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1、第四模块第四模块 色谱检测技术色谱检测技术第二节第二节 液相色谱法液相色谱法第七章色谱分析法第七章色谱分析法学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题知识目标：知识目标： 理解高效液相色谱法的含义及特点；掌握常用术语；理解高效液相色谱仪的结构组成；掌握高效液相色谱法的主要应用。技能目标：技能目标：能使用高效液相色谱仪对药物进行分析。学习目标学习目标学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课
2、内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题复习提问复习提问2.气相色谱法定性 和定量依据。1.写出气相色谱 法流程。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题)新课大纲新课大纲 本章主要内容本章主要内容一、概述及基本原一、概述及基本原理理二、色谱条件检测二、色谱条件检测器器 三、定性和定量方三、定性和定量方法法四、在药物分析中四、在药物分析中的应用的应用 学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复
3、习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题一、概述及基本原理 是用是用高压输液泵高压输液泵将具有不同极性的将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等液等流动相泵入流动相泵入装有固定相的装有固定相的色谱柱色谱柱，经经进样进样阀注入供试品，由流动相带入柱阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被内，在柱内各成分被分离分离后，依次进入后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。录。1.高效液相色谱法流程高
4、效液相色谱法流程学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题与经典液相色谱法一致。与经典液相色谱法一致。1.按按固定相固定相的聚集状态不同分为的聚集状态不同分为:液液-固固色谱法和色谱法和液液-液液色谱法。色谱法。2.按按分离分离原理不同分为原理不同分为:吸附
5、色谱、分配色谱、离子交换色谱吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。和凝胶色谱法四类。2.高效液相色谱法的分类高效液相色谱法的分类学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题不但具有不但具有高效、高速、高灵敏度高效、高速、高灵敏度的特点的特点还由于它的还由于它的流动相流动相（载液）（载液）种类种类比气相色比气相色谱的流动相（载气）多，因此可选用两种或谱的流动相（载气）多，因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相，可提高选择多种不同比例的
6、液体作流动相，可提高选择性。性。此外，液相色谱的此外，液相色谱的馏分馏分比气相色谱易于收比气相色谱易于收集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。构提供纯样品。3.高效液相色谱与气相相比：高效液相色谱与气相相比：学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题但是，高效液相色谱的但是，高效液相色谱的固定相的分固定相的分离效率离效率、检测器的检测范围检测器的检测范围以及以及灵敏灵敏度度等方面，目前还不如气相
7、色谱法。等方面，目前还不如气相色谱法。此外对于此外对于气体气体和易挥发物质的分析和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法，因此高效方面也远不如气相色谱法，因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短，相辅相成。互相取长补短，相辅相成。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题黄芩苷：保留时间12.048min双黄连色谱图及保留值色谱图及保留值学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新
8、课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题大黄酸标准品大黄酸标准品HPLC色谱图色谱图学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题常通口服液常通口服液HPLC色谱图色谱图学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题分离度
9、：分离度：1）色谱分离的根本目）色谱分离的根本目的是使样品中各组分的是使样品中各组分相互分离相互分离2）用分离度定量表示）用分离度定量表示相邻两峰的分离程度，相邻两峰的分离程度，也称分辨率。也称分辨率。3）越大表示分离越好）越大表示分离越好学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题
10、课后习题课后习题课后习题液固色谱固定相：液固色谱固定相：硅胶硅胶无定形：无定形：YWG球形：球形：YQG堆积硅珠：堆积硅珠：YQG高分子多孔小球高分子多孔小球：YSG固固定定相相与与流流动动相相学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题非极性非极性：十八烷基：十八烷基 ODS(C18) 国产品：国产品： YWG- C18 H37 YQG - C18 H37 进口品：进口品：Partisil 5-ODS（无定形）（无定形）极性极性：氨基、氰基：氨基
11、、氰基 国产品：国产品： YWG- CN YQG -NH2 进口品：进口品：Zorbax-CN(球形）球形） 化化学学键键合合相相：硅硅氧氧烷烷型型学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题1.不与固定相发生化学反应不与固定相发生化学反应2.对样品有适宜的对样品有适宜的溶解度溶解度：太小不易分离、：太小不易分离、太大易产生沉淀太大易产生沉淀3.必须与检测器相适应，如紫外，检测波必须与检测器相适应，如紫外，检测波长大于截止波长（当吸光度长大于截止波
12、长（当吸光度A=1)4.粘度小粘度小5.洗脱方式：恒组成溶剂洗脱、梯度洗脱洗脱方式：恒组成溶剂洗脱、梯度洗脱流动相的基本要求：流动相的基本要求：学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题二、仪器构造二、仪器构造学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题高效液相色高效液相色谱仪主要有谱仪主要有进进样系
13、统、输液样系统、输液系统、分离系系统、分离系统、检测系统统、检测系统和数据处理系和数据处理系统五部分构成。统五部分构成。进样系统进样系统输液系统输液系统分离系统分离系统检测系统检测系统数据处理系统数据处理系统学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题一般采用隔膜注射进样器或高一般采用隔膜注射进样器或高压进样瞬间完成进样操作，压进样瞬间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。析样品的重复性是有益的。
14、 进样系统进样系统学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题该系统包括高压泵、流动相贮存该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。器和梯度仪三部分。输液系统输液系统学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题该系统包括色谱柱、该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。连接管和恒温器等。分离系统分离系统学
15、习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题高效液相色谱常用的检高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。光检测器和荧光检测器三种。检测系统检测系统学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题该系统可对测试数据进行采集、该系统可对测试数据进行采集、贮存、
16、显示、打印和处理等操作，使贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。开展。数据处理系统数据处理系统学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题输液泵及梯度泵输液泵及梯度泵恒流：螺旋往复泵隔膜柱塞（用的最多）恒压：梯度泵：用于改变溶剂的组成分高压及低压梯度兩种方式2.主要部件主要部件学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内
17、容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题思考：为什么用高压泵？因为填料颗粒小，具有高的柱效，但会因为填料颗粒小，具有高的柱效，但会引起高阻力，因此用高压输送流动相。引起高阻力，因此用高压输送流动相。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题进样器进样器 六通阀进样器是高效液相色谱系统中最六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器。理想的进样器。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复
18、习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题自动进样器，是具有极高重复性和精度的样品进样系统。样品数最多可达384个（2个样品槽合计），样品架上可有84个样品瓶，或者50个2ml的样品瓶。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题色谱柱：色谱柱：由由柱管柱管（不锈钢）（不锈钢）和和固定相固定相（化学键合相：药物分析中（化学键合相：药物分析中90%用反用反相键
19、合相，如相键合相，如C18)组成组成学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题 智能型智能型HPLC柱柱箱，温度范围为箱，温度范围为室温以上室温以上10-80，控温精度，控温精度为为 0.1， 可可放置放置40CM长的长的色谱柱。色谱柱。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题（1）紫外检测器）紫
20、外检测器该检测器适用于对紫外光（或可见光）该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测。其特点：使用有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为高（检测下限为1-10gml）；线性范）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。测梯度溶液洗脱的样品。 检测器：检测器：学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容
21、本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题（2）示差折光检测器）示差折光检测器凡具有与流动相折光率不同的样品组分，凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。目前，糖类均可使用示差折光检测器检测。目前，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测下限为下限为10-7gml），流动相的变化会引起），流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。析，也不适用于梯度洗
22、脱样品的检测。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题（3）荧光检测器）荧光检测器凡具有荧光的物质，在一定条件下，凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检
23、测下限为度很高（检测下限为10-1210-14gml），），痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。 学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题（4）. Model 6000二级管阵列紫外检测器二级管阵列紫外检测器学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题三、定性
24、和定量方法三、定性和定量方法定性参数：保留时间。定量参数：峰高或峰面积。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题1.外标法：一系列浓度不同的标准品，准确一系列浓度不同的标准品，准确进样，得色谱图，用峰面积或峰高与浓度绘进样，得色谱图，用峰面积或峰高与浓度绘制校准曲线，由其回归方程计算样品的浓度。制校准曲线，由其回归方程计算样品的浓度。（样品溶液的浓度用样品峰与标准品峰的直（样品溶液的浓度用样品峰与标准品峰的直接面积比计算。）接面积比计算。）样品
25、浓度样品峰面积标准品浓度标准品峰面积含量测定：含量测定：学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题要求：1）精密度与进样量有关，进样量重复性好能得到好的精密度2）严格控制实验条件，仪器稳定，如流速、温度学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题 1）内标物的要求：在样品中不存在、与样品完全分离、与待
26、测物保留时间接近、与待测物峰大小相近、不与待测物中各组分发生化学反应、很纯且贮在职稳定。2）面积比样品峰面积 内标峰面积 样品浓度样品面积比标准品浓度 标准面积比2.内标法：内标法：已知量的纯物质作内标物，加至准确称量样品和标准品中进行测定。学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题3）优点：只要被测组分及内标物出峰就可定量、与进样量的重复性无关、适于微量成分及杂质。缺点：样品配制麻烦及内标物不易寻找。4）实例：复方乙酰水扬酸片的测定学习目标学习
27、目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题测杂质时常采用此法）1)先用纯品测校正因子，因检测器对各组分灵敏度不同，使相同质量的不同组分得到的峰面积不同，因此需用校正因子。2)要求所有组分必须流出并能检测，计算待测组分占总峰面积的比值。Ci%= Aifi .100% Aifi3.峰面积归一化法：学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题
28、课后习题课后习题课后习题（一）在药典中应用的情况（一）在药典中应用的情况1.鉴别鉴别：以供试品与对照品的保留时间一致进行鉴别。以供试品与对照品的保留时间一致进行鉴别。如头孢、林可、可的松如头孢、林可、可的松2.检查检查：用于检查有关物质、分解产物，如乙烯雌酚：用于检查有关物质、分解产物，如乙烯雌酚：1ml含含0.5mg和和1ml含含0.01mg，记录至主成，记录至主成分保留时间的分保留时间的2倍，溶液倍，溶液1显示的杂质峰数不显示的杂质峰数不得超过得超过4个，各杂质的峰面积及其总和分别个，各杂质的峰面积及其总和分别不得大于溶液不得大于溶液2主峰面积的主峰面积的1/2和和1/3。3.含量测定含量
29、测定：列出色谱条件、系统适用性试验：列出色谱条件、系统适用性试验四、在药物分析中的应用四、在药物分析中的应用 学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题（二）在制剂的测定和稳定性的研究（二）在制剂的测定和稳定性的研究3.糖浆剂：泼尼松糖浆剂：泼尼松2.注射剂的测定：林可霉素注射剂的测定：林可霉素1.片剂的测定：复方甘草片片剂的测定：复方甘草片4.软膏剂：氟氢松软膏剂：氟氢松5.其他：布洛芬缓释胶囊、栓、乳膏其他：布洛芬缓释胶囊、栓、乳膏学习目标学
30、习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题(三)在中草药分析中的应用测定前先提取分离有效成分，再测定1.提取净化方法：溶剂提取、超声、固相萃取柱（加压使样品进入柱再水、甲醇洗，收集醇液进样）2.测定药物：如复方甘草冲剂中的甘草酸和绿原酸(四)体内药物分析血中、尿、胆汁、乳汁、脏器学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后
31、习题课后习题(五五)在兽药方面的应用：在兽药方面的应用：1.牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展 2.畜禽肉中土霉素、金霉素、四环素残留检查畜禽肉中土霉素、金霉素、四环素残留检查3.水中氯霉素残留水中氯霉素残留5.药物制剂中的含量及杂质限量的检查药物制剂中的含量及杂质限量的检查4.饲料中抗生素含量饲料中抗生素含量学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题本课小结本课小结学习目标学习目标学习目标学习目标复习提问复习提问复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课大纲新课大纲新课内容新课内容新课内容新课内容本课小结本课小结本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题课后习题课后习题课后习题1. 液相色谱法流程。3.什么是色谱图？什么是保留时间？2.液相色谱法定性和定量依据。4.液相色谱定性、定量方法主要有哪几种？
