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1、原位杂交实验方法Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望mRNA 原位杂交前实验准备w1,无RNA酶水的处理w2,无RNA酶载玻片的处理w3,标本的防RNA酶的固定w4,探针的稀释和保存w5,DNA探针需变性2原位杂交溶液的配制w1,预杂交液和杂交液的配制w2,20Xssc, 2Xssc, 0.2Xssc缓冲液的配制w3,0.1mol PBS缓冲液的配制w4,0.1mol 枸橼酸缓冲液的配制w5,0.1mol TBS缓冲液的配制w6,复合消化液的配制w7,组织细胞打孔液的配制
2、w8,杂交漂洗液w9,过氧化氢封闭液3探针设计方案w1,探针名称 :w2,适用种属:w3,标记方式:3DIG 5FAMw4,模板序列:w5,探针序列:4探针杂交原理w1,组织细胞的通透w2,探针长度w3 , 探针浓度和杂交时间w4,杂交中的Tm值和杂交温度w5,杂交严格度 w6,预杂交原理w7,杂交后处理 5A-石蜡切片mRNA原位杂交步骤w一,过氧化物酶显色系统w二,碱性磷酸酶显色系统w三,荧光显色方法6B-冰冻切片mRNA原位杂交步骤w一,过氧化物酶显色系统w二,碱性磷酸酶显色系统w三,荧光显色方法7C-细胞爬片或涂片mRNA原位杂交步骤w一,过氧化物酶显色系统w二,碱性磷酸酶显色系统w三,荧光显色方法8附录w1,DAB的配制和使用方法w2 NBT/BCIP的配制和使用方法w3,苏木素的配制和使用方法w4,核固红的配制和使用方法9流式细胞仪wD-悬浮细胞的mRNA原位杂交细胞流式细胞仪步骤10