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1、专题2 细胞工程1 细胞工程是指应用细胞生物学和分子细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过生物学的原理和方法,通过细胞水平细胞水平或或细细胞器水平胞器水平上的操作,按照人们的意愿来上的操作,按照人们的意愿来改改变变细胞内的细胞内的遗传物质遗传物质或或获得细胞产品获得细胞产品的一的一门综合科学技术。门综合科学技术。什么叫细胞工程?什么叫细胞工程?按操作对按操作对象分类象分类植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程22.1植物细胞工程植物细胞工程2.1.1植物细胞工程的基本技术植物细胞工程的基本技术植物组织培养技术3(一)(一) 细胞的全能性细胞的全能性1、定义:、定义:
2、 生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。体的潜能的特性。 2、原理:、原理: 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整个有的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的全部基因,从理论上讲,生物体所必需的全部基因,从理论上讲,生物体的每一个体的每一个活细胞活细胞都应该具有全能性。都应该具有全能性。 植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物组织培养的理论基础:植物组织培养的理论基础:44、生物体所有细胞全能性大小都一致吗?、生物体所有细胞全能性大小都一致吗?受精卵受精卵 生殖细胞生殖细胞
3、 体细胞体细胞; ;植物细胞植物细胞 动物细胞动物细胞3、差异:、差异: (1 1) 受精卵的全能性受精卵的全能性最高最高 (2 2) 受精卵分化后的细胞中,体细胞受精卵分化后的细胞中,体细胞的全能性比生殖细胞的的全能性比生殖细胞的低低。 5回忆、思考1、植物组织培养的大致过程包括哪几个阶段?、植物组织培养的大致过程包括哪几个阶段?离体的器官、组织或细胞成离体的器官、组织或细胞成 由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程,又称去分化。织的过程,又称去分化。脱分化脱分化再分化再分化愈伤组织愈伤组织根和芽根和芽完整植株完整植株发育发育2、什么是脱
4、分化?、什么是脱分化?63、什么叫愈伤组织?什么叫愈伤组织? 离体的植物器官、组织或细胞,在培养一段时间离体的植物器官、组织或细胞,在培养一段时间以后,通过细胞分裂,形成一种高度液泡化、无定形以后,通过细胞分裂,形成一种高度液泡化、无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松无规则的组织。状态薄壁细胞组成的排列疏松无规则的组织。4、什么叫再分化?、什么叫再分化? 脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程。或芽等器官的过程。7一、植物组织培养技术一、植物组织培养技术1 1、植物组织培养的过程、植物组织培养的过程阅读阅读P P3434的实验,回答问题
5、:的实验,回答问题:1.1.植物细胞表现出全能性的条件有哪些?植物细胞表现出全能性的条件有哪些?2.2.在植物组培过程中,为什么要进行一系列的消在植物组培过程中,为什么要进行一系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操作?毒,灭菌,并且要求无菌操作?3 3、为什么切取胡萝卜根的形成层,其他部分也、为什么切取胡萝卜根的形成层,其他部分也能培养成小植株吗?能培养成小植株吗?4 4、为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?、为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?5 5、请同学们根据上述过程概括出植物组织培养、请同学们根据上述过程概括出植物组织培养技术的流程图,并与同学交流。技术的流程图,并与同学交流。81.1.
6、植物细胞表现出全能性的条件有哪些?植物细胞表现出全能性的条件有哪些?2.2.在植物组培过程中,为什么要进行一系列的消毒,在植物组培过程中,为什么要进行一系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操作?灭菌,并且要求无菌操作?3 3、为什么切取胡萝卜根的形成层,其他部分也能、为什么切取胡萝卜根的形成层,其他部分也能培养成小植株吗?培养成小植株吗?细胞离体、一定的营养物质、细胞离体、一定的营养物质、激素和其他外界条件激素和其他外界条件避免杂菌在上面迅速生长消耗营养,避免杂菌在上面迅速生长消耗营养,且有些杂菌会危害培养物的生长。且有些杂菌会危害培养物的生长。想一想想一想胡萝卜根形成层容易诱导成愈伤组织,其他部分
7、胡萝卜根形成层容易诱导成愈伤组织,其他部分如叶、花也能培养成小植株,只是稍微困难些。如叶、花也能培养成小植株,只是稍微困难些。94、为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?、为什么诱导愈伤组织的过程中应避光培养?5、请同学们根据上述过程概括出植物组织培养、请同学们根据上述过程概括出植物组织培养 技术的流程图,并与同学交流。技术的流程图,并与同学交流。在有光时,往往容易形成维管组织,在有光时,往往容易形成维管组织,而不易形成愈伤组织。而不易形成愈伤组织。10切取切取形成层形成层无菌无菌接种接种诱导愈伤组织诱导愈伤组织的形成的形成试管苗的形成试管苗的形成培养室培养室移栽移栽脱分化脱分化再分化再分化1
8、1根据上述过程,请同学们讨论归纳出组织培养的概念。 2、概念:、概念: 植物组织培养就是在无菌和人工控制条件植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞,培下,将离体的植物器官、组织、细胞,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。终形成完整的植株。12植物组织培养的培养基植物组织培养的培养基v定义:含有一定营养成分,供组织培养植物定义:含有一定营养成分,供组织培养植物生长的基质生长的基质v无机营养成分:无机营养成分:C C,H H,O O大量元素及
9、部分微量大量元素及部分微量元素元素v有机营养成分有机营养成分 含含N N物质:包括维生素和氨基酸物质:包括维生素和氨基酸 碳源:碳源:2%5%2%5%的蔗糖的蔗糖 琼脂:起支持作用琼脂:起支持作用 生长激素:生长素,细胞分裂素和赤霉素生长激素:生长素,细胞分裂素和赤霉素vPHPH值:值:5.05.06.06.013因为不同种生物之间存因为不同种生物之间存在着生殖隔离,所以用在着生殖隔离,所以用传统的有性杂交方法是传统的有性杂交方法是不可能做到这一点的。不可能做到这一点的。于是,这些科学家试图用这两种植物的体于是,这些科学家试图用这两种植物的体细胞进行杂交,来实现这一美妙的设想。细胞进行杂交,来
10、实现这一美妙的设想。二、植物体细胞杂交技术二、植物体细胞杂交技术这幅番茄这幅番茄马铃薯图利马铃薯图利用传统有性杂交方法能用传统有性杂交方法能实现吗?为什么?实现吗?为什么?14(三)(三) 植物体细胞杂交植物体细胞杂交1 1、定义:、定义: 用两个来自不同植物的体细胞融合成用两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞,且把杂种细胞培育成一个杂种细胞,且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。新的植物体的方法。 2 2、优势:、优势:(与有性杂与有性杂交方法比较交方法比较) 打破了不同种生物间的生殖隔离限制,打破了不同种生物间的生殖隔离限制,大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。大大扩展了可用于杂交的亲
11、本组合范围。植物体细胞杂交植物体细胞杂交15(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交植物体细胞杂交过程示意图过程示意图16杂杂种种植植株株融合的融合的原生质原生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化1 1、过程、过程植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法?方法?促进融合促进融合的方法?的方法?融合融合完成完成的的标志标志植物细胞植物细胞B二、植物体细胞杂交技术二、植物体细胞杂交技术17去壁的常用方法:去壁的常用方法:酶
12、解法(纤维素酶、果胶酶等)酶解法(纤维素酶、果胶酶等) 原生质体融合方法原生质体融合方法:物理法:离心、振动、电刺激等物理法:离心、振动、电刺激等 化学法:聚乙二醇(化学法:聚乙二醇(PEGPEG) 18白菜白菜白菜白菜甘蓝甘蓝甘蓝甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝19所采用技术的理论基础 植物细胞工程通常采用的技 术 手 段 植物组织培养植物组织培养 植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物细胞的全能性植物细胞的全能性小结小结201、有关全能性的表述中,不正确的是(、有关全能性的表述中,不正确的是( ) 受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完 整个体,因此全能性最
13、高整个体,因此全能性最高 生物体内细胞由于分化全能性不能表达生物体内细胞由于分化全能性不能表达 卵细胞和受精卵一样,细胞未分化,全能卵细胞和受精卵一样,细胞未分化,全能 性很高性很高 植物细胞离体培养在一定条件下能表现出植物细胞离体培养在一定条件下能表现出 全能性全能性C练习21例例2:右图为植物体细胞杂交过程:右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答:示意图。据图回答:1 1)步骤)步骤)步骤)步骤是是是是_最常用的方法是最常用的方法是最常用的方法是最常用的方法是_._.2 2)步骤)步骤)步骤)步骤一般常用的化学试剂是一般常用的化学试剂是一般常用的化学试剂是一般常用的化学试剂是_目的是目的
14、是目的是目的是_._.3 3)在利用杂种细胞培育成为杂种)在利用杂种细胞培育成为杂种)在利用杂种细胞培育成为杂种)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中,运用的技术手段植株的过程中,运用的技术手段植株的过程中,运用的技术手段植株的过程中,运用的技术手段是是是是_ _ ,其中步骤,其中步骤,其中步骤,其中步骤相相相相当于当于当于当于_,步骤,步骤,步骤,步骤相当于相当于相当于相当于_ 去掉细胞壁分离出有去掉细胞壁分离出有去掉细胞壁分离出有去掉细胞壁分离出有活力的原生质体活力的原生质体活力的原生质体活力的原生质体 酶解法酶解法酶解法酶解法 聚乙二醇(聚乙二醇(聚乙二醇(聚乙二醇(PEGPEGPEG
15、PEG) 诱导原生质体融合诱导原生质体融合诱导原生质体融合诱导原生质体融合植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物组织培养脱分化脱分化脱分化脱分化再分化再分化再分化再分化22例例2:右图为植物体细胞杂交过程:右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答:示意图。据图回答: 4 4)植物体细胞杂交的目的是获得)植物体细胞杂交的目的是获得)植物体细胞杂交的目的是获得)植物体细胞杂交的目的是获得 新的杂种植株。使新的杂种植株。使新的杂种植株。使新的杂种植株。使_ 能够在新的植物体上有所表现,能够在新的植物体上有所表现,能够在新的植物体上有所表现,能够在新的植物体上有所表现, 其根本原因其根本原因其根本原
16、因其根本原因: : 5 5)从理论上讲,杂种植株的育性)从理论上讲,杂种植株的育性)从理论上讲,杂种植株的育性)从理论上讲,杂种植株的育性_。若运用传统有性杂交方法。若运用传统有性杂交方法。若运用传统有性杂交方法。若运用传统有性杂交方法 能否实现?能否实现?能否实现?能否实现?_。并说明理由:。并说明理由:。并说明理由:。并说明理由: 因此,这项研究对于培养作物新品因此,这项研究对于培养作物新品因此,这项研究对于培养作物新品因此,这项研究对于培养作物新品 种方面的重大意义在于:种方面的重大意义在于:种方面的重大意义在于:种方面的重大意义在于: .两个亲本的遗传性状两个亲本的遗传性状两个亲本的遗
17、传性状两个亲本的遗传性状 杂种植株获得了双亲的遗传物质杂种植株获得了双亲的遗传物质杂种植株获得了双亲的遗传物质杂种植株获得了双亲的遗传物质 可育可育可育可育不能不能不能不能因为不同种生物之间存在生殖隔离因为不同种生物之间存在生殖隔离因为不同种生物之间存在生殖隔离因为不同种生物之间存在生殖隔离克服远缘杂交不亲和的障碍,大大扩展了克服远缘杂交不亲和的障碍,大大扩展了克服远缘杂交不亲和的障碍,大大扩展了克服远缘杂交不亲和的障碍,大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围可用于杂交的亲本组合范围可用于杂交的亲本组合范围可用于杂交的亲本组合范围237.7.基因型为基因型为AaBbAaBb的水稻(含的水稻(含24
18、24条染色体)的花药通过条染色体)的花药通过无菌操作接入试管后,在一定条件下形成试管苗,问无菌操作接入试管后,在一定条件下形成试管苗,问:(1 1)愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规)愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团,愈伤组织形成过程中,必须从培养基则的细胞团,愈伤组织形成过程中,必须从培养基中获得中获得_ _ 等营养物质。等营养物质。(2 2)要促进花粉细胞分裂生长,培养基中应有)要促进花粉细胞分裂生长,培养基中应有_ _和和_两类激素。两类激素。水、无机盐、维生素和小分子有机水、无机盐、维生素和小分子有机物物细胞分裂素细胞分裂素植物生长素植物生长素24(3 3)愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根,再由芽)愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根,再由芽发育成叶和茎。这一过程必须给予光照,其原因是发育成叶和茎。这一过程必须给予光照,其原因是_能利用光能制造有机物,供试管苗生能利用光能制造有机物,供试管苗生长发育。长发育。(4 4)试管苗的细胞核中含)试管苗的细胞核中含_条脱氧核糖核苷酸链。条脱氧核糖核苷酸链。(5 5)培育成的试管苗可能出现的基因型有)培育成的试管苗可能出现的基因型有_。 叶绿体叶绿体 2424ABAB、aBaB、AbAb、abab25