《生物化学实验课件：实验二 总糖和还原糖的测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物化学实验课件：实验二 总糖和还原糖的测定（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验二、总糖和还原糖的测定实验二、总糖和还原糖的测定3,5二硝基水杨酸法二硝基水杨酸法目的要求目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理学习用比色法测定还原糖的方法实验原理实验原理在NaOH和丙三醇存在下，3,5二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。实验内容实验内容1.葡萄糖标准曲线的制备；2.样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定；3.样品（淀粉）中总糖的水解和含量测定。1、葡萄糖标准曲线制作、葡萄糖标准曲线制作1、取6支1.
2、5cm15cm试管，按下表加入2mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。管号葡萄糖标准液（mL）蒸馏水(mL)葡萄糖含量(mg/mL)A540001010.20.80.420.40.60.830.60.41.240.80.21.651022、在上述试管中分别加入DNS试剂2ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/ml）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。2、样品中还原糖的提取、样品中还原糖的提取l准确称取1g藕粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40ml蒸馏水，混匀，于50
3、恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。3、样品总糖的水解及提取、样品总糖的水解及提取l准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6MHCl10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出12滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6MNaOH溶液中和至溶液呈微红色，定容到100ml，过滤后取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀后用于总糖测定。4、样品中含糖量的测定、样品中含糖量的测定1、取7支1.5cm15c
4、m试管，分别按下表加入试剂：项目空白还原糖总糖0123456样品溶液（mL）11111113,5-二硝基水杨酸试剂（mL）2222222A5402、加完试剂后，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖含量。5、计、计 算算按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL；V还原糖或总糖提取液的总体积，mL；m样品重量，g；1000mg换算成g的系数。思思 考考 题题1.比色时为什么要设计空白管？2.糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？3.总糖和还原糖的提取有何不同？
