安安瓿瓿管管中中，在在真真空空干干燥燥机机上上抽抽干，真空条件下火焰熔封，冷藏。干，真空条件下火焰熔封，冷藏。SunYat-senUniversity大大(小小)米保藏法米保藏法 是根据我国制曲原理加以改进的一种方是根据我国制曲原理加以改进的一种方法。此法是将曲霉等大量产生孢子的菌直法。此法是将曲霉等大量产生孢子的菌直接培养在大接培养在大(小小)米培养基上，待孢子充分米培养基上，待孢子充分成熟后干燥后保藏。成熟后干燥后保藏。SunYat-s
60、enUniversity甘油管保藏法甘油管保藏法本本法法也也是是利利用用微微生生物物在在甘甘油油中中生生长长和和代代谢谢受受到到抑抑制制的的原原理理达达到到保保藏藏目目的的。其其方方法法是是，将将80%80%的的甘甘油油高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌待待用用。将将培培养养好好的的斜斜面面菌菌种种用用无无菌菌水水制制成成高高浓浓度度的的菌菌悬悬液液(10(108 810101010/ml)/ml)。取取1ml1ml灭灭菌菌甘甘油油与与1ml1ml菌菌悬悬液液充充分分混混匀匀，使使甘甘油油浓浓度度约为约为40%40%，于，于-20-20下冻存。下冻存。SunYat-senUniversity基因工程菌的
61、保藏由由载载体体质质粒粒等等携携带带的的外外源源DNA片片段段通通常常是是遗遗传传不不稳稳定定的的、且且很很易易丢丢失失其其外外源源质质粒粒复复制制子子。质质粒粒基基因因通通常常为为宿宿主主细细胞胞生生长长非非必必需。需。一一般般情情况况下下当当细细胞胞丢丢失失这这些些质质粒粒时时，生生长长速度会加快。速度会加快。SunYat-senUniversity当当培培养养基基中中加加入入抗抗生生素素时时，抗抗生生素素提提供供了了一一有有利利于于携携带带质质粒粒的的细细胞胞群群体体的的极极有有用用的的生生长长选选择择压压。而而且且在在运运用用基基因因工工程程菌菌进进行行发发酵酵时时，抗抗生生素素的的加
62、加入可帮助维持质粒复制与染色体复制的协调。入可帮助维持质粒复制与染色体复制的协调。基因工程菌应保藏在含低浓度选择剂的培养基中。基因工程菌应保藏在含低浓度选择剂的培养基中。SunYat-senUniversity微生物活力和稳定性测定所所有有保保藏藏菌菌种种的的方方法法都都必必须须是是长长期期可可靠靠地地保保持持菌种的优良性状不变。菌种的优良性状不变。在在保保藏藏时时定定期期检检测测菌菌种种活活力力，以以确确定定保保藏藏培培养养物物的的保保藏藏期期限限和和保保藏藏方方法法的的可可靠靠性性，以以及及确确定定在在实实际际保保藏藏过过程程中中出出现现的的细细胞胞死死亡亡程程度度和和遗遗传传稳定性。稳定
63、性。SunYat-senUniversity对对工工业业微微生生物物生生产产菌菌种种来来说说，建建议议保保藏藏菌菌种种的的形形态态学学和和生生化化特特征征( (如如代代谢谢产产物物的的产产生生、酶酶活活力力、遗遗传传特特征征及及生生化化指指标标) )应在保藏后加以检测和确定。应在保藏后加以检测和确定。成成功功的的菌菌种种长长期期保保藏藏方方法法之之有有价价值值的的指指标标包包括括在在保保藏藏6个个月月、1年年或或更更长长时时间间后后存存活活百百分分率率(或或存存活活单单位位)。细细胞胞群群体体的的形形态态学学特特征征或或一一些些特特别别的的生生化化特特征征应应在在菌菌种种保保藏藏前前后后保保持
64、持同同一一性性，以以及及实实验验室室中中、中中试试车车间间中中和和生生产产发发酵酵中中产产品滴度的稳定性，后者极为重要。品滴度的稳定性，后者极为重要。 SunYat-senUniversityv菌种保藏机构的任务菌种保藏机构的任务菌种保藏机构的任务菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。使用的目的。v菌种保藏机构菌种保藏机构菌种保藏机构菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)(CCCCM
65、) 中国培养物保藏中心（中国培养物保藏中心（CCTCCCCTCC） 美国的典型菌种保藏中心美国的典型菌种保藏中心(ATCC)(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（英国国家典型菌种保藏所（NCTCNCTC） 法国里昂巴斯德研究所（法国里昂巴斯德研究所（IPLIPL） 荷兰霉菌中心保藏所（荷兰霉菌中心保藏所（CBSCBS） 英国国家典型菌种保藏所（英国国家典型菌种保藏所（NCTCNCTC） 日本大板发酵研究所（日本大板发酵研究所（IFOIFO）国内外菌种保藏机构：国内外菌种保藏机构：SunYat-senUniversity几种常用菌种保藏方法的比较几种常用菌种保藏方法的比较方法名称主要措施适宜菌种
66、保藏期评价冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固体）石蜡油封藏法*沙土保藏法冷冻干燥法低温低温低温、缺氧干燥、无营养干燥、无氧、低温、有保护剂各大类细菌、酵母菌各大类*产孢子微生物各大类36月612月12年110年515年以上简便简便简便简便有效简便有效SunYat-senUniversity 由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的适应性，迄今为止，尚没有一种方法能被证明对所有的微生物适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导
67、致菌种的丧失。注意事项：注意事项：SunYat-senUniversity课堂思考题：课堂思考题：如何构建如何构建“超级细菌超级细菌”降解石油成分？降解石油成分？SunYat-senUniversity2002.11.19巴哈马籍油轮“威望号”在西班牙发生断裂沉没导致燃料油泄漏。这艘船共装有7.7万吨燃料油。 SunYat-senUniversitySunYat-senUniversity动物保护者在为鸟清洗身上的油污 SunYat-senUniversity复习思考题 名词解释：名词解释：遗传性与变异性遗传性与变异性 基因型与表型基因型与表型 饰变饰变 基因突变基因突变 营养营养缺陷型缺陷型
68、 自发突变自发突变 转换转换 颠换颠换 移码突变移码突变 点突点突 变突率变突率 野生型野生型 转化转化 转导转导 感受态细胞感受态细胞 流产转导流产转导 缺陷噬菌体缺陷噬菌体 接合接合 F F因子因子 菌种复壮菌种复壮 菌种保藏菌种保藏 1 1、试述证明核酸是遗传物质的、试述证明核酸是遗传物质的3 3个经典实验，为何均选择了微生物作为个经典实验，为何均选择了微生物作为研究对象？研究对象？ 2 2、试比较普遍性转导和局限性转导的异同。、试比较普遍性转导和局限性转导的异同。 3 3、试述基因突变的类型。、试述基因突变的类型。 4 4、微生物遗传物质的存在方式有几种？微生物遗传物质的存在方式有几种？ 5 5、能否找到一种仅对某一基因具有特异性诱变作用的化学诱变剂？为什能否找到一种仅对某一基因具有特异性诱变作用的化学诱变剂？为什么？么？SunYat-senUniversity6 6、试述微生物突变的规律。7 7、请你设计筛选营养缺陷型突变体的方案？8 8、试比较大肠杆菌中F因子存在的几种方式及 常见的杂交结果。9 9、何谓菌种退化？1010、试述菌种保藏的原理及方法。 SunYat-senUniversity
