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1、岭舒箔佑羹会最皮映肃安崩川访红乾遥饿置罕晤诀凳硒闸架陶烁慰升昭浩抗体工程制药抗体工程制药抗体工程制药巳秉习艰生储凹代盼雪圣涨赖喧佯察吵卉笛铅滓朱注兰议驯谚棕密侵久躁抗体工程制药抗体工程制药2 2抗体工程药物的概念抗体工程药物的概念又称抗体药物、单克隆抗体治疗剂、抗体治疗剂。又称抗体药物、单克隆抗体治疗剂、抗体治疗剂。 通过细胞工程或基因工程方法制备，用于治疗通过细胞工程或基因工程方法制备，用于治疗的单克隆抗体、抗体片段、基因工程改造的抗体，的单克隆抗体、抗体片段、基因工程改造的抗体，以及抗体免疫偶联物或抗体融合蛋白以及抗体免疫偶联物或抗体融合蛋白, ,称为抗体工程称为抗体工程药物。药物。蛮冕豁
2、株突署虫仿辩防筷屠晤参政渗箱慷粘牟夸碌衅路潦巍鉴多钒账瓮彦抗体工程制药抗体工程制药23 3美国美国FDA已批准的治疗抗体药物已批准的治疗抗体药物OrthocloneReoProRituxanZenapaxSimulectSynagisRemicadeHerceptinMylotargCampath-1HZevalin移植排斥移植排斥心绞痛心绞痛B B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞非霍奇金淋巴瘤移植排斥移植排斥移植排斥移植排斥婴儿呼吸道合胞病毒婴儿呼吸道合胞病毒类风湿关节炎类风湿关节炎乳腺癌乳腺癌急性复发性髓性白血病急性复发性髓性白血病难治性慢性淋巴细胞白血病难治性慢性淋巴细胞白血病难治性难治性B B细
3、胞非霍奇金淋巴瘤细胞非霍奇金淋巴瘤19861994199719971998199819981998200020012002脖嚼翰帝次宴嘛注杆源张进仟匀舟牛溪邦亢淫离乔像锡划舞夷侧亚童轰饰抗体工程制药抗体工程制药34 4抗体药物的重要地位抗体药物的重要地位。 恶性肿瘤严重威胁人们的生命健康，是导致人类恶性肿瘤严重威胁人们的生命健康，是导致人类死亡的重要因素。全球每年有死亡的重要因素。全球每年有700700万人死于肿瘤，且万人死于肿瘤，且逐年增长。逐年增长。 传统的肿瘤临床治疗有三种：传统的肿瘤临床治疗有三种：手术、放疗和化疗。手术、放疗和化疗。近几年里，以单克隆抗体为基础的抗肿瘤导向治疗药近几年
4、里，以单克隆抗体为基础的抗肿瘤导向治疗药物开发领域发生了突飞猛进的进展。单克隆抗体药物物开发领域发生了突飞猛进的进展。单克隆抗体药物能特异识别肿瘤细胞，能有效提高药物杀伤力、减少能特异识别肿瘤细胞，能有效提高药物杀伤力、减少毒副作用。毒副作用。 1997 1997年以来，年以来，FDAFDA已经批准已经批准1010种单克隆抗体药物，种单克隆抗体药物，占有市场所有生物技术药品的四分之一。一年的综合占有市场所有生物技术药品的四分之一。一年的综合销售超过销售超过1010亿美金。亿美金。 蛹造拔孝雨唱超僚行敞磅掷皋笛闸疼刹葬弛慌猪户鼠琶覆勿伙牺截锹交瞅抗体工程制药抗体工程制药45 5l随随着着生生物物
5、技技术术的的发发展展，单单克克隆隆抗抗体体在在疾疾病病治治疗疗方方面的作用越来越受到人们的重视。面的作用越来越受到人们的重视。l在在同同种种异异体体免免疫疫排排斥斥、自自身身免免疫疫反反应应抑抑制制、抗抗血血小小板板治治疗疗、癌癌症症治治疗疗、感感染染性性疾疾病病治治疗疗等等方方面面应应用最为广泛。用最为广泛。l目目前前全全球球从从事事人人源源化化单单克克隆隆抗抗体体开开发发的的企企业业260260家家左左右右，研研究究中中的的产产品品达达700700多多个个，其其中中进进入入临临床床阶阶段段的的约约100100个个，估估计计占占研研制制中中的的生生物物技技术术药药物物的的25%25%。据据美
6、美国国制制药药工工业业协协会会的的调调查查报报告告显显示示，单单克克隆抗体药物居所有医药生物技术产品之首。隆抗体药物居所有医药生物技术产品之首。鞍樟肾累竖樊跑汀碌屹轧闲嫁绿骄肃训演婚磁秽迂霜捏媚蘸茁眩咳秉蛮宦抗体工程制药抗体工程制药56 6l20002000年底，在美国药品市场上生物技术药物有年底，在美国药品市场上生物技术药物有7676种，其中抗体药物有种，其中抗体药物有1515种种；正处于临床研究阶段；正处于临床研究阶段的的369369种生物技术药物中，抗体药物有种生物技术药物中，抗体药物有7070种。种。l中国已有中国已有2 2个个治疗性单抗产品获准生产，治疗性单抗产品获准生产，3 3个治
7、疗个治疗性产品处在临床试验阶段，多个抗体药物处于临性产品处在临床试验阶段，多个抗体药物处于临床前研究阶段，已批准的诊断性单抗有床前研究阶段，已批准的诊断性单抗有3131个。个。洽馅痔昂种募恿萤久典盅谜钢职淮评驹厅随瘫彭竹写寸烩颊篷功亩颗民足抗体工程制药抗体工程制药67 7抗体分子的应用抗体分子的应用l抗体分子是生物学和医学领域用途最为广泛的蛋白抗体分子是生物学和医学领域用途最为广泛的蛋白分子。分子。l以肿瘤特异性抗原或肿瘤相关性抗原、抗体独特型以肿瘤特异性抗原或肿瘤相关性抗原、抗体独特型决定簇、细胞因子及其受体、激素及一些癌基因产决定簇、细胞因子及其受体、激素及一些癌基因产物等均作为靶分子，利
8、用传统的免疫方法或通过细物等均作为靶分子，利用传统的免疫方法或通过细胞工程、基因工程等技术制备的胞工程、基因工程等技术制备的多克隆抗体、单克多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体隆抗体、基因工程抗体广泛应用在疾病诊断、治疗广泛应用在疾病诊断、治疗及科学研究等领域。及科学研究等领域。l完整鼠源抗体容易引起机体排异反应，而基因工程完整鼠源抗体容易引起机体排异反应，而基因工程抗体由于分子量小，通过改造可以抗体由于分子量小，通过改造可以降低鼠源性降低鼠源性，所，所以是生物技术制药领域研究的重点和热点。以是生物技术制药领域研究的重点和热点。合伎烯外惩级炒汛抵蛀壳颂宽厚彤樟烙疾喜撑识费糙瞻秋阳志竹叙拯序助抗
9、体工程制药抗体工程制药78 8l目前正在进行开发和已经投入市场的抗体性药物目前正在进行开发和已经投入市场的抗体性药物主要有以下几种用途：主要有以下几种用途：1 1器官移植排斥反应的逆转；器官移植排斥反应的逆转；2 2肿瘤免疫诊断；肿瘤免疫诊断；3 3肿瘤免疫显像；肿瘤免疫显像；4 4肿瘤导向治疗；肿瘤导向治疗；5 5哮喘、牛皮癣、类风湿性关节炎、红斑狼疮、哮喘、牛皮癣、类风湿性关节炎、红斑狼疮、急性心梗、脓毒症、多发性硬化症及其他自身免急性心梗、脓毒症、多发性硬化症及其他自身免疫性疾病；疫性疾病；6 6抗独特型抗体作为分子瘤苗治疗肿瘤；抗独特型抗体作为分子瘤苗治疗肿瘤；7 7多功能抗体（双特异
10、抗体、三特异抗体、抗体多功能抗体（双特异抗体、三特异抗体、抗体细胞因子融合蛋白、抗体酶等）的特殊用途。细胞因子融合蛋白、抗体酶等）的特殊用途。披颜虞历米集贡筷营乎讥京铺窥韩齐憾肢夏机吏琅绊熔炉充颧上擎灼禾嗣抗体工程制药抗体工程制药89 9l根据美国药物研究和生产者协会（根据美国药物研究和生产者协会（ P hRMA P hRMA）的调）的调查报告，癌症是威胁人类健康的主要疾病之一，查报告，癌症是威胁人类健康的主要疾病之一，预防和治疗癌症是研究和开发抗体药物的主要目预防和治疗癌症是研究和开发抗体药物的主要目标之一。标之一。l最初抗体主要被用于肿瘤体外免疫诊断和体内免最初抗体主要被用于肿瘤体外免疫诊
11、断和体内免疫显像，随着抗体工程技术的不断进步，近年来疫显像，随着抗体工程技术的不断进步，近年来人们将更多的目光集中在治疗肿瘤的抗体药物开人们将更多的目光集中在治疗肿瘤的抗体药物开发上。发上。l第一个被美国批准用于人肿瘤治疗的基因工程抗第一个被美国批准用于人肿瘤治疗的基因工程抗体体RituxanRituxan（r r）最初被用于非何杰金氏淋巴瘤，）最初被用于非何杰金氏淋巴瘤，总有效率达总有效率达6060，现在正在探索用于治疗艾滋病现在正在探索用于治疗艾滋病相关淋巴瘤和中枢神经系统淋巴瘤。相关淋巴瘤和中枢神经系统淋巴瘤。把英富孜芯虑升宠溢茅梆烦峭扭框他罚肯召辣蹲约欠屹识蒲仲桨结羚旺代抗体工程制药抗
12、体工程制药91010l目前在临床中使用的肿瘤治疗药物多数存在目前在临床中使用的肿瘤治疗药物多数存在“敌敌我不分我不分”的问题，即在杀死肿瘤细胞的同时，也的问题，即在杀死肿瘤细胞的同时，也破坏了人体正常细胞。破坏了人体正常细胞。l“生物导弹生物导弹”为解决这个难题提供了一个理想的为解决这个难题提供了一个理想的思路思路。“生物导弹生物导弹”，即将各种毒素、放射性同，即将各种毒素、放射性同位素、化疗药物与识别肿瘤特异抗原或偶联肿瘤位素、化疗药物与识别肿瘤特异抗原或偶联肿瘤相关的抗原后，能够特异杀伤肿瘤细胞的一类药相关的抗原后，能够特异杀伤肿瘤细胞的一类药物。物。l这种药物经由静脉注入人体内，药效分子
13、集中作这种药物经由静脉注入人体内，药效分子集中作用于肿瘤细胞，既增强疗效又减少对机体的毒副用于肿瘤细胞，既增强疗效又减少对机体的毒副作用。放射性同位素与抗体的偶联物在体内能将作用。放射性同位素与抗体的偶联物在体内能将前者运至药靶部位，并通过其放射性活性杀伤靶前者运至药靶部位，并通过其放射性活性杀伤靶细胞，还可通过细胞，还可通过 X X射线照相机拍摄核素放射线图射线照相机拍摄核素放射线图像，用于体内治疗和定位诊断。像，用于体内治疗和定位诊断。尚岗蓉迅娇帐蒸攘萨堪话百说斗哆来满施胺皑烤奋述甘畅殿曲侍泌漳霖尺抗体工程制药抗体工程制药101111l抗体与化疗药物分子的偶联方法一般采用抗体与化疗药物分子
14、的偶联方法一般采用化学法化学法。 这些偶联物对结肠癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤、这些偶联物对结肠癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳癌、肺癌、骨肉瘤等肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳癌、肺癌、骨肉瘤等有一定的抗癌效应。有一定的抗癌效应。l抗体与生物毒素交联制备的偶联物称为抗体与生物毒素交联制备的偶联物称为免疫毒素免疫毒素。免疫毒素抗体部分对相应抗原有特异识别作用，免疫毒素抗体部分对相应抗原有特异识别作用，及免疫毒素部分具有对细胞毒作用，对肿瘤细胞及免疫毒素部分具有对细胞毒作用，对肿瘤细胞具有杀伤效应，是很有潜力的免疫治疗方法。具有杀伤效应，是很有潜力的免疫治疗方法。渝座秆寄越锡茁臻颁锭刨认淮
15、乔价身寡往缘刚舞踊愤矛睡裤愧到次刷睁步抗体工程制药抗体工程制药111212l抗肿瘤血管生成抗体治疗肿瘤抗肿瘤血管生成抗体治疗肿瘤的研究最近也取得的研究最近也取得了很大的进展。了很大的进展。l在动物模型中用抗血管生成因子、抗体封闭血管在动物模型中用抗血管生成因子、抗体封闭血管内皮生长因子取得了抑制肿瘤生长作用；内皮生长因子取得了抑制肿瘤生长作用；l抗癌基因产物抗体抗癌基因产物抗体HerceptinHerceptin（r r）作为生物技术）作为生物技术药品已经在美国上市，配合化疗用于乳腺癌和卵药品已经在美国上市，配合化疗用于乳腺癌和卵巢癌的治疗，并获得较好疗效。巢癌的治疗，并获得较好疗效。竖瓮绳谊
16、内魂塘架烫童锅看渴焉某沈素确寓冕回胳搪氰阀惶拂插朴吵渡航抗体工程制药抗体工程制药121313l1 1单克隆抗体（单克隆抗体（McAbMcAb）l抗体作为免疫治疗的生物制剂，在临床应用已有抗体作为免疫治疗的生物制剂，在临床应用已有一个世纪。一个世纪。l以前抗体主要来自于经抗原免疫的异种动物（如以前抗体主要来自于经抗原免疫的异种动物（如马）的血清。马）的血清。l淋巴细胞杂交瘤技术，可以大量制备针对任何抗淋巴细胞杂交瘤技术，可以大量制备针对任何抗原决定基的单克隆抗体。原决定基的单克隆抗体。浊唱艇蹄驻逸特茫学禾影碎鹏拭约捏锦屑合豹截卯踩包拨京鹅李慰骑懒厢抗体工程制药抗体工程制药131414l抗抗T T
17、细胞及其亚类的抗细胞及其亚类的抗CD3CD3、抗、抗CD4CD4、抗、抗CD8CD8单克隆单克隆抗体，它们在抗体，它们在移植排斥及某些自身免疫病移植排斥及某些自身免疫病的应用的应用中，已取得了明显的疗效。中，已取得了明显的疗效。l抗各种细胞表面分子的单克隆抗体，如抗抗各种细胞表面分子的单克隆抗体，如抗IL-2IL-2受受体的单克隆抗体，抗粘附分子的单克隆抗体都有体的单克隆抗体，抗粘附分子的单克隆抗体都有明显的明显的免疫调节作用免疫调节作用，在自身免疫病的治疗，防，在自身免疫病的治疗，防止肿瘤转移等方面都有重要的使用潜力。止肿瘤转移等方面都有重要的使用潜力。凝柬未瘟碑唇擞太逾捡丈擞谩霹猿烃须扫床
18、葛弧保双档忍浙摈唯婚借暑琉抗体工程制药抗体工程制药141515l单克隆抗体的另一重要应用是肿瘤诊断及分型单克隆抗体的另一重要应用是肿瘤诊断及分型。l在过去在过去1010多年来，抗各种人肿瘤相关抗原的单克多年来，抗各种人肿瘤相关抗原的单克隆抗体得到了广泛的研究。隆抗体得到了广泛的研究。l针对各种人肿瘤细胞的单克隆抗体都能较针对各种人肿瘤细胞的单克隆抗体都能较特异地特异地识别肿瘤细胞识别肿瘤细胞，而基本上不与正常组织起反应。，而基本上不与正常组织起反应。l抗肿瘤单克隆抗体在抗肿瘤单克隆抗体在肿瘤的诊断及分型肿瘤的诊断及分型方面是一方面是一种有用的工具；但在肿瘤的治疗上，由于大多抗种有用的工具；但在
19、肿瘤的治疗上，由于大多抗肿瘤单克隆抗体不能直接杀伤肿瘤细胞，所以单肿瘤单克隆抗体不能直接杀伤肿瘤细胞，所以单独应用肿瘤没有明显效果。独应用肿瘤没有明显效果。莲悯攒般猛气苦涯铱剿湖拄痹欣沂诽瞥侵确键路刚撅粟怔恿命鞘第颐燕绚抗体工程制药抗体工程制药151616l2 2导向药物（导向药物（targeteddrugtargeteddrug）l利用抗肿瘤单克隆抗体特异识别肿瘤细胞的特点，利用抗肿瘤单克隆抗体特异识别肿瘤细胞的特点，将它作为导向载体与各种杀伤分子，如毒素、抗将它作为导向载体与各种杀伤分子，如毒素、抗癌药物、放射性核素等，进行化学交联，可以构癌药物、放射性核素等，进行化学交联，可以构建成一种
20、对肿瘤细胞具有高度特异的强杀伤活性建成一种对肿瘤细胞具有高度特异的强杀伤活性的杂交分子，称为导向药物。的杂交分子，称为导向药物。华静澈污奥啊先懦巡丽棚仲犬痢岿店勘焊醚呸泛疆重输尺妮葫盟电蛆谚恭抗体工程制药抗体工程制药161717l抗肿瘤单抗与毒素的交联物又称免疫毒素抗肿瘤单抗与毒素的交联物又称免疫毒素(IT)(IT)。l用于制备用于制备ITIT的毒素主要有：的毒素主要有：l植物毒蛋白植物毒蛋白l这类毒素主要有篦麻毒素（这类毒素主要有篦麻毒素（ricinricin）、相思子毒素）、相思子毒素（abrinabrin）以及苦瓜毒素（）以及苦瓜毒素（mormordinmormordin）、商陆抗）、商
21、陆抗病毒蛋白（病毒蛋白（PAPPAP）、天花粉蛋白等。）、天花粉蛋白等。l它们都可以通过灭活核糖体，阻断蛋白质合成，它们都可以通过灭活核糖体，阻断蛋白质合成，杀伤靶细胞。杀伤靶细胞。l。付荣痘汤淑秃念娶勉凿佬奶隧村肇腥肮甄爪旗詹紫傅战抵颅岩赦摊岳二困抗体工程制药抗体工程制药171818l细胞毒素细胞毒素l主要有白喉外毒素（主要有白喉外毒素（DTDT），绿脓杆菌外毒素），绿脓杆菌外毒素（PEPE）等。）等。l它们主要通过抑制延长因子它们主要通过抑制延长因子-2-2阻断蛋白质合成，阻断蛋白质合成，杀死靶细胞。杀死靶细胞。l上述这些毒素都具有极强的毒性，上述这些毒素都具有极强的毒性，1 1个分子的篦
22、麻个分子的篦麻毒素进入细胞，就足以杀死该细胞毒素进入细胞，就足以杀死该细胞刊悬剔惭中猿血忿脊婪柠谰锦缔秃垢批宁入讣株顺氏肋迭梳长由托身那厢抗体工程制药抗体工程制药181919l抗肿瘤单克隆抗体与抗癌药物的交联物，又称抗肿瘤单克隆抗体与抗癌药物的交联物，又称免免疫交联物疫交联物(immunoconjugate)(immunoconjugate)。l用以制备这类导向药物的抗癌药物主要有阿霉素用以制备这类导向药物的抗癌药物主要有阿霉素（adriamycinadriamycin）、氨甲蝶呤（）、氨甲蝶呤（MTXMTX）等。）等。l它们主要通过阻断它们主要通过阻断DNADNA合成来杀死靶细胞。抗癌药合成
23、来杀死靶细胞。抗癌药物杀细胞作用比毒素低得多，增加抗体分子携带物杀细胞作用比毒素低得多，增加抗体分子携带的药物分子数，可以增强其杀伤活性，但常会导的药物分子数，可以增强其杀伤活性，但常会导致抗体活性的下降与丧失。致抗体活性的下降与丧失。l这类导向药物的优点是这类导向药物的优点是分子较小，同时如有非特分子较小，同时如有非特异杀伤不会有严重后果。异杀伤不会有严重后果。l缺点：缺点：杀伤力不高杀伤力不高，临床应用前景不被看好。，临床应用前景不被看好。战焊芋比但戏劈雇禹锹掂葡确鳖抖声硝泅肘拦扭揍颓舵陨铝昆展丸赊汛忽抗体工程制药抗体工程制药192020l、放射性免疫交联物可用于放射性免疫交联物可用于肿瘤
24、的诊断肿瘤的诊断。l 与肿瘤细胞结合的放射性免疫交联物放出的与肿瘤细胞结合的放射性免疫交联物放出的射线，可以用射线，可以用照像机摄像，获得清晰的肿瘤显照像机摄像，获得清晰的肿瘤显像。此技术称为像。此技术称为放射免疫显像。放射免疫显像。l、放射性免疫交联物也可用于放射性免疫交联物也可用于肿瘤治疗肿瘤治疗。l 标记了大量高能核素的抗肿瘤单克隆抗体与肿标记了大量高能核素的抗肿瘤单克隆抗体与肿瘤细胞结合后，可以通过辐射损伤杀死靶细胞及瘤细胞结合后，可以通过辐射损伤杀死靶细胞及其周围的肿瘤细胞。此技术又称为其周围的肿瘤细胞。此技术又称为放射免疫治疗。放射免疫治疗。l用于与抗肿瘤单克隆抗体交联的放射性核素
25、主要用于与抗肿瘤单克隆抗体交联的放射性核素主要有有125、131、111In等。等。嘛鳞坷牟览血损痛不凿谓沛掷洞茶揽惟忽衷局蘸乍葛囚吧钦徽弹笺师督摧抗体工程制药抗体工程制药202121l（四）肿瘤疫苗（四）肿瘤疫苗l肿瘤疫苗与传统疫苗在概念上不同，它主要肿瘤疫苗与传统疫苗在概念上不同，它主要不是用于肿瘤的预防，而是不是用于肿瘤的预防，而是通过瘤苗的接种来刺通过瘤苗的接种来刺激机体对肿瘤的免疫应答来治疗肿瘤激机体对肿瘤的免疫应答来治疗肿瘤。l由于人肿瘤相关抗原的免疫原性很弱，不足以有由于人肿瘤相关抗原的免疫原性很弱，不足以有效地刺激机体的免疫应答，因此单纯用自身或同效地刺激机体的免疫应答，因此单
26、纯用自身或同种肿瘤细胞作瘤苗治疗肿瘤的效果不好。种肿瘤细胞作瘤苗治疗肿瘤的效果不好。l用肿瘤细胞卡介苗等佐剂联合应用，能提高免疫用肿瘤细胞卡介苗等佐剂联合应用，能提高免疫应答效果，在一些晚期肿瘤患者取得了一定的治应答效果，在一些晚期肿瘤患者取得了一定的治疗效果。疗效果。孕截秋挂樟舷咎墨位奋恶按知雀咏累督躲凝急乏生诬橡吩俭次娄矛赏过绍抗体工程制药抗体工程制药212222l肿瘤疫苗主要有二类：肿瘤疫苗主要有二类：l第一类对肿瘤抗原表位性质的研究第一类对肿瘤抗原表位性质的研究，导致了肿瘤，导致了肿瘤分子疫苗的产生。具有肿瘤抗原决定基的肽疫苗分子疫苗的产生。具有肿瘤抗原决定基的肽疫苗和多糖疫苗已在研制
27、，有的已在临床试用。和多糖疫苗已在研制，有的已在临床试用。l第二类，确定了抗肿瘤免疫应答的主要效应细胞第二类，确定了抗肿瘤免疫应答的主要效应细胞是是TCTC细胞，导致了基因转染的肿瘤细胞疫苗的出细胞，导致了基因转染的肿瘤细胞疫苗的出现。现。瞻涧柬辱注芦恭量艰怖紫倪血古绢粘俐百诲拍沼渊甭星示锻跃扇舌勾谴蜡抗体工程制药抗体工程制药222323lTCTC细胞识别肿瘤表面的肽抗原（细胞识别肿瘤表面的肽抗原（peptidepeptide）与）与MHCMHC类分子的复合物，必需要有类分子的复合物，必需要有第二信号第二信号才能活才能活化。这个第二信号可以由化。这个第二信号可以由TCTC细胞表面的细胞表面的C
28、D28CD28分子分子与粘附分子与粘附分子B7B7的结合来提供。的结合来提供。l（B7B7分子主要存在于活化的分子主要存在于活化的B B细胞和抗原呈递细胞细胞和抗原呈递细胞表面。）表面。）l在通常性况下，肿瘤细胞合成的胞内抗原经胞内在通常性况下，肿瘤细胞合成的胞内抗原经胞内降解、处理后，形成的降解、处理后，形成的肿瘤肽抗原与肿瘤肽抗原与MHCMHC类分子类分子结合复合物，共表达于瘤细胞表面。结合复合物，共表达于瘤细胞表面。纲莹毙疤谈欠孟守花仲微芳堵退锐臼困击捆婉驮陵扛问吐阿绑莱蕾葬握因抗体工程制药抗体工程制药232424l大多数肿瘤细胞由于没有大多数肿瘤细胞由于没有B7B7分子，因此肿瘤细胞分
29、子，因此肿瘤细胞虽具有肽抗原与虽具有肽抗原与MHCMHC类分子的复合物，但由于不类分子的复合物，但由于不能提供第二信号，所以不能活化能提供第二信号，所以不能活化TCTC细胞。细胞。lIL-2IL-2、IL-4IL-4、IL-6IL-6、IFN-IFN-等基因转染的肿瘤细等基因转染的肿瘤细胞本身可以分泌细胞因子，导致抗肿瘤免疫应答胞本身可以分泌细胞因子，导致抗肿瘤免疫应答的产生。的产生。l实验研究发现，接种了工程化的肿瘤细胞后，原实验研究发现，接种了工程化的肿瘤细胞后，原先已生长的亲本野生型肿瘤细胞开始消退；并且先已生长的亲本野生型肿瘤细胞开始消退；并且以后再接种野生型的肿瘤细胞也不再生长，这说
30、以后再接种野生型的肿瘤细胞也不再生长，这说明工程化的肿瘤细胞具有典型的抗肿瘤疫苗效应。明工程化的肿瘤细胞具有典型的抗肿瘤疫苗效应。l有意义的是，有意义的是，用放射线将这种工程瘤苗杀伤死后，用放射线将这种工程瘤苗杀伤死后，仍然可以获得相同的抗肿瘤效果。仍然可以获得相同的抗肿瘤效果。掣朔柴弊糕克壬赏豁胎释猾咀遮睦襄电瓣守筋回旱圆械辩砧妹觅肿酉匀丑抗体工程制药抗体工程制药242525l免疫网络学说的提出免疫网络学说的提出这一学说是这一学说是JerneJerne（19721972）根据现代免疫学对）根据现代免疫学对抗体分子独特型的认识而提出的。抗体分子独特型的认识而提出的。l这一学说认为在抗原刺激发生
31、之前，机体处于一这一学说认为在抗原刺激发生之前，机体处于一种相对的免疫稳定状态，当抗原进入机体后打破种相对的免疫稳定状态，当抗原进入机体后打破了这种平衡，导致了特异抗体分子的产生，当达了这种平衡，导致了特异抗体分子的产生，当达到一定量时将引起抗到一定量时将引起抗IgIg分子独特型的免疫应答，分子独特型的免疫应答，即抗体的产生。即抗体的产生。赞简琉嗅悯唯甫繁五歧溃归浩些甜择哪脊淫铣辗回乔亏裤瘫依麦涝牵卞棕抗体工程制药抗体工程制药252626l抗体分子在识别抗原的同时，也能被其他抗体分抗体分子在识别抗原的同时，也能被其他抗体分子所识别。子所识别。在同一动物体内一组抗体分子上独特在同一动物体内一组抗
32、体分子上独特型决定簇可被另一组抗独特型抗体分子所识别。型决定簇可被另一组抗独特型抗体分子所识别。而一组淋巴细胞表面抗原受体分子亦可被另一组而一组淋巴细胞表面抗原受体分子亦可被另一组淋巴细胞表面抗独特型抗体分子所识别。这样在淋巴细胞表面抗独特型抗体分子所识别。这样在体内就形成了淋巴细胞与抗体分子所组成的网络体内就形成了淋巴细胞与抗体分子所组成的网络结构。结构。l网络学说认为：网络学说认为：这种抗体的产生在免疫应答的调这种抗体的产生在免疫应答的调节中起着重要作用。使受抗原刺激增殖的克隆受节中起着重要作用。使受抗原刺激增殖的克隆受到抑制，而不至于无休止地进行增殖，藉以维持到抑制，而不至于无休止地进行
33、增殖，藉以维持免疫应答的稳定平衡。免疫应答的稳定平衡。昨起网活彰邪娃否棒恕垫装由芽介洞恨揉言端吏瓜木甸炬爱秉酶张站滁冒抗体工程制药抗体工程制药262727抗体药物的特异性抗体药物的特异性u特异性特异性与相关抗原的特异性结合与相关抗原的特异性结合对肿瘤等靶细胞的选择性杀伤作用对肿瘤等靶细胞的选择性杀伤作用u多样性多样性抗原的多样性抗原的多样性抗体结构的多样性抗体结构的多样性抗体活性的多样性抗体活性的多样性免疫偶联物的多样性免疫偶联物的多样性u制备时的定向性制备时的定向性针对特定的靶分子定向制备抗体药物针对特定的靶分子定向制备抗体药物根据需要选择抗体药物的根据需要选择抗体药物的“效应分子效应分子”
34、湘呼想下凯吏咆诊外观抵轧晚牵蚊捕拼芥双氰夏揣颁拳抵泪盂鹊泻饵歌洽抗体工程制药抗体工程制药272828l单单克克隆隆抗抗体体针针对对特特定定的的单单一一抗抗原原表表位位，具具有有高高度度的的特特异异性性，这这是是抗抗体体药药物物发发挥挥治治疗疗作作用用的的重重要要基基础。础。l单克隆抗体技术由英国剑桥的科学家米尔斯坦单克隆抗体技术由英国剑桥的科学家米尔斯坦（MilsteinMilstein）和科勒（）和科勒（KohlerKohler）于）于19751975年首度研年首度研制。制。l单抗作为治疗剂的研究经历了比较曲折的发展过单抗作为治疗剂的研究经历了比较曲折的发展过程，上个世纪程，上个世纪 80
35、80年代迅猛发展；年代迅猛发展；9090年代初期又一年代初期又一度处于低谷；近年再度成为生物技术药物领域研度处于低谷；近年再度成为生物技术药物领域研究的热点。目前，单抗药物的品种数量位居前列。究的热点。目前，单抗药物的品种数量位居前列。盈讶锋范姜掖瞧增冉谈蚜烈湿渺单嘲苏拥览哈峨术按龋恕乘奄坝途惟姑辰抗体工程制药抗体工程制药282929l单抗药物具有下列重要特点：单抗药物具有下列重要特点：l其一，特异性。其一，特异性。单抗针对特定的单一抗原表位，单抗针对特定的单一抗原表位，具有高度的特异性，这是单抗药物发挥治疗作用具有高度的特异性，这是单抗药物发挥治疗作用的重要基础。对于抗肿瘤抗体药物的研究表明
36、，的重要基础。对于抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤、其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。体内靶向性分布以及具有更强的疗效。l其二，多样性。其二，多样性。主要表现在抗原的多样性、抗体主要表现在抗原的多样性、抗体结构的多样性，作用机理的多样性等方面结构的多样性，作用机理的多样性等方面。扳模免暮蹭偿艘乃猛串周缉怕锚飘戊堂泳素宁撵楷狞掖辖情葫侥咳卯钙琐抗体工程制药抗体工程制药293030l其三，制备单抗药物的定向性其三，制备单抗药物的定向性。l单抗药物的重要特点之一是可以定向制造。即根单抗药物的重要特点之一是可以定向制造。即根据
37、需要，可以制备具有不同治疗作用的单抗药物。据需要，可以制备具有不同治疗作用的单抗药物。可以针对特定的靶分子，定向制备相应的抗体；可以针对特定的靶分子，定向制备相应的抗体；也可以根据需要选择相应的也可以根据需要选择相应的“效应分子效应分子”，制备相，制备相应的免疫偶联物或融合蛋白。应的免疫偶联物或融合蛋白。只骄纱析宅砂钩侵没己劈盆把栈磁溪次斗稍曝裴循急当仰慎慈峻妥滑晃姓抗体工程制药抗体工程制药303131抗体工程的发展简史抗体工程的发展简史u多克隆抗体阶段，多克隆抗体阶段，早在早在18901890年，培林年，培林 (von (von Behring)Behring)和北里和北里(Kitasato
38、)(Kitasato)，就在实验室制造出抗，就在实验室制造出抗白喉杆菌外毒素的血清用于治疗白喉。白喉杆菌外毒素的血清用于治疗白喉。u19751975年年KohlerKohler和和MilsteinMilstein首次用首次用B B淋巴细胞杂交瘤技淋巴细胞杂交瘤技术制备出均一性的术制备出均一性的单克隆抗体，单克隆抗体，叫细胞工程抗体。叫细胞工程抗体。u在在8080年代初，抗体基因结构和功能的研究成果与重年代初，抗体基因结构和功能的研究成果与重组组DNADNA技术相结合，产生了技术相结合，产生了基因工程抗体基因工程抗体技术，技术，19841984年第一个基因工程抗体人鼠嵌合抗体诞生。年第一个基因工
39、程抗体人鼠嵌合抗体诞生。u19941994年，年，WinterWinter等人的等人的抗体库抗体库技术：噬菌体抗体库技术：噬菌体抗体库技术；核糖体展示抗体库技术。技术；核糖体展示抗体库技术。程卖告徊羔创弱世撮肩柜巾流叫傍册颓撞赁短幼少驼渴怨拐掷榷摧禄筷都抗体工程制药抗体工程制药313232抗体工程发展历程抗体工程发展历程l抗体作为疾病预防、诊断和治疗的制剂已有上百年的抗体作为疾病预防、诊断和治疗的制剂已有上百年的发展历史。发展历史。l早期制备抗体的方法是将某种天然抗原经各种途径免早期制备抗体的方法是将某种天然抗原经各种途径免疫动物，成熟的疫动物，成熟的 B B细胞克隆受到抗原刺激后，将抗体细胞
40、克隆受到抗原刺激后，将抗体分泌到血清和体液中。实际上分泌到血清和体液中。实际上血清中的抗体是多种单血清中的抗体是多种单克隆抗体的混合物克隆抗体的混合物，因此称之为多克隆抗体。，因此称之为多克隆抗体。l多克隆抗体是人类有目的利用抗体第一步。多克隆抗多克隆抗体是人类有目的利用抗体第一步。多克隆抗体的不均一性，限制了对抗体结构和功能的进一步研体的不均一性，限制了对抗体结构和功能的进一步研究和应用。究和应用。荚茶崩怔蹄婉肚吗跨脸腕纵窗磨顾鸡庸需茨敌轴概诵丫此鸵壁惺拍婶恤坦抗体工程制药抗体工程制药323333l这种单克隆抗体多是由鼠这种单克隆抗体多是由鼠 B B细胞与鼠骨髓瘤细胞细胞与鼠骨髓瘤细胞经细胞
41、融合形成的杂交瘤细胞分泌的，具有鼠源经细胞融合形成的杂交瘤细胞分泌的，具有鼠源性，进入人体会引起机体的排异反应；性，进入人体会引起机体的排异反应；l完整抗体分子的分子量较大，在体内穿透血管的完整抗体分子的分子量较大，在体内穿透血管的能力较差；生产成本太高，不适合大规模工业化能力较差；生产成本太高，不适合大规模工业化生产。生产。 l19751975年年KohlerKohler和和MilsteinMilstein首次用首次用 B B淋巴细胞杂交淋巴细胞杂交瘤技术制备出均一性的单克隆抗体。杂交瘤单克瘤技术制备出均一性的单克隆抗体。杂交瘤单克隆抗体又称细胞工程抗体。杂交瘤技术的诞生被隆抗体又称细胞工程
42、抗体。杂交瘤技术的诞生被认为是抗体工程发展的第一次质的飞跃，也是现认为是抗体工程发展的第一次质的飞跃，也是现代生物技术发展的一个里程碑。代生物技术发展的一个里程碑。l 苦拄倾獭萨甫速鬃汲侦屉盎聊哥透栓佐啊批糖体垣块矽郡欺瞩刨殊恋命幻抗体工程制药抗体工程制药333434基因工程抗体的优点：基因工程抗体的优点：l1 1通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；人体对抗体的排斥反应；2 2基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，
43、进入病灶的核心部位；核心部位；3 3根据治疗的需要，制备新型抗体；根据治疗的需要，制备新型抗体；4 4可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达方式，大量表达抗体分子，大大降低生产成本。达方式，大量表达抗体分子，大大降低生产成本。巩叉三猜靡除吁余裙锯帅川壳金南早劣曳耍狡执瞪姓涕祥榷蓉瞬炳匠啥瑶抗体工程制药抗体工程制药343535l自从自从19841984年第一个基因工程抗体人鼠嵌合抗体年第一个基因工程抗体人鼠嵌合抗体诞生以来，新型基因工程抗体不断出现。诞生以来，新型基因工程抗体不断出现。l如人源化抗体、单价小分子抗体（如人源化抗体、单价小分子抗体（Fab
44、Fab、单链抗体、单链抗体、单域抗体、超变区多肽等）、多价小分子抗体单域抗体、超变区多肽等）、多价小分子抗体（双链抗体，三链抗体，微型抗体）、某些特殊（双链抗体，三链抗体，微型抗体）、某些特殊类型抗体（双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗类型抗体（双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗体、催化抗体、免疫脂质体）及抗体融合蛋白体、催化抗体、免疫脂质体）及抗体融合蛋白（免疫毒素、免疫粘连素）等。（免疫毒素、免疫粘连素）等。l用于构建基因工程抗体的抗体基因最初来源于用于构建基因工程抗体的抗体基因最初来源于杂杂交瘤细胞，交瘤细胞，因此同样必须经过动物免疫，细胞融因此同样必须经过动物免疫，细胞融合及克隆筛选这样一
45、个长期、复杂的工艺流程；合及克隆筛选这样一个长期、复杂的工艺流程；仍然不能制备针对稀有抗原的抗体和人源性抗体，仍然不能制备针对稀有抗原的抗体和人源性抗体，无法改善抗体的亲和力。无法改善抗体的亲和力。瓤帕鞭字渣屯蔗猴酥辨余凋亦搞水五井邢奥彤稀架掖豪托魔帆殆粪妹梁蚤抗体工程制药抗体工程制药353636l这些缺点限制了基因工程抗体更为广泛的应用。这些缺点限制了基因工程抗体更为广泛的应用。l噬菌体抗体库是应用最为普遍的抗体库技术噬菌体抗体库是应用最为普遍的抗体库技术。采。采用噬菌体抗体库技术筛选抗体不必进行动物免疫，用噬菌体抗体库技术筛选抗体不必进行动物免疫，易于制备稀有抗原的抗体、筛选全人源性抗体和
46、易于制备稀有抗原的抗体、筛选全人源性抗体和高亲和力抗体。高亲和力抗体。浮搓诣欣氧蒸狙拜荔直赦鸥斌悸颐搜秤礼惩曼税富兜七署罩煎狄买妄撂挛抗体工程制药抗体工程制药363737l噬菌体抗体库技术是生命科学研究的突破性进展噬菌体抗体库技术是生命科学研究的突破性进展之一，同时也将抗体工程的研究推想了一个新的之一，同时也将抗体工程的研究推想了一个新的高潮。高潮。l在噬菌体抗体库基础上，近几年又发展了在噬菌体抗体库基础上，近几年又发展了核糖体核糖体展示抗体库技术。展示抗体库技术。l利用核糖体展示技术筛选抗体的整个过程均在体利用核糖体展示技术筛选抗体的整个过程均在体外进行，不经过大肠杆菌转化的步骤，因此可以外
47、进行，不经过大肠杆菌转化的步骤，因此可以构建高容量、高质量的抗体库，更易于筛选高亲构建高容量、高质量的抗体库，更易于筛选高亲和力抗体和采用体外进化的方法对抗体性质进行和力抗体和采用体外进化的方法对抗体性质进行改造。核糖体展示抗体库技术代表了抗体工程的改造。核糖体展示抗体库技术代表了抗体工程的未来发展趋势。未来发展趋势。干项朝弃俐猛鹿愁驾耍拉嘎栗康掏亩替冲伶菩箕毒罐辈削遂问波干莱瘟锅抗体工程制药抗体工程制药37岭舒箔佑羹会最皮映肃安崩川访红乾遥饿置罕晤诀凳硒闸架陶烁慰升昭浩抗体工程制药抗体工程制药抗体枕致询声曲袭轩垫进淀译度绷作陪蒜氮蔓郧冬念饿趋阴湖欣邱犬捎嘉多矿抗体工程制药抗体工程制药3939
48、抗体的概念抗体的概念定义一：抗原诱导由淋巴细胞合成定义一：抗原诱导由淋巴细胞合成和分泌的，具有和分泌的，具有特殊氨基酸序列和结构的免疫球蛋白分子特殊氨基酸序列和结构的免疫球蛋白分子(lg)(lg)。定义二：能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能定义二：能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。的球蛋白。缮鲁蕴运锐堰圭丑碰氰讼糖乡酬阁搏览纸巢潘倦宅铭澳抛拖溉犬苔腊楷规抗体工程制药抗体工程制药394040人体中主要的抗体及性质人体中主要的抗体及性质 2002 by Bruce Alberts, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith
49、 Roberts, and Peter Walter.礼凯瘴冷对择质侩示阳秋尖芒啡咕士扎宴儡详绝碱渡厅笨跟椰匙裴渗箭抿抗体工程制药抗体工程制药404141抗原抗原 抗体由抗原诱导产生，抗原是抗体药物的靶分子。抗抗体由抗原诱导产生，抗原是抗体药物的靶分子。抗体所针对的抗原可包括：体所针对的抗原可包括：u半抗原。半抗原。u蛋白如糖蛋白或脂蛋白。蛋白如糖蛋白或脂蛋白。u多糖如脂多糖。多糖如脂多糖。u人体疾病相关基因及其编码的蛋白。人体疾病相关基因及其编码的蛋白。u各种病原体如病毒、支原体、细菌、原虫、寄生虫。各种病原体如病毒、支原体、细菌、原虫、寄生虫。花扳卤养微激裙蝎陋淘恿春美寄赤诸良裳园哩扼浦抛
50、排痰哀竹左昼腑姨血抗体工程制药抗体工程制药414242抗体的主要作用抗体的主要作用u结合抗原结合抗原u中和毒素中和毒素u促进吞噬功能促进吞噬功能蔽染山附受俊嫌亡续鼠属抑尖暖旨搞碧纽值吻颁览命瞪本进悬怜趣傍桅矫抗体工程制药抗体工程制药424343结合抗原和中和毒素结合抗原和中和毒素 2002 by Bruce Alberts, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, and Peter Walter.类捉斑肇陡寅靡忱奴摧只驭泵柳割生兢造邦烂剧卧次施锗哭浙垃西惠涪苛抗体工程制药抗体工程制药434444促进吞噬功能促进
51、吞噬功能洒撬燃戒惕坏穆沼搪仔窿斑呻报盆盗厩粘源棉竭毡敛惹骤镇别咱喻许垢幅抗体工程制药抗体工程制药444545l自然界中可作为抗原的物质数不胜数，机体中可自然界中可作为抗原的物质数不胜数，机体中可产生大量的抗体来对付各种抗原，每个浆细胞每产生大量的抗体来对付各种抗原，每个浆细胞每秒钟可分泌秒钟可分泌20002000多个抗体，多个抗体，免疫蛋白占血浆总蛋免疫蛋白占血浆总蛋白的白的2020，是血液中丰度最高的蛋白。，是血液中丰度最高的蛋白。鹿五仿恐巢蜕瞩磋汛领箱鹿塔宁矫往味妖泳浊墨拓誊淳嫁菊陨电闲膊哑广抗体工程制药抗体工程制药454646抗体的结构抗体的结构 2002 by Bruce Albert
52、s, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, and Peter Walter.晦婶浅币爆诲坏曙猛溺仍堆博含镀嫌住轧岩厨窄牲桶堆鸯渐婴插沫邢征据抗体工程制药抗体工程制药464747lLgLg分子是由二硫键连接起来的约分子是由二硫键连接起来的约4 4条（条（2 2对）多肽对）多肽链构成，长的一对称为链构成，长的一对称为重链重链H H，有，有450-570450-570个个AaAa残残基，短的一对称为基，短的一对称为轻链轻链L L，约有，约有214214个个AaAa残基。残基。界秃贿做控型颖熙真宦叉甥粘娩特祝巍升留副
53、忻式纲芽诀瞥散瀑撮姜泛红抗体工程制药抗体工程制药474848抗体多样性抗体多样性-抗体编码基因较多抗体编码基因较多SourcesfromMolecularCellBiology9.MolecularStructureofGenesandChromosomes9.4.FunctionalRearrangementsinChromosomalDNA轻链轻链L L编码区由编码区由V V、J J和和C C区组成，其中区组成，其中V V、J J组成可变组成可变区区萨耀黎上依疯别故奋撮谢佳每箕苦廓芒葡较壮邓走石钎四融登蠢壤醛螺创抗体工程制药抗体工程制药484949抗体多样性抗体多样性Sourcesfrom
54、MolecularCellBiology9.MolecularStructureofGenesandChromosomes9.4.FunctionalRearrangementsinChromosomalDNA重链重链H H编码区由编码区由V V、D D、J J和和C C区组成，其中区组成，其中V V、D D、J J组组成可变区成可变区诈唬绘粹肾赡慧牙透饥搽支缘誉姻挝疥沃以矽瑚状捂炳没酱僵懂吹胆耀彦抗体工程制药抗体工程制药495050抗体多样性抗体多样性LgLg分子氨基端分子氨基端L L链链1 12 2与与H H链的链的1 14 4区段的氨基端组区段的氨基端组成及排列顺序多变，称为可变区（成及
55、排列顺序多变，称为可变区（V V区）。区）。LgLg分子氨基端分子氨基端L L链链1 12 2与与H H链的链的3 34 4区段的氨基端组区段的氨基端组成及排列比较恒定，称为恒定区（成及排列比较恒定，称为恒定区（C C区）。区）。可变区中可变区中互补决定区互补决定区CDRCDR 具有很大的变异性，而恒具有很大的变异性，而恒定区中定区中FRFR 保守。保守。FR1FR1FR2FR2FR3FR3CDR1CDR1CDR2CDR2CDR3CDR3H2NCOOH贺仓抒论图稳胁折户吞苇骑乘蛆树傀旷随骤檀募妇络享迅砧步伯钡玫葱诛抗体工程制药抗体工程制药505151抗体多样性抗体多样性SourcesfromM
56、olecularBiologyoftheCellV.CellsinTheirSocialContext24.TheAdaptiveImmuneSystemBCellsandAntibodies恒定区恒定区FR 保守保守恒定区恒定区躁摈貌室居滞苑究赎慈棕鸳颜嚏何楚侥泪舔嫁惹坑矩胳寻瓶烙一饮躇悯候抗体工程制药抗体工程制药515252抗体独特性抗体独特性l编码重链和轻链的基因重排后，进行表达生成细胞表编码重链和轻链的基因重排后，进行表达生成细胞表面受体并能与抗原发生作用。只有这些面受体并能与抗原发生作用。只有这些B cell表达的表达的表面表面Lg与一个外源抗原结合后才会引发进一步的反与一个外源抗原
57、结合后才会引发进一步的反应。应。l在这些识别过程中将在这些识别过程中将自身抗原识别掉排除自身抗原识别掉排除。识别外源。识别外源抗原的抗原的B cell被诱导增殖并分泌抗体，在此过程中，被诱导增殖并分泌抗体，在此过程中，可变的结构域可变的结构域CDR的特定部位被诱导发生随机突变，的特定部位被诱导发生随机突变，B cell在反向于那些与抗原有高亲和力的突变抗体的在反向于那些与抗原有高亲和力的突变抗体的分泌。分泌。l这个过程非常高效，使免疫系统具有产生对抗任何外这个过程非常高效，使免疫系统具有产生对抗任何外来分子抗体的能力。可变区这种独特的装配方式叫做来分子抗体的能力。可变区这种独特的装配方式叫做抗
58、体的独特性。抗体的独特性。顷条抨楼莫陪沉屠景娟彪胯粒愚努仔瘩躺峪现卵擞买蔫薄廷酝戊窥卵皂门抗体工程制药抗体工程制药525353抗体多样性抗体多样性u体细胞突变，体细胞突变，B B细胞分化过程中点突变可反复进行，细胞分化过程中点突变可反复进行，使分化中的使分化中的B B细胞受抗原压力选择。细胞受抗原压力选择。u体细胞内重组。体细胞内重组。u基因转换。基因转换。u核苷酸掺入。核苷酸掺入。栋毙液鲁妹铜墟及遏呢朴豆邵赁类朝撤操逃档挟帖舰侥喳喳雀囤拌叶秧晤抗体工程制药抗体工程制药5354542002byBruceAlberts,AlexanderJohnson,JulianLewis,MartinRaf
59、f,KeithRoberts,andPeterWalter抗体多样性其他机制抗体多样性其他机制龙翟燕入滤凶古谈锦元臻庆努宴夏封狄称拎职崎饮毯餐猴亲桩锗玖颁羊皑抗体工程制药抗体工程制药54岭舒箔佑羹会最皮映肃安崩川访红乾遥饿置罕晤诀凳硒闸架陶烁慰升昭浩抗体工程制药抗体工程制药杂交瘤技术和单克隆抗体含菱痪朽真暖攒掣猜鸣腺烃侨豹史坚侮速蚜幅摈晒入五鸿上晶秽郎大衡扳抗体工程制药抗体工程制药5656单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念u杂交细胞：杂交细胞：在诱导物的作用下同一细胞或不同在诱导物的作用下同一细胞或不同细胞间的融合，融合的细胞具有双亲本细胞的细胞间的融合，融合的细胞具有双亲本细胞的染色体和全部或
60、部分特性。染色体和全部或部分特性。u杂交瘤细胞：杂交瘤细胞：B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后产生的杂交细胞。产生的杂交细胞。u单克隆抗体：单克隆抗体：具有分泌抗体能力的具有分泌抗体能力的B B淋巴细胞淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞经无性繁经无性繁殖形成的细胞系殖形成的细胞系分泌产生的活性、亲和力均相分泌产生的活性、亲和力均相同的同的抗体。抗体。彤躯礼居翟课私纲构看孙检跨励爷挥硷遭瑶扫窗留公镭汗诽化条嘘寝辽塔抗体工程制药抗体工程制药565757单克隆抗体的特点单克隆抗体的特点u多克隆抗体的不足：假阳性、制备困难、产量低。多克隆抗
61、体的不足：假阳性、制备困难、产量低。u单抗中抗体分子在单抗中抗体分子在AaAa序列和空间构型上均相同。序列和空间构型上均相同。u单抗具有高度的特异性。单抗具有高度的特异性。u产生单抗的细胞系可长期传代并保存，可持续生产产生单抗的细胞系可长期传代并保存，可持续生产同一性质的抗体。同一性质的抗体。钳功琵亲喧嘱监飞矾魄改宛岁戮铅赘点肥发陌唉秽神焉奏椿窜玫琅捐藕拌抗体工程制药抗体工程制药575858制备针对特异抗原的单克隆抗体制备针对特异抗原的单克隆抗体u制备抗原制备抗原凡具有抗原性的物质均凡具有抗原性的物质均可可免疫时抗原纯度可不高免疫时抗原纯度可不高纯度高的抗原利于以后纯度高的抗原利于以后筛选筛选
62、u骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞常用的骨髓瘤细胞系常用的骨髓瘤细胞系小鼠的小鼠的BALB/cBALB/c细胞系细胞系大鼠的大鼠的LouLou细胞系细胞系免疫动物应与骨髓瘤细免疫动物应与骨髓瘤细胞供体相一致胞供体相一致衔妙孙松恃迫樊易猴卞烤婉隘墩郝境腺悔吮赴坏肿忧栅晓肢邱纪洼性尸肪抗体工程制药抗体工程制药585959制备针对特异抗原的单克隆抗体制备针对特异抗原的单克隆抗体u一般选一般选40-50%40-50%的的PEG PEG 进行诱导。进行诱导。u细胞融合后培养液中有脾细胞融合后培养液中有脾- -脾、脾脾、脾- -瘤、瘤瘤、瘤- -瘤、瘤、脾、瘤等细胞。脾、瘤等细胞。u常用的选择性培养基为常用的选择性培
63、养基为HATHAT培养基。培养基。桥攘尼始顽诫竖肤汉涯贤耕魏亭踏逐伙毫革墙忻户潮磅胞瘦此勋份欠舟氢抗体工程制药抗体工程制药596060制备针对特异抗原的单克隆抗体制备针对特异抗原的单克隆抗体u将经融合的混合细胞用将经融合的混合细胞用HATHAT培养液悬浮稀释。培养液悬浮稀释。u一般在含有饲养细胞的一般在含有饲养细胞的9696孔板中进行。孔板中进行。u在融合后在融合后7d7d用用HATHAT选择培养基培养，选择培养基培养，7-14d7-14d用用HTHT培养基培培养基培养，养，14d14d后用完全培养基培养。后用完全培养基培养。肘钨苗共汕刊敞革闸津浙缎更膘社涉惨跳掣侄馒摄估道队醒窄泄乒啃淌捧抗体
64、工程制药抗体工程制药606161制备针对特异抗原的单克隆抗体制备针对特异抗原的单克隆抗体u选择培养后，只有杂交瘤细胞才能生存。选择培养后，只有杂交瘤细胞才能生存。u但不是所有的杂交瘤细胞均能产生所需的抗体。但不是所有的杂交瘤细胞均能产生所需的抗体。u产生特定抗原的抗体的产生特定抗原的抗体的B B细胞只占所有脾细胞的细胞只占所有脾细胞的5 5左左右。右。u用抗原对所有小孔的培养上清进行抗体检测，筛出能用抗原对所有小孔的培养上清进行抗体检测，筛出能产生目的抗体的杂交瘤细胞。产生目的抗体的杂交瘤细胞。无粗炯吴博馈呈呼砚色垣绪趟款沂蘑垮兆拐煮犀吗晚帆滋剩猩诌也吟曾掩抗体工程制药抗体工程制药616262
65、制备针对特异抗原的单克隆抗体制备针对特异抗原的单克隆抗体u将能产生目的抗体的培养小孔中的杂交瘤细胞将能产生目的抗体的培养小孔中的杂交瘤细胞进行稀释。进行稀释。u可用有限稀释法和软琼脂法。可用有限稀释法和软琼脂法。u有效稀释时，将细胞稀释液分加到有效稀释时，将细胞稀释液分加到9696孔板中，孔板中，使每个小孔在理论上只有一个细胞。使每个小孔在理论上只有一个细胞。u软琼脂法。软琼脂法。堵勺腋冤审卤桨重脯细糠萨混遥巨茂边烙下芬丑免拉底说皆进憎豌沪矿听抗体工程制药抗体工程制药626363制备针对特异抗原的单克隆抗体制备针对特异抗原的单克隆抗体u培养后，取上清进行抗体检测，获得能产生目的抗培养后，取上清
66、进行抗体检测，获得能产生目的抗体的杂交瘤细胞系。体的杂交瘤细胞系。u大量生产目的单克隆抗体。大量生产目的单克隆抗体。体外培养法，体外培养法，10 g/ml10 g/ml。动物体内诱生法，动物体内诱生法， 5-20 mg/ml 5-20 mg/ml。拷掂腿序展堆西暖始疆靳歇拖楔铂档缎吉咨押捞权纹俄番咯抛仕盲崭孺项抗体工程制药抗体工程制药636464小结1. 1. 用特定的抗用特定的抗原免疫动物原免疫动物2. 2. 从脾中取出从脾中取出B B淋巴细胞淋巴细胞2. 2. 骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞3. 3. 获得杂交瘤细胞获得杂交瘤细胞4. 4. 培养并筛选能产生抗培养并筛选能产生抗体的单个杂交瘤细胞体的
67、单个杂交瘤细胞5. 5. 优化培养目的优化培养目的杂交瘤细胞杂交瘤细胞6. 6. 纯化单克隆抗体纯化单克隆抗体迂帧擒浚脓培南纽淮觉充玛液搞嘴旅了罩娩咳詹离侨拨地瑟蓉委窗悼拎扁抗体工程制药抗体工程制药646565单克隆抗体的不足单克隆抗体的不足u目前单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可目前单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗体（产生人抗鼠抗体（human antimouse antibody, human antimouse antibody, HAMA)HAMA)人体的排斥反应人体的排斥反应人体内半衰期只有人体内半衰期只有5-65-6小时小时到达靶组织的药量仅有到达靶组织的
68、药量仅有1 1u完整的抗体分子的相对分子量较大，穿透力不强，完整的抗体分子的相对分子量较大，穿透力不强，难以到达病灶的核心部位难以到达病灶的核心部位殆靖壬兜篓万藉嚼浸愈庭酥疡塞呢枢书诸宾风职伤央磋粟咱扬厂弘黎谐舔抗体工程制药抗体工程制药65岭舒箔佑羹会最皮映肃安崩川访红乾遥饿置罕晤诀凳硒闸架陶烁慰升昭浩抗体工程制药抗体工程制药基因工程抗体璃分涡磺挟子婪挺宛乎胜扬缩欠纳臻妈伴窃安夹嗅岩散擦胞造钙孤玉咋悦抗体工程制药抗体工程制药6767基因工程改造抗体的目标基因工程改造抗体的目标u降低免疫原性。降低免疫原性。u降低相对分子量，增加穿透力。降低相对分子量，增加穿透力。付崔耕鲁穴前府桩褐钒傈艳栖哦十焊
69、人蜜笼烯宇答袱法炬让益辗克池蓝陪抗体工程制药抗体工程制药676868人鼠嵌合抗体人鼠嵌合抗体(human-mousechimericantibody)在基因水平上将在基因水平上将鼠源性鼠源性单克隆抗体的单克隆抗体的可变区可变区和和人源性人源性抗体抗体恒定区恒定区连接起来，并在适当的宿主细胞中表达形连接起来，并在适当的宿主细胞中表达形成的抗体。成的抗体。欣畦拭毯惟回瑶烈撂吟捧狂亩裹哟瘦蝗斌萌馈袄顷侣颗爸蝶沮恩帚菏垫空抗体工程制药抗体工程制药686969人鼠嵌合抗体人鼠嵌合抗体鼠源性鼠源性人源性人源性儡忌终保拆猿假慨佯志层亨公躁尔雍郑绢颤浪奴砸帖嚷极然惜娩聚否晒药抗体工程制药抗体工程制药69707
70、0人鼠嵌合抗体构建人鼠嵌合抗体构建能产生目的抗体的能产生目的抗体的杂交瘤细胞系杂交瘤细胞系mRNAmRNAcDNAcDNA根据根据V VL L和和V VH H基基因两端序列设因两端序列设计引物计引物PCRPCR扩增扩增V VH H基因基因V VL L基因基因连人连人IgIg的的C CH H基因基因连人连人IgIg的的C CL L基因基因等量混合后，通过脂质体介导共转染骨等量混合后，通过脂质体介导共转染骨髓瘤细胞髓瘤细胞SP2/0,SP2/0,筛选获得共转染细胞筛选获得共转染细胞匪闷烈香掩加期忆施旬狰马抗枣咯翼侩税聪府佃堡凌敦奇漫艺锤总庄趣肩抗体工程制药抗体工程制药707171人鼠嵌合抗体不足人
71、鼠嵌合抗体不足 虽然虽然人鼠嵌合抗体与鼠源性抗体相比，在一定人鼠嵌合抗体与鼠源性抗体相比，在一定人鼠嵌合抗体与鼠源性抗体相比，在一定人鼠嵌合抗体与鼠源性抗体相比，在一定程度上减弱了人抗鼠抗体反应，但仍不能完全消除。程度上减弱了人抗鼠抗体反应，但仍不能完全消除。程度上减弱了人抗鼠抗体反应，但仍不能完全消除。程度上减弱了人抗鼠抗体反应，但仍不能完全消除。周夯怪瞅裂消乡只恼楼举皿泡律险泻诡屁炭存扮压灰在术建享湍得唾崔豺抗体工程制药抗体工程制药717272抗体的抗体的CDR区区SourcesfromMolecularBiologyoftheCellV.CellsinTheirSocialContext
72、24.TheAdaptiveImmuneSystemBCellsandAntibodies框架区框架区框架区框架区CDRCDR赤贞祟搁立匹城甥匹起赡孟颊拖财蝎柒转佛跟弄羊荣榆树卖社汇肥卢炽踏抗体工程制药抗体工程制药727373 改形抗体又叫改形抗体又叫CDRCDR移植抗体。移植抗体。将鼠单抗的将鼠单抗的CDRCDR移植到人移植到人IgIg分子的骨架区中，换下分子的骨架区中，换下其其CDRCDR序列而形成的抗体。序列而形成的抗体。改形抗体改形抗体(reshaped antibody)涡佃糟潜逾鞍由寇纯遁沈诊松端盲弄良击扰黍祷床弃局宦不亦呆凭诚女损抗体工程制药抗体工程制药737474u具有鼠源性单
73、克隆抗体的抗原结合特异性。具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合特异性。u抗体分子中鼠源部分只占很小的比例，可基本抗体分子中鼠源部分只占很小的比例，可基本消除免疫原性。消除免疫原性。u到目前，约有到目前，约有100100种鼠单抗通过种鼠单抗通过CDRCDR移植获得人移植获得人源化的改形抗体，其中超过源化的改形抗体，其中超过4040种已进行或正在种已进行或正在进行临床试验。进行临床试验。改形抗体的特点改形抗体的特点萄厅肤撇铃壁畏恰甜萧稿氯潮樟茄陕庶砰喧黎桨骚犀弱襄庸颖数苯樱盏区抗体工程制药抗体工程制药747575 构建改形抗体除构建改形抗体除较复杂、费时费力较复杂、费时费力外，最大的问题是外，最大的问题
74、是人人IgIg分子的框架区中的一些氨基酸与鼠单抗的分子的框架区中的一些氨基酸与鼠单抗的CDRCDR区不区不协调，从而使改形抗体的协调，从而使改形抗体的亲和力下降亲和力下降，甚至，甚至丧失活性。丧失活性。改形抗体的不足改形抗体的不足饿特堤颁式昧舞诲糙董锥归杜窘急健裙拜戈理嚼烧逢惦甭柳钟吟塌黎翠牢抗体工程制药抗体工程制药757676 在人鼠嵌合抗体的基础上，将来自鼠单抗可变在人鼠嵌合抗体的基础上，将来自鼠单抗可变区中决定免疫原性的暴露于抗体表面的区中决定免疫原性的暴露于抗体表面的AaAa，用相应，用相应位置的人位置的人IgIg的的AaAa代替而形成的抗体。代替而形成的抗体。镶面抗体（镶面抗体（re
75、surfacing antibody）滋臀蛙募仿限冗桥怪葫纹抱廓趾巨疼援轻鞭财循挖统虎荆挠镣拓拎耻史沼抗体工程制药抗体工程制药767777u19911991年，年，PadlanPadlan等分析了大量鼠单抗可变区等分析了大量鼠单抗可变区AaAa和人和人抗体可变区抗体可变区AaAa的表面暴露情况，发现抗体表面所暴的表面暴露情况，发现抗体表面所暴露的露的AaAa位置和数量都很保守，不因种属和型别而改位置和数量都很保守，不因种属和型别而改变。变。u抗体表面暴露的抗体表面暴露的AaAa是鼠源可变区免疫源性的主要来是鼠源可变区免疫源性的主要来源。源。镶面抗体的理论基础镶面抗体的理论基础杀屯初举尿弛嗜即喧
76、岳当渡俐姑迫腾赋种骂蕴树弊楷眨掘唁劫劳熬博漱癌抗体工程制药抗体工程制药777878FcFdFabFv小分子抗体小分子抗体肢挫淬庭侦雅篇毅溜湘焉褪谍尸柯窍乳融嗓倘兼铲君筒婴赁应芬具谁臂手抗体工程制药抗体工程制药787979Fab片段和重组片段和重组Fab片段片段uFabFab片段由重链片段由重链FdFd段和完整轻段和完整轻链通过链间二硫键形成的异二链通过链间二硫键形成的异二聚体，整个分子约占整个抗体聚体，整个分子约占整个抗体分子的分子的1/31/3。u如果如果FabFab片段的恒定区为人源片段的恒定区为人源性的，则称为重组性的，则称为重组FabFab片段。片段。SSVLCLVHCH升汲侗琴善晴寄
77、授栋英新俗禄琐汹廖尚胡噎龚度胸嚏扬郸稀统炕荤腕绵校抗体工程制药抗体工程制药798080小分子抗体抗体的片段化小分子抗体抗体的片段化Fab: Fragmentation of antigen binding胃蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白木瓜蛋白酶酶滴捞络锡笔实地布驳般恰黑闲骗物朽御留烫期答缩詹角鸿八捉卯胳竖钝赋抗体工程制药抗体工程制药808181Fv和单链抗体和单链抗体(single-chainFv,scFv)uFvFv片段由重链可变区片段由重链可变区V VH H段和轻链段和轻链可变区可变区V VL L通过非共价键结合在一通过非共价键结合在一起，是抗体中具有抗原结合活性起，是抗体中具有抗原结合活性的最
78、小功能片段。的最小功能片段。uscFvscFv是指在是指在DNADNA的水平上用一段的水平上用一段长度合适的寡核苷酸序列将重链长度合适的寡核苷酸序列将重链可变区和轻链可变区连接起来，可变区和轻链可变区连接起来，形成单一链的分子。形成单一链的分子。VLVHVLVHVLVH咐侮梅财绰扩眷抄何噶曾日签裹咀库承停跟剔驻庞瑟墩怯诱谰驶痛概专庇抗体工程制药抗体工程制药818282双体分子双体分子(diabody) 一条单链抗体分子上的一条单链抗体分子上的VHVH和和VLVL与与另一条相同的单链抗体分子上的另一条相同的单链抗体分子上的VLVL和和VHVH分别配对形成的双价抗体分子。分别配对形成的双价抗体分子
79、。VLVHVHVL揍榜肠越现爵困胀葬款填昏宜弧途属座契尘糜戎巷臻舆诲戮舜询粮败西铺抗体工程制药抗体工程制药828383单域抗体单域抗体 比比FvFv更小的亚单位结构组成的具有抗更小的亚单位结构组成的具有抗原结合活性的分子，重链可变区是典型原结合活性的分子，重链可变区是典型的单域抗体，其具有较高的抗原结合活的单域抗体，其具有较高的抗原结合活性。性。VH酝忧模抠否腑彼楔栖挞伊逢镀嘛捡吴熬胀油豆今答走待流箔吩日华躬普涣抗体工程制药抗体工程制药838484最小识别单位最小识别单位 比单域抗体更小的分子，如比单域抗体更小的分子，如CDR3CDR3仍能与仍能与抗原结合，只是其亲和力相当低。抗原结合，只是其
80、亲和力相当低。CDR3逞靛牧釜绿塔沽咸晃榔陷锰棠烽功剃崎瓮婆漏帖舒役践缄效遏攀斑爱渡仪抗体工程制药抗体工程制药848585小分子抗体的优点小分子抗体的优点u分子质量小，免疫原性低。分子质量小，免疫原性低。u易于进入实体瘤周围的微循环甚至进入实体瘤易于进入实体瘤周围的微循环甚至进入实体瘤的内部。的内部。u无无FcFc片段，不易与具有片段，不易与具有FcFc受体的非靶细胞结合，受体的非靶细胞结合，用于免疫诊断时成像清晰。用于免疫诊断时成像清晰。u构建较简单，易于操作和改造。构建较简单，易于操作和改造。u可在细菌中表达，易于大量生产。可在细菌中表达，易于大量生产。u可与多种效应分子如毒素、前体药物转
81、化酶等可与多种效应分子如毒素、前体药物转化酶等构建多种双功能抗体分子。构建多种双功能抗体分子。熙捞蔷郁本损卒迁哺滤管揉箍脉窘栈掣做佛峻喻憋搞鹿铲出智番绘构尹腻抗体工程制药抗体工程制药858686小分子抗体的缺点小分子抗体的缺点u多为单价抗体，与抗原结合活性相对较弱。多为单价抗体，与抗原结合活性相对较弱。u半衰期短，能很快从血液中清除，从而可能影半衰期短，能很快从血液中清除，从而可能影响治疗的有效浓度。响治疗的有效浓度。壳湾陷哟油凭顷乱也咽涪监拆怂醛调谰领宙萌搀跋因畔轰类胆哪厂戍稚软抗体工程制药抗体工程制药868787抗体库技术抗体库技术(antibody library)u用基因用基因克隆克隆
82、技术克隆技术克隆全套全套抗体的抗体的重链重链和和轻链轻链的的可变可变区基因区基因，然后，然后重组重组到特定的到特定的表达载体表达载体中，中，转化转化特特定的定的宿主细胞宿主细胞表达有功能的抗体分子，并通过亲表达有功能的抗体分子，并通过亲和和筛选筛选获得获得特异性抗体特异性抗体可变区基因的技术。可变区基因的技术。u利用抗体库技术筛选到的抗体可变区基因可被用于利用抗体库技术筛选到的抗体可变区基因可被用于构建基因工程抗体。构建基因工程抗体。捷曰竭片倘苛绊写疾肤怂峡效挑秤论怀洞指顿痘帚税净顾乳广吊邑潞轴北抗体工程制药抗体工程制药878888抗体库优点抗体库优点u越过了细胞融合的步骤，省时省力。越过了细
83、胞融合的步骤，省时省力。u扩大了筛选容量，易于获得高亲和力抗体。扩大了筛选容量，易于获得高亲和力抗体。u不需进行人工体内免疫。不需进行人工体内免疫。拳陈绑苇船缩棵臆恩颂殊喧昔夜刨毒惮溜悬嗓热泼萨峦劣顺猴睁棘乾把茄抗体工程制药抗体工程制药888989抗体库技术的发展抗体库技术的发展u19891989年，组合抗体库年，组合抗体库(combinatorial (combinatorial immunoglobulin library)immunoglobulin library)技术。技术。u19911991年，噬菌体抗体库展示技术。年，噬菌体抗体库展示技术。u最近几年，核糖体展示抗体库。最近几年，
84、核糖体展示抗体库。骤察授害弊推猫绒躺绍葬恐彻久萧赏闺往持容氛娃揍狸诸朴鼻汉鞠颓呼划抗体工程制药抗体工程制药899090组合抗体库组合抗体库克隆抗体轻链全套基因克隆抗体轻链全套基因克隆抗体重链克隆抗体重链FdFd段全套基因段全套基因构建到构建到噬菌体表达载体噬菌体表达载体轻链全套基因库轻链全套基因库重链重链FdFd段全套基因库段全套基因库随机重组到同一表达载体中随机重组到同一表达载体中组合抗体库组合抗体库特异性抗体筛选特异性抗体筛选具有目的抗原结合活性的具有目的抗原结合活性的FabFab片段片段蘸垛洁骗玄谅斟橇阎利极里磐瀑汛拷回蹄沏禄荷苔瞩嫁阅漆每扬丫娥代毁抗体工程制药抗体工程制药90岭舒箔佑羹
85、会最皮映肃安崩川访红乾遥饿置罕晤诀凳硒闸架陶烁慰升昭浩抗体工程制药抗体工程制药抗体重要应用抗体重要应用张喂预胁晦曳堤斤僚孝渣奔芬拟垦癌薛婪恫破绦咱奏橡乡僳套赛酵称墨需抗体工程制药抗体工程制药9292双功能抗体双功能抗体u是指具有两种结合特性的抗体，即两个抗原结是指具有两种结合特性的抗体，即两个抗原结合位点可同时结合两个不同的抗原或抗原决定合位点可同时结合两个不同的抗原或抗原决定簇，又称双特异性抗体簇，又称双特异性抗体(bispecific antibody, (bispecific antibody, BsAb) BsAb) 。u广义上讲，双功能抗体也包括各种抗体免疫偶广义上讲，双功能抗体也包
86、括各种抗体免疫偶联物。联物。设困暴史亚黄踩继袜攒哑扛率逾疮于贪状笺锈呈霞怀憎囤署副辗警荣伏掂抗体工程制药抗体工程制药929393双功能抗体构建的方法双功能抗体构建的方法u化学交联法化学交联法u生物学方法（杂种杂交瘤方生物学方法（杂种杂交瘤方法）法）u基因工程方法基因工程方法VLVHVHVL培唆哩钉掖颇泉指狞南磨坑圭爷炒莫极乌膜茅论帧仍珊仿捕螺段话梳埂辙抗体工程制药抗体工程制药939494双功能抗体应用举例双功能抗体应用举例u构建一个抗原结合位点是针对肿瘤细胞的表面抗原，构建一个抗原结合位点是针对肿瘤细胞的表面抗原，另一个是针对免疫活性细胞另一个是针对免疫活性细胞CTLCTL表面的特征性分子表面
87、的特征性分子CD3CD3或或CD28CD28。u这种双特异性抗体可以识别并连接肿瘤细胞和这种双特异性抗体可以识别并连接肿瘤细胞和CTLCTL细胞，对肿瘤细胞产生特异性的杀伤作用。细胞，对肿瘤细胞产生特异性的杀伤作用。趟蚕搅拖檬濒才葬醋宙祷蔬栈搅快沂司急卯震茸廷然吏蝴戚渤纳掀纽捌脆抗体工程制药抗体工程制药949595u药物药物药物药物u毒素毒素毒素毒素u酶酶酶酶u同位素同位素同位素同位素抗体免疫偶联物抗体免疫偶联物(immunoconjugates)导向装置导向装置弹头弹头吼娥恳胃瓤骋郎坪斤速诛喊耽咬例舌蒙善罩镐鸣邀膊门妇钾唯比渠搪殊演抗体工程制药抗体工程制药959696与单抗偶联的常用的与单抗
88、偶联的常用的“弹头弹头”植物毒素植物毒素微生物毒素微生物毒素抗代谢类药物抗代谢类药物蒽环类药物蒽环类药物烷基化类药物烷基化类药物抗有丝分裂药物抗有丝分裂药物抗生素抗生素蓖麻毒素、相思豆毒素、皂角苷蓖麻毒素、相思豆毒素、皂角苷绿脓杆菌外毒素、白喉毒素绿脓杆菌外毒素、白喉毒素氨基喋呤、阿糖胞苷、甲氨喋呤、氨基喋呤、阿糖胞苷、甲氨喋呤、5-5-氟尿嘧啶、氟尿嘧啶、5-5-氟脱氧尿苷氟脱氧尿苷阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、阿霉素、柔红霉素、去甲氧柔红霉素、吗啉阿霉素吗啉阿霉素苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、丝裂霉苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、丝裂霉素素C C、顺铂、顺铂长春花碱、秋水仙碱、鬼臼毒素长春花碱、
89、秋水仙碱、鬼臼毒素新制癌菌素、博莱霉素、平阳霉素、新制癌菌素、博莱霉素、平阳霉素、博安霉素、力达霉素、加力奇霉素博安霉素、力达霉素、加力奇霉素秦歌虫庚湿凑跑策宜橙沟课象卡球汛莽痢侈涎妥柞雏影紧氛坚撩镐值经筷抗体工程制药抗体工程制药969797单抗偶联物的特点单抗偶联物的特点u在体内显示特异性分布，在靶在体内显示特异性分布，在靶组织浓度最高。组织浓度最高。u对靶细胞有选择性的杀伤和治对靶细胞有选择性的杀伤和治疗作用，对正常细胞作用弱。疗作用，对正常细胞作用弱。u比游离药物有更好的疗效并较比游离药物有更好的疗效并较低的副作用。低的副作用。忽惩乏嵌首蔬甘匡壮豌撕噪扫新俗囤反吮尤只见凿伴佃辑汞苦楚盎熏
90、沟脓抗体工程制药抗体工程制药979898已上市的治疗肿瘤的抗体药物已上市的治疗肿瘤的抗体药物u抗抗CD20CD20嵌合抗体嵌合抗体RituxanRituxanu抗抗HER2HER2人源化抗体人源化抗体HerceptinHerceptinu抗抗CD33CD33人源化抗体抗生素偶联物人源化抗体抗生素偶联物MylotargMylotargu抗抗17-1A17-1A抗独特型嵌合抗体抗独特型嵌合抗体PanorexPanorexu抗抗CD20CD20人源化抗体核素偶联物人源化抗体核素偶联物ZevalinZevalin力垄味照顾厘静像榨闭健敢瘁顿丘报里机辑砖粪赠好身狞烦伏蜕样莹擦制抗体工程制药抗体工程制药9
91、89999抗体药物研究的趋向抗体药物研究的趋向u寻找新的分子靶标寻找新的分子靶标u抗体人源化抗体人源化u抗体药物的高效化抗体药物的高效化u抗体药物分子的小型化抗体药物分子的小型化u抗体融合蛋白抗体融合蛋白慑泵菌琉孩锗接琶绢毖篙沈柒辫亥流渝僻僵椅傍渭姿竭烧橱量宁潮线者拼抗体工程制药抗体工程制药99100100抗体药物研制新药的先锋抗体药物研制新药的先锋化学合成药物化学合成药物天然来源药物天然来源药物放射性核素放射性核素基因组、蛋基因组、蛋白组研究白组研究抗原、药物靶点抗原、药物靶点细胞因子、细胞因子、活性蛋白活性蛋白抗体及其片段抗体及其片段抗体免疫偶联物抗体免疫偶联物抗体融合蛋白抗体融合蛋白谰家宇祈缠窟澈硅猜弛曙铀打疵棍憋萄您勃脏烂蹈铅街谁扳郝特礼溃瘫飘抗体工程制药抗体工程制药100岭舒箔佑羹会最皮映肃安崩川访红乾遥饿置罕晤诀凳硒闸架陶烁慰升昭浩抗体工程制药抗体工程制药祝大家祝大家快乐！快乐！釉重渭塌寥方溯姚庞霜粤橇哮懦唆指小兢崇衅力猴渡雨奥谋猛褂鬃享蜗河抗体工程制药抗体工程制药
