《酶联免疫吸附测定法elisa在抗生素残留检测中的应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酶联免疫吸附测定法elisa在抗生素残留检测中的应用（48页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法ELISA)ELISA)在在抗生素残留检测中的应用抗生素残留检测中的应用 药物残留快速检测试剂盒药物残留快速检测试剂盒 实验操作指导实验操作指导1 1、酶联免疫吸附测定法、酶联免疫吸附测定法ELISAELISA简介简介1.1、根本概念：抗原、抗体、抗原抗体的特性1.2、ELISA方法简介：1.3、ELISA方法的原理1.4、ELISA方法的分类2 2、ELISAELISA试剂的组成试剂的组成2.1、ELISA试剂盒的组成2.1.1、已包被抗原或抗体的固相载体免疫吸附剂，俗称酶标板；2.1.2、酶标记的抗原或抗体酶标记物；2.1.3、酶的底物；2.1.4、参考
2、标准品定量测定；2.1.5、酶标记物及样本的稀释液；2.1.6、洗涤液；2.1.7、酶反响终止液。2.22.2、各、各ELISAELISA组成试剂的作用组成试剂的作用2.2.1、固相载体2.2.2、免疫吸附剂2.2.3、酶标记物2.2.4、酶的底物2.2.5、洗涤液2.2.6、反响终止液2.2.7、参考标准品3 3、ELISAELISA实验过程实验过程3.1 、试剂的准备3.2 、加样3.3 、保温3.4、 洗涤3.5 、显色和比色4 4、ELISAELISA试验的质量控制试验的质量控制4.1、分析前质控4.1.1、人员培训4.1.2、仪器质控4.1.3、标本采集及处理过程的质控4.2、分析中
3、质控4.34.3、几种常用的质控方法、几种常用的质控方法4.3.1、灰区概念4.3.2、外添加回收率试验方法4.3.3、确证阳性样品质控4.3.4、室间质评的方法：发质控物进行调查5、胶体金试纸、胶体金试纸5.1、免疫层析法简介及特点、免疫层析法简介及特点5.2、免疫层析法的结构及原理、免疫层析法的结构及原理二、培训内容操作局部二、培训内容操作局部6、操作过程演示、操作过程演示7、计算软件应用说明、计算软件应用说明 1 1、酶联免疫吸附测定法、酶联免疫吸附测定法、酶联免疫吸附测定法、酶联免疫吸附测定法ELISAELISA简介简介简介简介 1.11.1、根本概念：、根本概念：、根本概念：、根本概
4、念： 抗原：抗原是指进入人或动物机体后，可刺激机体免疫系统发生免疫应答，抗原：抗原是指进入人或动物机体后，可刺激机体免疫系统发生免疫应答，抗原：抗原是指进入人或动物机体后，可刺激机体免疫系统发生免疫应答，抗原：抗原是指进入人或动物机体后，可刺激机体免疫系统发生免疫应答，从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反响的物质。发生特异性反响的物质。发生特异性反响的物质。发生特异
5、性反响的物质。 抗体：是由抗原刺冲动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相应抗体：是由抗原刺冲动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相应抗体：是由抗原刺冲动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相应抗体：是由抗原刺冲动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 抗原抗体的根本特性：抗原抗体的根本特性：抗原抗体的根本特性：抗原抗体的根本特性：a a、反响的特异性；、反响的特异性；、反响的特异性；、反响的特异性；b b、反响的等比例性、反响的等比例性、反响的等
6、比例性、反响的等比例性 1.21.2、ELISAELISA方法简介：方法简介：方法简介：方法简介： ELISAELISA属于标记免疫学技术的一种，属于标记免疫学技术的一种，属于标记免疫学技术的一种，属于标记免疫学技术的一种，19711971年由荷兰和瑞典的学者提出，年由荷兰和瑞典的学者提出，年由荷兰和瑞典的学者提出，年由荷兰和瑞典的学者提出，由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在食品平安和卫生检测中由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在食品平安和卫生检测中由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在食品平安和卫生检测中由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在食品平安和卫生检测中
7、得到了广泛的应用。目前市场上有多种基于得到了广泛的应用。目前市场上有多种基于得到了广泛的应用。目前市场上有多种基于得到了广泛的应用。目前市场上有多种基于ELISAELISA方法开发的用于食品中方法开发的用于食品中方法开发的用于食品中方法开发的用于食品中抗生素检测的试剂盒产品。抗生素检测的试剂盒产品。抗生素检测的试剂盒产品。抗生素检测的试剂盒产品。 返回返回返回返回 1.31.3、ELISAELISA方法的原理方法的原理方法的原理方法的原理 基于抗原抗体反响的特异性和等比例性，以基于抗原抗体反响的特异性和等比例性，以基于抗原抗体反响的特异性和等比例性，以基于抗原抗体反响的特异性和等比例性，以96
8、96孔的聚苯乙烯塑料微孔板又称酶孔的聚苯乙烯塑料微孔板又称酶孔的聚苯乙烯塑料微孔板又称酶孔的聚苯乙烯塑料微孔板又称酶标板为载体，在适当的技术条件下使抗原或抗体包被吸附在酶标板微孔的标板为载体，在适当的技术条件下使抗原或抗体包被吸附在酶标板微孔的标板为载体，在适当的技术条件下使抗原或抗体包被吸附在酶标板微孔的标板为载体，在适当的技术条件下使抗原或抗体包被吸附在酶标板微孔的内壁上成为所谓的包被固相抗体或抗原，没有被吸附游离的抗原或抗体内壁上成为所谓的包被固相抗体或抗原，没有被吸附游离的抗原或抗体内壁上成为所谓的包被固相抗体或抗原，没有被吸附游离的抗原或抗体内壁上成为所谓的包被固相抗体或抗原，没有被
9、吸附游离的抗原或抗体通过洗涤除去，然后直接参加酶标记抗体或抗原或先参加适当的抗体或抗原与通过洗涤除去，然后直接参加酶标记抗体或抗原或先参加适当的抗体或抗原与通过洗涤除去，然后直接参加酶标记抗体或抗原或先参加适当的抗体或抗原与通过洗涤除去，然后直接参加酶标记抗体或抗原或先参加适当的抗体或抗原与包被抗原或抗体反响后，再参加相应的酶标记抗体或抗原，形成酶标记的抗原包被抗原或抗体反响后，再参加相应的酶标记抗体或抗原，形成酶标记的抗原包被抗原或抗体反响后，再参加相应的酶标记抗体或抗原，形成酶标记的抗原包被抗原或抗体反响后，再参加相应的酶标记抗体或抗原，形成酶标记的抗原抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶
10、标记物洗涤去除，参加底物溶液于微抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物洗涤去除，参加底物溶液于微抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物洗涤去除，参加底物溶液于微抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物洗涤去除，参加底物溶液于微孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或复原成为有色的底物。在一定的孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或复原成为有色的底物。在一定的孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或复原成为有色的底物。在一定的孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或复原成为有色的底物。在一定的条件下，复合物上酶的量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈条件下，复合物上酶
11、的量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈条件下，复合物上酶的量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈条件下，复合物上酶的量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反响的抗原现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反响的抗原现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反响的抗原现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反响的抗原和抗体的量。这就是和抗体的量。这就是和抗体的量。这就是和抗体的量。这就是ELISAELISA的原理。的原理。的原理。的原理。 返回返回返回返
12、回 1.41.4、ELISAELISA方法的分类方法的分类方法的分类方法的分类 ELISAELISA可以分为直接法、间接法和夹心法等几种。可以分为直接法、间接法和夹心法等几种。可以分为直接法、间接法和夹心法等几种。可以分为直接法、间接法和夹心法等几种。 直接法：直接法：直接法：直接法： 直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原原原原抗体复合物，参加酶反响底
13、物，测定产物的吸光值，计算出包被在酶标上的抗体复合物，参加酶反响底物，测定产物的吸光值，计算出包被在酶标上的抗体复合物，参加酶反响底物，测定产物的吸光值，计算出包被在酶标上的抗体复合物，参加酶反响底物，测定产物的吸光值，计算出包被在酶标上的抗体或抗原的量。见图抗体或抗原的量。见图抗体或抗原的量。见图抗体或抗原的量。见图2-172-17a a 间接法：间接法：间接法：间接法： 是将酶标记在二抗上，当抗体一抗和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，是将酶标记在二抗上，当抗体一抗和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，是将酶标记在二抗上，当抗体一抗和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，是将酶标记在二抗上，当抗
14、体一抗和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，再以酶标二抗和复合物结合，通过测定酶反响产物的颜色可以间接反响一抗再以酶标二抗和复合物结合，通过测定酶反响产物的颜色可以间接反响一抗再以酶标二抗和复合物结合，通过测定酶反响产物的颜色可以间接反响一抗再以酶标二抗和复合物结合，通过测定酶反响产物的颜色可以间接反响一抗和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量。见图和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量。见图和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量。见图和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量。见图2-172-17b b 夹心法：夹心法：夹心法：夹心法： 是先将未标记的抗体包被在酶标板上，用于捕获抗
15、原，在用酶标的抗体与抗原反是先将未标记的抗体包被在酶标板上，用于捕获抗原，在用酶标的抗体与抗原反是先将未标记的抗体包被在酶标板上，用于捕获抗原，在用酶标的抗体与抗原反是先将未标记的抗体包被在酶标板上，用于捕获抗原，在用酶标的抗体与抗原反响形成抗体响形成抗体响形成抗体响形成抗体- -抗原抗原抗原抗原- -酶标抗体复合物；也可以象间接法一样应用酶标二抗和抗体酶标抗体复合物；也可以象间接法一样应用酶标二抗和抗体酶标抗体复合物；也可以象间接法一样应用酶标二抗和抗体酶标抗体复合物；也可以象间接法一样应用酶标二抗和抗体- -抗抗抗抗原原原原- -抗体复合物结合，形成抗体抗体复合物结合，形成抗体抗体复合物结
16、合，形成抗体抗体复合物结合，形成抗体- -抗原抗原抗原抗原- -抗体抗体抗体抗体- -酶标二抗复合物，见图酶标二抗复合物，见图酶标二抗复合物，见图酶标二抗复合物，见图2-172-17C C。前。前。前。前者称为直接夹心法，后者称为间接夹心法。者称为直接夹心法，后者称为间接夹心法。者称为直接夹心法，后者称为间接夹心法。者称为直接夹心法，后者称为间接夹心法。 返回返回返回返回ELISAELISA原理及分类图原理及分类图2-172-17 上述三种方法又可以分为竞争法和非竞争法。由于我公司的试剂盒产上述三种方法又可以分为竞争法和非竞争法。由于我公司的试剂盒产品绝大局部属于直接法中的竞争法。下面对直接法
17、中的酶标抗原竞争品绝大局部属于直接法中的竞争法。下面对直接法中的酶标抗原竞争法作重点说明。法作重点说明。 在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔，在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔，在对照孔中参加系列标准品溶液和酶标记物；在测定孔中同时参加酶在对照孔中参加系列标准品溶液和酶标记物；在测定孔中同时参加酶标记物和非酶标抗原通常来自于待测样品，酶标记物和样品互相标记物和非酶标抗原通常来自于待测样品，酶标记物和样品互相竞争包被抗体的结合点，经过温浴后，没有结合到包被抗体上的酶标竞争包被抗体的结合点，经过温浴后，没有结合到包被抗体上的酶标记物和样品经过洗涤
18、去除。拍干后参加底物溶液，经温育后洗涤拍干，记物和样品经过洗涤去除。拍干后参加底物溶液，经温育后洗涤拍干，显色、终止，用酶标仪测定吸光度值。其反响原理如图显色、终止，用酶标仪测定吸光度值。其反响原理如图2-182-18 返回返回竞争法竞争法ELISA原理图原理图2-18如下图.在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔，在对照孔中参加浓度的系列标准品溶液和酶标记物；在测定孔中同时参加酶标记物和待检样本抗原，酶标记物和样品互相竞争包被抗体的结合点，形成酶标记的抗原抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物通过洗涤去除，参加底物溶液于微孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化复原
19、成为有色的产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标记物结合参加底物后呈色较深，当样本含有抗原时，样本中的抗原和酶标记物共同竞争抗体的结合位点，酶标抗原的比例越高，结合在固相抗体上的酶标抗原就越多，酶标抗原的比例越低，结合在固相上的抗体就越少，而在一定的条件下，复合物上酶的量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反响的抗原和抗体的量，从而进一步得知样本中抗原的多少。这就是竞争法ELISA的原理。測定孔EEEEE酶标记物底物溶液对照孔EEEEEEEEEEEEEEE酶标记物底物溶液參考液(不含抗原)EE樣本(含抗原)竞争
20、法ELISA原理简述如下图如下图. .在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔，在对照孔中参加浓度的系列标准品溶液和酶标记物；孔和对照孔，在对照孔中参加浓度的系列标准品溶液和酶标记物；在测定孔中同时参加酶标记物和待检样本抗原，酶标记物和在测定孔中同时参加酶标记物和待检样本抗原，酶标记物和样品互相竞争包被抗体的结合点，形成酶标记的抗原样品互相竞争包被抗体的结合点，形成酶标记的抗原抗体复合抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物通过洗涤去除，参加底物物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物通过洗涤去除，参加底物溶液于微孔中，复合物上
21、的酶催化底物使其水解、氧化复原成为溶液于微孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化复原成为有色的产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和有色的产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标记物结合参加底物后呈色较深，当样本含有抗原时，样本中酶标记物结合参加底物后呈色较深，当样本含有抗原时，样本中的抗原和酶标记物共同竞争抗体的结合位点，酶标抗原的比例越的抗原和酶标记物共同竞争抗体的结合位点，酶标抗原的比例越高，结合在固相抗体上的酶标抗原就越多，酶标抗原的比例越低，高，结合在固相抗体上的酶标抗原就越多，酶标抗原的比例越低，结合在固相上的抗体就越少，而在一定的条件下，复合物上酶的结
22、合在固相上的抗体就越少，而在一定的条件下，复合物上酶的量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈现的色量也反映了固定化的抗原抗体复合物的量和酶产物呈现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反响的抗原和抗体的量，从而进一步得知样本中抗原的多少。这就响的抗原和抗体的量，从而进一步得知样本中抗原的多少。这就是竞争法是竞争法ELISAELISA的原理。的原理。样本浓度的计算样本浓度的计算样本浓度的计算样本浓度的计算所获得的每个浓度标准溶液或样本吸光度值的平均值所获得的每个浓度标准溶液或样本吸光度值的平均值BB除以第一除以第
23、一个标准个标准OO标准的吸光度值标准的吸光度值BB。再乘以。再乘以100%100%，即百分吸光，即百分吸光度值。度值。百分吸光度值百分吸光度值%)=(B/BO)/100%)=(B/BO)/100%公式中公式中BB为样本溶液的平均吸光度值，为样本溶液的平均吸光度值，B0B0为为0PPb0PPb标准溶液的平均标准溶液的平均吸光度值。以克伦特罗浓度的半对数值为吸光度值。以克伦特罗浓度的半对数值为xx轴，百分吸光度值为轴，百分吸光度值为YY轴，绘制标准曲线图，标准曲线如图一相对应每一个样品中残轴，绘制标准曲线图，标准曲线如图一相对应每一个样品中残留的克伦特罗的浓度可以从标准曲线上读出，在实际的计算中只
24、需留的克伦特罗的浓度可以从标准曲线上读出，在实际的计算中只需用酶标测出标准品和样品的吸光值，其他过程可通过专用的计算软用酶标测出标准品和样品的吸光值，其他过程可通过专用的计算软件完成。件完成。返回返回2、ELISA试剂的组成2.12.1、完整的、完整的、完整的、完整的ELISAELISA试剂盒应包含以下各组分：试剂盒应包含以下各组分：试剂盒应包含以下各组分：试剂盒应包含以下各组分：1 1已包被抗原或抗体的固相载体免疫吸附剂，已包被抗原或抗体的固相载体免疫吸附剂，已包被抗原或抗体的固相载体免疫吸附剂，已包被抗原或抗体的固相载体免疫吸附剂，俗称酶标板；俗称酶标板；俗称酶标板；俗称酶标板；2 2酶标
25、记的抗原或抗体酶标记物；酶标记的抗原或抗体酶标记物；酶标记的抗原或抗体酶标记物；酶标记的抗原或抗体酶标记物；3 3酶的底物；酶的底物；酶的底物；酶的底物；4 4系列参考标准品定量测定；系列参考标准品定量测定；系列参考标准品定量测定；系列参考标准品定量测定；5 5酶标记物及样本的稀释液；酶标记物及样本的稀释液；酶标记物及样本的稀释液；酶标记物及样本的稀释液；6 6洗涤液；洗涤液；洗涤液；洗涤液；7 7反响终止液。反响终止液。反响终止液。反响终止液。 返回返回返回返回2.2、ELISA试剂的作用2.2.12.2.1、固相载体：、固相载体：、固相载体：、固相载体：固相载体在固相载体在固相载体在固相载
26、体在ELISAELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不测定过程中作为吸附剂和容器，不测定过程中作为吸附剂和容器，不测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反响。可作参与化学反响。可作参与化学反响。可作参与化学反响。可作ELISAELISA中载体的材料很多，最中载体的材料很多，最中载体的材料很多，最中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。常用的是聚苯乙烯。常用的是聚苯乙烯。常用的是聚苯乙烯。ELISAELISA载体的形状主要有三种：载体的形状主要有三种：载体的形状主要有三种：载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常微量滴定板、小珠
27、和小试管。以微量滴定板最为常微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用，专用于用，专用于用，专用于用，专用于EILSAEILSA的产品称为的产品称为的产品称为的产品称为ELISAELISA板，国际上标准板，国际上标准板，国际上标准板，国际上标准的微量滴定板为的微量滴定板为的微量滴定板为的微量滴定板为812812的的的的9696孔式。孔式。孔式。孔式。2.22.2、免疫吸附剂：、免疫吸附剂：、免疫吸附剂：、免疫吸附剂：已包被抗原或抗体的固相载体，是已包被抗原或抗体的固相载体，是已包被抗原或抗体的固相载体，是已包被抗原或抗体的固相载体，是ELISAELISA方法中的核方法中的核方法中的核方法中
28、的核心试剂。心试剂。心试剂。心试剂。返回返回返回返回2.32.3、酶标记物：、酶标记物：、酶标记物：、酶标记物：即酶标记的抗原或抗体，是即酶标记的抗原或抗体，是即酶标记的抗原或抗体，是即酶标记的抗原或抗体，是ELISAELISA中最关键的试剂。中最关键的试剂。中最关键的试剂。中最关键的试剂。良好的酶标记物应该是既保有酶的催化活性，也保良好的酶标记物应该是既保有酶的催化活性，也保良好的酶标记物应该是既保有酶的催化活性，也保良好的酶标记物应该是既保有酶的催化活性，也保持了抗体或抗原的免疫活性。酶标记物中酶与持了抗体或抗原的免疫活性。酶标记物中酶与持了抗体或抗原的免疫活性。酶标记物中酶与持了抗体或抗
29、原的免疫活性。酶标记物中酶与抗体或抗原之间有恰当的分子比例，在酶标记抗体或抗原之间有恰当的分子比例，在酶标记抗体或抗原之间有恰当的分子比例，在酶标记抗体或抗原之间有恰当的分子比例，在酶标记物中应尽量不含有或少含有游离的未结合的酶物中应尽量不含有或少含有游离的未结合的酶物中应尽量不含有或少含有游离的未结合的酶物中应尽量不含有或少含有游离的未结合的酶或游离的抗体或抗原。此外酶标记物还要有良或游离的抗体或抗原。此外酶标记物还要有良或游离的抗体或抗原。此外酶标记物还要有良或游离的抗体或抗原。此外酶标记物还要有良好的稳定性。在好的稳定性。在好的稳定性。在好的稳定性。在ELISAELISA中，常用的酶为辣
30、根过氧化中，常用的酶为辣根过氧化中，常用的酶为辣根过氧化中，常用的酶为辣根过氧化物酶物酶物酶物酶(horseradishperoxidase,HRP)(horseradishperoxidase,HRP)和碱性磷酸酶和碱性磷酸酶和碱性磷酸酶和碱性磷酸酶(alkalinephosohatase,AP)(alkalinephosohatase,AP)。返回返回返回返回 2.42.4、酶的底物、酶的底物、酶的底物、酶的底物 2.4.12.4.1、HRPHRP的底物的底物的底物的底物HRPHRP催化过氧化物的氧化反响，最具代表性的过氧化物为催化过氧化物的氧化反响，最具代表性的过氧化物为催化过氧化物的氧
31、化反响，最具代表性的过氧化物为催化过氧化物的氧化反响，最具代表性的过氧化物为H2O2H2O2，其，其，其，其反响式如下：反响式如下：反响式如下：反响式如下：DH2+H2O2D+H2ODH2+H2O2D+H2O上式中，上式中，上式中，上式中，DH2DH2为供氢体，为供氢体，为供氢体，为供氢体，H2O2H2O2为受氢体。在为受氢体。在为受氢体。在为受氢体。在ELISAELISA中，中，中，中，DH2DH2一般为一般为一般为一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。常用的供氢无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。常用的供氢无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作
32、比色测定。常用的供氢无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。常用的供氢体有邻苯二胺体有邻苯二胺体有邻苯二胺体有邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺、四甲基联苯胺、四甲基联苯胺、四甲基联苯胺(3,3,5,5-(3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB)tetramethylbenzidine,TMB) OPDOPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反响后，在氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反响后，在氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反响后，在氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反响后，
33、在492nm492nm处有最处有最处有最处有最高吸收峰，灵敏度高吸收峰，灵敏度高吸收峰，灵敏度高吸收峰，灵敏度高，比色方便，是高，比色方便，是高，比色方便，是高，比色方便，是HRPHRP结合物最常用的底物。结合物最常用的底物。结合物最常用的底物。结合物最常用的底物。OPDOPD本身难溶于水，本身难溶于水，本身难溶于水，本身难溶于水，OPD2HCLOPD2HCL为水溶性。曾有报道为水溶性。曾有报道为水溶性。曾有报道为水溶性。曾有报道OPDOPD有致异变性，操作时应予注意。有致异变性，操作时应予注意。有致异变性，操作时应予注意。有致异变性，操作时应予注意。OPDOPD见光易变质，与过氧化氢混合成底
34、见光易变质，与过氧化氢混合成底见光易变质，与过氧化氢混合成底见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，OPDOPD和和和和H2O2H2O2一般分一般分一般分一般分成二组分，成二组分，成二组分，成二组分，OPDOPD可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶剂，使用更为方便。过氧
35、化氢那么配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓剂，使用更为方便。过氧化氢那么配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓剂，使用更为方便。过氧化氢那么配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓剂，使用更为方便。过氧化氢那么配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用蒸馏水稀释。先进的缩液，使用时用蒸馏水稀释。先进的缩液，使用时用蒸馏水稀释。先进的缩液，使用时用蒸馏水稀释。先进的ELISAELISA试剂盒中那么直接配成含保护试剂盒中那么直接配成含保护试剂盒中那么直接配成含保护试剂盒中那么直接配成含保护剂的工作浓度为剂的工作浓度为剂的工作浓度为剂的工作浓度为0.02%H2O20.02%H2O2的应用液的应用液的应用
36、液的应用液, ,只需参加只需参加只需参加只需参加OPDOPD后即可作为底物应后即可作为底物应后即可作为底物应后即可作为底物应用液。用液。用液。用液。 TMBTMB经经HRPHRP作用后产物显蓝色，目视比照鲜明。作用后产物显蓝色，目视比照鲜明。TMBTMB性质较性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2H2O2溶液混和即成应用液，溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，可直接作底物使用。另外，TMBTMB又有无致癌性等优点，因此又有无致癌性等优点，因此在在ELISAELISA中应用日趋广泛。酶反响用中应用日趋广泛。酶反响用HCLHCL或或H2SO4H2SO4终止后
37、，终止后，TMBTMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为为450nm450nm。 2.4.22.4.2APAP的底物的底物APAP为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl(p-nitrophenylphosphate,p-NPP)phosphate,p-NPP)作为底物，可制成片剂，使用方便。产物作为底物，可制成片剂，使用方便。产物为黄色的对硝基酚，在为黄色的对硝基酚，在405nm405nm波长处有吸收峰。用波长处有吸收峰。用NaOHNaOH终终止酶反响后，黄色可稳定一时间。
38、止酶反响后，黄色可稳定一时间。APAP也有发荧光底物磷酸也有发荧光底物磷酸4-4-甲基伞酮，可用于甲基伞酮，可用于ELISAELISA作作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。 返回返回2.52.5、洗涤液、洗涤液、洗涤液、洗涤液洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋团与蛋白质的疏水基团借疏
39、水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温吐温2020，其浓度可在，其浓度可在0.05%-0.2%0.05%-0.2%之间，高于之间，高于0.2%0.2%时，时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。的灵敏度。返回返回2.6酶反响终止液酶反响终止液常用的常用的HRP反响终止液为硫酸，其浓度反响
40、终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用中一般采用2mol/L。2.7参考标准品参考标准品定量测定的定量测定的ELISA试剂盒应含有制作标准试剂盒应含有制作标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围的的4-5个浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防个浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防腐剂的缓冲液中。腐剂的缓冲液中。返回返回3、ELISA实验过程实验过程3.1试剂的准备试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。试剂。ELISA实验中应用蒸馏水或去
41、离子水，。实验中应用蒸馏水或去离子水，。自配的缓冲液的自配的缓冲液的PH应用应用pH计进行较正。从冰计进行较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的局部应及时使用。试剂盒中本次试验不需用的局部应及时放回冰箱保存。放回冰箱保存。返回返回3.23.2加样加样加样加样在在在在ELISAELISA实验中一般有实验中一般有实验中一般有实验中一般有5 5次加样步聚，即加标准次加样步聚，即加标准次加样步聚，即加标准次加样步聚，即加标准品、加样本、加酶标记物、加底物、加反响终止液。品、加样本、加酶标记物、加底物、加反响终止液。品、加
42、样本、加酶标记物、加底物、加反响终止液。品、加样本、加酶标记物、加底物、加反响终止液。加样时应将所加物加在加样时应将所加物加在加样时应将所加物加在加样时应将所加物加在LEISALEISA板孔的底部，防止加板孔的底部，防止加板孔的底部，防止加板孔的底部，防止加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加样时一般用微量加样器，按规定的量参加板加样时一般用微量加样器，按规定的量参加板加样时一般用微量加样器，按规定的量参加板加样时一般用微量加样器，按规定的量参加板孔中。每次加标
43、本应更换吸嘴，以免发孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染。加酶结合物应用液和底物应用液时可生交叉污染。加酶结合物应用液和底物应用液时可生交叉污染。加酶结合物应用液和底物应用液时可生交叉污染。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。返回返回返回返回 3.33.3保温保温保温保温在在在在ELISAELISA中一般加标本和加酶标记物后会有一次抗原抗中一般加标本和加酶标记物后会有一次抗
44、原抗中一般加标本和加酶标记物后会有一次抗原抗中一般加标本和加酶标记物后会有一次抗原抗体反响。抗原抗体反响的完体反响。抗原抗体反响的完体反响。抗原抗体反响的完体反响。抗原抗体反响的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)(incubation)。 ELISAELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相外表上属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相外表上属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相外表上属固相免疫测定，抗原、抗体
45、的结合只在固相外表上发生。参加板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和发生。参加板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和发生。参加板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和发生。参加板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的时机，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直固相抗结合的时机，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直固相抗结合的时机，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直固相抗结合的时机，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才接与抗体
46、接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能到达反响的终点。在其后参加的酶标记抗体与固相抗原的能到达反响的终点。在其后参加的酶标记抗体与固相抗原的能到达反响的终点。在其后参加的酶标记抗体与固相抗原的能到达反响的终点。在其后参加的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么结合也同样如此。这就是为什么结合也同样如此。这就是为什么结合也同样如此。这就是为什么ELISAELISA反响总是需要一定时反响总是需要一定时反响总是需要一定时反响总是需要一定时间的温育。间的温育。间的温育。间的温育。温育常采用的温度有温育常采用的温度有温育常采用的温度有温育常采用的温度有4343、3737、室温和、室温
47、和、室温和、室温和4 4冰箱温度冰箱温度冰箱温度冰箱温度等。为了便于操作目前绝大局部的试剂盒均采用室温进行等。为了便于操作目前绝大局部的试剂盒均采用室温进行等。为了便于操作目前绝大局部的试剂盒均采用室温进行等。为了便于操作目前绝大局部的试剂盒均采用室温进行温育反响，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准温育反响，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准温育反响，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准温育反响，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指室温温度是指室温温度是指室温温度是指20-2520-25，但具体操作时可根据说明书的要求控，但具体操作时可根据说明书的要求控
48、，但具体操作时可根据说明书的要求控，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，制温育。室温温育时，制温育。室温温育时，制温育。室温温育时，ELISAELISA板只要平置于操作台上即可。板只要平置于操作台上即可。板只要平置于操作台上即可。板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。 3.43.4洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤在洗涤在洗涤在洗涤在ELISAELISA过程中虽不是一个反响步骤，但却也决定过程中虽不是一个反响步骤，但却也决定过程中虽不是一个反响步
49、骤，但却也决定过程中虽不是一个反响步骤，但却也决定着实验的成败。着实验的成败。着实验的成败。着实验的成败。ELSIAELSIA就是靠洗涤来到达别离游离的和结合就是靠洗涤来到达别离游离的和结合就是靠洗涤来到达别离游离的和结合就是靠洗涤来到达别离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以去除残留在板孔中没能与固的酶标记物的目的。通过洗涤以去除残留在板孔中没能与固的酶标记物的目的。通过洗涤以去除残留在板孔中没能与固的酶标记物的目的。通过洗涤以去除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反响过程中非特异性地吸相抗原或抗体结合的物质，以及在反响过程中非特异性地吸相抗原或抗体结合的物质，以及在反响
50、过程中非特异性地吸相抗原或抗体结合的物质，以及在反响过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在质洗涤下来。可以说在质洗涤下来。可以说在质洗涤下来。可以说在ELISAELISA操作中，洗涤是
51、最主要的关键操作中，洗涤是最主要的关键操作中，洗涤是最主要的关键操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。不得马虎。不得马虎。不得马虎。洗涤的方式除某些洗涤的方式除某些洗涤的方式除某些洗涤的方式除某些ELISAELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，仪器配有特殊的自动洗涤仪外，仪器配有特殊的自动洗涤仪外，仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作主要为浸泡式，过程如下：手工操作主要为浸泡式，过程
52、如下：手工操作主要为浸泡式，过程如下：手工操作主要为浸泡式，过程如下：a.a.吸干或甩干孔内反响液；吸干或甩干孔内反响液；吸干或甩干孔内反响液；吸干或甩干孔内反响液；b.b.用洗涤液过洗一遍将洗用洗涤液过洗一遍将洗用洗涤液过洗一遍将洗用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后，即甩去；涤液注满板孔后，即甩去；涤液注满板孔后，即甩去；涤液注满板孔后，即甩去；c.c.浸泡，即将洗涤液注满板孔，浸泡，即将洗涤液注满板孔，浸泡，即将洗涤液注满板孔，浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置放置放置放置1-21-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩
53、短；分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；d.d.吸干孔吸干孔吸干孔吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；e.e.重复操作重复操作重复操作重复操作c c和和和和d d，洗涤，洗涤，洗涤，洗涤3-43-4次或按说明规定。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次或按说明规定。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次或按
54、说明规定。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次或按说明规定。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。次数或延长浸泡时间。次数或延长浸泡时间。次数或延长浸泡时间。3.53.5显色和比色显色和比色显色和比色显色和比色3.5.13.5.1、 显色显色显色显色显色是显色是显色是显色是ELISAELISA中的最后一步温育反响，此时酶中的最后一步温育反响，此时酶中的最后一步温育反响，此时酶中的最后一步温育反响，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反响催化无色的底物生成有色的产物。反响催化无色的底物生成有色的产物。反响催化无色的底物生成有色的产物。反响的温度和时间仍是影响显色的因素。在定量测定中，
55、的温度和时间仍是影响显色的因素。在定量测定中，的温度和时间仍是影响显色的因素。在定量测定中，的温度和时间仍是影响显色的因素。在定量测定中，参加底物后的反响温度和时间应按规定力求准确。参加底物后的反响温度和时间应按规定力求准确。参加底物后的反响温度和时间应按规定力求准确。参加底物后的反响温度和时间应按规定力求准确。底物显色一般在室外温或底物显色一般在室外温或底物显色一般在室外温或底物显色一般在室外温或3737反响反响反响反响20-3020-30分钟后分钟后分钟后分钟后即不再加深，约即不再加深，约即不再加深，约即不再加深，约4040分钟将到达显色的顶峰，再延长分钟将到达显色的顶峰，再延长分钟将到达
56、显色的顶峰，再延长分钟将到达显色的顶峰，再延长反响时间，可使本底值增高。底物液受光照会自行反响时间，可使本底值增高。底物液受光照会自行反响时间，可使本底值增高。底物液受光照会自行反响时间，可使本底值增高。底物液受光照会自行变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加终止液终止反响。产物用各类酸性终止液终止后会终止液终止反响。产物用各类酸性终止液终止后会终止液终止反响。产物用各类酸性终止液终止后会终止液终止反响。产物用各类酸性终止液终止后会使蓝色转变成黄色，此时可用
57、特定的波长使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长450nm450nm测读吸光值。测读吸光值。测读吸光值。测读吸光值。3.5.23.5.2比色比色比色比色比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比体，然后将板正确放入酶标比色仪的比体，然后将板正确放入酶标比色仪的比体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。色架中。色架中。色架中。比色结果的表达以往通用光密度比色结果的表达以往通用
58、光密度比色结果的表达以往通用光密度比色结果的表达以往通用光密度oplicaloplicaldensitydensity，ODOD，现按规定用吸光度，现按规定用吸光度，现按规定用吸光度，现按规定用吸光度absorbenceabsorbence，A A，两者含义相同。通常的表示方法是，将吸收，两者含义相同。通常的表示方法是，将吸收，两者含义相同。通常的表示方法是，将吸收，两者含义相同。通常的表示方法是，将吸收波长写于波长写于波长写于波长写于A A字母的右下字母的右下字母的右下字母的右下角，如角，如角，如角，如TMBTMB的吸收波长为的吸收波长为的吸收波长为的吸收波长为450nm450nm，表示方法
59、为，表示方法为，表示方法为，表示方法为A450nmA450nm或或或或OD450nmOD450nm。 3.6.33.6.3酶标比色仪酶标比色仪酶标比色仪酶标比色仪酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读ELISAELISA结果结果结果结果吸光度的光度计。针对固相载吸光度的光度计。针对固相载吸光度的光度计。针对固相载吸光度的光度计。针对固相载体形式的不同，有特制的适用于板、珠和小试管的设计。许体形式的不同，有特制的适用于板、珠和小试管的设计。许体形式的不同，有特制的适用于板、珠和小试管
60、的设计。许体形式的不同，有特制的适用于板、珠和小试管的设计。许多试剂公司配套供给酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测多试剂公司配套供给酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测多试剂公司配套供给酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测多试剂公司配套供给酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到等等。优良的酶
61、标仪的读数一般可精确到0.0010.001，准确性为，准确性为，准确性为，准确性为1%1%，重复性达，重复性达，重复性达，重复性达0.5%0.5%。举例说，假设某孔测得的。举例说，假设某孔测得的。举例说，假设某孔测得的。举例说，假设某孔测得的A A值为值为值为值为1.0831.083，那么该孔相对于空气的真实，那么该孔相对于空气的真实，那么该孔相对于空气的真实，那么该孔相对于空气的真实A A值应为值应为值应为值应为1.0830.011.0830.011.0731.0931.0731.093，重复测定数次，其，重复测定数次，其，重复测定数次，其，重复测定数次，其A A值均应值均应值均应值均应1.
62、0830.051.0830.051.0781.0881.0781.088在之间。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能在之间。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能在之间。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能在之间。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。酶标仪的检测范围一般在而不同。酶标仪的检测范围一般在而不同。酶标仪的检测范围一般在而不同。酶标仪的检测范围一般在0.0003.0000.0003.000之间，甚至之间，甚至之间，甚至之间，甚至更高。超出可测上限的更高。超出可测上限的更高。超出可测上限的更高。超出可测上限的A A值常以值常以值常以值常以*或或或或overover或其它符号表示。或其它符号表示。
63、或其它符号表示。或其它符号表示。酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15301530，使用前先预热仪器，使用前先预热仪器，使用前先预热仪器，使用前先预热仪器15-3015-30分钟，测读结果更稳定。分钟，测读结果更稳定。分钟，测读结果更稳定。分钟，测读结果更稳定。测读测读A A值时，要选用产物的敏感吸收峰，用单波长进值时，要选用产物的敏感吸收峰，用单波长进行测读。也可用双波长进行测读，即每孔先后测读行测读。也可用双波长进行测读，即每孔先后测
64、读两次，第一次在最适波长两次，第一次在最适波长W1W1，第二次在不敏感，第二次在不敏感波长波长W2W2，两次测定间不移动，两次测定间不移动ELISAELISA板的位置。板的位置。例如例如TMBTMB用用450nm450nm为为W1W1，625nm625nm为为W2W2，最终测得，最终测得的的A A值为两者之差值为两者之差W1-W2W1-W2。双波长式测读可减。双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读使用说明书。使用说明书。返回返回4.ELISA试验的质量控制4.1
65、、分析前质控4.1.14.1.1、人员培训、人员培训、人员培训、人员培训 实验人员操作的技巧及熟练程度直接影响到检验结实验人员操作的技巧及熟练程度直接影响到检验结实验人员操作的技巧及熟练程度直接影响到检验结实验人员操作的技巧及熟练程度直接影响到检验结果，因此检验人员需经过培训，熟练掌握相关的技果，因此检验人员需经过培训，熟练掌握相关的技果，因此检验人员需经过培训，熟练掌握相关的技果，因此检验人员需经过培训，熟练掌握相关的技术知识和操作要点：术知识和操作要点：术知识和操作要点：术知识和操作要点：检验工程的根本原理检验工程的根本原理检验工程的根本原理检验工程的根本原理 ELISAELISA原理；原
66、理；原理；原理；熟悉检测技巧，了解实验的关键环节及操作要点；熟悉检测技巧，了解实验的关键环节及操作要点；熟悉检测技巧，了解实验的关键环节及操作要点；熟悉检测技巧，了解实验的关键环节及操作要点；熟悉检测试剂性能包括试剂盒组成，包被片段熟悉检测试剂性能包括试剂盒组成，包被片段熟悉检测试剂性能包括试剂盒组成，包被片段熟悉检测试剂性能包括试剂盒组成，包被片段及其组成；及其组成；及其组成；及其组成； 4.1.24.1.2、仪器质控、仪器质控、仪器质控、仪器质控为使仪器保持最正确工作状态应建立维护和校正仪器的标为使仪器保持最正确工作状态应建立维护和校正仪器的标为使仪器保持最正确工作状态应建立维护和校正仪器
67、的标为使仪器保持最正确工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序准操作程序准操作程序准操作程序SOPSOP，所要控制的仪器包括移液器加样枪，所要控制的仪器包括移液器加样枪，所要控制的仪器包括移液器加样枪，所要控制的仪器包括移液器加样枪，水浴箱温箱，洗板机和酶标仪。，水浴箱温箱，洗板机和酶标仪。，水浴箱温箱，洗板机和酶标仪。，水浴箱温箱，洗板机和酶标仪。移液器：移液器：移液器：移液器：ELISAELISA加样量小加样量小加样量小加样量小5-1005-100l l，其准确性直接影，其准确性直接影，其准确性直接影，其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分响实验结果，利用称重
68、法检查：吸取刻度指示量的水，万分响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在2%2%以内；以内；以内；以内；水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中或温水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中或温水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中或温水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中或温箱内实测温度是否一致，允许有箱内实测温度是否一致，允许有箱内实测温度是否一致，允
69、许有箱内实测温度是否一致，允许有11的误差；的误差；的误差；的误差；洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过不超过不超过不超过2ul2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪：经常维护其光学局部，防止滤光片霉变，定期检酶标仪：经常维护其光学局部，防止滤光片霉变，定期检酶标仪：经常
70、维护其光学局部，防止滤光片霉变，定期检酶标仪：经常维护其光学局部，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。测校正，使其保持良好的工作性能。测校正，使其保持良好的工作性能。测校正，使其保持良好的工作性能。 4.1.3、标本采集及处理过程的质控、标本采集及处理过程的质控取样：保证取样有代表性，即要遵循一定的取取样：保证取样有代表性，即要遵循一定的取样方法又要保证一定的取样比例如：随机多样方法又要保证一定的取样比例如：随机多点取样、四分法等点取样、四分法等样品选取过程中需要防止产生交叉污染。如：样品选取过程中需要防止产生交叉污染。如：处理不同批次的样品时应更换使用的工器具或处理不同批次
71、的样品时应更换使用的工器具或对使用的工具进行彻底的清洗。对使用的工具进行彻底的清洗。 4.24.2、分析中质控、分析中质控、分析中质控、分析中质控ELISAELISA实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISAELISA的高灵敏，强特异的优点。的高灵
72、敏，强特异的优点。的高灵敏，强特异的优点。的高灵敏，强特异的优点。因此因此因此因此, ,应建立实验工程的标准操作程序应建立实验工程的标准操作程序应建立实验工程的标准操作程序应建立实验工程的标准操作程序(SOP)(SOP)。 加样加样加样加样加样应用微量移液器加样枪加样应用微量移液器加样枪加样应用微量移液器加样枪加样应用微量移液器加样枪) )按规定的量参加微孔板的底按规定的量参加微孔板的底按规定的量参加微孔板的底按规定的量参加微孔板的底部防止加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加部防止加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加部防止加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加部防止
73、加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加样枪的枪头不要触及微孔的内壁。样枪的枪头不要触及微孔的内壁。样枪的枪头不要触及微孔的内壁。样枪的枪头不要触及微孔的内壁。每次加样应更换吸嘴，做到一样一吸头，以免发生交叉污每次加样应更换吸嘴，做到一样一吸头，以免发生交叉污每次加样应更换吸嘴，做到一样一吸头，以免发生交叉污每次加样应更换吸嘴，做到一样一吸头，以免发生交叉污染。染。染。染。 温育温育温育温育大多数的试剂盒抗原抗体反响需要在室温度下，经过一定大多数的试剂盒抗原抗体反响需要在室温度下，经过一定大多数的试剂盒抗原抗体反响需要在室温度下，经过一定大多数的试剂盒抗原抗体反响需要在室温度下，经过一定
74、的时间才能到达反响的平衡点的时间才能到达反响的平衡点的时间才能到达反响的平衡点的时间才能到达反响的平衡点ELISAELISA边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能使反响液温度迅速到达平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔使反响液温度迅速到达平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔使反响液温度迅速到达平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔使反响液温度迅速到达平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔板上，另一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的板上，另一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的板上，另
75、一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的板上，另一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的1/31/3处，处，处，处，不可将板条叠加放置。不可将板条叠加放置。不可将板条叠加放置。不可将板条叠加放置。 洗涤洗涤ELISAELISA是靠洗涤来到达别离结合与未结合抗原抗体复合物是靠洗涤来到达别离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记物的目的，同时洗涤也可将非特异吸附的蛋白质的及酶标记物的目的，同时洗涤也可将非特异吸附的蛋白质的干扰以及血球、细菌中的酶干扰去除掉。干扰以及血球、细菌中的酶干扰去除掉。手工洗涤一般采用浸泡方法：手工洗涤一般采用浸泡方法：1 1甩去孔内反响液；甩去孔内反响液；22用洗涤液过洗一遍即注
76、满孔后即甩去；用洗涤液过洗一遍即注满孔后即甩去；33微孔重新注满洗液后浸泡微孔重新注满洗液后浸泡2-32-3分钟，间歇摇动；分钟，间歇摇动；44甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。重复以上操作至少重复以上操作至少5 5次。注意各种试剂盒的洗涤液尽量次。注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用。不要混用。洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底，将孔内液体全部吸干，液和吸液纤孔都能一致地插入孔底，将孔内液体全部吸干，同时要设置一定的浸泡时间。如出现机洗后拍板有较多残留同时要设置一定的浸泡时
77、间。如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗液时应再用手工洗2 2次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道，防次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道，防止堵孔。止堵孔。 显色显色 HRPHRP催化底物是一步呈色反响，同样需要一定的时间和温度，催化底物是一步呈色反响，同样需要一定的时间和温度，一定要按照说明书规定的时间温度一般为室温一定要按照说明书规定的时间温度一般为室温CC，15-2015-20分分钟。到达规定的反响时间后需要立即终止。钟。到达规定的反响时间后需要立即终止。 酶标仪判读结果酶标仪判读结果显色反响终止后应立刻比色一般在显色反响终止后应立刻比色一般在3030分钟内有效。分钟内有效。常见的显色系
78、统有常见的显色系统有OPDOPD和和TMBTMB二种，以后者最为常见，二种，以后者最为常见，而而TMBTMB酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。TMBTMB终止后显黄色，测定波长为终止后显黄色，测定波长为450nm450nm， 参比波长为参比波长为630nm630nm。使用双波长的优点可以消除反响板条上的划痕手印的干使用双波长的优点可以消除反响板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反响孔底部应用纸吸干后才能置酶标仪中比扰。同时要注意反响孔底部应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否那么吸光度易出现负值或损坏滤光片。色，否那么吸光度易出现负值或损坏滤光片。 返回
79、返回4.3、几种常用的质控方法4.3.1、灰区概念、灰区概念把定量分析的正常值范围引入定性分析建立把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将灰区概念，即将CO值上下的一段区域定为阳值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内那么报告阳性，如仍落在灰区范围内那么报告+阳性阳性。灰区的设置方法为：灰区的设置方法为：C.O1CVCV为该试剂的批内为该试剂的批内CV(一般为一般为510%； 4.3.24.3.2、外添加回收率试验方法、外添加回收率试验方法、外添加回收率试验方法、外添加回收率试验方法 A A、什么
80、是外添加回收率、什么是外添加回收率、什么是外添加回收率、什么是外添加回收率 外添加回收率是指向阴性样中参加一定浓度的标准溶液，使外添加回收率是指向阴性样中参加一定浓度的标准溶液，使外添加回收率是指向阴性样中参加一定浓度的标准溶液，使外添加回收率是指向阴性样中参加一定浓度的标准溶液，使之到达某一确定浓度称为加标样，然后将其与该阴性样之到达某一确定浓度称为加标样，然后将其与该阴性样之到达某一确定浓度称为加标样，然后将其与该阴性样之到达某一确定浓度称为加标样，然后将其与该阴性样同时测定，进行对照试验，以观察参加的标准品的量能否认同时测定，进行对照试验，以观察参加的标准品的量能否认同时测定，进行对照试
81、验，以观察参加的标准品的量能否认同时测定，进行对照试验，以观察参加的标准品的量能否认量回收，以回收率表示。量回收，以回收率表示。量回收，以回收率表示。量回收，以回收率表示。 B B、如何添加标准品、如何添加标准品、如何添加标准品、如何添加标准品 原那么上我们建议使用较高浓度的标准溶液进行外添加，下原那么上我们建议使用较高浓度的标准溶液进行外添加，下原那么上我们建议使用较高浓度的标准溶液进行外添加，下原那么上我们建议使用较高浓度的标准溶液进行外添加，下面以我公司的试剂盒为例进行说明：假设使用面以我公司的试剂盒为例进行说明：假设使用面以我公司的试剂盒为例进行说明：假设使用面以我公司的试剂盒为例进行
82、说明：假设使用4.05ppb4.05ppb标准标准标准标准品进行添加，一般鱼肉的检测下限为品进行添加，一般鱼肉的检测下限为品进行添加，一般鱼肉的检测下限为品进行添加，一般鱼肉的检测下限为0.1ppb0.1ppb，建议将鱼肉添，建议将鱼肉添，建议将鱼肉添，建议将鱼肉添加到加到加到加到0.1ppb0.1ppb作为回收样品进行检测。所以假设需要添加作为回收样品进行检测。所以假设需要添加作为回收样品进行检测。所以假设需要添加作为回收样品进行检测。所以假设需要添加XmlXml4.05ppb4.05ppb的标准品于的标准品于的标准品于的标准品于1 1克鱼肉中，得到克鱼肉中，得到克鱼肉中，得到克鱼肉中，得到
83、0.1ppb0.1ppb的鱼肉样本。按的鱼肉样本。按的鱼肉样本。按的鱼肉样本。按公式公式公式公式(1)(1)计算计算计算计算X X值值值值 1+X1+X0.1=4.05X(1)0.1=4.05X(1) 那么那么那么那么X X即为所添加的即为所添加的即为所添加的即为所添加的4.05PPb4.05PPb标准溶液的体积。标准溶液的体积。标准溶液的体积。标准溶液的体积。C C、如何计算回收率、如何计算回收率添加前的阴性鱼肉设为样品添加前的阴性鱼肉设为样品A A，添加后的鱼肉设为样，添加后的鱼肉设为样品品B B，将，将A A和和B B同时进行检测，其检测结果分别为同时进行检测，其检测结果分别为CACA、
84、CBCB，按公式，按公式(2)(2)进行计算回收率进行计算回收率回收率回收率= =CBCACBCA/0.1100%(2)/0.1100%(2)D D、外添加回收率的意义。、外添加回收率的意义。外添加回收率的意义在于，通过外添加一定浓度的外添加回收率的意义在于，通过外添加一定浓度的标准品，从而验证试验方法的稳定性和有效性。标准品，从而验证试验方法的稳定性和有效性。 4.3.34.3.3、用确证样品质控、用确证样品质控、用确证样品质控、用确证样品质控 选取与被测样本性质接近的经过确证的样本为质控样本，在选取与被测样本性质接近的经过确证的样本为质控样本，在选取与被测样本性质接近的经过确证的样本为质控
85、样本，在选取与被测样本性质接近的经过确证的样本为质控样本，在每次进行检测时将该样本同时进行检测，通过判断该样品检每次进行检测时将该样本同时进行检测，通过判断该样品检每次进行检测时将该样本同时进行检测，通过判断该样品检每次进行检测时将该样本同时进行检测，通过判断该样品检出值与确证值之间的变异度来判断检验结果的有效性。出值与确证值之间的变异度来判断检验结果的有效性。出值与确证值之间的变异度来判断检验结果的有效性。出值与确证值之间的变异度来判断检验结果的有效性。 4.3.44.3.4、室间质评的方法、室间质评的方法、室间质评的方法、室间质评的方法 ：发质控物进行调查：发质控物进行调查：发质控物进行调
86、查：发质控物进行调查 这是国内外室间质评的常用形式。有关管理部门或相关的行这是国内外室间质评的常用形式。有关管理部门或相关的行这是国内外室间质评的常用形式。有关管理部门或相关的行这是国内外室间质评的常用形式。有关管理部门或相关的行业检验协会采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规业检验协会采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规业检验协会采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规业检验协会采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将检验结果报至部管理中心。由管理定的日期进行检验，并将检验结果报至部管理中心。由管理定的日期进行检验，并将检验结果报至部管理中心。由管理定的日
87、期进行检验，并将检验结果报至部管理中心。由管理中心进行统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，中心进行统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，中心进行统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，中心进行统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不断提高检验质量。断提高检验质量。断提高检验质量。断提高检验质量。 返回返回返回返回 5、胶体金试纸简介：5.15.1、免疫层析法简介：、免
88、疫层析法简介：、免疫层析法简介：、免疫层析法简介：免疫层析法免疫层析法免疫层析法免疫层析法(Immunochromatography)(Immunochromatography)是九十年代是九十年代是九十年代是九十年代兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维膜的某一其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维膜的某一其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维膜的某一其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当该枯燥的硝酸纤维素膜一
89、端浸入样品区带，当该枯燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品区带，当该枯燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品区带，当该枯燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品( (尿液尿液尿液尿液) )后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，假设用免疫胶体金可即与该抗体发生特异性结合，假设用免疫胶体金可即
90、与该抗体发生特异性结合，假设用免疫胶体金可即与该抗体发生特异性结合，假设用免疫胶体金可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。诊断。诊断。诊断。 5.25.2、免疫层析法的特点：、免疫层析法的特点：、免疫层析法的特点：、免疫层析法的特点： 快速：全部检测过程仅需快速：全部检测过程仅需快速：全部检测过程仅需快速：全部检测过程仅需5-205-20分钟。分钟。分钟。分钟。简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简
91、单，可随时简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时随地进行。随地进行。随地进行。随地进行。可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可立刻拿到结果，不可立刻拿到结果，不可立刻拿到结果，不可立刻拿到结果，不必等待。必等待。必等待。必等待。稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。检
92、测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，因而适合各种人群的检查。因而适合各种人群的检查。因而适合各种人群的检查。因而适合各种人群的检查。 5.35.3、胶体金简介：、胶体金简介：、胶体金简介：、胶体金简介： 胶体金是金的水溶胶；胶体金法是指以胶体金为显色标记物。胶体金是金的水溶胶；胶体金法是指以胶体金为显色标记物。胶体金是金的水溶胶；胶体金法是指以胶体金为显色标记物。胶体金是金的水溶胶；胶体金法是指以胶体金为显色标记物。它的优点是操作简单
93、，只需参加样品一个步骤，反响迅速，它的优点是操作简单，只需参加样品一个步骤，反响迅速，它的优点是操作简单，只需参加样品一个步骤，反响迅速，它的优点是操作简单，只需参加样品一个步骤，反响迅速，仅需几分钟，不需其他仪器设备，也不需要专业临检人员操仅需几分钟，不需其他仪器设备，也不需要专业临检人员操仅需几分钟，不需其他仪器设备，也不需要专业临检人员操仅需几分钟，不需其他仪器设备，也不需要专业临检人员操作，而且携带方便，基层可以开展。作，而且携带方便，基层可以开展。作，而且携带方便，基层可以开展。作，而且携带方便，基层可以开展。 免疫层析快速免疫层析快速检测试纸结构及检测试纸结构及原理原理如下图：将样
94、本加到如下图：将样本加到S S区后，由于层析作用样本会进入区后，由于层析作用样本会进入B B区和区和B B区的金标抗体发生免疫反响，再层析到区的金标抗体发生免疫反响，再层析到T T线位置时，线位置时， 如果样本如果样本中含有待测抗原那么在中含有待测抗原那么在B B区时将同金标抗体结合，金标抗体上的位点将被其占据，再到区时将同金标抗体结合，金标抗体上的位点将被其占据，再到T T位置时就无空余的位置时就无空余的位点和测试线上的抗原结合，故位点和测试线上的抗原结合，故T T线不显色或显色很淡，线不显色或显色很淡，C C线显色，这样得到的是阳性结果。当待测样本中不含抗线显色，这样得到的是阳性结果。当待
95、测样本中不含抗原时，样本与金标抗体不反响，再层析到原时，样本与金标抗体不反响，再层析到T T线位置时，固定在线位置时，固定在NCNC膜上的抗原会膜上的抗原会“捕捉捕捉 金标抗体复合物，故金标抗体复合物，故T T线显色，线显色，C C线也线也显色，得到阴性结果。当无显色，得到阴性结果。当无T T线时，表示测试效。线时，表示测试效。SBTCD免疫层析快速检测试纸结构及原理免疫层析快速检测试纸结构及原理如下图：将样本加到如下图：将样本加到S区后，由于层析作用样区后，由于层析作用样本会进入本会进入B区和区和B区的金标抗体发生免疫反响，区的金标抗体发生免疫反响，再层析到再层析到T线位置时，线位置时，如果
96、样本中含有待测如果样本中含有待测抗原那么在抗原那么在B区时将同金标抗体结合，金标抗区时将同金标抗体结合，金标抗体上的位点将被其占据，再到体上的位点将被其占据，再到T位置时就无空位置时就无空余的余的位点和测试线上的抗原结合，故位点和测试线上的抗原结合，故T线不显色或线不显色或显色很淡，显色很淡，C线显色，这样得到的是阳性结果。线显色，这样得到的是阳性结果。当待测样本中不含抗当待测样本中不含抗原时，样本与金标抗体不反响，再层析到原时，样本与金标抗体不反响，再层析到T线线位置时，固定在位置时，固定在NC膜上的抗原会膜上的抗原会“捕捉捕捉金金标抗体复合物，故标抗体复合物，故T线显色，线显色，C线也显色
97、，得线也显色，得到阴性结果。当无到阴性结果。当无T线时，表示测试效。线时，表示测试效。返回返回联系方式：联系方式：联系人：赵瑞琦电 话：0411-84754218 VybYAd#Dg%Gi*Il-Lo0Nq3Qt5Sv8VybXAd#Dg%Fi*Il-s5Sv8VxaXAd#Cf$Fi*Ik)Kn0Nq2Ps5Sv7UxaXAdZCf$Fi*Hk)Kn0Mp2Ps5Su7UxaXAcZCf$Fh&Hk)Kn+Mp2Ps5Ru7UxaXzcZCf$Eh&Hk)Km+Mp2Ps4Ru7Ux9WzcZCf!Eh&Hk)Jm+Mp2Or4Ru7Uw9WzcZCe!Eh&Hj(Jm+Mp1Or4Ru7T
98、w9WzcYBe!Eh&Gj(Jm+Mo1Or4Ru6Tw92Ps4Ru7UxaWzcZCf$Eh&Hk)Jm+Mp2Pr4Ru7Ux9WzcZCe!Eh&Hk(Jm+Mp2Or4Ru7Tw9WzcZBe!Eh&Hj(Jm+Mp1Or4Ru6Tw9WzcYBe!Eh&Gj(Jm+Lo1Or4Rt6Tw9WzbYBe!Eg%Gj(Jm-Lo1Or4Qt6Tw9VybYBe!Dg%Gj(Jl-Lo1Or3Qt6Tw8Vg%Gi*Il-Lo0Nq3Qt6Sv8VybXAd#Dg%Fi*Il-Ln0Nq3Qt5Sv8VyaXAd#Dg$Fi*Il-Kn0Nq3Ps5Sv8VxaXAd#Df$Fi*Ik
99、)Kn0Nq2Ps5Sv8UxaXAdZCf$Fi*Hk)Kn0Np2Ps5Su7UxaXAcZCf$Fi&Hk)Kn0Mp2Ps5Ru7UxaXzcZCf$Fh&Hk)#Df$Fi*Il)Kn0Nq3Ps5Sv8UxaXAd#Cf$Fi*Ik)Kn0Np2Ps5Sv7UxaXAdZCf$Fi*Hk)Kn0Mp2Ps5Su7UxaXAcZCf$Fh&Hk)Kn+Mp2Ps5Ru7UxaWzcZCf$Eh&Hk)Km+Mp2Pr4Ru7Ux9WzcZCf!Eh&Hk)Jm+Mp2Or4Ru7Uw9WzcZCe!E+Mo1Or4Rt6Tw9WzbYBe!Eh%Gj(Jm+Lo1Or4Qt6Tw9W
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