氯霉素眼药水的高效液相色谱分析

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1、氯霉素眼药水的高效液相色谱分析氯霉素眼药水的高效液相色谱分析药物分析实验药物分析实验十十眼药水中的氯霉素的测定眼药水中的氯霉素的测定 氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素氯霉素，辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂等，为无色或几乎无色的澄明液体。等，为无色或几乎无色的澄明液体。 测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰，量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰，首先要分离得到氯霉素的纯样品。因首先要分离得到氯霉素的纯样品。因此，采用此，采用高效液相色谱法高效液相色谱法来进行测试，来进行测试，用用外标标准曲线法外标

2、标准曲线法定量。定量。氯霉素氯霉素成份成份 A成份成份 A峰面积峰面积A样品样品峰面积峰面积A对照对照外标标准曲线法外标标准曲线法色谱定量：色谱定量：峰面积与样品浓度峰面积与样品浓度成正比。成正比。一系列已一系列已知浓度的知浓度的氯霉素溶氯霉素溶液液眼药水稀眼药水稀释液释液CAi浓度：浓度： C1，C2，C3，C4，C5峰面积：峰面积：A1，A2，A3，A4，A5液相液相色谱的基本流程图色谱的基本流程图流动相流动相 高压高压泵泵色谱柱色谱柱检测器检测器 泵泵输输液液分离分离 检测检测 计算机计算机AEGBCDF进样阀进样阀进样进样预备柱预备柱氯霉素含量的测定氯霉素含量的测定 精密吸取眼药水精密

3、吸取眼药水0.5mL于于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。刻度。1、对照品溶液配制、对照品溶液配制2、眼药水样品配制、眼药水样品配制 精密称取精密称取5.0mg氯霉素样品于氯霉素样品于10mL容量瓶中，用甲醇溶容量瓶中，用甲醇溶解定容，配成解定容，配成0.1mg/mL母液。分别移取母液。分别移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL母液于母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的标准溶液。的标准溶液。色谱操作步骤：色谱操作步骤：1、依次打开检测器、泵的开关、依次打开检测器、泵

4、的开关2、打开电脑主机，打开操作界面、打开电脑主机，打开操作界面3、排气泡、排气泡4、设置色谱条件，打开泵开关、设置色谱条件，打开泵开关5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时6、基线调零，填写数据文件名及信息、基线调零，填写数据文件名及信息7、进样并记录数据、进样并记录数据8、数据处理及打印报告、数据处理及打印报告9、冲洗色谱系统约半小时，关机。、冲洗色谱系统约半小时，关机。色谱条件：色谱条件：色谱仪色谱仪 岛津岛津LC-15C高效液相色谱高效液相色谱色谱柱色谱柱 C18柱（柱（5m，1504.6mm或或2504.6mm）柱温柱温 室

5、温室温流动相流动相 甲醇甲醇 水（水（60 40）（）（150短柱）短柱） 甲醇甲醇 水（水（80 20）（）（250长柱）长柱）流速流速 1.000ml/min波长波长 272nm泵泵柱柱进样进样排放排放泵泵排放排放柱柱进样进样定量环定量环六通阀六通阀Inject：插入针头：插入针头Load：打入样品：打入样品Inject：样品进入色谱：样品进入色谱3、色谱测试、色谱测试 用清洗溶剂清洗用清洗溶剂清洗微量进样针三次，用微量进样针三次，用待测溶液润洗三次，待测溶液润洗三次，吸取待测溶液吸取待测溶液25L，进样，得色谱图。进样，得色谱图。数据记录数据记录标准曲线标准曲线：隔两分钟进样一：隔两分钟进样一次，浓度从低到高，记录在次，浓度从低到高，记录在一张谱图上。第二次进样时一张谱图上。第二次进样时断开六通阀进样感应。断开六通阀进样感应。样品曲线样品曲线：单独进样，单：单独进样，单独记录谱图。独记录谱图。