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1、实验须知和分光光度计的使用实验须知和分光光度计的使用生化与分子生物学教研室生化与分子生物学教研室一、学生实验守则一、学生实验守则实验前应认真预习，明确实验目的、步骤，回答老 师的提问。 进入实验室必须保持安静，不准高声谈笑，注意 环境卫生，不准吸烟，不随地吐痰，不乱抛纸屑 杂物，爱护公物。实验时应严肃认真，专心细致，要准确记录实验 数据，严格遵守操作规程，节约水电和试剂，注 意安全，爱护实验仪器设备，如发生事故时，应 迅速停止实验，设法制止事态的扩大，并立即向 指导老师报告。 使用精密、贵重仪器，应先了解性能和操作方法， 未经老师同意，不得任意操作，违者按有关规定处 理。 实验中不准动用与本实
2、验无关及他人使用的仪器 设备、材料和元件。如损坏丢失仪器、配件、工 具等，均应查清原因，及时上报，按已定的赔偿 办法办理；如隐瞒事故不报者，从重处理。 实验后要认真填写好实验报告(包括认真分析实 验结果、精确处理数据、图表)，如不符合要求 的实验报告，应退给学生重做。 实验完毕，由指导教师负责检查清点实验用的仪 器、工具。学生应办好交接手续，做好清洁卫生， 及时切断电源、关好水龙头，经指导教师同意后方可离开实验室。 本守则由指导教师和参加实验的人员共同监督， 严格执行。二、实验课平时成绩评分标准二、实验课平时成绩评分标准实验课占期末总评的20%，其中操作考试和平时成绩各占10%。 平时成绩的得
3、分包括以下六项：实验态度、实验纪律、实验操作、仪器爱护、实验报告及实验后清洗。 旷课者当次无实验成绩及得分。 请假一次扣除40分，二次及以上者每次扣70分，直至平时成绩扣完为止。 迟到或早退一次者扣除10分，二次及以上者每次扣除15分，直至平时成绩扣完为止。 将实验物品带离实验室者，除处以适当罚款外，扣除20分。 实验报告不按时完成者，扣除10分。每次实验课后由带教老师评出该次平时成绩。三、酸、碱及苯酚的急救处理三、酸、碱及苯酚的急救处理（一）酸 强酸如硫酸、硝酸、盐酸、王水（是硝酸与盐酸的混合物）等（其中硫酸作用最强，盐酸居末），对皮肤、粘膜的刺激和腐蚀作用极强。 皮肤损伤可用大量清水冲洗，
4、或用4碳酸氢钠溶液冲洗，再以生理盐水冼净，并按灼伤治疗。 若吸收了强酸立即选服2.5氧化镁溶液或镁乳（75氢氧化镁混悬液）、石灰水的上清液（含0.17氢氧化钙）、极稀的肥皂水、氢氧化铝凝胶、生蛋清、牛奶等。忌用碳酸氢钠及碳酸钠（因可产生大量气体导致胃穿孔）。 （二）碱 强碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、次氯酸钠、氧化钠、氧化钾以及腐蚀作用较弱的碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钙、氧化钙、氢氧化铵等，具有腐蚀性。 皮肤损伤可用大量清水冲洗。 若误吸收了强碱立即内服弱酸溶液如食用醋 （三）苯酚 不慎粘在皮肤上，以10%4O%乙醇或聚乙二醇擦洗受染皮肤，再用清水冲洗至无苯酚味为止。也可用甘油、植物油擦洗皮肤，肥皂水
5、、温水洗涤，灼伤部用饱和硫酸钠溶液或5碳酸氢钠湿敷。四、生化四大技术的介绍四、生化四大技术的介绍分光光度法分光光度法电泳技术电泳技术层析技术层析技术 离心技术离心技术五、分光光度计原理五、分光光度计原理LII0TI/I0 透光率透光率A：吸光度、消光度、光密度吸光度、消光度、光密度n n任何物质对光线都有吸收，而且每种物质任何物质对光线都有吸收，而且每种物质都有其特有的吸收光谱。都有其特有的吸收光谱。 相同物质在同一相同物质在同一条件下，其吸收光谱的强度吸光度条件下，其吸收光谱的强度吸光度 （A absorb ）与该物质的含量成正比例关系。）与该物质的含量成正比例关系。因此把根据物质吸收光谱的
6、特性进行定性因此把根据物质吸收光谱的特性进行定性或定量分析的方法称为吸收光谱法或分光或定量分析的方法称为吸收光谱法或分光光度法。光度法。n n朗伯比尔（朗伯比尔（朗伯比尔（朗伯比尔（Lambert-BeerLambert-Beer）定律：）定律：）定律：）定律：n nA A-logI/I-logI/I0 0=-=-logTlogT=KCL=KCL A A：光密度，吸光度，消光度。：光密度，吸光度，消光度。：光密度，吸光度，消光度。：光密度，吸光度，消光度。I I：透过光强度。：透过光强度。：透过光强度。：透过光强度。 I I0 0：入射光强度。：入射光强度。：入射光强度。：入射光强度。 T T
7、：透光度：透光度：透光度：透光度KK：消光系数。：消光系数。：消光系数。：消光系数。 C C：溶液浓度。：溶液浓度。：溶液浓度。：溶液浓度。 L L：溶液厚度。：溶液厚度。：溶液厚度。：溶液厚度。吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比LII0标准液：已知的待测物质浓度。标准液：已知的待测物质浓度。A=KLCA标标/A测测=KLC标标/KLC测测C测测=C标标A/A标标空白液空白液溶剂空白液：溶剂空白液： 欲测物有色其他无色欲测物有色其他无色 。试剂空白液：试剂空白液
8、： 试剂不加样品。试剂不加样品。样品空白液：样品空白液： 不加显色剂。不加显色剂。平行操作空白液：无欲测物。平行操作空白液：无欲测物。不显色空白液：不显色空白液： 控制操作不发生显色反应控制操作不发生显色反应褪色空白液：褪色空白液： 加褪色剂。加褪色剂。光源光源单色器单色器狭缝狭缝比色杯比色杯检测系统检测系统分光光度计构造分光光度计构造-型分光光度计使用步型分光光度计使用步骤骤n n2.调到指定波长调到指定波长n n4.放入黑体对光，调，拿出黑体放入黑体对光，调，拿出黑体n n5.将空白液、标准液、待测液按顺序放入比将空白液、标准液、待测液按顺序放入比色杯架，空白液置于光路中。色杯架，空白液置
9、于光路中。n n6.T=100% ；A=0n n7.按至，关盖，拉动比色槽，进按至，关盖，拉动比色槽，进行记录行记录n n8.取出比色杯，清洗取出比色杯，清洗n n9.调至，比色槽归位调至，比色槽归位分光光度计使用注意事项分光光度计使用注意事项1.分光光度计属精密仪器，应精心爱护使用。防分光光度计属精密仪器，应精心爱护使用。防分光光度计属精密仪器，应精心爱护使用。防分光光度计属精密仪器，应精心爱护使用。防震、防潮、防腐蚀。震、防潮、防腐蚀。震、防潮、防腐蚀。震、防潮、防腐蚀。2.比色杯里的液体要在比色杯里的液体要在比色杯里的液体要在比色杯里的液体要在2/32/33/43/4之间，不易过多。之间
10、，不易过多。之间，不易过多。之间，不易过多。放在比色箱里之前要放在比色箱里之前要放在比色箱里之前要放在比色箱里之前要擦干擦干擦干擦干表面液体，以防表面液体，以防表面液体，以防表面液体，以防腐蚀腐蚀腐蚀腐蚀仪器。仪器。仪器。仪器。3.不可用手、滤纸、毛刷等物擦拭比色杯的光滑不可用手、滤纸、毛刷等物擦拭比色杯的光滑不可用手、滤纸、毛刷等物擦拭比色杯的光滑不可用手、滤纸、毛刷等物擦拭比色杯的光滑面，用手拿时只能拿其面，用手拿时只能拿其面，用手拿时只能拿其面，用手拿时只能拿其磨砂面磨砂面磨砂面磨砂面。4.比色杯比色杯比色杯比色杯不要放置不要放置不要放置不要放置在仪器面上，以免液体腐蚀仪在仪器面上，以免液体腐蚀仪在仪器面上，以免液体腐蚀仪在仪器面上，以免液体腐蚀仪器表面。器表面。器表面。器表面。5.比色杯的清洗。比色杯的清洗。比色杯的清洗。比色杯的清洗。六、用分光光度法测定硫酸铜的浓度六、用分光光度法测定硫酸铜的浓度n n硫酸铜标准液：硫酸铜标准液：4%n n硫酸铜吸收峰：硫酸铜吸收峰：650nm
