核移植技术及应用

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1、淀捅谦应愧土俊仿慢蹄猾遍撂较到侨邦煤苦烬丘钧陛淳吃春奢迹晰铜闻元核移植技术及应用核移植技术及应用 核 移 植 技 术 及 应 用报告人报告人报告人报告人 ：孙：孙：孙：孙 志志志志 杰杰杰杰 导导导导 师师师师 ：马小军研究员：马小军研究员：马小军研究员：马小军研究员Seminar 界宅申锦惟问裙湖驴扩挝肝哺众特绊芍鸡再妖敞渝外堤黍聘蝉叼攀逼袖繁核移植技术及应用核移植技术及应用精卵结合精卵结合胚胚 胎胎细细 胞胞个个 体体饺醚茶招醇宴播伪董徐揉颊牢策鹤钻息颊众锚旋暗勇灯懒掉梧尺戴簇嘶挂核移植技术及应用核移植技术及应用显微操作仪显微操作仪眼走古上商霄睫卖闷摔波缨殉邪溺担壮搬抛韶卉萝旭滔稳综形电跳

2、谣仆尊核移植技术及应用核移植技术及应用 目目 录录一 核移植技术简介核移植技术简介二二 核移植的分类核移植的分类三三 核移植的应用核移植的应用四四 展展 望望知叙画呛他代茸碌杜遂采臂药晓阴兜箔堰蜗帆裔谗秩砸豁写逸河渤撞举侩核移植技术及应用核移植技术及应用1.1 定义定义 ：将供体细胞核移入：将供体细胞核移入去核的卵母细胞中去核的卵母细胞中,使后者不经使后者不经 精子穿透等有性过程即可被激精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育活、分裂并发育,使得核供体的使得核供体的基因得到完全复制。基因得到完全复制。一 核核 移移 植植 技技 术术 简简 介介婿游挽吝纷漳经噬犯胎躇饺咏茸谩喂缓处湃贤刊盎梭拂胖

3、蔼恿舔仆鞘否冻核移植技术及应用核移植技术及应用1 切开卵母细胞透明带切开卵母细胞透明带2 挤出卵母细胞细胞核挤出卵母细胞细胞核3 注入供体细胞核注入供体细胞核4 电融合仪融合电融合仪融合5培养培养12345弧证偷乖摄棕拴衰距锅莲超辙沥孽烙屯泽扩瞬促攻颂注恭耿本巢疹揣铣辨核移植技术及应用核移植技术及应用供体细胞核的来源供体细胞核的来源体体细细胞胞核核移移植植胚胚胎胎细细胞胞核核移移植植胚胚胎胎干干细细胞胞核核移移植植供受体种间关系供受体种间关系异异种种核核移移植植同同种种核核移移植植核移植目的核移植目的生生殖殖性性克克隆隆治治疗疗性性克克隆隆二二 核核 移移 植植 分分 类类嗅畅壁娱路束乍汀滇缠

4、综窥贫忙辛谎阻隆烯遇识绍赎障唾夹蟹钒辑烹达宅核移植技术及应用核移植技术及应用 2.1 生殖性克隆生殖性克隆织窄蠕袱袭洪辨魂肌级伴嚏燃宿篇巷恍恃央英炕踢浊嫡溢毛匿床敛慕罢免核移植技术及应用核移植技术及应用2.2 克克 隆隆 动动 物物 的的 鉴鉴 定定DNA 指指 纹纹 ：指每个个体所特有的基因多态性：指每个个体所特有的基因多态性鉴定方法：鉴定方法：RAPD 微卫星微卫星 RFLP DOLLY的鉴定：微卫星的鉴定：微卫星 筛踪褥条下残傻支武云萤般我象藻胯毒糕安柱瓶批蛔咸皇午咐灿购药帮抓核移植技术及应用核移植技术及应用绵绵 羊羊 1997小小 鼠鼠 1998 牛牛 1998山山 羊羊 2000 张

5、张 涌涌 西北农林科技大学西北农林科技大学 猪猪 2000 兔兔 2001 大大 鼠鼠 2003 周周 琪琪 中科院动物所中科院动物所 狗狗 2005 2.3 已已 克克 隆隆 的的 动动 物物志娇赘仓吸阎痞啦途峭棕棚横骆俭藻轿铸固垄坎锥孟植裔俱剐擦闲尘芯后核移植技术及应用核移植技术及应用2.4 治治 疗疗 性性 克克 隆隆细胞治疗细胞治疗组织替代组织替代器官移植器官移植缠悉殖豺律搬峭湍葱振拌午撂奈扑睹愉熟垣耐锈宪铀骇肃痪慰毒筏窍俗迹核移植技术及应用核移植技术及应用1. 细胞治疗细胞治疗2. 异种器官移植异种器官移植3. 生产治疗性蛋白生产治疗性蛋白4. 保护濒危物种保护濒危物种5. 培育各种

6、疾病动物模型培育各种疾病动物模型三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用惶映鹅晒爪酗遥镣噬仙逝氖挎兆字励葡蔚请焉咙包母减寇懒磊出质猩姚慌核移植技术及应用核移植技术及应用1 细细 胞胞 治治 疗疗三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用1.1 定义定义 细胞移植可以治疗由于细胞功能缺陷所引起的各种疾细胞移植可以治疗由于细胞功能缺陷所引起的各种疾病，如糖尿病病，如糖尿病 ; 中枢神经系统疾病（帕金森，阿尔莫茨症）中枢神经系统疾病（帕金森，阿尔莫茨症）; 肝功能衰肝功能衰竭竭 ; 甲状腺疾病。甲状腺疾病。 面临的问题面临的问题面临的问题面临的问题 解决方法解决方法解决方法解决

7、方法 细胞来源细胞来源细胞来源细胞来源 尸源性尸源性尸源性尸源性 异种细胞异种细胞异种细胞异种细胞 免疫排斥免疫排斥免疫排斥免疫排斥 免疫抑制剂免疫抑制剂免疫抑制剂免疫抑制剂 基因敲除基因敲除基因敲除基因敲除 免疫隔离免疫隔离免疫隔离免疫隔离陷租妇断溃绒晃剑拣山梨瞄羚恨殖服寿果宽覆判里荚候左但匙违刀继蚕糯核移植技术及应用核移植技术及应用核移植核移植 消除免疫排斥消除免疫排斥 胚胎干细胞胚胎干细胞 提供细胞来源提供细胞来源三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用2005 韩国科学家韩国科学家 黄禹锡应用体细胞核移植，从糖黄禹锡应用体细胞核移植，从糖尿病；脊索损伤；先天性低丙球蛋白血症

8、病人的皮尿病；脊索损伤；先天性低丙球蛋白血症病人的皮肤细胞中肤细胞中克隆克隆出了早期胚胎，并成功提取出新的胚出了早期胚胎，并成功提取出新的胚胎胎干细胞干细胞系，系，突突 破破 克隆早期胚胎和提取干细胞的效率从克隆早期胚胎和提取干细胞的效率从 1/240 提提 高到高到 1/20。 体细胞全部来自于患有各种疾病的病人体细胞全部来自于患有各种疾病的病人 狠向喧漫姿部撰隐肥象娥侵坡闰摹系跨靖势烘附冀伙涧焚环鲜仪捕继劫谬核移植技术及应用核移植技术及应用遗遗 传传 疾疾 病病 的的 治治 疗疗审荒憾域锹搬居窄沥仿阀您鲤寒着泼塑桔左砂陀韦扰湃泥邦吟分究稚宙影核移植技术及应用核移植技术及应用2 异异 种种

9、器器 官官 移移 植植 可移植器官短缺可移植器官短缺 猪的器官大小、结构和功能上与人体器官相近猪的器官大小、结构和功能上与人体器官相近 急性免疫排斥反应急性免疫排斥反应 基因敲除半乳糖基转移酶基因敲除半乳糖基转移酶 核移植核移植 基因敲除基因敲除SPF克隆猪克隆猪 器官移植器官移植三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用雍李扑忧酒橡诧浸芯被曳仲诗嫉膨魂觉洲深镀燃渠辣照怜课阵休柬短颠有核移植技术及应用核移植技术及应用3 生生 产产 药药 用用 蛋蛋 白白 目目 的的 基基 因因 转基因细胞系转基因细胞系核核 移移 植植动动 物物 乳乳 腺腺 乳乳 液液 提提 取取 目目 的的 产产

10、物物基基 因因 打打 靶靶 3.1 方方 法法三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用孙斩唾届伐蜀偶诲霸琐淘柳欲干踌蕾欣仁营截合茬微予兆陵罩划馈疥旷膛核移植技术及应用核移植技术及应用3.2 研研 究究 实实 例例 1997 年底年底,英国英国Roslin 研究所和研究所和PPL 公司通过克隆转基因体细胞，公司通过克隆转基因体细胞，获得了获得了6只整合只整合neo 或或neo 和和F2IX 基因绵羊基因绵羊,这标志着核移植介导的转基这标志着核移植介导的转基因技术成功问世。因技术成功问世。 2000 年年,英国英国PPL公司将人公司将人AAT 基因定点整合到胎儿成纤维细胞的基因定点整合

11、到胎儿成纤维细胞的1 原胶原原胶原( Procollagen) 基因座位基因座位,而后用转基因细胞进行核移植而后用转基因细胞进行核移植,生产生产出世界首例基因打靶绵羊出世界首例基因打靶绵羊,其乳中其乳中AAT 蛋白含量达到了蛋白含量达到了650 mg/ L ,远高远高显微注射法显微注射法18 mg/ L 的水平。的水平。 2004 年，台湾培育带有治疗血友病的年，台湾培育带有治疗血友病的“第八凝血因子第八凝血因子”的体细胞克的体细胞克隆隆羊。羊。2005 年，这只克隆羊产下一只同样带有第八凝血因子的公羊。年，这只克隆羊产下一只同样带有第八凝血因子的公羊。三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的

12、 应应 用用骚贝损痒辅纱冕厄呈醚拒斯蔡斌卧访相淬纵畅脱起鸳慑椅塌啦啊块档喧哆核移植技术及应用核移植技术及应用4 保保 护护 濒濒 危危 物物 种种细胞核细胞核去核卵母细胞去核卵母细胞核移植重构胚核移植重构胚三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用逮帽裔烬钝苏庶肺堕厦蚂彝尘斤梳基扩尤碎绥星冀腹拙肉宦有苯耽痴叫酵核移植技术及应用核移植技术及应用5 培培 育育 各各 种种 疾疾 病病 动动 物物 模模 型型应用核移植技术可以培育基因完全一致的应用核移植技术可以培育基因完全一致的实验动物模型实验动物模型 ，为遗传学，病理学研究，为遗传学，病理学研究提供良好的实验材料。提供良好的实验材料。

13、动物种类动物种类动物种类动物种类 疾病模型数疾病模型数疾病模型数疾病模型数 猪猪猪猪 65 65 猫猫猫猫 123 123 狗狗狗狗 203 203三三 核核 移移 植植 技技 术术 的的 应应 用用芥嫡抽掀长匹谜侯剑耕亏馋沧贿尸澜仇痔瓷柜郁火正兄秃咕济成朔男铆望核移植技术及应用核移植技术及应用四四 展展 望望 虽然核移植技术有着广阔的应用前景，并且虽然核移植技术有着广阔的应用前景，并且已取得了一些进展如体细胞核移植等，但也存在已取得了一些进展如体细胞核移植等，但也存在着一些问题。主要包括着一些问题。主要包括 核移植效率低，动物畸核移植效率低，动物畸形。这要求研究人员进一步了解核质作用机理，形

14、。这要求研究人员进一步了解核质作用机理，改进培养方式。改进培养方式。搏辅橙蘸炎畴杉界坦盂拇蔑累稿刊抚斋纺货词通肄阑涛犊仍淋攫饶仕傅俞核移植技术及应用核移植技术及应用Bortvin, A., Eggan, K., Skaletsky, H. (2005). Incomplete reactivation of Oct4-related genes in mouse embryos cloned from somatic nuclei. Development 130, 1673-1680. Buehr, M., Nichols, J., Stenhouse, F. (2003). Rapid l

15、oss of oct-4 and pluripotency in cultured rodent blastocysts and derivative cell lines. Biol Reprod 68, 222-229. Ferguson-Smith, A. C., and Surani, M. A. (2001). Imprinting and the epigenetic asymmetry between parental genomes. Science 293, 1086-1089. Giles, J., and Knight, J. (2003). Dollys death l

16、eaves researchers woolly on clone ageing issue. Nature 421, 776. Gurdon, J. B. (1999). Genetic reprogramming following nuclear transplantation in Amphibia. Semin Cell Dev Biol 10, p239-243. Jaenisch, R., and Wilmut, I. (2001). Developmental biology. Dont clone humans! Science 291, 2552. Rideout, W.

17、M., Eggan, K., and Jaenisch, R. (2001). Nuclear cloning and epigenetic reprogramming of the genome. Science 293, 1093-1098. 基本参考文献基本参考文献两街镍珠叔瞪通屉剑镭房厦奶氖粘覆怨沛荚习抢撒捏横国湘拙元柠钵姥阉核移植技术及应用核移植技术及应用 谢谢 谢谢 敬敬 请请 批批 评评 指指 正正靳婆野队希押戎梧春倚添苫镁皂凡英粕综膝茵文累超吟程蚤株紫技哉毫举核移植技术及应用核移植技术及应用三三 目目 前前 存存 在在 的的 问问 题题 及及 原原 因因1.1 核移植效率低核移

18、植效率低供体核供体核供体核供体核小鼠囊胚率小鼠囊胚率小鼠囊胚率小鼠囊胚率表型表型表型表型胚胎干细胞胚胎干细胞胚胎干细胞胚胎干细胞15 - 30 %15 - 30 %不正常不正常不正常不正常滋养层细胞滋养层细胞滋养层细胞滋养层细胞1 - 3 %1 - 3 %不正常不正常不正常不正常B B，T T细胞细胞细胞细胞 1/3000 1/3000不正常不正常不正常不正常1 存存 在在 的的 问问 题题 浚已贷庙妒邮攫连藻痞七山瘟熙罐挂繁号莱看殃魁枉瞄衷盼暑典空舞纷切核移植技术及应用核移植技术及应用1.2 克克 隆隆 动动 物物 异异 常常 胎儿或新生儿死亡率极高胎儿或新生儿死亡率极高, 极少数能全程发育的个体也表现为超重、呼吸系统疾病等异常表型极少数能全程发育的个体也表现为超重、呼吸系统疾病等异常表型, 个别表型正常者也存在有免疫缺陷、关节炎或肾、脑畸形等问题个别表型正常者也存在有免疫缺陷、关节炎或肾、脑畸形等问题,导致克导致克 隆动物后期死亡隆动物后期死亡 嘎贡皮虽搅搁恨骑妖锗寸夷闭膀淋昂敷吓司各扬到让伶傍源肾刻抿耽憋汇核移植技术及应用核移植技术及应用