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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩
2、子们却在周下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味
3、道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人
4、生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅长的时间隧道，袅单细胞藻类培养第二章第二章第二章第二章 单细胞藻类培养单细胞藻类培养单细胞藻类培养单细胞藻类培养u一、单细胞藻类的种类与生物特性一、单细胞藻类的种类与生物特性u（一）单细胞藻类培养的种类（一）单细胞藻类培养的种类u常用的饵料微藻主要有：常用的饵料微藻主要有：u牟氏角毛藻牟氏角毛藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体；：虾、蟹、海参、海胆的幼体；u三角褐指藻三角褐指藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体、种贝；：虾、蟹、海参、海胆的幼体、种贝；u中肋骨条藻：虾、蟹幼
5、体；中肋骨条藻：虾、蟹幼体；u底栖舟形藻：鲍、海参、海胆、埋栖贝类、舔食螺类的附着底栖舟形藻：鲍、海参、海胆、埋栖贝类、舔食螺类的附着幼体；幼体；u底栖卵形藻：同上；底栖卵形藻：同上；u等鞭金藻：贝、虾、蟹、海参、海胆的幼体；等鞭金藻：贝、虾、蟹、海参、海胆的幼体；u亚心形四片藻：轮虫、卤虫、种贝及虾的后期幼体；亚心形四片藻：轮虫、卤虫、种贝及虾的后期幼体；u海水小球藻海水小球藻：同上；：同上；u钝顶螺旋藻钝顶螺旋藻：虾、蟹幼体及配合饲料的添加剂；：虾、蟹幼体及配合饲料的添加剂；Company Logo二、藻种的分离二、藻种的分离u（一）采样（一）采样u个体个体较大较大的浮游藻类，可用的浮游藻
6、类，可用密浮游生物网在水中捞取密浮游生物网在水中捞取。u但在水产动物的人工育苗中所需要的但在水产动物的人工育苗中所需要的饵料微藻饵料微藻，一般，一般个体很个体很小小，往往在几微米到十几微米，用浮游生物网无法采集到，往往在几微米到十几微米，用浮游生物网无法采集到，需要需要把水样采回实验室处理把水样采回实验室处理。u水样采回后，进行显微镜检查，如果发现有需要分离的藻种，水样采回后，进行显微镜检查，如果发现有需要分离的藻种，而这种藻种的数量较多时，可立即进行分离，若数量少，而这种藻种的数量较多时，可立即进行分离，若数量少，必须先经过预备培养，待数量增多后再分离。必须先经过预备培养，待数量增多后再分离
7、。Company Logo（二）预备培养（二）预备培养u1、容器：、容器：u通常采用三角烧瓶。通常采用三角烧瓶。u2、培养液：、培养液：u各种藻类的培养液存在差异。各种藻类的培养液存在差异。u土壤抽出液土壤抽出液:取土壤取土壤1kg，加纯水，加纯水1000ml，煮沸，煮沸60min，在，在暗处放置暗处放置2d，过滤，以滤液，过滤，以滤液600ml加纯水加纯水400ml。u土壤抽出液土壤抽出液：取土壤：取土壤1kg，加纯水，加纯水1000ml，再加入，再加入NaOH2-3g，煮沸，煮沸120min，冷却后过滤，滤液直接使用。，冷却后过滤，滤液直接使用。u土壤抽出液土壤抽出液：取土壤：取土壤1kg
8、，加纯水，加纯水2000ml，煮沸煎浓，把上，煮沸煎浓，把上部泥浆倾入烧瓶中澄清，静置一昼夜后，次日吸取上清液，再煮部泥浆倾入烧瓶中澄清，静置一昼夜后，次日吸取上清液，再煮沸煎浓。第三天在如法煎浓，最后倾入三角烧瓶中，加棉花塞，沸煎浓。第三天在如法煎浓，最后倾入三角烧瓶中，加棉花塞，煎浓，直至得到煎浓，直至得到1000ml的深褐色的土壤抽出液。每次使用后，的深褐色的土壤抽出液。每次使用后，煮沸灭菌保存。煮沸灭菌保存。Company Logou土壤抽出液土壤抽出液：取田园土壤：取田园土壤1kg，加水，加水2000ml，搅拌均，搅拌均匀，浸泡，用前吸取上清，煮沸消毒后使用。匀，浸泡，用前吸取上清，
9、煮沸消毒后使用。u海泥（或土壤）抽出液海泥（或土壤）抽出液：用海滩上砂质较少，有机物较多：用海滩上砂质较少，有机物较多而又不是过分淤黑的上层软泥，清除其中的小树枝和小石而又不是过分淤黑的上层软泥，清除其中的小树枝和小石块等杂物，以容量计算块等杂物，以容量计算1份泥加份泥加2份水，充分搅拌均匀，静份水，充分搅拌均匀，静置置1-2min，待粗砂，小石沉下，把上层泥浆倾入铝锅内，待粗砂，小石沉下，把上层泥浆倾入铝锅内，弃去底部粗砂，小石等杂物。静置弃去底部粗砂，小石等杂物。静置24h，吸取上清液使用。，吸取上清液使用。Company Logo3、管理、管理u搅动或摇动：搅动或摇动：u浮游种类应浮游种
10、类应每天摇动一次每天摇动一次。u附着种类应静置不动。附着种类应静置不动。u经常观察，掌握时机及时分离经常观察，掌握时机及时分离：u如发现藻类呈淡淡颜色，即进行显微镜检查，如需分离藻类如发现藻类呈淡淡颜色，即进行显微镜检查，如需分离藻类已占优势，应立即进行分离。已占优势，应立即进行分离。u如没有需要分离的藻类，便重新进行采样及预培养。如没有需要分离的藻类，便重新进行采样及预培养。Company Logo（三）分离方法：（三）分离方法：u1、微吸管分离法：、微吸管分离法：u选直径约选直径约5mm的细玻璃管的细玻璃管，在，在酒精喷灯上加热酒精喷灯上加热，待熔，待熔，快快速拉成口径极细的微吸管速拉成口
11、径极细的微吸管。u微吸管的另一端套接一条长约微吸管的另一端套接一条长约30cm或或8cm的医用乳胶管。的医用乳胶管。u在分离操作时长乳胶管的另一端用牙齿咬紧，如用短乳胶管在分离操作时长乳胶管的另一端用牙齿咬紧，如用短乳胶管则用手指压紧，用以控制吸取动作。则用手指压紧，用以控制吸取动作。u将稀释的水样，置浅凹载玻片上，在将稀释的水样，置浅凹载玻片上，在显微镜下观察挑取要分显微镜下观察挑取要分离的藻类细胞离的藻类细胞，吸取时把，吸取时把微吸管对准藻细胞微吸管对准藻细胞，然后，然后牙齿或牙齿或手指放松手指放松，由于气流的关系，藻，由于气流的关系，藻细胞被微吸管吸入细胞被微吸管吸入，接着，接着吸入的水
12、滴放入另一凹玻片上，观察是否是目标单胞藻。吸入的水滴放入另一凹玻片上，观察是否是目标单胞藻。u然后把分离出的藻细胞移入预先装有培养液的试管中，管口然后把分离出的藻细胞移入预先装有培养液的试管中，管口塞棉塞，在适宜光照下培养。每天摇动一次。塞棉塞，在适宜光照下培养。每天摇动一次。Company Logo2、水滴分离法、水滴分离法u将微吸管将微吸管插入水样中约插入水样中约2cm深深，提取微吸管，待无水滴自，提取微吸管，待无水滴自然滴下，然滴下，把微吸管与载玻片接触把微吸管与载玻片接触，即有一小水滴水样留在，即有一小水滴水样留在载玻片上。载玻片上。u按照上述方法，按照上述方法，吸取水滴吸取水滴3-4
13、滴滴，水滴作直线排列，水滴作直线排列，相互间相互间隔一段距离隔一段距离。然后在。然后在显微镜下观察显微镜下观察每个水滴，每个水滴，如果某一水如果某一水滴中藻细胞只有一个需要分离的藻细胞，即用培养把水滴滴中藻细胞只有一个需要分离的藻细胞，即用培养把水滴连同藻类细胞冲入试管中连同藻类细胞冲入试管中，并加入培养液到试管容量的，并加入培养液到试管容量的1/4，试管口塞上棉花塞，放在适宜光照下培养，每天摇，试管口塞上棉花塞，放在适宜光照下培养，每天摇动一次。动一次。Company Logo3、平板划线法、平板划线法u方法同光合细菌。方法同光合细菌。u由于单细胞藻类大多不适合在固体培养基中生长，因此，由于
14、单细胞藻类大多不适合在固体培养基中生长，因此，分分离效果较差离效果较差。Company Logo二、单细胞藻类的培养方式二、单细胞藻类的培养方式u（一）纯培养与单种培养：（一）纯培养与单种培养：u1、纯培养：纯培养、纯培养：纯培养即无菌培养即无菌培养，是指排除了包括细菌在内，是指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。的一切生物的条件下进行的培养。u2、单种培养：在生产性培养中是、单种培养：在生产性培养中是不排除细菌存在的不排除细菌存在的，为了，为了区别而称单种培养。区别而称单种培养。Company Logo（二）开放式培养和封闭式培养（二）开放式培养和封闭式培养u1、开放式培养、开放
15、式培养：是把藻类培养在：是把藻类培养在敞开的敞开的广口玻璃瓶，水族广口玻璃瓶，水族箱等箱等容器中容器中进行培养，设备简单，为目前主要的培养单细进行培养，设备简单，为目前主要的培养单细胞藻类的形式。胞藻类的形式。u特点：特点：充足的光照和通风，繁殖迅速。充足的光照和通风，繁殖迅速。u容易受敌害生物的污染。容易受敌害生物的污染。u2、封闭式培养、封闭式培养：在：在封闭容器中封闭容器中进行培养，仅有充气管，培进行培养，仅有充气管，培养液加入管和藻液抽出管与外界有接触，其余不与外界接养液加入管和藻液抽出管与外界有接触，其余不与外界接触。触。u特点：特点：减少敌害生物污染，成功率高。减少敌害生物污染，成
16、功率高。u生长速度较慢。生长速度较慢。Company Logo（三）一次性培养、半连续培养和连续培养（三）一次性培养、半连续培养和连续培养u1、一次性培养：在各种容器中，配制培养液，把少量藻种、一次性培养：在各种容器中，配制培养液，把少量藻种接种进去，在适宜的环境条件下培养，经过一段时间藻种接种进去，在适宜的环境条件下培养，经过一段时间藻种繁殖达到较高的密度，繁殖达到较高的密度，一次全部收获一次全部收获。u2、半连续培养：半连续培养是在一次性培养的基础上，当、半连续培养：半连续培养是在一次性培养的基础上，当培养的藻细胞达到或接近收获的密度时，培养的藻细胞达到或接近收获的密度时，每天收获藻液的每
17、天收获藻液的一部分并补充等量的培养液一部分并补充等量的培养液，继续培养。，继续培养。u3、连续培养：一般为室内，人工光源，自动控温，封闭式、连续培养：一般为室内，人工光源，自动控温，封闭式充气培养。充气培养。u连续培养能使藻细胞生长繁殖的条件稳定，藻细胞始终处于连续培养能使藻细胞生长繁殖的条件稳定，藻细胞始终处于指数生长期，生长迅速，产量高。指数生长期，生长迅速，产量高。Company Logo三、培养方法：三、培养方法：u（一）培养容器：（一）培养容器：u三角烧瓶、玻璃钢水槽三角烧瓶、玻璃钢水槽和和水泥池水泥池等均可作为单胞藻的培养容等均可作为单胞藻的培养容器。器。u（二）容器工具的消毒：（
18、二）容器工具的消毒：u同光合细菌的消毒方法。同光合细菌的消毒方法。u（三）培养液的制备：（三）培养液的制备：u选择合适的培养液配方，按照配方配制。选择合适的培养液配方，按照配方配制。Company Logo（四）接种（四）接种u1、接种质量：一般要求选取无敌害生物污染，生活力强，、接种质量：一般要求选取无敌害生物污染，生活力强，生活旺盛的藻种培养。生活旺盛的藻种培养。u颜色正常，无大量沉淀和无明显附壁现象。颜色正常，无大量沉淀和无明显附壁现象。u2、藻种数量、藻种数量:u藻种培养：藻液容量和新配培养液比例为藻种培养：藻液容量和新配培养液比例为1：2-1：3，一，一般般一瓶藻种可接成一瓶藻种可接
19、成3-4瓶瓶。u中继培养和生产性大量培养由于培养容器容量大，藻种供应中继培养和生产性大量培养由于培养容器容量大，藻种供应有时不足，可根据具体情况灵活掌握，但最少不宜低于有时不足，可根据具体情况灵活掌握，但最少不宜低于1：50。u一般以一般以1：10-1：20较适宜。较适宜。u3、接种时间：、接种时间：u最好在最好在8-10时时，不宜在晚上。，不宜在晚上。Company Logo（五）培养（五）培养u1、日常管理、日常管理u搅拌和充气：搅拌和充气：u通过通过搅拌或充气增加水和空气的接触面搅拌或充气增加水和空气的接触面，使空气中，使空气中二氧化碳二氧化碳溶解溶解到培养液中，补充由于藻细胞作用对二氧
20、化碳的消耗。到培养液中，补充由于藻细胞作用对二氧化碳的消耗。u帮助沉淀藻细胞帮助沉淀藻细胞上浮上浮而而获得光照获得光照。u防止防止水表面长出水表面长出菌膜菌膜。u搅动、摇动一般搅动、摇动一般每天至少每天至少3次次，定时定时进行，进行，每次半分钟每次半分钟。u充气充气。可。可24小时连续充气或间歇充气。小时连续充气或间歇充气。Company Logo调节光照调节光照u人工光照：人工光照：u自然光：极端易变是太阳光源的特点，必须自然光：极端易变是太阳光源的特点，必须根据天气情况，根据天气情况，不断调节光照度不断调节光照度。u室内尽可能利用室内尽可能利用近窗口的漫射光近窗口的漫射光，防止直射光照射，
21、光照过，防止直射光照射，光照过强时可用竹帘或布帘遮光调节。强时可用竹帘或布帘遮光调节。u室外室外一般应有一般应有棚室顶架棚室顶架，用活动，用活动白帆布或彩条布蓬调节光照，白帆布或彩条布蓬调节光照，阴雨天，可短期利用人工光照阴雨天，可短期利用人工光照。Company Logo调节温度调节温度u一般一般单胞藻培养单胞藻培养不须控温设备不须控温设备，冬季冬季培养应培养应加取暖设备加取暖设备来提来提高温度。高温度。Company Logo注意酸碱变化注意酸碱变化uCO2被吸收利用，导致藻液被吸收利用，导致藻液pH上升。上升。u其他营养物质的吸收，也会引起其他营养物质的吸收，也会引起pH的上升或下降。的
22、上升或下降。u如如pH过高或过低，可用过高或过低，可用1mol/L的盐酸或氢氧化钠调节的盐酸或氢氧化钠调节。Company Logo2、培养藻类生长情况观察和检查、培养藻类生长情况观察和检查u藻类的生长情况，可以通过藻液呈现的藻类的生长情况，可以通过藻液呈现的颜色颜色，藻细胞的，藻细胞的运动运动或是悬浮情况或是悬浮情况，是否有沉淀和附壁现象是否有沉淀和附壁现象；u菌膜和敌害生物污染菌膜和敌害生物污染迹象的有无等观察而了解大概情况。迹象的有无等观察而了解大概情况。Company Logo（六）防治敌害生物的措施（六）防治敌害生物的措施u1、预防措施：、预防措施：u严格防止污染：严格防止污染：u防
23、止污染的防止污染的重点应该放在生产性藻种培养这一级上重点应该放在生产性藻种培养这一级上。u因为：藻种培养在室内，培养容器为玻璃瓶。因为：藻种培养在室内，培养容器为玻璃瓶。防止污染条件防止污染条件较好。较好。u只要藻种级没有敌害生物污染，扩大培养到水池，生产周期只要藻种级没有敌害生物污染，扩大培养到水池，生产周期短，就是发生污染敌害生物还需要一段生长、繁殖时间才短，就是发生污染敌害生物还需要一段生长、繁殖时间才能达到一定数量，所以影响不大。能达到一定数量，所以影响不大。Company Logo保持培养藻液的生长优势和数量优势保持培养藻液的生长优势和数量优势u首先接种的藻种最好取自首先接种的藻种最
24、好取自指数生长期指数生长期。u接种量大接种量大，从培养开始培养藻液在培养液中即占数量上的绝，从培养开始培养藻液在培养液中即占数量上的绝对优势。对优势。Company Logo做好藻种的分离、培养和供应工作做好藻种的分离、培养和供应工作u在培养过程中，严格防止污染是重要的，但从目前单细胞藻在培养过程中，严格防止污染是重要的，但从目前单细胞藻类的培养水平看，绝对防止敌害生物污染是不可能的，类的培养水平看，绝对防止敌害生物污染是不可能的，u要根本的解决这个问题，就必须要根本的解决这个问题，就必须不断的补充新的不断的补充新的“纯纯”藻种藻种来取代在长期培养过程中已经受污染的藻种来取代在长期培养过程中已
25、经受污染的藻种，这才可能使，这才可能使培养较好的顺利进行。培养较好的顺利进行。Company Logo2、清除、抑制或杀灭敌害生物的方法、清除、抑制或杀灭敌害生物的方法u使用过滤方法清除大型敌害生物：使用过滤方法清除大型敌害生物：u饵料微藻都很小，对污染的大型敌害生物（如轮虫等）可用饵料微藻都很小，对污染的大型敌害生物（如轮虫等）可用过滤方法清除。过滤方法清除。u清除轮虫等敌害生物可用清除轮虫等敌害生物可用网孔小于网孔小于60um的密筛绢网过滤的密筛绢网过滤，必须连续过滤。必须连续过滤。Company Logo使用药物抑制或杀灭敌害生物使用药物抑制或杀灭敌害生物u培养培养亚心形扁藻和湛江等鞭藻
26、亚心形扁藻和湛江等鞭藻出现出现尖鼻虫尖鼻虫危害时，在藻液中危害时，在藻液中加加0.003%医用浓氨水医用浓氨水，可有效杀死尖鼻虫不影响藻细胞，可有效杀死尖鼻虫不影响藻细胞生长繁殖。生长繁殖。u如果在藻液中如果在藻液中细菌大量繁殖细菌大量繁殖时，致使藻细胞生长缓慢大量下时，致使藻细胞生长缓慢大量下沉，在沉，在lL藻液中加入藻液中加入少量青霉素少量青霉素，可抑制细菌的生长。，可抑制细菌的生长。Company Logo改变环境条件杀灭敌害生物改变环境条件杀灭敌害生物u利用利用亚心形扁藻亚心形扁藻耐高盐的特性，使用提高比重的方法杀灭敌耐高盐的特性，使用提高比重的方法杀灭敌害生物。在被污染的藻液中害生物
27、。在被污染的藻液中加入食盐加入食盐，把藻液，把藻液比重提高到比重提高到1.056-1.060，游仆虫等敌害生物可被杀死。，游仆虫等敌害生物可被杀死。u盐藻培养受变形虫危害时，在盐藻培养受变形虫危害时，在1000ml藻液中加盐藻液中加盐70-110g能杀死尖鼻虫，游仆虫及个体较小的原生动物。能杀死尖鼻虫，游仆虫及个体较小的原生动物。u当亚心形扁藻、湛江等鞭藻中有尖鼻虫、游仆虫等敌害生物当亚心形扁藻、湛江等鞭藻中有尖鼻虫、游仆虫等敌害生物时，可以采用盐酸酸化藻液的办法进行杀灭。时，可以采用盐酸酸化藻液的办法进行杀灭。u方法方法1000ml藻液中加藻液中加1mol/L盐酸盐酸3ml，边加边搅拌同，边
28、加边搅拌同时测定时测定pH值，值，待待pH降到降到3时时，停止加盐酸，停止加盐酸，酸化酸化0.5-1h，即可将上述敌害生物杀死。即可将上述敌害生物杀死。u然后用然后用氢氧化钠将藻液恢复原氢氧化钠将藻液恢复原pH，藻液经，藻液经23-25h后，就后，就可恢复游动及正常生长繁殖。可恢复游动及正常生长繁殖。Company Logo四、几种比较特殊的培养方法四、几种比较特殊的培养方法u（一）同槽培养（一）同槽培养u在对虾育苗池施肥培养生物饵料供同池培养的对虾幼体食用，生在对虾育苗池施肥培养生物饵料供同池培养的对虾幼体食用，生物饵料培养与对虾育苗在同一水池内同时进行，即同槽培养。物饵料培养与对虾育苗在同
29、一水池内同时进行，即同槽培养。u1、培养池：、培养池：水容量大，室外、露天水容量大，室外、露天。u2、清池消毒：、清池消毒：u3、藻种：从海区抽上来，经沉淀池沉淀的海水，用、藻种：从海区抽上来，经沉淀池沉淀的海水，用150目筛娟网目筛娟网过滤后灌入池中。过滤后灌入池中。u4、施肥：、施肥：u第一天第一天氮肥：氮肥：2-3mg/L、磷肥：磷肥：0.2-0.3mg/Lu以后每天施以后每天施氮肥：氮肥：0.5-1.5mg/L、磷肥：、磷肥：0.05-0.15mg/Lu铁肥和硅肥不必每天施，隔铁肥和硅肥不必每天施，隔2-3天施一次或完全不施。天施一次或完全不施。u铁肥：铁肥：0.3-0.5mg/Lu硅
30、肥：硅肥：0.05-0.1mg/LCompany Logo（二）专池培养（二）专池培养u专池培养：与同槽培养不同的是使用专用饵料池培养，专池培养：与同槽培养不同的是使用专用饵料池培养，施肥施肥量加大，培养时间短浓度大量加大，培养时间短浓度大。u1、2、3步骤同上。步骤同上。u4、施肥：、施肥：u第一次施硝酸钠：第一次施硝酸钠：30mg/Lu磷酸氢二钾：磷酸氢二钾：3mg/Lu三氯化铁：三氯化铁：0.3mg/Lu一般一般三、四天三、四天，即可收获。，即可收获。u优点：方法简单、培养速度快，能大量及时的供饵。优点：方法简单、培养速度快，能大量及时的供饵。u缺点：生长起来绝大多数单胞藻不适合缺点：生
31、长起来绝大多数单胞藻不适合蚤状幼体摄食蚤状幼体摄食，生长生长起来又极容易大量死亡起来又极容易大量死亡。Company Logo（三）底栖硅藻的培养（三）底栖硅藻的培养u鲍、蛤鲍、蛤及海参等海产经济动物的幼虫卵孵出后，只有一短暂及海参等海产经济动物的幼虫卵孵出后，只有一短暂的浮游阶段即下沉过底栖生活。在的浮游阶段即下沉过底栖生活。在底栖生活阶段需要底栖生活阶段需要提供提供底栖性饵料底栖性饵料。u1、藻种的来源：、藻种的来源：u海区挂板附片：在海区挂板附片：在海区浮筏下海区浮筏下，悬挂各种类型的，悬挂各种类型的附着基附着基（如文蛤壳、塑料板、玻璃片等），悬挂深度在（如文蛤壳、塑料板、玻璃片等），悬
32、挂深度在0.5m左右左右，2、3天后取回天后取回；冲洗冲洗去附着去附着杂物杂物，再，再取下底栖硅藻，收集取下底栖硅藻，收集藻种。藻种。u刮砂淘洗：自然繁殖的底栖硅藻在刮砂淘洗：自然繁殖的底栖硅藻在海滩的表面海滩的表面形成形成黄绿色黄绿色至黄褐色的密集藻群至黄褐色的密集藻群。取有密集藻群的表面细砂取有密集藻群的表面细砂，加入清，加入清洁海水，搅拌清洗杂物，静置片刻，待沙泥下沉，洁海水，搅拌清洗杂物，静置片刻，待沙泥下沉，上层液上层液体呈茶褐色，在经粗筛娟过滤体呈茶褐色，在经粗筛娟过滤，即可得到浓度很大的底栖，即可得到浓度很大的底栖硅藻藻液硅藻藻液。Company Logo2、培养容器和附片装置、
33、培养容器和附片装置u培养容器：培养容器：u玻璃钢水槽玻璃钢水槽：藻种：藻种u水族箱水族箱：中继培养：中继培养u水泥池水泥池：大型培养：大型培养u附片装置附片装置u玻璃、聚乙烯薄膜、玻璃、聚乙烯薄膜、玻璃钢波纹板玻璃钢波纹板等均可作为附片装置。等均可作为附片装置。u附片架附片架Company Logo3、培养方法、培养方法u接种附片接种附片u把培养容器、培养池和附片装置把培养容器、培养池和附片装置清洗消毒干净清洗消毒干净，将幅片装置将幅片装置装入培养容器装入培养容器中，中，加满过滤海水加满过滤海水。u把采集到得把采集到得底栖硅藻液用密筛娟网过滤底栖硅藻液用密筛娟网过滤1-2次后次后，倒入培养倒入
34、培养池中池中，搅拌均匀搅拌均匀，静置静置1天天，利用底栖硅藻在静水中沉降并，利用底栖硅藻在静水中沉降并附片的特性来附片的特性来附片附片。u24h后，硅藻藻种已比较均匀地附着在附片的向上面，后，硅藻藻种已比较均匀地附着在附片的向上面，用用水轻轻冲洗附片水轻轻冲洗附片，附片上的硅藻不脱离时附片上的硅藻不脱离时，即全部换水即全部换水，加入新鲜海水并施肥，加入新鲜海水并施肥，开始培养开始培养。u培养培养2-3天后天后，可将，可将附片装置翻转附片装置翻转，再一次接种附片再一次接种附片，即得，即得双面附片，继续培养。双面附片，继续培养。Company Logo换水换水u每每2-3天换水一次并施肥天换水一次
35、并施肥，换水时必须，换水时必须冲洗池底污物冲洗池底污物，并将，并将敌害生物冲走。敌害生物冲走。u在在高温季节里高温季节里，换水次数应增加换水次数应增加。u在条件许可时在条件许可时利用循环水或流动水培养底栖硅藻利用循环水或流动水培养底栖硅藻，能获得，能获得更更理想理想的效果。的效果。Company Logou施肥施肥u硝酸铵：硝酸铵：10-25mgu九水硅酸钠：九水硅酸钠：1mgu磷酸二氢钾：磷酸二氢钾：1-2.5mgu维生素维生素B12：0.25ugu柠檬酸铁：柠檬酸铁：0.1mgu海水海水1000mlu光照光照5000-10000lxu生长情况观察生长情况观察u收获：收获：5-7天天培养即可
36、收获。培养即可收获。u将附片装置用过滤海水轻轻冲洗或在池中荡洗几次，然后将附片装置用过滤海水轻轻冲洗或在池中荡洗几次，然后整个移整个移入育苗池中入育苗池中，培养的幼虫下沉在附片上，并以附片上的底栖硅藻，培养的幼虫下沉在附片上，并以附片上的底栖硅藻为饵料。为饵料。u洗刷：将硅藻从附片上洗刷：将硅藻从附片上洗刷下来洗刷下来，经过滤后投入育苗池中经过滤后投入育苗池中。Company Logo五、藻种的保存五、藻种的保存u（一）琼脂斜面保存（一）琼脂斜面保存在微藻培养液中，在微藻培养液中，溶入琼脂溶入琼脂，制成，制成1.5%-2%的琼脂斜面的琼脂斜面固体培养基固体培养基，划线接种上微藻划线接种上微藻，
37、在，在弱光下培养弱光下培养，当目测到，当目测到藻落形成时，在藻落形成时，在实验室温下保存或放入冰箱中保存实验室温下保存或放入冰箱中保存。u优点：时间长，一般为优点：时间长，一般为1年左右年左右u 如果如果每天每天让藻种让藻种接受短时间弱光照接受短时间弱光照，则可保存，则可保存2-3年；年；u 体积小便于携带和邮寄。体积小便于携带和邮寄。u缺点：琼脂斜面易干燥收缩，引起藻细胞变形，缺点：琼脂斜面易干燥收缩，引起藻细胞变形，重接种时需重接种时需较长时间恢复较长时间恢复。Company Logo（二）液体保种（二）液体保种u方法与单胞藻的培养基本相同，但是注意以下几点可以延长方法与单胞藻的培养基本相
38、同，但是注意以下几点可以延长保种时间。保种时间。u1、减少接种量：、减少接种量：u如如中肋骨条藻中肋骨条藻接种接种1周周就能达到就能达到最大生长密度最大生长密度，然后渐渐开，然后渐渐开始衰败，始衰败，2周周作用就会作用就会全部死亡全部死亡。u这样就必须这样就必须每周或者每周或者10d左右就左右就更新接种一次更新接种一次。u如果在如果在100ml的的培养液培养液中，只中，只接种接种2-3滴滴藻种在室温和室藻种在室温和室内自然光照下，需要内自然光照下，需要1个多月才能达到最大密度个多月才能达到最大密度。u这样就可以在这样就可以在1个月或更长时间更新个月或更长时间更新1次接种即可次接种即可。Comp
39、any Logo2、加入氮素、加入氮素u以往在微藻保种时，常用降低氮素的浓度来使微藻缓慢生长，以往在微藻保种时，常用降低氮素的浓度来使微藻缓慢生长，延长更新接种的周期。延长更新接种的周期。u现在发现微藻细胞分裂率与氮浓度之间有一个双曲线的关系，现在发现微藻细胞分裂率与氮浓度之间有一个双曲线的关系，即在适宜浓度范围内生长率随氮浓度增加而上升，随后趋即在适宜浓度范围内生长率随氮浓度增加而上升，随后趋于平稳，于平稳，超过适宜浓度范围，生长率反而下降超过适宜浓度范围，生长率反而下降。u所以，如用所以，如用硝酸钠作氮源硝酸钠作氮源，浓度为浓度为100mg/L（N）培养培养微藻可以微藻可以2-3个月更新接
40、种个月更新接种1次次。Company Logo3、低温、低温u将指数生长期的微藻，置于将指数生长期的微藻，置于家用冰箱（家用冰箱（4-5）中，中，可保存可保存半年左右。半年左右。u但这种保种方式保存的藻种，更新接种需要但这种保种方式保存的藻种，更新接种需要15-20天才能天才能正常生长正常生长。Company Logo思考题思考题u（一）选择（一）选择u1、大多数单胞藻适合的温度范围是（、大多数单胞藻适合的温度范围是（ ）。）。uA 20-25 B 25-30 C 30-35 D 35-40 u2、大多数单胞藻适宜的、大多数单胞藻适宜的pH（ ）。）。uA 6.07.0 B 7.58.5 C
41、8.09.0 D 6.09.0u3、生产性培养单胞藻，一般的接种量为（、生产性培养单胞藻，一般的接种量为（ B ）。）。uA 1：5-1：7 B 1：10-1：20 C 1：50-1：100 D 1：2-1：3u4、单胞藻培养中，搅拌和充气的最主要的目的是（、单胞藻培养中，搅拌和充气的最主要的目的是（ ）。）。uA使二氧化碳溶解到培养液中使二氧化碳溶解到培养液中 B帮助沉淀藻细胞上浮而获帮助沉淀藻细胞上浮而获得光照。得光照。uC防止水表面长出菌膜防止水表面长出菌膜 D 增加溶解氧增加溶解氧u Company Logou5、单胞藻培养中，预防敌害生物污染的关键在（、单胞藻培养中，预防敌害生物污染
42、的关键在（ ）。）。uA 中继培养中继培养 B 生产性培养生产性培养 C 藻种培养藻种培养 D 单胞单胞藻运输与贮存藻运输与贮存u6、下列条件中哪个不是延长单胞藻液体保种时间的措施（、下列条件中哪个不是延长单胞藻液体保种时间的措施（ ）。）。uA 减少接种量减少接种量 B 增加二氧化碳增加二氧化碳 C 增加氮素增加氮素 D 低低温温u7、藻种培养，一般的接种量为（、藻种培养，一般的接种量为（ D ）。）。uA 1：5-1：7 B 1：10-1：20 C 1：50-1：100 D 1：2-1：3Company Logou（二）填空（二）填空u1、一般可采用、一般可采用 、 和和 进进行单胞藻的分
43、离。行单胞藻的分离。u2、钝顶螺旋藻需要的培养条件，温度、钝顶螺旋藻需要的培养条件，温度 、光、光照照 、pH 。 u3、单细胞藻类培养过程分为：、单细胞藻类培养过程分为： 、 、 、 。Company Logou（三）简答（三）简答u1、单细胞藻类的培养条件。、单细胞藻类的培养条件。u2、简要叙述如何采用微吸管分离法分离单胞藻。、简要叙述如何采用微吸管分离法分离单胞藻。u3、预防敌害生物进入单胞藻培养池的措施。、预防敌害生物进入单胞藻培养池的措施。u4、单细胞藻类的常用保种方法。、单细胞藻类的常用保种方法。u5、如何获得底栖硅藻的藻种。、如何获得底栖硅藻的藻种。Company Logo结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！47
