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1、第十五章甾体激素类药物的分析第十五章甾体激素类药物的分析The analysis of Steroid Hormon Drugs第一节基本结构和分类一、母核一、母核环戊烷并多氢菲 l环上双键的表示方法：l 用“”表示 ,双键的位置写在的右上角。双键位置4 1,4 5 5(10) 分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素l1肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素皮质酮的衍生物 l代表药物有： 可的松氢化可的松l人工合成药物： 地塞米松氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键，9位上引入-F，16位上引入-C
2、H3 氢化泼尼松在氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键 l结构特点：结构特点： 含有21个C A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮） 17位：-醇酮基，有还原性。 人工合成品：1、2位间有双键，6位，9位引入卤素，16位或16位引入甲基，16位引入羟基等。 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试与羰基试剂反应剂反应 C17 醇酮基醇酮基还还 原原 性性l2雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素睾丸素的衍生物 代表药物：甲基睾丸素 丙酸睾丸素 蛋白同化激素在睾丸素基础上结构修饰得到，如苯丙酸诺龙l结构特点：结构特点： 含有19个
3、C A环的4-3-酮 17位羟基、甲基、酯 供分析官能团：供分析官能团： A环4-3-酮C17 羟基羟基可成酯可成酯UV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应l3孕激素孕激素黄体酮l结构特点：结构特点： 含有21个C A环的4-3-酮 17位甲酮基 供分析官能团：供分析官能团： A环的4-3-酮 17位上的甲酮基 UV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应与亚硝基铁氰化钠反应与亚硝基铁氰化钠反应l4雌激素雌激素 雌二醇、炔雌醇及衍生物 雌酮 l结构特点：结构特点： 含有18个C A环：苯环，3位上有酚羟基， 10位无甲基 17位：羟基、乙炔基 供分析官能团：供分析官能团： A环的酚羟基 17位的羟基 C1
4、7 乙炔基与与AgNO3反应反应UV、与重氮苯磺酸盐反应、与重氮苯磺酸盐反应可成酯可成酯l口服避孕药，如炔诺酮、异炔诺酮、安宫黄体酮等 A环有4-3-酮结构；有的第17位有羟基和乙炔基；l小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯 环 C3-酚OH-OH-CCH第二节鉴别试验一、呈色反应一、呈色反应 1母核 能与H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等呈色。 最常用的是H2SO4。 如：(二二) 官能团的反应官能团的反应肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OH1
5、C17 醇酮基醇酮基还原性还原性A. 呈色反应呈色反应肾上肾上腺皮腺皮质激质激素药素药物物Cu2O橙红色橙红色碱性碱性酒石酸铜酒石酸铜B. 沉淀反应沉淀反应Ag黑色黑色氨制硝酸银氨制硝酸银甾酮类甾酮类激素药激素药物物呈色呈色羰基试剂羰基试剂2. C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼黄体酮黄体酮异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色）具有甲酮具有甲酮基或活泼基或活泼亚甲基的亚甲基的甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛3. 甲酮基甲酮基黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫
6、色亚硝基铁亚硝基铁 氰化钠氰化钠其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸4. 酚羟基酚羟基含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银5. 乙炔基乙炔基有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl6. 有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈色呈色 茜素氟蓝茜素氟蓝蓝紫色蓝紫色F-香香7. 酯的反应酯的反应特臭特臭特臭特臭二、制备衍生物测定熔点二、制备衍生物测定熔点三、紫外分光光度法三、紫外分光光度法四、红外光谱法（四、红外光谱法（特征性强特
7、征性强） 中国药典上收载的甾体激素类药物均有红外光谱图。五、薄层色谱法五、薄层色谱法六、六、HPLC 第三节特殊杂质检查第三节特殊杂质检查 其它甾体、硒、残留溶剂、游离磷酸盐（一）有关物质（其他甾体）（一）有关物质（其他甾体）1.定义定义 2. 与标示药物结构不同的与标示药物结构不同的甾体化合物都称为甾体化合物都称为“其他甾体其他甾体”Li/NH3 C2H5OH弱酸弱酸雌二醇雌二醇3甲醚甲醚苯丙酸诺龙的合成路线苯丙酸诺龙的合成路线III强酸强酸III苯丙酰氯苯丙酰氯HCl3. 特点特点4. （1）可能存在多个甾体杂质）可能存在多个甾体杂质5. （2）结构类似）结构类似2. 来源来源 原料、中间
8、体、异构体、降解产物原料、中间体、异构体、降解产物4. 方法（具有一定分离能力）方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）（1）TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色（2）HPLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积规定杂质峰面积硒硒二、二、来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢剧毒剧毒原理原
9、理方法方法三、残留溶剂三、残留溶剂（灵敏度法）（灵敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限= 3.1ng 0.3%丙酮丙酮 0.5% 内标法内标法 + 校正因子校正因子GC法法四、游离磷酸盐四、游离磷酸盐地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法对照品法原理：原理：方法：方法：第四节含量测定一一、HPLC, USP、BP、JP均均采采用用, RPHPLC（大多内标法）（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法甾体杂质，对利
10、用结构特征设计的比色法有干扰）有干扰）特点特点 用样量少，灵敏度高，分离效用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快果好，测定速度快二、二、 UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素三、三、 比色法比色法（一）异烟肼比色法（一）异烟肼比色法（二）四氮唑比色法（二）四氮唑比色法（三）（三）kober反应比色法反应比色法l（一）、异烟肼比色法（一）、异烟肼比色法l1原理 C3酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量
11、。2、反应条件（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。 HCl浓度：0.0074mol/L （1000ml醇中含0.625ml浓HCl） 异烟肼浓度：0.0365mol/L (0.5mg/ml)(3) 水分、水分、O2与光线的影响与光线的影响含水量含水量腙水解腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响与光线无影响温度温度(4)t （3）水分的影响 甾体激素与异烟肼的缩合反应为可逆反应，所以含水量升高可促使反应逆转而水解，使吸收度降低（H2OA）(5) 反应的专属性反应的专属性 在
12、该反应条件下， 对43酮具有一定的专属性 C20酮基反应慢， C17酮基反应慢； C11酮基不反应 43酮：室温下，30反应完全。 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C17 -醇酮基醇酮基强还原性强还原性1. 原理原理OH -还原还原二、四氮唑比色法二、四氮唑比色法2四氮唑盐的种类：（1）红四氮唑： 2,3,5三苯基氯化四氮唑 （2,3,5triphenyltetrazoliumchloride） 缩写TTC 或RT（Red tetrazolium）（2）蓝四氮唑：3,3二甲氧苯基双4，4（3,5二苯基）氯化四氮唑3,3-dianisole-bis4,4-(3,5-diphenyl)triphe
13、nyltetrazoliumchloride 缩写BT ( Blue tetrazolium ) OOH-分子重排分子重排三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）蓝四氮唑蓝四氮唑（BT）双甲瓒（暗蓝）双甲瓒（暗蓝）3、测定法测定法lATTC法 BP(1988); ChP(1995)：lBBT法 USP(xxIII )4、讨论讨论 结构、反应温度和时间、水分、碱浓度、空气中氧、试剂类别和浓度等，对反应速度，呈色强度和稳定性有影响。（1）官能团位置的影响 a C11： 11位酮基反应速度快于11位羟基 可的松氢化可的松lb C21：-羟基（C21-O
14、H）l 21 -OH酯化后较母体羟基反应速度慢 即：游离体酯类如：可的松醋酸可的松 简单酯复杂酯， 醋酸酯磷酸酯琥珀酸酯三甲基醋酸酯（2） 溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 A 无水乙醇无水乙醇l（3）液性：）液性： 必要条件：强碱性 以(CH3)4N+OH-结果较满意 （4） O2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O2影响影响颜色强颜色强度和稳度和稳定性定性隔绝空气、隔绝空气、 快速、充快速、充N2（5） 温度与时间温度与时间t甲瓒分解甲瓒分解%
15、ChP 25 4045BP 30 1h1. 1. 原理原理max=465max=515雌激素雌激素三、三、Kober反应比色法反应比色法雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚max=465max=515 Kober反应缺点：l（1）条件较难控制，易出双色黄+红l（2）重现性较差： 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反应时间和温度的影响。 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定剂，赋形剂,溶剂对测定有干扰。1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构特征与分析方、熟悉本类药物的分类，掌握其结构特征与分析方法的关系；法的关系；2、掌握某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法；、掌握某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法；3、掌握本类药物中其他甾体的检查方法，了解其他、掌握本类药物中其他甾体的检查方法，了解其他特殊杂质的检查特殊杂质的检查第十五章第十五章 复习内容复习内容4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法 的原理、方的原理、方法及测定条件。了解法及测定条件。了解UV法、法、Kober反应比色法及反应比色法及HPLC法在其含量测定中的应用法在其含量测定中的应用
