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1、实验动物与动物实验室的生物安全防护一、实验动物及实验动物设施一、实验动物及实验动物设施二、实验动物重要的人畜共患病及传染病二、实验动物重要的人畜共患病及传染病三、动物实验室的生物安全防护三、动物实验室的生物安全防护四、各级动物生物安全实验室设施与防护要求四、各级动物生物安全实验室设施与防护要求五、五、实验室生物安全事件应急预案实验室生物安全事件应急预案六、我国实验动物管理的组织机构及相关法规简介六、我国实验动物管理的组织机构及相关法规简介内内 容容2一、实验动物及实验动物设施一、实验动物及实验动物设施1、实验动物实验动物(Laboratoryanimals)：是指经人工培育，对其：是指经人工培
2、育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制；遗传背景明确，来源携带的微生物和寄生虫实行控制；遗传背景明确，来源清楚；用于科学实验、药品、生物制品的生产和检定及清楚；用于科学实验、药品、生物制品的生产和检定及其他科学实验的动物。其他科学实验的动物。2、实验用动物实验用动物(Animalsforresearch/Experimentalanimals）：所有用于科学实验的动物统称为实验用动物。）：所有用于科学实验的动物统称为实验用动物。包括实验动物，野生包括实验动物，野生动物，经济动物和观赏动物。动物，经济动物和观赏动物。3按按实验动物设施实验动物设施环境内环境内气流组织形式气流组织形式分类分类 乱流式
3、：乱流式：又称非单向流洁净室，是指气流以不均匀又称非单向流洁净室，是指气流以不均匀的速度成不平行的流动，伴有回流或涡流的洁净室。的速度成不平行的流动，伴有回流或涡流的洁净室。可依靠送风气流不断稀释室内空气，把室内污浊气体可依靠送风气流不断稀释室内空气，把室内污浊气体逐渐地排出。逐渐地排出。 单向流式单向流式：气流以均匀的截面速度，沿着平行流线气流以均匀的截面速度，沿着平行流线以单一方向在整个室截面上通过的洁净房间，又称层以单一方向在整个室截面上通过的洁净房间，又称层流室或平行流室。流室或平行流室。 7顶送侧排顶送侧排涡流或乱流涡流或乱流垂直单向流垂直单向流8按按实验动实验动物物设设施施环环境内
4、境内微生物控制程度微生物控制程度分分类类普通环境普通环境符合动物居住的基本要求；符合动物居住的基本要求；控制人员和物品、动物的出入；控制人员和物品、动物的出入；不能完全控制传染因子；不能完全控制传染因子；适用于饲育教学等用途的适用于饲育教学等用途的普通级实验动物普通级实验动物；该设施内空气与外界环境相通，但有必要的防野鼠、该设施内空气与外界环境相通，但有必要的防野鼠、蚊蝇设施；蚊蝇设施；洁净等级未作要求洁净等级未作要求。9普通环境示意图普通环境示意图10屏障环境：屏障环境：符合动物居住的基本要求；符合动物居住的基本要求；严格控制人员、物品和空气的进出严格控制人员、物品和空气的进出：（1 1）进
5、入系统的进入系统的空气空气应经过初、中、高效三级过滤；应经过初、中、高效三级过滤；（2 2）进入）进入系统系统的的设备、设备、动物、饲料、水、垫料、实验用品动物、饲料、水、垫料、实验用品均均需有严格的微生物控制；需有严格的微生物控制；（3 3）人员人员须经淋浴、更换灭菌服方可进入室内。须经淋浴、更换灭菌服方可进入室内。适用于饲育适用于饲育清洁级清洁级及及无特定病原体无特定病原体(SPF)实验动物；实验动物；洁净等级要求达到洁净等级要求达到7级。级。11屏障环境设屏障环境设施平面布局施平面布局屏障环境示意图屏障环境示意图12隔离环境：隔离环境：采用采用无菌隔离装置无菌隔离装置以保证无菌状态或无外
6、来污染物以保证无菌状态或无外来污染物;隔离装置内的隔离装置内的空气、饲料、水、垫料和设备空气、饲料、水、垫料和设备均为无菌均为无菌，动物和物料的动态传递须经特殊的传递系统动物和物料的动态传递须经特殊的传递系统;该系统既能保证与外环境的绝对隔离，又能满足转运该系统既能保证与外环境的绝对隔离，又能满足转运动物时保持与内环境的一致动物时保持与内环境的一致;该设施适用于饲育该设施适用于饲育SPF、悉生及无菌动物；、悉生及无菌动物；洁净等级要求达到洁净等级要求达到5级或级或7级。级。13隔离器隔离器14改良的屏障设施改良的屏障设施独立供气动物笼系统独立供气动物笼系统（Independentventila
7、tioncage，IVC） 该系统采用具有先进水平的该系统采用具有先进水平的微型隔离微型隔离技术，通过技术，通过在笼子内部输送经过在笼子内部输送经过高效过滤高效过滤的空气以保证动物的空气以保证动物免受免受微生物的污染微生物的污染，可以使动物生活在一个相对隔离的环，可以使动物生活在一个相对隔离的环境中。在普通环境下加境中。在普通环境下加IVC就可成为一个就可成为一个清洁级的动清洁级的动物房物房。换笼及实验操作均在超净工作台内进行。换笼及实验操作均在超净工作台内进行。15独立供气动物笼独立供气动物笼系统系统(IVC)16（2）人员、物品和动物进出屏障环境基本要求）人员、物品和动物进出屏障环境基本要
8、求人员进出屏障环境基本要求：人员进出屏障环境基本要求：所有进出人员应养成所有进出人员应养成随手关门随手关门的好习惯，并能严格的好习惯，并能严格遵守遵守“人员入室流程图人员入室流程图”所示的方向和要求所示的方向和要求单向流单向流动动；进入按以下顺序，即：更衣进入按以下顺序，即：更衣-淋浴淋浴-更灭菌衣更灭菌衣-洁净洁净走廊走廊-动物实验室动物实验室-污染走廊污染走廊-洗消室洗消室-更衣更衣-外部。外部。所有进出人员必须严格遵守屏障环境管理规定。所有进出人员必须严格遵守屏障环境管理规定。17物品进出屏障物品进出屏障环境环境的基本要求：的基本要求：双扉双扉高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器：耐高压蒸汽灭菌
9、物品的灭菌。：耐高压蒸汽灭菌物品的灭菌。带紫外线消毒的带紫外线消毒的传递窗传递窗：不耐高温高压、不能药液：不耐高温高压、不能药液浸泡以及内包装已经由浸泡以及内包装已经由高压蒸汽高压蒸汽、60CO辐照辐照和和环氧环氧乙烷乙烷等灭菌方式灭菌过的物品的灭菌。等灭菌方式灭菌过的物品的灭菌。盛满消毒液的盛满消毒液的不锈钢渡槽不锈钢渡槽：不耐高温高压和不便于：不耐高温高压和不便于从传递窗传入的物品的灭菌。从传递窗传入的物品的灭菌。18动物进出屏障环境的基本要求：动物进出屏障环境的基本要求： 引入的动物应为引入的动物应为相应的等级相应的等级；引进的动物需有引进的动物需有明确的动物品种明确的动物品种/系、性别
10、、数量、系、性别、数量、出生日期和质量合格证出生日期和质量合格证及遗传背景资料等；及遗传背景资料等；动物运达后应先动物运达后应先检查运输盒密封材料的完整性检查运输盒密封材料的完整性；验收后，按以下顺序将动物传入：动物验收后，按以下顺序将动物传入：动物(专用包装专用包装盒盒)传递窗检疫室清洁走廊饲育室或实验室传递窗检疫室清洁走廊饲育室或实验室；实验后或生产供应；实验后或生产供应包装后包装后污染走廊污染走廊外部。外部。19项项目目指指标标小鼠小鼠/大鼠大鼠豚鼠豚鼠/地鼠地鼠犬犬/猴猴/小型猪小型猪/兔兔/猫猫鸡鸡屏障屏障环环境境隔离隔离环环境境普通普通环环境境屏障屏障环环境境隔离隔离环环境境普通普
11、通环环境境屏障屏障环环境境隔离隔离环环境境屏障屏障环环境境温度温度/202618292026162820261628相相对对湿度湿度/4070最小最小换换气次数气次数/(次次/h),15208152081520气流速度气流速度/(m/s),0.2相相对对区域最小静区域最小静压压差差/Pa,10501050105010空气空气洁净洁净度度/级级75or775or775or75or7沉降菌最大平均沉降菌最大平均浓浓度度/(CFU/0.5h90mm平皿平皿),3无无检检出出无无检检出出3无无检检出出无无检检出出氨氨浓浓度度/(mg/m3),14噪声噪声/dB(A),60照度照度/Lx最低工作照度最低
12、工作照度200动动物照度物照度1520100200510昼夜照明交替昼夜照明交替时间时间/h12/12或或10/14（3）实验动物设施环境技术指标）实验动物设施环境技术指标GB14925-201020 一、流行性出血热一、流行性出血热二、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎二、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎三、狂犬病三、狂犬病四、猴四、猴B B病毒病病毒病五、弓形虫病五、弓形虫病六、沙门氏菌病六、沙门氏菌病七、钩端螺旋体病七、钩端螺旋体病八、结核分支杆菌病八、结核分支杆菌病九、志贺菌病九、志贺菌病十、鼠痘十、鼠痘十一、兔出血症十一、兔出血症 几乎所有的生命科学领域的科几乎所有的生命科学领域的科研研/教学教学/生产生
13、产/检定检定/安全评价等都安全评价等都离不开医学动物实验。而动物实离不开医学动物实验。而动物实验存在生物安全的危险。验存在生物安全的危险。 人畜共患病：人畜共患病：是指脊椎动物是指脊椎动物与人类之间自然传播和感染疾病，与人类之间自然传播和感染疾病，即人类和脊椎动物由共同病原体即人类和脊椎动物由共同病原体引起，在流行病学上又有关联的引起，在流行病学上又有关联的疾病。疾病。二、实验动物重要的人畜共患病及传染病二、实验动物重要的人畜共患病及传染病21（一）流行性出血热（一）流行性出血热由流行性出血由流行性出血热热病毒引起的主要病毒引起的主要发发生于大鼠的烈性生于大鼠的烈性传传染病染病，也是一种，也是
14、一种人畜共患人畜共患的自然疫源性的自然疫源性传传染病。染病。1981年年WHO统统一命一命名名为肾综为肾综合征出血合征出血热热（HFRS）。）。1、自然宿主：、自然宿主：主要是小型主要是小型啮齿动啮齿动物物，大鼠，大鼠为实验动为实验动物型物型HFRS的主要的主要传传染源。染源。2、传传播：播：气溶胶吸入，人气溶胶吸入，人类类主要接触宿主主要接触宿主动动物及排泄物而受感物及排泄物而受感染。染。3、症状：、症状：人：人：发热发热，头头痛，肌肉痛，痛，肌肉痛，结结膜水膜水肿肿充血（点状），充血（点状），出血性出血性肾损伤肾损伤（肾综肾综合症出血合症出血热热），最后），最后肾肾衰竭，出衰竭，出现现尿毒
15、尿毒症，症，严严重可重可导导致死亡。大致死亡。大鼠：鼠：多多为隐为隐性感染，性感染，长长期排毒，一期排毒，一般无般无临临床症状，也不死亡。一般不影响床症状，也不死亡。一般不影响实验进实验进程。程。22（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎（二）淋巴细胞性脉络丛脑膜炎 由淋巴由淋巴细细胞脉胞脉络丛脑络丛脑膜炎病毒膜炎病毒(LCMV)引起的一种急性引起的一种急性传传染病染病，为为人畜共患病人畜共患病。主要侵害中枢神经系统，呈现脑脊髓炎症状。主要侵害中枢神经系统，呈现脑脊髓炎症状。1、传传播播动动物：物：LCMV是人和多种动物共患的病毒性疾病，是人和多种动物共患的病毒性疾病，小鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、犬、猴、兔
16、均易感大鼠、豚鼠、犬、猴、兔均易感。持续感染小家鼠，急性感染。持续感染小家鼠，急性感染金黄地鼠。许多小鼠为无症状带毒者金黄地鼠。许多小鼠为无症状带毒者2、症状：、症状：人：人：潜伏期周，流感潜伏期周，流感样样症状和症状和脑脑膜炎、膜炎、发烧发烧，肌，肌痛，痛，恶恶心，心，厌厌食等。食等。小鼠：小鼠：大大脑脑型型：多数呆滞，嗜睡，被毛粗：多数呆滞，嗜睡，被毛粗乱，弓背，消瘦，特征性表乱，弓背，消瘦，特征性表现现抓尾巴倒提抓尾巴倒提时时，头头部震部震颤颤，肢体，肢体阵挛阵挛性惊厥，后肢性惊厥，后肢强强直性伸展。症状出直性伸展。症状出现现后后天内死亡。天内死亡。内内脏脏型：型：被毛粗乱，被毛粗乱，结
17、结膜炎等，部分小鼠出膜炎等，部分小鼠出现现腹水。腹水。迟发迟发型：型：先天性先天性带带毒小鼠。开始无症状，毒小鼠。开始无症状，0.5-1年后表年后表现为现为：被毛粗乱，：被毛粗乱，弓背，尿蛋白，腹水，生弓背，尿蛋白，腹水，生长缓长缓慢等。慢等。23（三）狂犬病（三）狂犬病 由狂犬病毒由狂犬病毒(RabiesVirus，RV)引起的急性直接接触性引起的急性直接接触性为为主的主的人畜共患病。主要特征：人畜共患病。主要特征：侵害中枢神侵害中枢神经经系系统统，呈，呈现现狂躁不安，意狂躁不安，意识识紊乱，最后麻痹死亡紊乱，最后麻痹死亡。1、传传播播动动物：物：几乎所有温血几乎所有温血动动物都物都对对RV
18、易感。易感。最易感最易感动动物物包括包括犬、狐、狼，袋鼠；犬、狐、狼，袋鼠；次易感次易感动动物物包括包括仓仓鼠、豚鼠、兔等鼠、豚鼠、兔等啮齿类动啮齿类动物；物；中度易感中度易感动动物物包括牛、包括牛、绵绵羊、羊、马马、灵、灵长类动长类动物。野生物。野生啮齿类啮齿类动动物如野鼠等在一定条件下可成物如野鼠等在一定条件下可成为为本病本病长长期存在的危期存在的危险险疫源。四疫源。四季均可季均可发发生，春夏稍高。生，春夏稍高。2、症状：、症状：(1)前前驱驱期期(沉郁期沉郁期)；(2)兴奋兴奋期期(狂暴期狂暴期)；(3)麻痹期麻痹期24（四）猴（四）猴B病毒病病毒病 由猴由猴B病毒病毒(SimianBv
19、irusInfections)（又称疱疹病（又称疱疹病毒）引起的毒）引起的人和猴人和猴共患的一种共患的一种传传染病。染病。猴猴是是B病毒的自然病毒的自然宿主，感染率可达宿主，感染率可达1060。多数情况下。多数情况下仅仅在口腔出在口腔出现现疱疹和疱疹和溃疡溃疡，之后病毒可，之后病毒可长长期潜伏在呼吸道或泌尿生殖器期潜伏在呼吸道或泌尿生殖器官附近的神官附近的神经节经节，也可，也可长长期潜伏在期潜伏在组织组织器官内，器官内，产产生生B病病毒抗体。毒抗体。人人类类感染感染主要表主要表现现脑脑炎炎或或脑脑脊髓炎症状，多数病脊髓炎症状，多数病人人发发生死亡。生死亡。大多数猴呈大多数猴呈隐隐性感染。种族差
20、异明性感染。种族差异明显显，白种人死亡，白种人死亡率高，黄种人低。率高，黄种人低。25（五）弓形虫病（五）弓形虫病 本病是由属孢子纲的本病是由属孢子纲的刚第弓形虫刚第弓形虫引起的，能够在引起的，能够在人人与动物与动物之间传染的重要人兽共患病。小鼠、大鼠、地鼠之间传染的重要人兽共患病。小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、犬和猴为中间宿主，猫为终末宿主。、豚鼠、犬和猴为中间宿主，猫为终末宿主。 症状：症状：常无明显症状。常无明显症状。人：多数为无症状的隐性感染；人：多数为无症状的隐性感染； 实验动物：少数被毛疏松不整，淋巴结肿大，出现实验动物：少数被毛疏松不整，淋巴结肿大，出现流产或死胎现象。流产或死胎现象。
21、26（六）沙门氏菌（六）沙门氏菌沙沙门门菌菌(Salmonellasp)是是1880年年Eberth首先首先发现发现。是一。是一类类重要重要的的人人兽兽共患疾病共患疾病病原体。病原体。对实验动对实验动物威物威胁较胁较大的是大的是鼠鼠伤伤寒和寒和肠肠炎炎菌菌。在。在动动物中可交叉感染，或同物中可交叉感染，或同时时感染两种沙感染两种沙门门菌。菌。豚鼠豚鼠对对沙沙门门菌高度敏感，感染后可菌高度敏感，感染后可发发生生严严重的重的临临床疾病；小床疾病；小鼠和大鼠鼠和大鼠也很敏也很敏感，并常以感，并常以亚临亚临床感染的形式床感染的形式长长期期带带菌。菌。沙沙门门菌主要通菌主要通过过消化道消化道传传染染，即
22、，即动动物食入物食入污污染沙染沙门门菌的菌的粪粪便便或被或被粪粪便便污污染的染的饲饲料、料、饮饮水、水、垫垫料。料。症状：症状：1.急性型：急性型：爆爆发发性流行，性流行，45天内大批死亡；天内大批死亡；2.亚亚急性急性型型:行行为为呆滞呆滞,腹泻，被毛蓬松，食欲不振，呈腹泻，被毛蓬松，食欲不振，呈肠肠炎症状；炎症状；3.慢性慢性型型:下痢下痢为为主要症状主要症状,消瘦，消瘦，产产仔数减少，也有部分呈仔数减少，也有部分呈隐隐性感染。性感染。哺乳期小鼠哺乳期小鼠发发病率高达病率高达70%，BALB/c敏感敏感，CDF1不敏感不敏感27（七）钩端螺旋体病（七）钩端螺旋体病 钩钩端螺旋体病端螺旋体病
23、(Leptospirosis)是一种重要而复是一种重要而复杂杂的的人畜共患病人畜共患病和和自然疫源性自然疫源性传传染病。染病。临临床表床表现现形式多形式多样样，主要有主要有发热发热、黄疸、血、黄疸、血红红蛋白尿、出血、流蛋白尿、出血、流产产、皮肤和、皮肤和黏膜坏死、水黏膜坏死、水肿肿等。等。钩钩端螺旋体的端螺旋体的动动物宿主非常广泛，几乎所物宿主非常广泛，几乎所有温血有温血动动物都可感染物都可感染，其中，其中啮齿啮齿目的鼠目的鼠类类是最重要的是最重要的贮贮存宿主存宿主 28（八）结核分支杆菌病（八）结核分支杆菌病 由由结结核分支杆菌核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis
24、)引引起的起的人和人和动动物共患的一种物共患的一种细细菌性疾病菌性疾病。人人感染后形成感染后形成结结核病，核病，猴、犬、豚鼠、兔和猫等均可感染猴、犬、豚鼠、兔和猫等均可感染，以猴，以猴发发病率最高。病率最高。（九）志贺菌病（九）志贺菌病 由志由志贺贺菌菌(Shigellaspp)或称痢疾杆菌引起或称痢疾杆菌引起人和人和实实验动验动物物肠肠道感染道感染的一种的一种细细菌性疾病。菌性疾病。人和猴以人和猴以细细菌性菌性痢疾痢疾为为主要症状。主要症状。29（十）鼠（十）鼠 痘痘 小鼠鼠痘小鼠鼠痘(Mousepox，MPV)是小鼠的一种是小鼠的一种毁毁灭灭性、高度性、高度传传染性疾病，其病原染性疾病，其
25、病原为为脱脚病病毒脱脚病病毒，鼠痘的特点鼠痘的特点在在于感染后于感染后不但引起全身或局部皮肤的痘疹，不但引起全身或局部皮肤的痘疹，还还可可发发生肢、尾生肢、尾肿胀肿胀，发发炎和坏疽，肢体脱落呈炎和坏疽，肢体脱落呈“缺肢缺肢“的畸形，故被称的畸形，故被称为为传传染性脱染性脱脚病。脚病。流行：流行：小鼠鼠痘在世界各地广小鼠鼠痘在世界各地广为为流行，常造成小鼠大批流行，常造成小鼠大批死亡，有的呈死亡，有的呈隐隐性感染，但在性感染，但在实验实验条件下，病毒可条件下，病毒可转转化化为显为显性染，从而性染，从而严严重影响和干重影响和干扰实验扰实验研究的研究的顺顺利利进进行。行。诊诊断：断：血清学方法血清学
26、方法:血凝抑制血凝抑制试验试验；补补体体结结合合试验试验；免疫；免疫荧荧光；免疫光；免疫酶酶试验试验；酶酶联联免疫吸附免疫吸附试验试验等。等。30（十一）兔出血症（十一）兔出血症 由兔出血症病毒由兔出血症病毒(RabbitHemorrhagicDiseaseVirus)引起的兔的一种引起的兔的一种烈性烈性传传染病染病，又称，又称“兔瘟兔瘟”。主要特征。主要特征是病兔突然死亡，是病兔突然死亡，临临死死兴奋兴奋，挣挣扎、抽搐、惨叫。扎、抽搐、惨叫。本病只本病只发发生于兔，不同品种的兔均易感，不同性生于兔，不同品种的兔均易感，不同性别别兔的易感性无差异。不同年兔的易感性无差异。不同年龄龄兔的易感性差
27、异很大，兔的易感性差异很大，主主要要发发生于生于60日日龄龄以上的青年兔和成年兔，以上的青年兔和成年兔，发发病急，死亡病急，死亡率高率高，断乳后育成兔死亡率稍低，哺乳期仔兔很少，断乳后育成兔死亡率稍低，哺乳期仔兔很少发发病病死亡。死亡。31 由于实验动物常采取群体饲养，易造成动物疾病的由于实验动物常采取群体饲养，易造成动物疾病的暴发和流行。且多数病原属人畜共患病病原，可同时暴发和流行。且多数病原属人畜共患病病原，可同时引起人和动物的疾病，就更具危险性。严格实验动物引起人和动物的疾病，就更具危险性。严格实验动物的管理制度、预防在先是杜绝人和动物间疾病传播的的管理制度、预防在先是杜绝人和动物间疾病
28、传播的根本保证。根本保证。 三、动物实验室的生物安全防护三、动物实验室的生物安全防护321、动动物物实验实验室生物危害的来源室生物危害的来源（1）动动物性气溶胶物性气溶胶（AnimalAerosol）的）的产产生：感染生：感染动动物物在在观观察察饲饲养期养期间间，它，它们们在呼吸、排泄、抓咬、在呼吸、排泄、抓咬、挣挣扎、逃逸、扎、逃逸、跳跳跃时跃时；在更；在更换垫换垫料、料、饲饲料、料、进进行感染接种行感染接种时时；在尸体剖；在尸体剖检检、病理、病理组织组织、排泄物的、排泄物的处处理等理等过过程中会大量程中会大量产产生生传传播危播危害性极大的害性极大的动动物性气溶胶。因此物性气溶胶。因此对对气
29、溶胶的生物安全防气溶胶的生物安全防护护，应应当是当是动动物物实验实验室建室建设设中的核心。中的核心。33（2）实验动实验动物：物：特特别别是是实验实验用用动动物物（羊、（羊、马马、蟾蜍等）本、蟾蜍等）本身可能患有能感染人的人畜共患病。如：身可能患有能感染人的人畜共患病。如：34病例一：病例一： 2010年年12月月17日日东东北北农农大大动动物医学学院物医学学院做羊的剖做羊的剖腹腹产实验产实验，19日日应应用技用技术术学院学院利用利用该该羊做羊的解剖羊做羊的解剖实验实验，结结果果致致27名同学、名同学、1名教名教师师被感国家乙被感国家乙类传类传染病染病布氏杆菌病布氏杆菌病！后后经调查经调查是学
30、院未是学院未严严格遵守相格遵守相应应的的实验实验操作操作规规程，程，购买购买了了不合格不合格动动物物羊羊所致。所致。此病体内此病体内终终生生带带菌，关菌，关节节疼痛、疼痛、损伤损伤身体其他身体其他器官、不孕不育！最器官、不孕不育！最终丧终丧失失劳动劳动能力，直接阻碍了今后生活和能力，直接阻碍了今后生活和工作的正常工作的正常进进行！行！ 病例二：病例二：2009年年中山大学北校区中山大学北校区科研人员在没有科研人员在没有“实验动实验动物使用许可证物使用许可证”的实验室利用大鼠做实验时，导致的实验室利用大鼠做实验时，导致实验室实验室多名多名工作人员工作人员感染感染流行性出血热流行性出血热! 352
31、、动动物物实验实验室生物安全防范的基本措施室生物安全防范的基本措施（1）实验动实验动物物设设施施为单为单独区域，与独区域，与办办公和其他公和其他实验场实验场所所分开。分开。（2）动动物物实验实验人人员员需需经经培培训训，取得上，取得上岗证岗证，实实行行持持证证上上岗岗。（3）动动物物应应从具有从具有“实验动实验动物生物生产许产许可可证证”的的单单位位购买购买；不；不同品种（系）、不同来源的同品种（系）、不同来源的动动物必物必须须分室分室饲饲养，不同养，不同对对象、不同内容的象、不同内容的实验实验分室分室进进行。行。（4）实验实验人人员员更更换换工作服、鞋、戴帽、手套、口罩、工作服、鞋、戴帽、手
32、套、口罩、风风淋淋后方可后方可进进入。入。36（5）动动物物由由动动物物传递传递窗，外包装窗，外包装经经紫外紫外线线照射或照射或喷喷洒消毒洒消毒液后液后传传入，入室后要入，入室后要检检疫（疫（小小动动物物7天，大天，大动动物物14天天）。）。（6）所有所有样样品、品、饲饲料料（钴钴60照射）照射）经经渡槽或渡槽或传递传递窗紫外窗紫外线线照射或照射或喷喷洒消毒液后洒消毒液后传传入。入。（7）非非实验实验用品用品（如食物、（如食物、饮饮水、香烟和手机等）一律不水、香烟和手机等）一律不得得带带入入动动物物实验实验室。室。（8）饲饲养养笼笼、实验实验器具、器具、饮饮水瓶、水瓶、垫垫料料等等须经须经高高
33、压灭压灭菌后菌后方可使用。方可使用。动动物物饮饮水：屏障水：屏障环环境内使用境内使用灭灭菌水。菌水。37（9）按操作）按操作规规程抓取、固定程抓取、固定动动物等物等实验实验操作。操作。（10）设设置安全出口、出口指示、置安全出口、出口指示、灭灭火器械；配置火器械；配置应应急洗急洗眼器。眼器。（11）实验废实验废弃物由弃物由污污物走廊物走廊传传出，出，专门专门放在指定位置放在指定位置统统一一处处理，理，动动物死体物死体专专用塑料袋包装后冷用塑料袋包装后冷冻冻保存，送保存，送专门专门机构做机构做无害化无害化处处理理。383、动物实验过程的行为规范、动物实验过程的行为规范（1）物理限制：）物理限制：
34、是指在实验过程中（包括检查、收集标是指在实验过程中（包括检查、收集标本、给药、治疗或实验操作等），用手或工具限制动物本、给药、治疗或实验操作等），用手或工具限制动物活动的过程。主要原则和要求包括：活动的过程。主要原则和要求包括： 不能作为常规的饲养工具；不能作为常规的饲养工具； 工具的设计应合理；工具的设计应合理； 尽量减少限制的时间；尽量减少限制的时间； 在限制过程中，如果发生损伤或严重的行为改变，应在限制过程中，如果发生损伤或严重的行为改变，应暂停或禁止限制，并给予处理或治疗。暂停或禁止限制，并给予处理或治疗。 保证实验人员和周围人员的安全。保证实验人员和周围人员的安全。39（2）手术操作
35、）手术操作操作一定要使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法；操作一定要使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法；禁止不必要的重复操作；禁止不必要的重复操作；不提倡利用一个动物进行多个手术实验；（不提倡利用一个动物进行多个手术实验；（东农学东农学生师生感染事件生师生感染事件）严格实验操作规程，防止发生血液严格实验操作规程，防止发生血液/体液外溅和刺伤，体液外溅和刺伤，避免生物污染；避免生物污染；手术后的动物、标本以及所用器具材料等必须按照手术后的动物、标本以及所用器具材料等必须按照规定程序妥善处置。规定程序妥善处置。 40（3）动物实验的有关操作）动物实验的有关操作给药给药：根据实验要求，按不同的动物，不同途径给
36、药。主根据实验要求，按不同的动物，不同途径给药。主要包括要包括灌胃和静脉注射灌胃和静脉注射。大动物大动物，将动物，将动物麻醉麻醉后后方可进行方可进行灌胃或静脉注射。灌胃或静脉注射。小动物小动物可可根据情况根据情况选择是否麻醉，静脉选择是否麻醉，静脉注射时需使用固定器。注射时需使用固定器。 采样采样：原则上：原则上活检活检时应对动物进行时应对动物进行麻醉麻醉。大动物进行采血。大动物进行采血或体检时，要求将动物麻醉。对小动物进行采血时，可不或体检时，要求将动物麻醉。对小动物进行采血时，可不麻醉动物，但要防止动物咬抓。麻醉动物，但要防止动物咬抓。 标本的运输标本的运输：要求用：要求用防渗漏防渗漏的容
37、器装标本。容器应确保的容器装标本。容器应确保密密封封。将大、小动物标本从实验室。将大、小动物标本从实验室传出传出应应严格按照严格按照有关有关规定规定程序执行。程序执行。41（4）实验标实验标本、本、废废弃物和尸体弃物和尸体处处理理血液和体液血液和体液标标本的本的处处理：理：用于抗体、抗原、病原微生物、用于抗体、抗原、病原微生物、生化指生化指标标等等检查检查的血液和体液，按照要求的血液和体液，按照要求进进行行处处理并理并检检测测，检测检测后的后的标标本本经经121，30min高高压灭压灭菌菌处处理。理。动动物物组织脏组织脏器的器的处处理：理：动动物器官物器官组织组织，尤其是用于病原，尤其是用于病
38、原微生物分离的微生物分离的组织组织按照按照标标准程序准程序进进行行处处理；用于病理切理；用于病理切片的片的组织组织，均需，均需经过经过甲甲醛醛固定后再固定后再进进行切片。剩余的行切片。剩余的组组织经织经121，30min高高压灭压灭菌菌处处理理。42 动动物尸体的物尸体的处处理理：安乐死后的动物尸体，取材完毕，：安乐死后的动物尸体，取材完毕，经经121，30min高高压灭压灭菌菌处处理理后，集中送环保部门后，集中送环保部门处理。处理。动动物咽拭子的物咽拭子的处处理：理：用于病原分离和用于病原分离和PCR检测检测的咽拭的咽拭子，按照各自的要求子，按照各自的要求处处理后，理后，进进行病毒分离和行病
39、毒分离和PCR检测检测，剩余的剩余的标标本本经经121，30min高高压压消毒消毒处处理。理。病原分离培养物的病原分离培养物的处处理：理：病原分离的培养物，不病原分离的培养物，不论论是是阳性阳性还还是阴性是阴性结结果，均需果，均需经经121，30min高高压压消毒消毒处处理。理。434、实验动物使用程序和要求、实验动物使用程序和要求（1）实验动物的基本使用程序和要求：）实验动物的基本使用程序和要求： 1）购买实验动物时，应从有）购买实验动物时，应从有“实验动物实验动物生产许可证生产许可证”的的单位购买。单位购买。 2）进行动物实验时，应向有）进行动物实验时，应向有“实验动物实验动物使用许可证使
40、用许可证”的的单位提交单位提交“动物实验申请动物实验申请”和和“实验动物福利与伦理审查实验动物福利与伦理审查申请申请”（发表论文）；（发表论文）； 3）动物实验申请获得批准后，动物实验室根据申请的动）动物实验申请获得批准后，动物实验室根据申请的动物种属和数量，将动物安排在指定的区域内饲养和实验；物种属和数量，将动物安排在指定的区域内饲养和实验； 4）实验结束后，需要动物实验室开具）实验结束后，需要动物实验室开具“动物实验证明动物实验证明”。44 （2）含有感染性材料的动物实验要求）含有感染性材料的动物实验要求 1）涉及感染性材料的操作要在生）涉及感染性材料的操作要在生物安全柜中进行物安全柜中进
41、行，并防止泄露在安全柜底面；并防止泄露在安全柜底面； 2）动物笼具在清洗前先做清除污染处理；）动物笼具在清洗前先做清除污染处理； 3）污物、一次性物品需放入医疗废物专用垃圾袋中，）污物、一次性物品需放入医疗废物专用垃圾袋中，经经高压灭菌后高压灭菌后方可拿出实验室；方可拿出实验室； 4）动物尸体用双层医疗废物专用垃圾袋包裹后，放）动物尸体用双层医疗废物专用垃圾袋包裹后，放入标有动物尸体专用的容器中，用消毒液喷雾容器表入标有动物尸体专用的容器中，用消毒液喷雾容器表面后处理。面后处理。 5）生物安全柜每次使用后应该消毒。）生物安全柜每次使用后应该消毒。456）废废液液需按需按比例倒入有消毒液比例倒入
42、有消毒液的桶中，倒入的桶中，倒入时时需沿容器壁需沿容器壁轻轻倒，倒，应应戴眼罩，防止戴眼罩，防止溅溅入眼中；入眼中；7）如果有）如果有感染性物感染性物质溅质溅到生物安全柜到生物安全柜上、地上以及其他地上、地上以及其他地方，方，应应按按“菌（毒）外溢在台面、地面和其他表面菌（毒）外溢在台面、地面和其他表面”处处理理方法方法处处理；理；8）每天工作）每天工作结结束束时时，应应用消毒液擦拭用消毒液擦拭门门把手把手和和地面地面等表面等表面区域。区域。9）废废物放入高物放入高压灭压灭菌器内菌器内时时需同需同时时粘粘贴贴指示条指示条，物品移出，物品移出前前观观察察指示条是否达到指示条是否达到灭灭菌要求菌要
43、求。颜颜色不符色不符时时需重复高需重复高压灭压灭菌。菌。10）高）高压灭压灭菌器需菌器需每月做每月做灭灭菌菌测试测试一次一次，并作，并作记录记录。 46（3）动物的检疫）动物的检疫和疾病的控制和疾病的控制处处理要求理要求1）外）外购实验动购实验动物需要物需要进进行行检检疫疫，各，各动动物的物的检检疫期不同，疫期不同，大大动动物物为为2周周，小小动动物物为为1周周；2）在）在检检疫期内疫期内观观察察动动物的精神状物的精神状态态、食欲、食欲、营营养状况、排养状况、排泄物等，如有任何异常，泄物等，如有任何异常，动动物不得用于物不得用于实验实验，应应退出退出动动物物检检疫室；疫室；3）检检疫合格的疫合
44、格的动动物物经经适当适当处处理后由理后由缓缓冲冲间间或物流通道或物流通道进进入入动动物物实验实验室。室。4）动动物物发发生疾病死亡生疾病死亡应应及及时进时进行病理尸行病理尸检检或其他或其他实验实验室室检检47查查，作出，作出诊诊断，提出断，提出处处理意理意见见。4）当）当动动物物发发生生传传染病染病时时，原，原则则上全部上全部销销毁毁，并及，并及时报时报告告实实验验室室负责负责人或上人或上级级主管部主管部门门。实验实验室、用具、室、用具、笼笼架、架、垫垫料、衣帽等必料、衣帽等必须进须进行行彻彻底消毒。底消毒。动动物室消毒后封物室消毒后封锁锁一段一段时间时间，经检测经检测合格才能使用。合格才能使
45、用。5）当动物发生）当动物发生烈性传染病流行烈性传染病流行时，应立即上报实验动物检时，应立即上报实验动物检定机构，同时采取严格的定机构，同时采取严格的隔离消毒隔离消毒措施，以免传染病的措施，以免传染病的蔓延。蔓延。6）尸体处理：尸体处理：尸体处理一般要求焚烧或深埋。尸体处理一般要求焚烧或深埋。48 为了防止感染性病原微生物的动物实验室可能对为了防止感染性病原微生物的动物实验室可能对观察实验动物的人员以及其他实验室造成污染，要求观察实验动物的人员以及其他实验室造成污染，要求此类动物实验室应是一个相对独立的区域。如果与普此类动物实验室应是一个相对独立的区域。如果与普通动物实验室毗连，则设计上应当同
46、实验室的公共部通动物实验室毗连，则设计上应当同实验室的公共部分分开，并便于清除污染。分分开，并便于清除污染。四、各级动物生物安全实验室设施与防护要求四、各级动物生物安全实验室设施与防护要求49vv动动动动物物物物实实实实验验验验室室室室的的的的建建建建筑筑筑筑要要要要求求求求是是是是避避避避免免免免外外外外界界界界微微微微生生生生物物物物感感感感染染染染饲饲饲饲养养养养的的的的清清清清洁洁洁洁级级级级或或或或SPFSPF级级级级动动动动物物物物，所所所所以以以以空空空空气气气气是是是是外外外外排排排排的的的的，而而而而动动动动物物物物是是是是清清清清洁洁洁洁的的的的。此此此此时进时进时进时进入
47、入入入实验实验实验实验室的工作人室的工作人室的工作人室的工作人员员员员反而可能作反而可能作反而可能作反而可能作为传为传为传为传染源感染染源感染染源感染染源感染动动动动物。物。物。物。vv动动动动物物物物生生生生物物物物安安安安全全全全实实实实验验验验室室室室的的的的建建建建筑筑筑筑理理理理念念念念则则则则与与与与之之之之相相相相反反反反，在在在在ABSL-3ABSL-3实实实实验验验验室室室室内内内内的的的的动动动动物物物物是是是是不不不不安安安安全全全全因因因因素素素素，要要要要避避避避免免免免动动动动物物物物及及及及其其其其排排排排泄泄泄泄物物物物污污污污染染染染外外外外界界界界环环环环境
48、境境境，所所所所以以以以ABSL-3ABSL-3实实实实验验验验室室室室内内内内是是是是负负负负压压压压，空空空空气气气气是是是是向向向向内内内内流的。流的。流的。流的。v动动物生物安全物生物安全实验实验室的分室的分级级主要根据所研究病原微生物的主要根据所研究病原微生物的危害危害评评估估结结果果和和和和危害程度分危害程度分类类划分划分为为一一级级、二、二级级、三、三级级和和四四级级。动物实验室与动物生物安全实验室的区别动物实验室与动物生物安全实验室的区别50级动级动物生物安全物生物安全实验实验室室（AnimalBiosafetyLevel-1,ABSL-1）v适用于适用于检疫后检疫后的大多数种
49、属动物（灵长类除外），以及专的大多数种属动物（灵长类除外），以及专门接种了门接种了危害程度第四类危害程度第四类的微生物，如大、小鼠及金黄地的微生物，如大、小鼠及金黄地鼠白血病病毒、小鼠乳腺瘤病毒等的动物饲养和操作。鼠白血病病毒、小鼠乳腺瘤病毒等的动物饲养和操作。v设施要求设施要求：实验室与建筑物中的一般通道不须隔开，一般：实验室与建筑物中的一般通道不须隔开，一般在实验台上操作。在实验台上操作。v防护设备防护设备：一般不要求专用防护设备。：一般不要求专用防护设备。 51ABSL-1的的设设施要求：施要求： 1、实验实验室室设计设计与建筑与建筑应应便于清便于清洁洁。2、实验实验台表面台表面不透水，
50、耐酸、碱、有机溶不透水，耐酸、碱、有机溶剂剂、并耐、并耐热热。3、实验实验室室设备设备坚坚固。固。实验实验台、柜及台、柜及设备设备之之间间的空的空间应间应有适有适当距离便于清当距离便于清洁洁。4、实验实验室区及室区及动动物物饲饲养区养区应设应设洗手池。洗手池。5、如、如实验实验室有可开关的窗子室有可开关的窗子应应装上装上纱纱窗。窗。6、实验实验室室空气直接外排空气直接外排，不得再循，不得再循环环或回流至其它或回流至其它动动物物饲饲养区。养区。7、建筑物内、建筑物内动动物物设设施施应应与开放的人与开放的人员员活活动动区区分开分开。8、应应安装安装自自动闭门动闭门器器，当有，当有实验动实验动物物时
51、应时应保持保持锁闭锁闭状状态态。9、如果有地漏，、如果有地漏，应应始始终终用水或消毒用水或消毒剂剂液封。液封。10、动动物物笼笼具的洗具的洗涤应满涤应满足足清清洁洁要求。要求。52ABSL-1的标准微生物学规范：的标准微生物学规范： 1、实验实验人人员员的的实验实验工作需由工作需由实验实验室室负责负责人批准，其他人人批准，其他人员员未未经经批准不得批准不得进进入入实验实验室。室。2、工作面每天、工作面每天消毒消毒一次，并及一次，并及时对溅时对溅落活微生物的材料落活微生物的材料进进行行消毒。消毒。3、采用、采用机械吸液机械吸液装置，禁止用嘴吸液。装置，禁止用嘴吸液。4、在、在实验实验区内区内禁止
52、禁止饮饮食、吸烟、食、吸烟、处处理理隐隐性眼性眼镜镜及化及化妆妆等。等。5、实验实验人人员员在操作活微生物材料及在操作活微生物材料及动动物后，离开物后，离开实验实验室之前室之前均均应应洗手洗手。6、所有、所有污污染的液体或固体染的液体或固体废废弃物在弃物在处处理前理前应应去除去除污污染染。感染。感染动动物尸体需用防漏、有盖容器运出并焚化。物尸体需用防漏、有盖容器运出并焚化。7、所有、所有操作均操作均应应按按规规程程仔仔细细小心小心进进行，使气溶胶的行，使气溶胶的产产生减至生减至最底限度。最底限度。8、实验实验室室应应有防昆虫及鼠有防昆虫及鼠类类的措施。的措施。53ABSL-1的特殊规范：的特殊
53、规范： 1、需、需告知告知进进入入实验实验室人室人员员潜在危害潜在危害，符合特定要求符合特定要求人人员员方方能由能由负责负责人批准人批准进进入。入。2、实验实验室要制定室要制定生物安全手册生物安全手册，供需要，供需要进进入的工作人入的工作人员阅员阅读读并按程序并按程序执执行。行。3、建、建议议穿穿长长工作服，以防止工作服，以防止污污染。染。动动物室工作服不能穿到物室工作服不能穿到其它其它实验实验区域。区域。4、需运至、需运至实验实验室外室外进进行行消毒消毒处处理的理的污污染材料，染材料，应应装入装入坚坚固、固、密密闭闭的容器。的容器。5、动动物用物用笼笼架具可用手洗及机洗。架具可用手洗及机洗。
54、洗洗涤应满涤应满足清足清洁洁要求要求。54级动物生物安全实验室（级动物生物安全实验室（ABSL-2） v与动物实验一级生物安全水平相似，适用于那些对与动物实验一级生物安全水平相似，适用于那些对人及环境有人及环境有中度潜在危险中度潜在危险的微生物和动物实验工作，的微生物和动物实验工作，其不同点在于：其不同点在于：人员经过操作病原性物质人员经过操作病原性物质专门训专门训练练，并由能胜任的科学人员，并由能胜任的科学人员监督管理监督管理；正在工作正在工作时时限制限制外人进入实验室；外人进入实验室；某些某些产生传染性气溶胶产生传染性气溶胶的工作在的工作在生物安全柜生物安全柜或其他或其他物理封闭物理封闭设
55、备内进行。设备内进行。v设置要求设置要求：用：用生物安全柜生物安全柜或或其他个人防护用品，或其他个人防护用品，或物理阻隔装置物理阻隔装置.55ABSL-2的的防防护护要求：要求： 一级防护一级防护：应在：应在生物安全柜生物安全柜操作，包括容易产生气溶胶的操作，包括容易产生气溶胶的操作；个人防护包括穿操作；个人防护包括穿专用实验室防护专用实验室防护外衣、罩衣、长衣或外衣、罩衣、长衣或专门制服，戴护目镜、口罩、面罩等，处理动物时要专门制服，戴护目镜、口罩、面罩等，处理动物时要戴双层戴双层手套手套，离开实验室时要把这些衣物留在实验室内消毒处理，离开实验室时要把这些衣物留在实验室内消毒处理，严禁带出实
56、验室。严禁带出实验室。 二级防护二级防护：高压蒸汽灭菌柜；眼睛冲洗设备高压蒸汽灭菌柜；眼睛冲洗设备。ABSL-2的的设设施要求：施要求： 除满足除满足ABSL-1的设施要求外，还应有的设施要求外，还应有高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌器菌器，供传染性实验室废弃物处理专用。供传染性实验室废弃物处理专用。 56ABSL-2的的标标准微生物学准微生物学规规范：范： ABSL-2的的标标准微生物学准微生物学规规范同范同ABSL-1。 57ABSL-2的的特殊特殊规规范：范： ABSL-2的特殊的特殊规规范除范除满满足足ABSL-1要求外，要求外，还应还应注意：注意：实验实验室室负责负责人人应应确定确定进进入入实
57、验实验室室人员的资质人员的资质。在一般情况在一般情况下，下，应应禁止高度易感人群禁止高度易感人群，如孕，如孕妇妇或免疫受或免疫受损损人人员员进入进入。操作操作传传染性物染性物质质的的实验实验室，要有室，要有进进入入实验实验室的特殊室的特殊规规定定（如（如进进行行预预防接种）。在防接种）。在进进入入实验实验区的区的门门上上应标应标明明“生物危生物危险险”的警告的警告标标志，包括通用的生物危志，包括通用的生物危险险性性标标志，志，传传染性物染性物质质种种类类、实验实验室室负责负责人姓名、人姓名、电话电话、以及、以及进进入入实验实验室的特殊室的特殊要求。要求。工作人工作人员员需需进进行行意外事故意外
58、事故发发生后的生后的紧紧急急处处理方法的理方法的培训培训，并保并保证证培培训训记录记录。要特要特别别注意注意防止经皮肤防止经皮肤感染，尤其是要避免被感染，尤其是要避免被动动物抓物抓/咬咬伤伤58ABSL-2的的特殊特殊规规范：范： 废弃物在处理前应废弃物在处理前应去除污染去除污染。 笼具需经高压笼具需经高压灭菌灭菌或或去污后方可洗涤去污后方可洗涤。 与实验与实验无关的动物无关的动物不允许放在实验室内。不允许放在实验室内。 根据传染因子的情况，根据传染因子的情况，开展工作前开展工作前采集并保存所有实验采集并保存所有实验人员及有被感染危险的其他人员的本底人员及有被感染危险的其他人员的本底血清样品。
59、血清样品。采集采集第二份血清样品的间隔时间可随所用传染因子及实验室第二份血清样品的间隔时间可随所用传染因子及实验室情况的不同而异。情况的不同而异。 制定生物安全手册制定生物安全手册，对工作人员说明特殊实验的危险性，对工作人员说明特殊实验的危险性，并要求他们严格遵守。并要求他们严格遵守。 59级动物生物安全实验室（级动物生物安全实验室（ABSL-3）v 设设置要求：置要求：用用生物安全柜生物安全柜或或其他个人防其他个人防护护用品，或用品，或物理物理阻隔阻隔装置装置。v防防护设备护设备：一一级级防防护护：使用使用级级或或级级生物安全柜生物安全柜，戴防毒面具，穿，戴防毒面具，穿着背开衣或罩衣、着背开
60、衣或罩衣、长长衣和衣和连裤连裤衣，重复使用必衣，重复使用必须须消毒。消毒。二二级级防防护护：隔离，隔离，通通过过两道自两道自动连锁门动连锁门才能才能进进入，内入，内设设更更衣室，淋浴室；衣室，淋浴室；实验实验室出口室出口处设处设有脚有脚/肘肘动动或自或自动动开关的开关的洗手池；排出的空气至少有一道洗手池；排出的空气至少有一道HAPE过滤过滤，空气不准，空气不准在建筑物的其他区域循在建筑物的其他区域循环环使用；使用；严严格格执执行系行系统统内的内的维维修修制度和消毒措施；眼睛清洗器随制度和消毒措施；眼睛清洗器随时时可用。可用。60ABSL-3的防护设备的防护设备 1、在、在实验实验室内穿上保室内
61、穿上保护护用的用的实验实验服服（如后开口服、全身（如后开口服、全身覆盖服、两件套服、覆盖服、两件套服、连连衣衣裤裤）。）。2、在有、在有传传染性染性动动物的室内物的室内应应戴模戴模压压面罩面罩或或防毒面具防毒面具。3、动动物物实验实验需加需加戴防撕咬手套戴防撕咬手套，无菌方式摘除后与，无菌方式摘除后与动动物物室室废废弃物一同弃物一同处处理。理。4、专专用靴子用靴子等防等防护护性鞋罩，脱除之前要消毒。性鞋罩，脱除之前要消毒。5、动动物在物在带带滤过滤过帽帽或或负压负压式式IVC或或隔离器等隔离器等笼笼盒内盒内饲饲养。养。61ABSL-3的设施要求：的设施要求： 1、动物实验室须在整体建筑中自成一
62、区，可通过隔离门与、动物实验室须在整体建筑中自成一区，可通过隔离门与公共走廊相连。公共走廊相连。2、动物实验室通道的门需互锁。、动物实验室通道的门需互锁。3、墙、地面、顶棚的内表面应防水，以便于清洁及消毒。、墙、地面、顶棚的内表面应防水，以便于清洁及消毒。这些表面的连接处应已密封或能密封，以便于该区域去除这些表面的连接处应已密封或能密封，以便于该区域去除污染。污染。4、每个实验室设置洗手池。洗手池要有支架、肘推开关或、每个实验室设置洗手池。洗手池要有支架、肘推开关或自动开关；并设在实验室出口处。自动开关；并设在实验室出口处。5、实验室内窗户关闭，并密封。、实验室内窗户关闭，并密封。62v6、实
63、验室的进出门、或封闭组件能自动关闭。、实验室的进出门、或封闭组件能自动关闭。v7、实验实验室通室通风设备风设备启启动时动时，按，按先先开开排排风风机、机、后后开开送送风风机机顺顺序序进进行，关行，关闭时闭时先先关关送送风风机、机、后后关关排排风风机。机。v8、由生物安全柜排出的气体、由生物安全柜排出的气体经经HEPA滤滤器器过滤过滤后可直接后可直接排放，或通排放，或通过过建筑物中的排气系建筑物中的排气系统统排放；生物安全柜排放；生物安全柜应应每每12个月个月检查检查一次，其排出的空气可以在一次，其排出的空气可以在实验实验室内再循室内再循环环。v9、应应有通有通讯设备讯设备和和闭闭路路电视监电视
64、监控系控系统统。63ABSL-3的的标标准微生物学准微生物学规规范：范：ABSL-3的的标标准微生物学准微生物学规规范同范同ABSL-1。64ABSL-3的的特殊规范：特殊规范： ABSL-3除了除了满满足足ABSL-2的要求外，的要求外，还应还应注意：注意：1、在在进进入入实验实验室或室或动动物室的物室的门门上上应标应标明明“生物危生物危险险”警告警告标标志，志，包括通用的包括通用的生物危生物危险险性性标标志志，标标明明传传染因子名称染因子名称，实验实验室室负责负责人或其他人或其他负责负责人姓名人姓名，电话电话号号码码，以及，以及进进入入实验实验室的一些特殊室的一些特殊要求（如有关人要求（如
65、有关人员员必必须须免疫，戴防毒面具或采取其他个人防免疫，戴防毒面具或采取其他个人防护护措施）。措施）。2、所有涉及所有涉及传传染性材料的活染性材料的活动动都都应应在在封封闭单闭单元中的生物安全柜元中的生物安全柜或或其他物理封其他物理封闭设备闭设备内内进进行。不得在敞开的行。不得在敞开的实验实验台台进进行敞口容行敞口容器操作。器操作。3、在在传传染性材料操作染性材料操作结结束束时时，生物安全柜生物安全柜及其及其他封他封闭设备闭设备的工的工作面作面应应去除去除污污染。染。4、真空管真空管线线用高效空气用高效空气过滤过滤器及液体消毒器及液体消毒剂剂消毒装置消毒装置处处理。理。65级动级动物生物安全物
66、生物安全实验实验室（室（ABSL-4） v设置要求设置要求：用用生物安全柜生物安全柜或其或其他个人防护用品他个人防护用品，或，或物理阻物理阻隔隔装置。装置。v防护设备：防护设备： 1、所有所有动动物必物必须饲须饲养在养在隔离器隔离器内。内。2、所有所有感染性材料的操作感染性材料的操作都必都必须须在在级生物安全柜级生物安全柜中中进进行。行。有有生命生命维维持系持系统统的的实验实验室室，相关操作可在，相关操作可在级级生物安全柜生物安全柜内内进进行。行。3、进进入入实验实验室室时时，工作人，工作人员员必必须须脱下包括脱下包括内衣内衣裤裤的全部日的全部日常服装常服装，并，并换换上上专专用防用防护护服服
67、。工作。工作结结束后，必束后，必须须脱下防脱下防护护服服进进行消毒，淋浴后再离去。行消毒，淋浴后再离去。4、设设施必施必须须安装安装带带有有HEPA过滤过滤器的排器的排风风系系统统进进行通行通风风，以，以确保室内确保室内负压负压（向内气流）。（向内气流）。665、通通风风系系统统必必须须有有防止气体逆流防止气体逆流及及出出现现正正压压的装置。的装置。6、必必须须配配备备双双门门高高压灭压灭菌器菌器来来传递传递物品，物品，洁净洁净端在防端在防护护室外的房室外的房间间内。内。7、必必须须配配备备传递传递气气锁舱锁舱以供不能高以供不能高压灭压灭菌的物品菌的物品传传出，出，其其洁净洁净端在防端在防护护
68、室外的房室外的房间间内。内。8、在在进进行行感染危害程度第一感染危害程度第一类类的病原微生物的病原微生物的的动动物的物的操作操作时时，均必，均必须须在在四四级级生物安全水平的最高防生物安全水平的最高防护实护实验验室室中中进进行。行。67ABSL-4的设施要求：的设施要求： 1、使用、使用生物安全柜生物安全柜和和正压防护系统正压防护系统。前者进行微生。前者进行微生物操作时均在物操作时均在级生物安全柜中进行。后者工作人级生物安全柜中进行。后者工作人员穿戴携带有生物维持系统的特殊防护服装，进行员穿戴携带有生物维持系统的特殊防护服装，进行相关实验研究。相关实验研究。2、设有、设有化学消毒淋浴室化学消毒
69、淋浴室。 68ABSL-4的标准微生物学规范：的标准微生物学规范： v必须符合必须符合级、级、 级及级及级生物安全水平动物设施级生物安全水平动物设施的所有要求。的所有要求。v严格限制人员进入严格限制人员进入，只有实验室负责人指定的工作，只有实验室负责人指定的工作人员方有权进入。人员方有权进入。v禁止单独工作禁止单独工作，必须遵守，必须遵守双人工作双人工作制度。制度。69ABSL-4的特殊规范：的特殊规范： 1、工作人工作人员员必必须须已已经经接受接受过过最高水平的微生物培最高水平的微生物培训训，熟悉，熟悉其工作中所涉及的危害以及必要的其工作中所涉及的危害以及必要的预预防措施。防措施。2、饲饲养
70、养感染危害程度第一感染危害程度第一类类病原微生物病原微生物动动物物的区域，必的区域，必须须遵照遵照级级生物安全水平的最高防生物安全水平的最高防护实验护实验室的防室的防护标护标准准。3、工作人工作人员员必必须进须进行行医学医学检测检测。70注意事项：注意事项：（1）必须在实验人员污染停留的工作区域设置必要的）必须在实验人员污染停留的工作区域设置必要的固定式固定式监测装置监测装置和和报警系统报警系统；（2）必须在实验区设置固定式空）必须在实验区设置固定式空气微尘取样系统气微尘取样系统，定，定期取样监测；期取样监测；（3）必须在实验区设置）必须在实验区设置放射性气溶胶监测仪放射性气溶胶监测仪；（4）
71、必须在该设施内保证）必须在该设施内保证有不间断电源供给有不间断电源供给，应设置，应设置事故备用电源。事故备用电源。71五、五、实验室生物安全事件应急预案实验室生物安全事件应急预案（一一）工作原则）工作原则1、预预防防为为主主；常常备备不懈不懈2、设设施施规规范范；管理到位管理到位3、主主动监测动监测；反反应应及及时时4、依法依法处处理理；措施果断措施果断5、机制通机制通畅畅；遏制危害遏制危害72（二二）适用范）适用范围围与与实验实验室安全相关的、危害工作人室安全相关的、危害工作人员员健康以及社会公众健康以及社会公众健康和社会健康和社会稳稳定的所有事件。主要包括：定的所有事件。主要包括：1、病原
72、微生物和有毒有害化学病原微生物和有毒有害化学试剂试剂的的实验实验室室污污染事件；染事件；2、工作人工作人员员受到受到实验实验室内有毒有害病原微生物或有毒有室内有毒有害病原微生物或有毒有害化学害化学试剂试剂的感染或侵害；的感染或侵害；3、病原微生物、有毒有害化学病原微生物、有毒有害化学试剂试剂被泄漏出被泄漏出实验实验室事件室事件.4、由于停由于停电电、火灾等不可、火灾等不可预测预测因素所引起的因素所引起的实验实验室其他室其他污污染事件。染事件。（三三）预预案启案启动动：当出当出现现（二二）中的任意情况，启）中的任意情况，启动动本本预预案。案。73（四）（四）组织组织指指挥挥体系及体系及职责职责任
73、任务务1、生物安全生物安全应应急急领导领导小小组组组组成及成及职责职责：v组长组长：XXXv成成员员：XXXXXXXXXXXXXXXX领导领导小小组组职责职责：制定制定实验实验室生物安全防室生物安全防护护指指导导方方针针，规规划划对对中心中心实验实验室的硬件建室的硬件建设设、组织实组织实施科学管理。在施科学管理。在实验实验室生物安全事件室生物安全事件发发生生时时，决策指，决策指挥挥，调动调动人人员员，全面部署，全面部署742、生物安全事件生物安全事件应应急急处处理工作理工作组组及及职责职责v组长组长：XXv成成员员：XXXXXXXXXXXXXXv应急处理工作组应急处理工作组职责职责：制定实验室
74、生物安全管理办法，：制定实验室生物安全管理办法，建立规章制度和实验室操作规范，对各类实验室的安全建立规章制度和实验室操作规范，对各类实验室的安全进行监督检查，督促各项生物安全管理责任和措施落实进行监督检查，督促各项生物安全管理责任和措施落实到位；突发事件发生时，在领导小组的指挥下实施全面到位；突发事件发生时，在领导小组的指挥下实施全面的应急工作。的应急工作。75（五）（五）预预防防、预预警警1、预防预防（1）加加强强实验实验室室标标准化建准化建设设，强强化化个人防个人防护护和和实验实验室安全室安全操作操作。（2）建立建立实验实验室病原微生物室病原微生物、有毒有害化学有毒有害化学试剂专库试剂专库
75、。对对于病原于病原样样本、本、剧剧毒化学品建立毒化学品建立严严格的格的监监管制度。管制度。（3）增增强强安全意安全意识识，合理完善，合理完善实验实验室生物安全的各室生物安全的各项规项规章章制度。制度。实验实验室工作人室工作人员应员应自自觉觉遵守遵守实验实验室生物安全管理室生物安全管理规规定，定，严严格按照操作格按照操作规规程和技程和技术规术规范开展研究工作。范开展研究工作。（4）提高警惕，防止不法之徒盗窃病原微生物和有毒有害提高警惕，防止不法之徒盗窃病原微生物和有毒有害化学化学试剂试剂，对对人群人群进进行生物化学恐怖攻行生物化学恐怖攻击击，对对公众健康公众健康产产生生严严重重损损害，影响社会害
76、，影响社会稳稳定。定。762、预预警警（1）建立有效的建立有效的预预警机制，警机制，为为各种病原微生物和有毒有害各种病原微生物和有毒有害化学化学试剂试剂建立档案和使用建立档案和使用纪录纪录，填写准确。每次使用后，填写准确。每次使用后及及时时登登记记，发现遗发现遗失或被盗，立即失或被盗，立即报报告。告。（2）建立建立实验实验室工作人室工作人员员健康档案，定期体健康档案，定期体检检。发现发现与与实实验验室生物安全有关的人室生物安全有关的人员员感染或感染或伤伤害害应应立即立即报报告。告。（3）定期开展自定期开展自查查，及，及时发现时发现安全安全隐隐患，患，发发出出预预警通警通报报。77（六）（六）应
77、应急控制措施急控制措施实验实验室生物安全事件室生物安全事件发发生后，立即启生后，立即启动应动应急机制。在急机制。在领导领导小小组组的指的指挥挥下，有关部下，有关部门进门进入入应应急状急状态态，对对突突发发事件事件进进行行侦测侦测、调查调查，综综合合评评估，采取估，采取应应急急处处理措施，控制危理措施，控制危害的蔓延等等。害的蔓延等等。1、对实验对实验室生物安全事件室生物安全事件综综合合评评估估（1）流行病学流行病学调查调查：包括事件包括事件发发生的原因、接触人生的原因、接触人员员的的发发病情况、引起疾病流行的可能因素等。病情况、引起疾病流行的可能因素等。（2）标标本、本、样样品采集和品采集和检
78、验检验：对污对污染的物品、区域、感染的物品、区域、感染的人染的人员进员进行采行采样样和和检测检测，对对可疑生物可疑生物进进行行样样本本检查检查，进进行病原的分离行病原的分离鉴鉴定，以确定事件的性定，以确定事件的性质质与危害。与危害。（3）污污染区域划定染区域划定：对污对污染区及周染区及周围围地区地区进进行行卫卫生生监测监测782、现场现场控制措施控制措施（1）封封闭闭或封或封锁锁相关相关实验实验室和室和实验实验区。区。（2）控制控制传传染源染源；（3）对查对查明的微生物病原、生物毒素明的微生物病原、生物毒素、有毒有害化学品有毒有害化学品污污染的物品要染的物品要对对其其进进行封存和行封存和销销毁
79、毁；（4）对对受到受到污污染染的的所有所有场场所、物品等所、物品等进进行消毒行消毒处处理理；（5）保保护护易感人群易感人群，采取采取紧紧急接种、急接种、预预防性投防性投药药、群体防、群体防护护等等；（6）卫卫生知生知识识宣教宣教；（7）人人员员疏散疏散，采取必要的停工、停采取必要的停工、停课课和人和人员员疏散措施疏散措施；（8）消除区域民众心理障碍和精神消除区域民众心理障碍和精神应应激激。79（七七）追踪监测）追踪监测追踪事件可能波及的地区的高暴露人群，开展主动监测工追踪事件可能波及的地区的高暴露人群，开展主动监测工作，做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。作，做到早发现、早报告、早隔离、早治疗
80、。（八八）上报与部门协调）上报与部门协调 及时上报及时上报上级主上级主管部门，报告程序按照中华人民共和管部门，报告程序按照中华人民共和国传染病防治法、突发公共卫生事件应急条例的有国传染病防治法、突发公共卫生事件应急条例的有关规定。关规定。（九）（九）疫情的解除疫情的解除（十）应急演练（十）应急演练80六、我国实验动物管理的组织机构及相关六、我国实验动物管理的组织机构及相关法规简介法规简介 当前世界各国都有不同的立法形式来管理实验动物当前世界各国都有不同的立法形式来管理实验动物工作，以工作，以确保实验动物质量确保实验动物质量和和动物实验效果动物实验效果，从而保证，从而保证科研成果水平、产品质量和
81、人员安全。与实验动物有关科研成果水平、产品质量和人员安全。与实验动物有关的法律条文，一般分的法律条文，一般分两类：两类：一类一类是涉及是涉及实验动物质量和实验动物质量和保护保护方面的，其目的是保障动物实验取得可靠结果，方面的，其目的是保障动物实验取得可靠结果，另另一类一类是涉及是涉及实验动物进出口及运输实验动物进出口及运输过程中，保护人类和过程中，保护人类和其它动物或环境免遭动物危害和疾病污染。其它动物或环境免遭动物危害和疾病污染。81（一）我国实验动物管理组织机构（一）我国实验动物管理组织机构主管主管部门部门行业行业部门部门民间机构民间机构地方主管地方主管部门部门地方行业地方行业部门部门单位
82、单位地方所属卫生单位地方所属卫生单位卫生部卫生部医学动管会医学动管会卫生厅局卫生厅局直属科研院所直属科研院所直属大专院校直属大专院校地地药品检验系统药品检验系统科科药品监督药品监督管理局管理局方方药监局药监局药品研发与生产单位药品研发与生产单位学学科科生物制品研发与生产单位生物制品研发与生产单位技技技技地方所属农业单位地方所属农业单位术术 农业部农业部动管会动管会厅厅农业委厅局农业委厅局 直属科研院所直属科研院所部部、直属大专院校直属大专院校 教育部教育部委委教育委厅局教育委厅局 地方所属大专院校地方所属大专院校直属大专院校直属大专院校中国科学院中国科学院直属研究院所直属研究院所军队系统军队系
83、统军队医学军队医学动管会动管会各军区各军区卫生部卫生部军区所属卫生单位军区所属卫生单位直属研究机构及院校、医院直属研究机构及院校、医院82（二）我国实验动物政策法规体系框架（二）我国实验动物政策法规体系框架类类别别文件名称文件名称发布机构发布机构法律法律地方法律地方法律北京市实验动物管理条例北京市实验动物管理条例北京市人大常委会（北京市人大常委会（1996）湖北省实验动物管理条例湖北省实验动物管理条例湖北省人大常委会（湖北省人大常委会（2005）云南省实验动物管理条例云南省实验动物管理条例云南省人大常委会（云南省人大常委会（2007）广东省实验动物管理条例广东省实验动物管理条例广东省人大常委会
84、（广东省人大常委会（2010）国家层面国家层面法律法规法律法规国务院批发国务院批发实验动物管理条例实验动物管理条例国务院批准，国家科委发布国务院批准，国家科委发布多部门联发多部门联发实验动物许可证管理办法（试行）实验动物许可证管理办法（试行）科技部等七部局联合发布科技部等七部局联合发布实验动物质量管理办法实验动物质量管理办法国家科委、技监局联合发布国家科委、技监局联合发布单部门制发单部门制发实验动物种子中心管理办法实验动物种子中心管理办法科技部科技部医学实验动物管理实施细则医学实验动物管理实施细则卫生部卫生部地方规章地方规章各地方实验动物管理办法、细则等各地方实验动物管理办法、细则等地方政府地
85、方政府部门文件部门文件国务院各部门有关实验动物管理文件国务院各部门有关实验动物管理文件各行业主管部门各行业主管部门技术标准技术标准国家标准国家标准实验动物标准（实验动物标准（83项）项）国家质检总局国家质检总局行业标准行业标准医学实验动物标准医学实验动物标准卫生部卫生部地方标准地方标准各地方实验动物质量、检测等标准各地方实验动物质量、检测等标准各地方技术质量管理部门各地方技术质量管理部门83（三）国家关于实验动物主要管理法规及配套文件（三）国家关于实验动物主要管理法规及配套文件实验动物管理条例实验动物管理条例(2号令号令)(国务院批准发布国务院批准发布国家科委国家科委1988)实验动物质量管理
86、办法实验动物质量管理办法(科委、技监局科委、技监局1997)（七七部部局局2001 ）实实验验动动物物许许可可证证管管理理办办法法实验动物种子中心管理办法实验动物种子中心管理办法(科技部科技部1998)科技部条财司1998种种实实施施细细则则物物种种子子中中心心引引种种、供供国国家家啮啮齿齿类类实实验验动动科技部条财司1999种种子子问问题题的的处处理理意意见见放放过过程程中中有有关关实实验验动动关关于于当当前前许许可可证证发发关关于于善善待待验验动动物物的的指指导导性性意意见见实实验验动动物物出出口口审审批批办办法法84实验动物管理条例实验动物管理条例摘要摘要第四章第四章实验动物的应用实验动
87、物的应用第十九条第十九条应用实验动物应当根据不同的实验目的，应用实验动物应当根据不同的实验目的，选用相应的合格实验动物。选用相应的合格实验动物。申报科研课题和鉴定科申报科研课题和鉴定科研成果，应当把应用合格实验动物作为基本条件。研成果，应当把应用合格实验动物作为基本条件。应用不合格实验动物取得的检定或者安全评价结果应用不合格实验动物取得的检定或者安全评价结果无效，所生产的制品不得使用无效，所生产的制品不得使用。85第二十条第二十条供应用的实验动物应当具备下列完整的资料：供应用的实验动物应当具备下列完整的资料：（一）品种、品系及亚系的确切名称；（一）品种、品系及亚系的确切名称；（二）遗传背景或其
88、来源；（二）遗传背景或其来源；（三）微生物检测状况；（三）微生物检测状况；（四）合格证书；（四）合格证书；（五）饲育单位负责人签名。（五）饲育单位负责人签名。无上述资料的实验动物不得应用。无上述资料的实验动物不得应用。86第三章第三章实验动物生产和使用许可证实验动物生产和使用许可证第九条第九条实验动物生产和使用，实行许可证制度。实验动物生产和使用，实行许可证制度。实验实验动物生产动物生产和和使用单位，必须取得许可证。使用单位，必须取得许可证。实验动物生实验动物生产许可证，适用于从事实验动物繁育和商业性经营的产许可证，适用于从事实验动物繁育和商业性经营的单位。单位。第十一条第十一条从事动物实验和
89、利用实验动物生产药品、生从事动物实验和利用实验动物生产药品、生物制品的单位，物制品的单位，必须必须取得使用许可证。取得使用许可证。实验动物质量管理办法实验动物质量管理办法摘要摘要87第十五条第十五条取得许可证的实验动物生产单位，必须对饲取得许可证的实验动物生产单位，必须对饲养、繁育的实验动物按有关国家标准进行质量检测。养、繁育的实验动物按有关国家标准进行质量检测。出售时应提供合格证出售时应提供合格证。第十七条第十七条未取得实验动物生产许可证的单位，一律不未取得实验动物生产许可证的单位，一律不准饲育、繁育和经营实验动物。准饲育、繁育和经营实验动物。未取得实验动物使用许可证的单位，进行动物实验未取
90、得实验动物使用许可证的单位，进行动物实验和生产药品和生物制品所使用的实验动物，一律视为和生产药品和生物制品所使用的实验动物，一律视为不合格不合格。88第二章第二章 生产与使用管理生产与使用管理（1）实验动物的实验动物的生产、使用生产、使用实行实行许可管理许可管理制度。制度。（2）从事从事实验动物生产实验动物生产的单位和个人，的单位和个人，应当取得应当取得由省科技主由省科技主管部门颁发的实验动物管部门颁发的实验动物生产许可证生产许可证；使用实验动物进行科使用实验动物进行科学研究、实验和检测等活动学研究、实验和检测等活动的单位和个人，的单位和个人，应当取得应当取得由省由省科技主管部门颁发的实验动物
91、科技主管部门颁发的实验动物使用许可证使用许可证。（3）申请申请实验动物实验动物生产生产和和使用许可证使用许可证的单位和个人，符合相的单位和个人，符合相应申请条件的，由省科技主管部门颁发应申请条件的，由省科技主管部门颁发相应的生产、使用相应的生产、使用许可证。许可证。广东省实验动物管理条例摘要89第三章第三章 生产与使用规范生产与使用规范（1）有有生产许可证的单位和个人生产许可证的单位和个人，对其提供的，对其提供的实验动物实验动物应出具应出具质量合格证明质量合格证明质量合格证明质量合格证明；有；有使用许可证的单位和个人使用许可证的单位和个人，对在其场所进，对在其场所进行的动物实验应出具行的动物实
92、验应出具动物实验证明动物实验证明动物实验证明动物实验证明。（2）应用实验动物进行医疗卫生、药品等应用实验动物进行医疗卫生、药品等科学研究、实验、检科学研究、实验、检测等活动的测等活动的，应当，应当使用合格的实验动物使用合格的实验动物使用合格的实验动物使用合格的实验动物，并在有，并在有实验动物使实验动物使实验动物使实验动物使用许可证的场所内用许可证的场所内用许可证的场所内用许可证的场所内进行相关活动。进行相关活动。 违反规定违反规定进行的科学研究、实验、检定、评价的进行的科学研究、实验、检定、评价的结果无效结果无效，相关的科研项目相关的科研项目不得验收、鉴定、评奖不得验收、鉴定、评奖。90第三章
93、第三章 生产与使用规范生产与使用规范 教学示教时使用实验动物教学示教时使用实验动物的，在保证的，在保证安全的前提安全的前提下，可在下，可在使使用许可证规定以外的场所内用许可证规定以外的场所内进行，但要注意人员的安全防护。进行，但要注意人员的安全防护。（3）运输实验动物时，使用的运输实验动物时，使用的笼器具、笼器具、运输工具应当符合安全运输工具应当符合安全和微生物控制等级要求和微生物控制等级要求，不同品种、品系和等级的实验动物，不同品种、品系和等级的实验动物不得混装，保证实验动物达到相应质量等级。不得混装，保证实验动物达到相应质量等级。（4）从国外引入实验动物从国外引入实验动物的，应的，应持有供
94、方持有供方提供的动物种系名称、提供的动物种系名称、遗传背景、质量状况及生物学特性等遗传背景、质量状况及生物学特性等有关资料有关资料，依照，依照中华中华人民共和国进出境动植物检疫法人民共和国进出境动植物检疫法规定办理有关手续规定办理有关手续。91第四章第四章 生物安全与实验动物福利生物安全与实验动物福利 （1）实验动物实验动物发生传染性疾病时发生传染性疾病时，生产和使用单位及个人应及，生产和使用单位及个人应及时隔离、报告等；当发时隔离、报告等；当发生人畜共患病时生人畜共患病时，还应立即报告当地，还应立即报告当地疾病控制机构；疾病控制机构；发生重大动物疫情的发生重大动物疫情的，应当按照国家规定立，
95、应当按照国家规定立即启动突发重大动物疫情应急预案。即启动突发重大动物疫情应急预案。（2）在实验动物生产、使用过程中产生的在实验动物生产、使用过程中产生的废弃物和动物尸体废弃物和动物尸体应应经经无害化处理无害化处理；产生的；产生的废水、废气等应经处理达标后排放废水、废气等应经处理达标后排放。（3）鼓励共享实验动物的实验数据和资源，鼓励共享实验动物的实验数据和资源，倡导倡导“3R”原则原则。92第四章第四章 生物安全与实验动物福利生物安全与实验动物福利 （4）在生产、使用和运输过程中应当在生产、使用和运输过程中应当维护实验动物福利维护实验动物福利，不得不得虐待实验动物虐待实验动物；涉及实验动物伦理
96、与物种安全问题的，应当；涉及实验动物伦理与物种安全问题的，应当遵照有关规定，并符合国际惯例。遵照有关规定，并符合国际惯例。（5）对动物进行手术时，应进行对动物进行手术时，应进行有效麻醉有效麻醉；需要处死动物时，；需要处死动物时，应应实施安死术实施安死术。（6）开展动物实验时，应制定开展动物实验时，应制定保证实验动物福利保证实验动物福利、符合实验动符合实验动物伦理要求物伦理要求的实验方案；有条件的应设立的实验方案；有条件的应设立“实验动物福利伦实验动物福利伦理组织理组织”，对实验方案进行审查，对实验过程进行监督管理。，对实验方案进行审查，对实验过程进行监督管理。93第六章第六章 法律责任法律责任
97、 （1）未取得未取得实验动实验动物物生生产产和和使用使用许许可可证证或或许许可可证证已已过过期期，擅自，擅自从事从事实验动实验动物生物生产产或或者使用的者使用的，由省科技主管部，由省科技主管部门门没收没收违违法所法所得，并得，并处处1万元万元3万元以下的万元以下的罚罚款款（2）有下列情形之一的，）有下列情形之一的，处处2000元元1万元以下的万元以下的罚罚款；款；情情节严节严重或逾期不改的，重或逾期不改的，吊吊销实验动销实验动物的生物的生产产、使用、使用许许可可证证。动动物物饲饲育室育室和和实验实验室不分开室不分开设设立立的。的。（3）将使用后的将使用后的实验动实验动物流入消物流入消费费市市场
98、场的，的，由省科技主管部由省科技主管部门责门责令改正，没收令改正，没收违违法所得，并法所得，并处处1万元万元3万元以下的万元以下的罚罚款；款；情情节严节严重或者逾期不改的，重或者逾期不改的，吊吊销实验动销实验动物生物生产产、使用、使用许许可可证证。94附录：相关的法律、法规和部门规范附录：相关的法律、法规和部门规范（与实验动物及实验动物设施有关的）（与实验动物及实验动物设施有关的） 病原微生物病原微生物实验实验室安全管理条例室安全管理条例（国（国务务院令第院令第424号号2004年年11月月12日施行）日施行）关于生物安全三关于生物安全三级实验级实验室建室建设设与管理有关事与管理有关事项项的通
99、知的通知（科技部（科技部2003212号号2003年年6月月27日日发发）关于关于严严格格审审批生物安全批生物安全实验实验室建室建设项设项目的目的紧紧急通知急通知（科技部（科技部2004229号号2004年年7月月27日日发发）兽兽医医实验实验室生物安全管理室生物安全管理规规范范（农业农业部部2003年年10月月15日日颁颁布）布）95实验动实验动物物环环境及境及设设施施标标准准GB14925-2010实验实验室生物安全通用要求室生物安全通用要求GB19481-2004微生物和生物医学微生物和生物医学实验实验室安全通用准室安全通用准则则WS233-2002生物安全生物安全实验实验室建室建设设技
100、技术规术规范范GB50346-2004实验动实验动物管理条例物管理条例（国家科委第（国家科委第2号令号令1988年年11月月14日日颁颁布）布）实验动实验动物物质质量管理量管理办办法法（国家科委、国家技（国家科委、国家技术监术监督局督局1997年年12月月11日日颁发颁发）96实验动实验动物物许许可可证证管理管理办办法（法（科技部、科技部、卫卫生部、教育部、生部、教育部、农业农业部、国家部、国家质监总质监总局、国家中医局、国家中医药药局、解放局、解放军总军总后勤部后勤部卫卫生部生部2001年年12月月5日日颁发颁发）国家国家实验动实验动物种子中心管理物种子中心管理办办法法（国家科委（国家科委1
101、998174号号1998年年5月月12日日发发）国家国家啮齿类实验动啮齿类实验动物种子中心引种、供种物种子中心引种、供种实实施施细则细则（国家科技部（国家科技部1998年年10月月发发）关于善待关于善待验动验动物的指物的指导导性意性意见见（国家科技部国家科技部2006年年9月月发发）广广东东省省实验动实验动物管理条例物管理条例（广（广东东省人大常委会省人大常委会2010.10）97谢谢!98第六章第六章ENAENA多肽抗多肽抗体谱体谱免疫印迹检测免疫印迹检测黑龙江中医药大学 临床医学院 诊断教研室黄 萍第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第一节第一节概述概述一、一、
102、何为何为ENA? ENA(Extractable nuclear antige) 盐水可提取性核抗原的总称。盐水可提取性核抗原的总称。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 核抗原：核抗原：组蛋白组蛋白 ：不溶于水不溶于水 DNA ；不溶于水不溶于水 ENA：可溶于生理盐水可溶于生理盐水是是非非组组蛋蛋白白核核蛋蛋白白，属属酸酸性性核核蛋蛋白白抗抗原原，是许多小分子量的是许多小分子量的RNA和多肽组成和多肽组成。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 二、多肽抗体谱二、多肽抗体谱 ENA抗抗体体是是指指能能与与核核中中盐盐水水可可提提取取抗抗原原
103、发发生生特特异异性性结结合合抗抗体体，既既是是抗抗核核抗抗体的一部分。体的一部分。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 ENA多肽抗体谱多肽抗体谱是是由由许许多多小小分分子子量量的的RNA和和多多肽肽组成。组成。不不同同的的uRNA各各有有其其相相应应的的抗抗体体。目目前前发发现现的的相相应应的的抗抗体体已已有有十十余余种种，其其中中，国国际际上上共共认认的的对对风风湿湿有有特特异异的的诊诊断断价价值值的的有有七七种种。故故将将这这七七种种抗抗体体叫叫做做多多肽抗体谱肽抗体谱第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 三、三、 免疫印迹免疫印迹免疫
104、印迹（免疫印迹（Immunoblot IBT）又又称称免免疫疫转转印印技技术术。是是一一项项新新的的生生化化技技术术。它它对对研研究究工工作作的的影影响响与与内内切切酶酶的的发发现现和和 PCR的的基基因因扩扩增增技技术术是是等等量量齐观的。齐观的。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理：将将凝凝胶胶电电泳泳与与固固相相免免疫疫结结合合起起来来，其主要的操作过程分三个步骤。其主要的操作过程分三个步骤。1、分离、分离盐水可提取抗原（盐水可提取抗原（ENA）中多中多肽按分子量的大小，先用肽按分子量的大小，先用SDS 聚丙烯酰胺凝胶分离
105、聚丙烯酰胺凝胶分离第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理： 2 、转移转移将将分分离离的的组组份份从从凝凝胶胶上上转转移移到到固固相相基质上，如硝酸纤维膜基质上，如硝酸纤维膜第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理： 3 、测定测定对转移后的组份进行免疫法测定，对转移后的组份进行免疫法测定，显示出蛋白带。显示出蛋白带。既通过抗体的反应，用酶联免疫吸既通过抗体的反应，用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）的数量与分子量的数量与
106、分子量 第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理：免免疫疫转转印印技技术术实实际际上上是是一一项项将将凝凝胶胶电电泳泳技技术术、固固定定化化技技术术及及分分子子亲亲和和技技术术三三者融为一体的免疫转印技术。者融为一体的免疫转印技术。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：免疫转印技术优点：第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 1、高分辨率高分辨率免免疫疫转转印印技技术术综综合合了了电电泳泳技技术术分分辨辨率强的特点。率强的特点。第
107、第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 2、高灵敏度高灵敏度免疫转印技术综合了免疫反应敏感免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点，可检出最小蛋白质性高的特点，可检出最小蛋白质1pg(10-12g) 第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 3、高特异性高特异性免免疫疫转转印印技技术术综综合合了了免免疫疫反反应应特特异异性性，根根据据抗抗原原抗抗体体的的特特异异反反应应，同同一一条条蛋白印迹上可做多项分析。蛋白印迹上可做多项分析。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗
108、体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 4、高度稳定性高度稳定性蛋白印迹膜便于保存，可存放蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12 个月。个月。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 5、设备简单，操作容易设备简单，操作容易免免疫疫转转印印技技术术在在临临床床检检验验中中必必有有远远大大前前程程，并并可可能能代代替替许许多多现现有有的的传传统统检检验方法。验方法。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 第二节第二节检测对象检测对象 ENA多肽抗体谱多肽抗体谱早期诊断早期诊断SLE和多种风湿病，和多种风
109、湿病，有较高的特异性和敏感性，有较高的特异性和敏感性，有助于结缔组织病的诊断有助于结缔组织病的诊断和鉴别诊断和鉴别诊断第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 一、风湿病的定义一、风湿病的定义风风湿湿病病学学是是一一门门以以内内科科学学和和临临床床免免疫疫学为基础的新兴学科学为基础的新兴学科其其研研究究的的对对象象是是风风湿湿性性疾疾病病，包包括括所所有有不不同同原原因因，以以及及不不明明原原因因引引起起的的骨骨、关关节、肌疾病。节、肌疾病。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼
110、痛和炎症的疾病的疾病感炎性：感炎性：莱姆（莱姆（Lyme）氏病氏病代谢性：代谢性： 痛风痛风内分泌性：内分泌性：甲状旁腺功能亢进甲状旁腺功能亢进遗传性；遗传性；粘液多糖病粘液多糖病退化性：退化性：骨关节炎骨关节炎生态环境性：大骨节病生态环境性：大骨节病第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎类风湿性疾病骨关节炎(RA)系统红斑狼疮系统红斑狼疮(SLE)干燥综合症干燥综合症(SS)硬皮病硬皮病(PSS)皮肌炎和多发行肌炎皮肌炎和多发行肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病混合性结缔组织病
111、(MCTD)第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 二、二、 适应症适应症 1、临临床床上上怀怀疑疑有有风风湿湿性性疾疾病病（结结缔缔组组织织病病或或自自身身免免疫疫性性疾疾病病），需需进进一一步步确诊者。确诊者。 2、 已已诊诊断断为为某某种种风风湿湿性性疾疾病病，但但需需明明确确是是否否合合并并其其它它风风湿湿性性疾疾病病，以以指指导导治疗者。治疗者。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测二、二、 适应症适应症 3 、诊断未明，但有下列症状，需排除或诊断未明，但有下列症状，需排除或确诊何种风湿性疾病者：确诊何种风湿性疾病者： 、原因不明发热伴
112、有关节或肌肉疼痛。、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减淋巴结肿大或白血球减少或血小板减少或溶血性贫血。少或溶血性贫血。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、蛋白尿。、蛋白尿。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、心包炎或胸膜炎。、心包炎或胸膜炎。、癫痫或精神、神经症状。、癫痫或精神、神经症状。、习惯性流产。、习惯性流产。、雷诺氏现象。、雷诺氏现象。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。第三章第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困、肌肉有压
113、痛或抬臂、下蹲起立时困 难。难。、下肢出现网状青紫。下肢出现网状青紫。、肺间质病变或肺动脉高压。肺间质病变或肺动脉高压。、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。经常口干、眼干、或反复腮腺炎。、易口腔溃疡或大量脱发。易口腔溃疡或大量脱发。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、吞咽困难，食道蠕动减弱。吞咽困难，食道蠕动减弱。、青年女性有偏头痛。青年女性有偏头痛。、荧光抗核抗体阳性。荧光抗核抗体阳性。、关节疼痛。关节疼痛。、长期反复性原因不明低热。长期反复性原因不明低热。第三章第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测三三 、送检标本送检标本 血清血清第第六六章章EN
114、A多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测四四 报告方式报告方式反应抗体反应抗体分子量分子量 1. 抗抗Sm抗体抗体+/- 29/28KD、13.5KD 2. 抗抗u1RNP抗体抗体+/- 73KD、32KD、17.5KD 3.抗抗Scl-70抗体抗体+/- 86KD、70KD 4.抗抗SSA抗体抗体+/- 52KD 5.抗抗SSB抗体抗体+/- 48/47KD、45KD 6.抗抗JO-1抗体抗体+/- 55KD 7.抗抗Rib抗体抗体+/- 38KD16KD15KD + 表示有该种自身抗体表示有该种自身抗体 - 表示无该种自身抗体表示无该种自身抗体第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
115、多肽抗体谱免疫印迹检测第三节第三节临床意义临床意义 第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义一抗一抗Sm抗体抗体 1.Sm为病人为病人Smith（发现抗体的第一位病人）发现抗体的第一位病人）的名字缩写的名字缩写 2.抗抗Sm抗体是酸性糖蛋白抗体是酸性糖蛋白 3.是目前公认的系统性红斑狼疮（是目前公认的系统性红斑狼疮（SLE）标记抗体，有利于标记抗体，有利于SLE的早期诊断。、的早期诊断。、注意：关键是注意：关键是13.5KD 一般是一般是13.5KD和和 29/28KD同时出现，若单独出现同时出现，若单独出现29/28 KD、无无13.5KD不能判断不能判
116、断抗抗Sm抗体阳性抗体阳性 4.阳性率阳性率30-50%，仅见于本病。，仅见于本病。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 二二 、抗抗u1RNP抗体抗体(抗抗RNP)1、是混合性结缔组织病是混合性结缔组织病(MCTD)的一项重的一项重要血清学特征。要血清学特征。2、阳性率可达阳性率可达95%以上。以上。3、73 KD（国外报导为国外报导为70 KD）和和32KD可可同时出现，也可分别出现。同时出现，也可分别出现。17.5 KD常拌常拌73 KD和和32 KD、一起出现，单独出现少见。一起出现，单独出现少见。4、其它结缔组织病的阳性率、其它结缔组织病的阳
117、性率系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（SLE ） 30%干燥综合症干燥综合症(SS) 20%硬皮病硬皮病(PSS) 7%第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 三、抗三、抗Scl-70抗体抗体 1、抗抗Scl-70抗体中的抗体中的SclSclerosis的缩写的缩写70代表抗原分子量，为代表抗原分子量，为70KD（70000） 2、是弥漫型硬皮病是弥漫型硬皮病(PSS)的标记抗体。的标记抗体。 3、阳性率可达阳性率可达50-64% 4、在在86 KD和和70KD两区带间有时可见到两区带间有时可见到两条较弱的区带，是两条较弱的区带，是100KD的降解产的降解产
118、物。物。两区带一般同时出现。两区带一般同时出现。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 四、抗四、抗SSA抗体（抗抗体（抗RO抗体）抗体）1SS为干燥综合症（为干燥综合症（Sjogrens syndrome）的缩写。的缩写。A为抗原子序列号为抗原子序列号2曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称抗抗RO抗体。抗体。3对干燥综合症（对干燥综合症（SS）诊断有意义。阳性率诊断有意义。阳性率7080%合并合并SLE3050%单纯单纯SLE810%第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 四、
119、抗四、抗SSA抗体（抗抗体（抗RO抗体）抗体）4可见于其它多种自身免疫性疾病。可见于其它多种自身免疫性疾病。包包括括SLE，硬硬皮皮症症，多多发发性性肌肌炎炎和和类类风风湿湿关关节炎等疾病。节炎等疾病。5、该该抗抗体体阳阳性性也也可可引引起起亚亚急急性性皮皮肤肤狼狼疮疮的的皮皮损损与与SLE的的广广泛泛光光过过敏敏性性皮皮炎炎也也相相关关，IgG类类抗抗SSA抗抗体体通通过过胎胎盘盘进进入入胎胎儿儿后后可可引引起起新新生生儿狼疮综合症。儿狼疮综合症。6、个个别别因因抗抗体体与与心心脏脏的的传传导导系系统统相相结结合合可可造造成先天性心脏传导阻滞。成先天性心脏传导阻滞。第第六六章章ENA多肽抗体
120、谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 五、抗五、抗SSB抗体抗体1抗抗SSB抗体常伴随抗抗体常伴随抗SSA抗体同时出现。抗体同时出现。2抗抗SSB和抗和抗SSA抗体并存，对诊断抗体并存，对诊断SS（干干燥燥综合症）有特异性。综合症）有特异性。348KD、47KD、45KD三区常不仅同时出三区常不仅同时出现，也与现，也与52KD区带同时出现，区带同时出现，但但48/47KD有时很弱，不易分辨。有时很弱，不易分辨。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 六、抗六、抗JO-1抗体抗体1是是Pm/Dm（肌炎肌炎/皮肌炎）公认的标记抗皮肌炎）公认的
121、标记抗体，阳性率体，阳性率2540%。2主要见于多发性肌炎（主要见于多发性肌炎（Pm）在皮肌炎在皮肌炎（Dm）中阳性率较低。中阳性率较低。3抗抗JO-1抗体抗体 该该抗抗体体阳阳性性患患者者常常会会同同时时出出现现肌肌炎炎，肺肺部部间间质质性性病病变变的的关关节节炎炎等等症症状状。易易被被临临床床误误诊诊为慢性肺部感染或类风湿关节炎。为慢性肺部感染或类风湿关节炎。4确确定定55KD需需要要慎慎重重，因因为为临临床床意意义义不不明明为为54、56KD和和55KD在位置上相差不到在位置上相差不到1毫米毫米。第第六六章章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 七、抗七、抗Rib抗体（抗核糖体抗体）抗体（抗核糖体抗体）1抗抗Rib抗体又称抗核糖体抗体（抗体又称抗核糖体抗体（rRNP）（抗抗rRNP抗体）抗体）2主要见于主要见于SLE，是是SLE的另一血清学标记抗的另一血清学标记抗体。体。 阳性率阳性率2030% 该抗体阳性与该抗体阳性与SLE的中枢神经系统病变相的中枢神经系统病变相关。关。
