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1、环境微生物实验（四）环境微生物实验（四）Microbiology DepartmentCollege of Resource & EnvironmentLiyongTel:E-mail: 培养基的配制灭菌培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌l实验目的实验目的l实验材料实验材料l实验方法实验方法l实验作业实验作业培养基的配制灭菌实验目的实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的使用方法。加压蒸汽灭菌法的使用方法。熟悉微生物的有关准备工作及操作方法。熟悉微生物的
2、有关准备工作及操作方法。培养基的配制灭菌实验材料实验材料药品：相关配方药品：相关配方器材：高压蒸汽灭菌器器材：高压蒸汽灭菌器其它：其它：培养基的配制灭菌实验方法实验方法培养基的配制培养基的配制选择配方选择配方: :称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热加热溶解。溶解。过滤：除去杂质。过滤：除去杂质。培养基的配制灭菌加琼脂溶化加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当加热过程要不断搅拌，可适当补水。补水。调调pHpH值值：用：用NaOHNaOH或或 HClHCl调调p
3、HpH，用，用pHpH试纸试纸对照。对照。分装：注意不要污染棉塞。分装：注意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上包扎成捆，挂上标签标签, ,注明何种培养基。注明何种培养基。灭菌备用：培养基灭菌后必须在灭菌备用：培养基灭菌后必须在37370 0C C下恒温培下恒温培养养24h24h，确定无菌生长，方可使用。，确定无菌生长，方可使用。培养基的配制灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基l l牛肉膏牛肉膏 3g l l蛋白胨蛋白胨 5g l l氯化钠氯化钠 3g l l琼脂琼脂 24g l l水水 1000mL l lpH 7.27.4培养基的配制灭菌马铃
4、薯蔗糖琼脂培养基马铃薯蔗糖琼脂培养基马铃薯蔗糖琼脂培养基马铃薯蔗糖琼脂培养基l去皮马铃薯去皮马铃薯 200g200g （煮沸煮沸30min30min后过滤后过滤, ,用汁液）用汁液）l蔗糖蔗糖 20g 20g l自来水自来水 1000mL 1000mL l琼脂琼脂 24g 24g lpH pH 自然自然培养基的配制灭菌单倍乳糖蛋白胨培养液单倍乳糖蛋白胨培养液l蛋白胨：蛋白胨：10g10gl牛肉浸膏：牛肉浸膏：3g3glNaClNaCl： 5g5gl乳糖：乳糖：5g5gl水：水：1000ml1000mll1.61.6溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂lpHpH：7.27.2l分装试
5、管分装试管;10ml/;10ml/管，内放置倒置小管；管，内放置倒置小管；培养基的配制灭菌同单倍乳糖蛋白胨培养液；乳糖蛋白胨培养液；浓度三倍浓度三倍；l蛋白胨：蛋白胨：10g*310g*3l牛肉浸膏：牛肉浸膏：3g*33g*3lNaClNaCl： 5g*35g*3l乳糖：乳糖：5g*35g*3l水：水：1000ml1000mll1.61.6溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂lpHpH：7.27.2l分装试管分装试管;10ml/;10ml/管，内放置倒置小管；管，内放置倒置小管；三倍乳糖蛋白胨培养液三倍乳糖蛋白胨培养液培养基的配制灭菌l l蛋白胨：蛋白胨：蛋白胨：蛋白胨：10g10
6、g10g10gl l乳糖：乳糖：乳糖：乳糖：5g5g5g5gl l琼脂：琼脂：琼脂：琼脂：24g24g24g24gl lK K K K2 2 2 2HPOHPOHPOHPO4 4 4 4：2g2g2g2gl l水：水：水：水：1000ml1000ml1000ml1000mll l2%2%2%2%伊红：伊红：伊红：伊红：20ml20ml20ml20mll l0.50.50.50.5美蓝：美蓝：美蓝：美蓝：13ml13ml13ml13ml注意：伊红和美蓝液单独分装灭菌，使用前再和注意：伊红和美蓝液单独分装灭菌，使用前再和其它成分混合使用；其它成分混合使用；伊红美蓝鉴别培养基伊红美蓝鉴别培养基培养基
7、的配制灭菌1 1组：组：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏蛋白胨培养基：1000mL1000mL 斜面：斜面：4040支支7mL7mL 其它：分装三角瓶其它：分装三角瓶(700ml(700ml) )培养基的配制灭菌2 2组：组：马铃薯培养基：马铃薯培养基：500mL500mL 装入三角瓶中装入三角瓶中培养基的配制灭菌3组：组：单倍乳糖发酵培养基：单倍乳糖发酵培养基： 600 mL600 mL 分装至试管分装至试管6060支；支；三倍乳糖发酵培养基：三倍乳糖发酵培养基：300 mL300 mL 分装至试管分装至试管3030支；支；培养基的配制灭菌4组：伊红美兰培养基：伊红美兰培养基：400mL 分装至三
8、角瓶中；分装至三角瓶中；培养基的配制灭菌其它准备材料：其它准备材料：其它准备材料：其它准备材料：90mL无菌水：无菌水：250mL三角烧瓶（加石子），精确加三角烧瓶（加石子），精确加水水90.0mL；塞上棉塞，包扎、灭菌备用；塞上棉塞，包扎、灭菌备用； 1个个/组；组；试管无菌水：试管精确加水试管无菌水：试管精确加水9.0mL，塞上棉塞，包扎、，塞上棉塞，包扎、灭菌备用灭菌备用:（14支支/组）；组）；250ml空三角瓶：空三角瓶：1个个/组；灭菌后取样用；组；灭菌后取样用；1mL 无菌吸管无菌吸管: 20-30支支/组；组；10mL 无菌吸管无菌吸管: 1支支/组组。培养基的配制灭菌 固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？些问题？ 培养基中加琼脂的作用是什么？为什么？培养基中加琼脂的作用是什么？为什么？ 琼脂的最有用特性是它的琼脂的最有用特性是它的凝点凝点和熔点之间的温度和熔点之间的温度相差很大相差很大 ，其特点：具有凝固性，稳定性，能与一些物质形成络合物等物理化学性质，可用作增稠剂,凝固剂，悬浮剂，乳化剂，保鲜剂和稳定剂。 干热灭菌、高压蒸汽灭菌有何不同（条件干热灭菌、高压蒸汽灭菌有何不同（条件和对象）？和对象）？培养基的配制灭菌培养基的配制灭菌
