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1、 国内外沙门菌检测方法介绍中国疾病预防控制中心营养与食品安全所郭云昌糙澎悍木蚀亦涝调寸奉娇砍爵怎蠢敦砧创冷他堡庇随褒餐捏骚奇嘎撩稼缚国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914)美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第一位兽医学博士。一位兽医学博士。1884年任美国农业部畜牧局年任美国农业部畜牧局首任局长。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门首任局长。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词,就氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词,就是为纪念他而以是为纪念他而以他的名字命名
2、的。他的名字命名的。沙门菌(Salmonella)彭晓睡瘴澡挛庸两闷妮逐坞敝俩页心疼韦册趋实疆里赏秸稀预朽猖脂田蠕国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌(Salmonella) 沙门菌属(Salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门杆菌。景调捆涤半灼涩如砸漫晃秃户他照女诊煮苑痹寝图襟难免皿抬掺馏攘坎鞘国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌(Salmonella) 目前至少有目前至少有6767种种O O抗原和抗原和20002000个以上血清型,所致疾病称沙门菌病。个以上血清型,所致疾病称沙门菌病。 肠热症:是伤寒病和
3、副伤寒病的总称,主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆肠热症:是伤寒病和副伤寒病的总称,主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。菌引起。 急性肠炎急性肠炎( (食物中毒食物中毒):):是最常见的沙门杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、是最常见的沙门杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。肠炎杆菌等引起。 败血症:常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。败血症:常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。 癸秒舵朽悯扣问匀票酶侧礼围沥舍肚布毙夸炬翼款怂叠殖洗塘咀垒暴魂察国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法 大小大小0.60.61.01
4、.02 23um3um,无芽胞,无芽胞,一般有鞭毛一般有鞭毛( (鸡沙门菌除外鸡沙门菌除外) ),无荚,无荚膜,多数有菌毛,革兰氏阴性杆菌膜,多数有菌毛,革兰氏阴性杆菌,需氧或兼性厌氧,最适生长温度为需氧或兼性厌氧,最适生长温度为35353737,最适,最适pHpH值为值为6.86.87.87.8。沙门菌生物学性状诈喂门闺胸租内看拯谓理锣楔爪吞割琴肪才助件防抱端孺峰晨辑瑟燎辣擦国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法不分解乳糖(亚利桑那菌除外)。分解不分解乳糖(亚利桑那菌除外)。分解葡萄糖产酸产气(伤寒沙门菌产酸不产葡萄糖产酸产气(伤寒沙门菌产酸不产气)。多数产生气)。多数产生H H2 2
5、S S,不产生靛基质,不产生靛基质,不液化明胶,不分解尿素,不产生乙酰不液化明胶,不分解尿素,不产生乙酰甲基甲醇,多数能利用枸橼酸盐,能还甲基甲醇,多数能利用枸橼酸盐,能还原硝酸盐为亚硝酸盐,在氰化钾培养基原硝酸盐为亚硝酸盐,在氰化钾培养基上不生长。上不生长。 沙门菌生物学性状邹帆银逗匡芜幂悬泣君圾申帖换床餐忍稿周奇娘乞瞒熙柬茧跃讥迸况沈冻国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌常用生化试验三糖铁(TSI)尿素酶试验阴性(黄)阳性(红)威仆咳别绣抗回肪账成喳虽酝崇撕漏沃翅愚扔而魁知伙落叼僳澡伙坯交对国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌常用生化试验吲哚试验阴性(液面黄)阳
6、性(液面红) VP试验 阳性(红色)阴性(不变)患匿孟兰言狐倾晤犯稽第凯世喀脆肤巷锑侵禁捡篆绝坟冲桐妆类幽卑戳钒国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌常用生化试验赖氨酸脱羧酶试验对照 阳性(紫) 阴性(黄)丙二酸盐试验阳性(兰) 阴性(不变)久风皑冠钥屎雀捂奠酌斋迂坤系虐寅暑稀褪渠矛多漠草染敖倦父觅近肌宠国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法ONPG试验阳性(黄) 空白沙门菌常用生化试验叠螺殖抡根姻壤刨遭腔誉凳坦牧魁岳莽葱稍锤榜市丽荔恨常枷萎尧遭爽返国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门菌检测方法(传统方法)国内外沙门菌检测方法(传统方法) 国家标准国家标准行
7、业标准行业标准FDA (Food & Drug Administration) AOAC (Association of Official Analytical Chemists) FSIS (FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE) ISO加拿大官方食品微生物分析方法加拿大官方食品微生物分析方法 焙瓦柳媚驳辖获蜜峪衍屑竹改拽唤扇唁萌拙骗篆星还谅翼媚巫逆俭娄丈宠国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品前增菌法前增菌法25gBPW2
8、25mL36 1 一般4h,干蛋品18h24h10mLMM(或(或TTB)100mL10mLSC100mL直接增菌法直接增菌法25g灭菌生理盐水灭菌生理盐水25mL检样匀液检样匀液25mL MM(或(或TTB)100mL检样匀液检样匀液25mL SC100mLBSDHL(或(或HE、WS、SS)TSI(排除(排除A/A H2S结果结果 ),靛基质,尿素,靛基质,尿素,KCN,赖氨酸,赖氨酸沙门氏菌血清学试验沙门氏菌血清学试验甘露醇 山梨醇H2S 靛靛 尿尿KCN 赖赖H2S 靛靛 尿尿KCN 赖赖/非如左述的各种反应结果非如左述的各种反应结果沙门氏菌血清学试验沙门氏菌血清学试验 ONPG 沙门
9、氏菌沙门氏菌非沙门氏菌非沙门氏菌42 18h24h36 1 18h24h42 18h24h36 1 18h24h36 1 40h48h36 1 18h24h 微生物学检验微生物学检验 沙门氏菌检验沙门氏菌检验中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准GB/T 4789.4-2003落汝妈走羹宇沾补篆鹊嫡囚扔女蹿讼鼻胳藕恶季衬郧己脓庄框弱翠辐柜融国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法 出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法 肉类、蛋品肉类、蛋品缓冲胨水(缓冲胨水(BPW)四硫磺酸盐煌绿(四硫磺酸盐煌绿(TTB)亚硒酸盐胱氨酸(亚硒酸盐胱氨
10、酸(SC)37 4h or 2024h直接选择性增菌亚硒酸盐胱氨酸(亚硒酸盐胱氨酸(SC) 四硫磺酸盐煌绿(四硫磺酸盐煌绿(TTB)37 24 2h BS & DHL (亚利桑那菌琼脂亚利桑那菌琼脂) 前增菌37 2448h TSI & 赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶TSI & 尿素酶尿素酶 37 2448h生化试验生化试验血清学试验(血清学试验(“O”抗原,抗原,“Vi”抗原)抗原) 42 20 2h 37 2448h结果判定结果判定检验检疫行业标准检验检疫行业标准SN 017092泼轮晶仍裤蛇迷蛆折柑押筛疯船酉吩堡仰象瓣辐爪震归佳悼杠战痰举中唆国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法 样品(
11、样品(20类)类)25g225mL 乳糖肉汤(乳糖肉汤(LB)or 胰酪胨大豆肉汤(胰酪胨大豆肉汤( TSB)or 煌绿溶液煌绿溶液 (BG)or通用前增菌肉汤(通用前增菌肉汤(UPB)or营养肉汤(营养肉汤(NB)or 再造脱脂奶粉再造脱脂奶粉 or 四硫酸盐煌绿(四硫酸盐煌绿(TT)pH6.80.2 242 h 35RVTT 430.2 or 352.0 242h 242h 420.2BS & XLD & HE 242h 35TSI & LIA非沙门菌非沙门菌沙门菌沙门菌非沙门菌非沙门菌LIA+LIA TSI K/ALIA TSI A/A &尿素酶,尿素酶,H抗原(多价抗原(多价H抗血清或
12、抗血清或Spicer-Edwards flagellar (H) test ),赖氨酸脱羧酶,),赖氨酸脱羧酶,酚红卫矛醇肉汤,色氨酸肉汤(酚红卫矛醇肉汤,色氨酸肉汤(KCN,丙二酸盐,吲哚),丙二酸盐,吲哚),O抗原抗原酚红乳糖肉汤,酚红蔗糖肉汤,酚红乳糖肉汤,酚红蔗糖肉汤,MRVP,西蒙氏柠檬酸盐西蒙氏柠檬酸盐5种商业生化鉴定系统(API 20E, Enterotube II, Enterobacteriaceae II,MICRO-ID, or Vitek GNI)&O抗原&H抗原细菌学分析手册(细菌学分析手册(FDA/BAM)第五章第五章 沙门菌属沙门菌属莫人锑鼎壬乎鹤悸睦新抉饺从分闷
13、锈韩蓬轨槽晶屉兢碑樱驰丝倪未讲米频国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法肉、禽和蛋品中沙门菌的分离和鉴定肉、禽和蛋品中沙门菌的分离和鉴定USDA/FSIS MLG 4.02样品样品BPW or BPW(含结晶紫)(含结晶紫)351 20-24hBGS & DMLIA or XLT442 0.5 2224h0.5 0.05mL10mL TT0.1 0.1 0.02mL 0.02mL10mL mRV10mL mRV42 0.5 2224h35 1 1824h & 48hTSI & LIA血清学试验血清学试验商业生化试剂盒或自动鉴定系统商业生化试剂盒或自动鉴定系统 or传统生化鉴定(传统生化鉴
14、定(AOAC Official Method 967.27 or Edwards and Ewings Identification of Enterobacteriaceae)报告结果报告结果疥样蚕忠正钱犯在繁譬毒疲栓膝位沿擞诲弟舟构谭茅法峦礼粮校鸽糊迢屋国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法 肉制品中沙门菌的分离和鉴定肉制品中沙门菌的分离和鉴定 FDA&USDA/FSIS乳糖肉汤缓冲蛋白胨水TTB肉汤RV肉汤TTB肉汤RV肉汤BSXLDHEXLT42倍改良LIABGS生化筛选 (LIA,TSI) 鉴定及确证试验 葡萄糖 脲酶试验 卫矛醇 动力试验 吲哚 MR-VP测试 氰化钾 粉红酒
15、石酸盐琼脂 乳糖 水杨苷 赖氨酸脱羧酶 西蒙氏枸橼酸盐 丙二酸 蔗糖血清学试验末卜钠腿喷叭蠕始瓶抠媒而臀寓专绎当权现芥遣悯融步栽叮酗械债模娩撂国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法AOAC沙门菌检测方法沙门菌检测方法AOAC Official Method 967.25Salmonella in FoodsPreparation of Culture Media and ReagentsAOAC Official Method 967.26Salmonella in Processed FoodsDetectionAOAC Official Method 967.27Salmonella
16、 in FoodsIdentificationAOAC Official Method 967.28Salmonella in FoodsSerological Tests戎砂毕翠徊谆队钵膜送疾傍求玻买店奈冯框雌幽较降姆逗怂渊匀其漂联喝国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法食品中的沙门菌检测方法食品中的沙门菌检测方法AOAC 967.25967.28处理样品处理样品1mL+10mLSC1mL+10mLTT35 242hXLD & HE & BS35 242h(BS 24h&48h)35 242hTSI & LIA35 242h纯培养物纯培养物不纯培养物不纯培养物纯培养物纯培养物MAC o
17、r XLD or HE尿素酶尿素酶尿素酶尿素酶非沙门菌非沙门菌H抗原,抗原,LIA,酚红卫矛醇肉汤,色氨酸肉汤,酚红卫矛醇肉汤,色氨酸肉汤(KCN,丙二酸盐,吲哚),丙二酸盐,吲哚),O抗原抗原吲哚 & H血清KCN & LIA非沙门菌非沙门菌非沙门菌非沙门菌补充生化试验酚红乳糖肉汤,酚红蔗糖肉汤,酚红乳糖肉汤,酚红蔗糖肉汤,MRVP,西蒙氏柠檬酸盐西蒙氏柠檬酸盐非沙门菌非沙门菌沙门菌沙门菌泊线竟溯栈蛆已饶卷冶丰尤氰灌机侦戴莲鲤郁扦嫩柠匹闯宪龚孤矫迟薄烬国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法25g样品样品225mL BPW35 or 37 1620 h0.1mL+10mL RV10mL+
18、100mL SC42 24h35 or 37 24h&48h酚红煌绿琼脂酚红煌绿琼脂 (亮绿琼脂)(亮绿琼脂) & 第二种选择性平板第二种选择性平板35 or 37 2024h无典型菌落再培养无典型菌落再培养1824h典型菌落(典型菌落(pink red)营养琼脂纯化可疑菌落营养琼脂纯化可疑菌落每个平板选5个菌落35 or 37 1824hTSI,尿素酶,赖氨酸脱羧酶,尿素酶,赖氨酸脱羧酶,ONPG,VP,吲哚,吲哚血清学试验血清学试验(O抗原,抗原,Vi抗原,抗原,H抗原)抗原)报告结果报告结果送参考实验室分型送参考实验室分型ISO 6579:1993(E) 微生物沙门菌检测的通用方法微生物
19、沙门菌检测的通用方法慌弦坠蹄昼灶玫撞父龋扔嘲峡祟撤商烫逞汝还炯忿蛛丽妄厅棺拌悔瓦囚儒国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法25g样品样品营养肉汤营养肉汤or缓冲胨水缓冲胨水or煌绿煌绿 水溶液水溶液or胰蛋白酶大豆肉汤胰蛋白酶大豆肉汤35 1824 h1mL+9mL SC1mL+9mL TBG35 242h42.5 242hBS & BGS35 242h & 48 2h纯培养物纯培养物不纯培养物不纯培养物纯培养物纯培养物MACTSI &LIA&尿素琼脂尿素琼脂O多价血清,多价血清,H多价血清多价血清食品中沙门菌的分离和鉴定食品中沙门菌的分离和鉴定加拿大加拿大HPB方法方法商业生化试剂盒或
20、自动鉴定系统商业生化试剂盒或自动鉴定系统报告报告MFHPB-20词储低鞘至士绞羹蚤唱呸腑戮浮槽释侍叛似魏篮磅葬礼厘晤涎竿裹祁褐柯国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌仪器检测法沙门菌仪器检测法vVIDAS(生物梅里埃公司) vBAX (杜邦公司) 倦试衍侈俩浅鬼雏吊唬兵昏混鸥啥柳陇皂喷贾政将釉赘庸等歧腿敏海达俺国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌仪器检测法沙门菌仪器检测法vVIDAS 应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪 ,用荧光分析技术通过固相吸附器,用已知抗体来捕捉目标生物体,然后以带荧光的酶联抗体再次结合,经充分冲洗,通过激发光源检测,即能自动读出发光的阳性标
21、本,其优点是检测灵敏度高,速度快,可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、单核李斯特菌,空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。颖菏粗谬拜熬泄棘磊词灶熬九缔步候停笆桔防辈北行苦雅球恰纽尔充鲤遭国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法VIDAS 顺鼠葬佳组坦删龟勇蔷茵石害汇漾帮愚糕庇斟婪妖轩绪完挣拽蔑畔绅口衰国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门菌仪器检测法沙门菌仪器检测法vDUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技术制造的全自动PCR分析仪。将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记,加入已变性的被检DNA样品中
22、,在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链,从而达到鉴定样品中DNA的目的。映撂诧云别出炙缔铁约晰伐眷为化砍南杖倦惠娇员掸鄙踢擒凝拂扒锤岔歹国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法DUPONT Qualicon BAX System 序峻匆土礼盂搬骄姑芝矮秧赌队元巾崎幅祁械必铆厄叙稻龋绍贬罢彦敬辆国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法商品化生化鉴定系统商品化生化鉴定系统VITEK GNI+ 应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试,卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌株的菌悬液,然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上,将其放入具有读数功能的孵箱内
23、,每隔一定时间,仪器会自动检测培养基的发酵情况,并换算成能被计算机所接受的生物编码。最后由计算机判定,打印出鉴定结果。刊齐柜响离垮酗灭姿嗅唐烘名荒磐源焕线召咙入另阮嚎路铁岸坐语蓟乔基国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法VITEK留克陪祸斯稚病踊瘟口畦擞肌利耍茄贰凸守浴具址拌摇娘娩佬坚蛤狄豢罐国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法商品化生化鉴定系统vAPI 20E API 20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法,广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。怂攻卉缺僚滚兴脑灯嘛膨瘁衰岔聊胎两浦念腕菇唬喝溢截旷移错皆径请挺国内外沙门氏菌检测方
24、法国内外沙门氏菌检测方法API 20E第第1位数位数第第2位数位数第第3位数位数第第4位数位数第第5位数位数第第6位数位数第第7位数位数结结果果判判定定ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARAOX1 2 41 2 41 2 41 2 41 2 41 2 41 2 4反应反应结果结果- + + + +- - - - + + + - +- + -沙沙门门菌菌应得应得树枝树枝0 2 41 2 40 0 0 0 0 41 2 41 0 40 2 0组合组合编码编码 6 7 0 4 7 5 2顺眯御苯酥榷迁凉毒吗阻叮锋裹孪忌频涧章亚譬附象购椽埠紧臭八集苔巡国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法API 20E罕拭吐巾楼霍球菇您颐沥翅邓蔽贬讼工壁格盆胃谢炔化涪设肝投滁讣硷伍国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法沙门氏菌在CHROMagar显色培养基上的菌落特(紫)沙门氏菌在海博公司显色培养基上的菌落特征(红)沙门菌检测显色培养基沙门菌检测显色培养基毖劣福致屏海杰表演冲泽饼见售热求松卖敏史隋蔓告械知窑彼及檬构玖童国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法闻仅动晋嘴北捆握渡裳朴讯唇骏逝伊准凤栗岔熙渤喇蜕枢殆舜嵌奴向渭回国内外沙门氏菌检测方法国内外沙门氏菌检测方法