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1、课题课题11微生物的利用微生物的利用实验1大肠杆菌的分离和培养了解有关微生物及培养基的基了解有关微生物及培养基的基础知知识，进行无菌技行无菌技术的操作，的操作，进行微生物的培养。行微生物的培养。 一、一、课题目目标：掌握掌握培养基的制培养基的制备、高高压蒸气蒸气灭菌菌和和平板划平板划线法法等基本操作技等基本操作技术，熟，熟练、规范范地地进行无菌操作，成功地培养微生物。行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技无菌技术的操作。的操作。二、二、课题重点和重点和难点：点：三、技能目三、技能目标：实验1大肠杆菌的分离和培养微生物包括哪五微生物包括哪五类：病毒病毒细菌菌放放线菌菌真菌真菌原生原生动物物特点：特
2、点：结构构简单,形体微小形体微小.通常要用光学通常要用光学显微微镜或或电子子显微微镜才能看到，有的甚至没有才能看到，有的甚至没有细胞胞结构构.且且体内一般不含有叶体内一般不含有叶绿素素.不能不能进行光合作用行光合作用.原核生物原核生物界界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基础知识：一、基础知识：(一一)微生物微生物实验1大肠杆菌的分离和培养细菌的外形与大小菌的外形与大小细菌：菌：单细胞不分枝的原核微生物胞不分枝的原核微生物。细菌菌细胞胞微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染染色色后后显微微镜观察察图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球
3、菌B.杆菌杆菌C.弧菌弧菌实验1大肠杆菌的分离和培养细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛鞭毛鞭毛、菌菌（纤纤）毛）毛）毛）毛、荚荚膜膜膜膜、细细胞壁胞壁胞壁胞壁、细细胞膜、胞膜、胞膜、胞膜、细细胞胞胞胞质质，细细胞胞胞胞质质中又有液泡、中又有液泡、中又有液泡、中又有液泡、储储存性存性存性存性颗颗粒、核粒、核粒、核粒、核质质等等等等。细菌的构造菌的构造图图图图1-3 1-3 细菌的结构细菌的结构细菌的结构细菌的结构实验1大肠杆菌的分离和培养* *细胞壁胞壁n n结结构特点：构特点：构特点：构特点：坚韧坚韧且有且有且有且有弹弹性性性性n细胞壁有哪些功能？胞壁有哪些功能？n固定固定固定固定细细胞外形；胞外
4、形；胞外形；胞外形；w w保保保保护细护细胞免受外力的胞免受外力的胞免受外力的胞免受外力的损伤损伤；w w阻阻阻阻拦拦大分子物大分子物大分子物大分子物质进质进人人人人细细胞胞胞胞；w w使使使使细细胞具有致病性及胞具有致病性及胞具有致病性及胞具有致病性及对对噬菌体的敏感性噬菌体的敏感性噬菌体的敏感性噬菌体的敏感性。伤寒寒杆杆菌菌细胞胞壁壁中中含含毒毒素素实验1大肠杆菌的分离和培养芽孢有些有些细菌在一定的条件下，菌在一定的条件下，细胞里面形成一个胞里面形成一个椭圆形的休形的休眠体，叫做眠体，叫做芽芽孢。芽。芽孢的壁很厚，的壁很厚，对干旱、低温、高温等干旱、低温、高温等恶劣的劣的环境有很境有很强的
5、抵抗力。例如，有的的抵抗力。例如，有的细菌的芽菌的芽孢，煮沸，煮沸3小小时以后以后才死亡。芽才死亡。芽孢又小又又小又轻，可以随，可以随风飘散。当散。当环境适宜（如温度、境适宜（如温度、水分适宜）的水分适宜）的时候，芽候，芽孢又可以萌又可以萌发，形成一个，形成一个细菌菌.实验1大肠杆菌的分离和培养菌落：菌落：n单个或少数个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可，就会形成一个肉眼可见的，具有一定的，具有一定形形态结构的子构的子细胞群体，叫做菌落胞群体，叫做菌落。n菌落是菌落是鉴定菌种的重要依据。定菌种的重要依据。实验1大肠杆菌的分离和培养菌落细菌的菌落特征菌
6、的菌落特征因种而异因种而异 实验1大肠杆菌的分离和培养细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据根据细菌所利用的能源和碳源的不同，菌所利用的能源和碳源的不同，将将细菌分菌分为两大两大营养养类型。型。n自养菌自养菌:分分类,举例例?n异养菌异养菌:n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌大部分病原菌大部分病原菌光合自养型光合自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌实验1大肠杆菌的分离和培养放线菌放线菌1、结构：构：单细胞原核胞原核分支状的菌分支状的菌丝（基内菌（基内菌丝、气生菌、气生菌丝）实验1大肠杆菌的分离和培养链霉素、土霉素、四霉素、土霉素、四环素、素、氯霉素
7、、霉素、红霉素、霉素、庆大霉素大霉素 微生物中微生物中发现了几千种抗生素，其中了几千种抗生素，其中2/3是是由放由放线菌菌产生的生的 应用用:实验1大肠杆菌的分离和培养病毒的结构病毒的结构实验1大肠杆菌的分离和培养2、病毒的增殖：、病毒的增殖：实验1大肠杆菌的分离和培养真菌真菌实验1大肠杆菌的分离和培养实验1大肠杆菌的分离和培养一、基一、基础知知识：（二）培养基（二）培养基 培养基（培养液）是培养基（培养液）是由人工方法配制而由人工方法配制而成的，成的，专供微生物生供微生物生长繁殖使用的混合繁殖使用的混合营养养液。液。（1 1）按物理状）按物理状态分：分：固体培养基固体培养基和和液体培养液体培
8、养基、半固体培养基基、半固体培养基。其中固体培养基用于菌种。其中固体培养基用于菌种保存及分离、保存及分离、鉴定菌落、活菌定菌落、活菌计数等，半固体数等，半固体培养基可培养基可观察微生物的运察微生物的运动，液体培养基常用，液体培养基常用于于发酵工酵工业。（2 2）按功能分：）按功能分：选择培养基培养基和和鉴别培养基培养基。（3 3）按成分分：）按成分分：天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。1.培养基的培养基的类型和用途型和用途实验1大肠杆菌的分离和培养选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高加入高浓度食度食盐的培养基
9、的培养基: 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基: 分离分离导入了目的基因的受体入了目的基因的受体细胞胞加入氨基喋呤、次黄加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺呤和胸腺嘧啶核苷的核苷的培养基培养基: 分离分离杂交瘤交瘤细胞胞实验1大肠杆菌的分离和培养天然培养基有血清、天然培养基有血清、血血浆、和、和组织提取液提取液（如（如鸡胚和牛胚浸液）胚和牛胚浸液）。优点：点：营养成分丰富，养成分丰富，培养效果好培
10、养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分成分复复杂，影响，影响对某些某些实验产物的提取和物的提取和实验结果的分析果的分析;易易发生支生支原体原体污染染;根据根据细胞生存所需物胞生存所需物质的种的种类和数量，用人工方法和数量，用人工方法模模拟合成的。合成的。合成培养基主要成分合成培养基主要成分是氨基酸、是氨基酸、维生素、碳水化生素、碳水化合物、无机合物、无机盐和其它一些和其它一些辅助物助物质。优点：点：标准化生准化生产，组分和含量相分和含量相对固定固定;成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全不能完全满足体外足体外细胞生胞生长需要。需要。合成培养基合成培养基:天然培养基
11、：天然培养基：实验1大肠杆菌的分离和培养血清中含有：血清中含有：多种蛋白多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促促贴附物附物质，如，如纤粘蛋白、冷析粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。球蛋白、胶原等。各种生各种生长因子因子转移蛋白移蛋白不明成分不明成分人工合成培养基只能人工合成培养基只能维持持细胞生存，要想使胞生存，要想使细胞生胞生长和和繁殖，繁殖，还需需补充一定量的天然培养基（如血清）。充一定量的天然培养基（如血清）。实验1大肠杆菌的分离和培养液体培养基：液体培养基：表面生表面生长均匀混均匀混浊生生长沉淀生沉淀生长实验1大肠杆菌的分离
12、和培养固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔实验1大肠杆菌的分离和培养半固体培养基：半固体培养基：无无动力力有有动力力(弥弥散散)(是否运是否运动) 实验1大肠杆菌的分离和培养2.不同的微生物往往需要采用不同的培养不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方基配方 (参考教材附录内容参考教材附录内容) 3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和和氮源氮源、 无机无机盐、等等营养物养物质，另外另外还需要需要满足微生物生足微生物生长对pH、特殊特殊营养物养物质,例如例如:生生长因子因子(即细菌生长必需，而自即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物身不能合成的化合物,
13、如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透渗透压等等的要求。的要求。 实验1大肠杆菌的分离和培养4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌液体培养基：增菌固体培养基：固体培养基：纯化，增菌化，增菌半固体培养基：半固体培养基：动力力检测，保种，保种实验1大肠杆菌的分离和培养二、无菌技二、无菌技术1.无菌技无菌技术的概念的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止所有防止杂菌菌污染的方法。染的方法。无无论是随后将要是随后将要学到的学到的倒平板倒平板、平板划平板划线操作，操作，还是是平板稀平板稀
14、释涂布法涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“无菌无菌”，即防止，即防止杂菌菌污染。只有熟染。只有熟练、规范范地地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 实验1大肠杆菌的分离和培养（）（）消毒定消毒定义：利用化学或物理方法，利用化学或物理方法，杀死大部份致死大部份致病微生物的病微生物的过程。区分程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-level Disinfection）、）、中程度消中程度消毒毒（Intermediate-level Disinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-level Disinfectio
15、n）三种方式。三种方式。2.消毒与消毒与灭菌的概念及两者的区菌的概念及两者的区别 实验1大肠杆菌的分离和培养（2）灭菌的定菌的定义：以化学以化学剂或物理方法消或物理方法消灭所有所有微生微生物，包括所有物，包括所有细菌的繁殖体、芽菌的繁殖体、芽孢、霉、霉菌及病毒，而达到菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之之过程。程。灭菌消毒技菌消毒技术是微生物有关工作中是微生物有关工作中最普通也是最重要的技最普通也是最重要的技术。实验1大肠杆菌的分离和培养1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100煮沸煮沸5-6min2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min3、化学、化学药剂
16、消毒法消毒法:用用75%酒精、新酒精、新洁尔灭等等进行皮肤消毒行皮肤消毒;氯气消毒水源气消毒水源4、紫外、紫外线消毒消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.常用的消毒与常用的消毒与灭菌的方法菌的方法实验1大肠杆菌的分离和培养1、灼、灼烧灭菌菌2、干、干热灭菌：菌：160-170 下加下加热1-2h。3、高、高压蒸气蒸气灭菌：菌：100kPa、121 下下维持持15-30min.(2)灭菌的方法：菌的方法：实验1大肠杆菌的分离和培养最常用的最常用的灭菌方法是菌方法是高高压蒸汽蒸汽灭菌菌，它可，它可以以杀灭所有的生物，包括最耐所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休的某些微生物的休眠体，同眠体，同时可
17、以基本保持培养基的可以基本保持培养基的营养成分不被破养成分不被破坏。坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干高温干热灭菌菌。为了了防止防止杂菌，特菌，特别是空气中的是空气中的杂菌菌污染，染，试管及玻璃管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可只可让空空气通气通过，而空气中的其他微生物不能通，而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种种器具是器具是专为防止空气中微生物的防止空气中微生物的污染而染而设计的。的
18、。实验1大肠杆菌的分离和培养分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物 物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子无菌技无菌技无菌技无菌技术
19、术实验1大肠杆菌的分离和培养3. 3.微生物微生物微生物微生物实验实验室培养的基本操作程序室培养的基本操作程序室培养的基本操作程序室培养的基本操作程序1、器具的、器具的灭菌菌2、培养基的配制、培养基的配制3、培养基的、培养基的灭菌菌4、倒平板、倒平板5、微生物接种、微生物接种6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7、菌种的保存、菌种的保存实验1大肠杆菌的分离和培养1.无菌技无菌技术除了用来防止除了用来防止实验室的培养物被其他室的培养物被其他外来微生物外来微生物污染外，染外，还有什么目的？有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。菌。如果需要，如果需要，
20、请选择合适的方法。合适的方法。（1） 培养培养细菌用的培养基与培养皿菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、玻棒、试管、管、烧瓶和吸管瓶和吸管（3） 实验操作者的双手操作者的双手答：无菌技答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。实验1大肠杆菌的分离和培养三、三、实验操作操作1.制制备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养培养基（用于培养细菌）菌）实验1大肠杆菌的分离和培养1计算算、称量称量2溶化溶化3调pH：pH764过滤：这一步可以省去。一步可以省去。5分装：分装分装：分装过
21、程中注意不要使培养程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而棉塞而引起引起污染。分装三角染。分装三角烧瓶的量以不超瓶的量以不超过三角三角烧瓶容瓶容积的一半的一半为宜。宜。6加塞加塞7包扎包扎操作步操作步骤实验1大肠杆菌的分离和培养 8灭菌菌:将将5050ml培养基用玻棒培养基用玻棒转移至三角移至三角锥瓶中，瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高，再放入高压蒸气蒸气灭菌菌锅，在，在压力力为100100kPa、温度温度为121121，灭菌菌15153030min。将培养基用旧将培养基用旧报纸包裹，放入干包裹，放入干热灭菌菌箱内，在箱内，在16
22、0160170170下下灭菌菌2 2h。 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到5050左右左右时，在酒精灯，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作附近倒平板。（倒平板操作见课本）本）2 2d后后观察平察平板，无板，无杂菌菌污染才可用来接种染才可用来接种. 10无菌无菌检查：将将灭菌的培养基放入菌的培养基放入37的温室中培的温室中培养养2448小小时，以，以检查灭菌是否菌是否彻底。底。实验1大肠杆菌的分离和培养倒平板技倒平板技倒平板技倒平板技术术实验1大肠杆菌的分离和培养 1.培养基培养基灭菌后，需要冷却到菌后，需要冷却到50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么才能用来倒平板。你用什么办法来
23、估法来估计培养基的温培养基的温度？度？问题讨论问题讨论答：答：可以用手触摸盛有培养基的可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，形瓶，感感觉锥形瓶的温度下降到形瓶的温度下降到刚刚不不烫手手时，就可，就可以以进行倒平板了。行倒平板了。2.为什么需要使什么需要使锥形瓶的瓶口通形瓶的瓶口通过火焰？火焰？答：通答：通过灼灼烧灭菌，防止瓶口的微生物菌，防止瓶口的微生物污染培养基。染培养基。实验1大肠杆菌的分离和培养3.平板冷凝后，平板冷凝后，为什么要将平板倒置？什么要将平板倒置？4.在倒平板的在倒平板的过程中，如果不小心将培养程中，如果不小心将培养基基溅在皿盖与皿底之在皿盖与皿底之间的部位，的部位，这个平板个平板
24、还能用来培养微生物能用来培养微生物吗？为什么？什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之之间的培养基上滋生，因此最好不要用的培养基上滋生，因此最好不要用这个平个平板培养微生物。板培养微生物。实验1大肠杆菌的分离和培养2 2、纯化大化大肠杆菌杆菌接种方法有：
25、接种方法有：平板划平板划线法和稀法和稀释涂布平板法涂布平板法平板划平板划线法法:通通过接种接种环在在琼脂固体培脂固体培养基表面养基表面连续画画线的操作的操作,将聚集的菌将聚集的菌钟逐步稀逐步稀释分散到培养基的表面分散到培养基的表面.在数次画在数次画线后后,可以分离到由一个可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可胞繁殖而来的肉眼可见的子的子细胞群体胞群体,这就是菌落就是菌落.微生物的接种技微生物的接种技微生物的接种技微生物的接种技术术实验1大肠杆菌的分离和培养 平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 实验1大肠杆菌的分离和培养平板划线时不能划破培养基的原因平板划
26、线时不能划破培养基的原因n一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；菌落的目的；n二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。菌落。实验1大肠杆菌的分离和培养实验1大肠杆菌的分离和培养问题讨论问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划什么在操作的第一步以及每次划线之前之前都要灼都要灼烧接种接种环？在划？在划线操作操作结束束时，仍然需，仍然需要灼要灼烧接种接种环吗？为什么？什么？答：操作的第一步灼答：操作的第一步
27、灼烧接种接种环是是为了避免接了避免接种种环上可能存在的微生物上可能存在的微生物污染培养物；每次划染培养物；每次划线前灼前灼烧接种接种环是是为了了杀死上次划死上次划线结束后，束后，接种接种环上残留的菌种，使下一次划上残留的菌种，使下一次划线时，接种，接种环上的菌种直接来源于上次划上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而的末端，从而通通过划划线次数的增加，使每次划次数的增加，使每次划线时菌种的数菌种的数目逐目逐渐减少，以便得到菌落。划减少，以便得到菌落。划线结束后灼束后灼烧接种接种环，能及，能及时杀死接种死接种环上残留的菌种，避上残留的菌种，避免免细菌菌污染染环境和感染操作者。境和感染操作者。实验1
28、大肠杆菌的分离和培养 2.在灼在灼烧接种接种环之后，之后，为什么要等其冷却后什么要等其冷却后再再进行划行划线？答：以免接种答：以免接种环温度太高，温度太高，杀死菌种。死菌种。 3.在作第二次以及其后的划在作第二次以及其后的划线操作操作时，为什么什么总是从上一次划是从上一次划线的末端开始划的末端开始划线？答：划答：划线后，后，线条末端条末端细菌的数目比菌的数目比线条起始条起始处要少，每次从上一次划要少，每次从上一次划线的末端开始，的末端开始，能使能使细菌的数目随着划菌的数目随着划线次数的增加而逐步减次数的增加而逐步减少，最少，最终能得到由能得到由单个个细菌繁殖而来的菌落。菌繁殖而来的菌落。实验1
29、大肠杆菌的分离和培养实验1大肠杆菌的分离和培养实验1大肠杆菌的分离和培养问题讨论问题讨论涂布平板的所有操作都涂布平板的所有操作都应在火焰附在火焰附近近进行。行。结合平板划合平板划线与系列稀与系列稀释的无菌操作的无菌操作要求，想一想，第要求，想一想，第2步步应如何如何进行无菌操作？行无菌操作？应从操作的各个从操作的各个细节保保证“无菌无菌”。例。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等等。实验1大肠杆菌的分离和培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物
30、的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养实验1大肠杆菌的分离和培养菌种的保存菌种的保存菌种的保存菌种的保存 1、临时保藏：接保藏：接种到固体斜面培养种到固体斜面培养基，菌落基，菌落长成后置成后置于于4冰箱保存。冰箱保存。 2、长期保存：甘期保存：甘油冷油冷冻管藏法管藏法实验1大肠杆菌的分离和培养四、四、课题成果成果评价价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后后无菌落生无菌落生长，说明培养基的制明培养基的制备是成功的，否是成功的，否则需要重需要重新制新制备。（二）接种操作是
31、否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生如果培养基上生长的菌落的的菌落的颜色、形状、大小色、形状、大小基本一致，并符合大基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，杆菌菌落的特点，则说明接种操明接种操作是符合要求的；如果培养基上出作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，了其他菌落，则说明接种明接种过程中，无菌操作程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，未达到要求，需要分析原因，再次再次练习。（三）是否（三）是否进行了及行了及时细致的致的观察与察与记录培养培养12 h与与24 h后的大后的大肠杆菌菌落的大小会有杆菌菌落的大小会有明明显不同，及不同，及时观察察记录的同学会的同学会发
32、现这一点，并能一点，并能观察到其他一些察到其他一些细微的微的变化。化。这一步的要求主要是培养学一步的要求主要是培养学生良好的科学生良好的科学态度与度与习惯。实验1大肠杆菌的分离和培养本本课题知知识小小结:实验1大肠杆菌的分离和培养【典例解析典例解析】例例1关微生物关微生物营养物养物质的叙述中，正确的的叙述中，正确的A.是碳源的物是碳源的物质不可能同不可能同时是氮源是氮源B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析：解析：不同的微生物，所需不同的微生物，所需营养物养物质有有较大差大差别，要，要针对微
33、生物的具体情况分析。微生物的具体情况分析。对于于A、B选项，它的表达是不完整的。，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮是氮源，也是能源，如蛋白源，也是能源，如蛋白胨。对于于C选项，除水以外的无机物种，除水以外的无机物种类繁繁多，功能也多多，功能也多样。如二氧化碳，可作。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作，可作为自养型微生物的碳源和无机自养型微生物的碳源和无机盐
34、；而；而NaCl则只能只能提供无机提供无机盐。对于于D选项，无机氮源提供能量的情况，无机氮源提供能量的情况还是存在的，是存在的，如如NH3可可为硝化硝化细菌提供能量和氮源。菌提供能量和氮源。答案：答案：D实验1大肠杆菌的分离和培养例例2下面下面对发酵工程中酵工程中灭菌的理解菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.防止防止杂菌菌污染染B.消消灭杂菌菌C.培养基和培养基和发酵酵设备都必都必须灭菌菌D.灭菌必菌必须在接种前在接种前答案：答案：B解析：解析：灭菌是微生物菌是微生物发酵酵过程的一个重要程的一个重要环节。A说的是的是灭菌的目的，因菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是酵所用的菌种大多是单一
35、一的的纯种，整个种，整个发酵酵过程不能混入其他微生物（程不能混入其他微生物（杂菌），菌），所以是正确的；所以是正确的；B是是错误的，因的，因为灭菌的目的是防止菌的目的是防止杂菌菌污染，但染，但实际操作中不可能只消操作中不可能只消灭杂菌，而是消菌，而是消灭全部微生物。全部微生物。C是正确的，因是正确的，因为与与发酵有关的所有酵有关的所有设备和物和物质都要都要灭菌；菌；发酵所用的微生物是酵所用的微生物是灭菌后菌后专门接接种的，种的，灭菌必菌必须在接种前，如果接种后再在接种前，如果接种后再灭菌就会把菌就会把所接菌种也所接菌种也杀死。死。实验1大肠杆菌的分离和培养编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫1
36、0g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，养基成分，请据此回答：据此回答：（1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物的微生物类型是型是 。（2）若不慎将）若不慎将过量量NaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪如不想浪费此培养基，此培养基，可再加入可再加入.自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 实验1大肠杆菌的分离和培养（3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CH2O），），该培养基可用于培养培养基可用于培养。（4）表中）表中营养成分共有养成分共有类。（5）不）不论何种培养基，在各种成分都何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要溶化后分装前，要进行的是行的是。（6）右表中各成分重量确定的原）右表中各成分重量确定的原则是是。（7）若右表培养基用于菌种）若右表培养基用于菌种鉴定，定，应该增加的成分增加的成分。固氮微生物固氮微生物 3 调整整pH 依微生物的生依微生物的生长需要确定需要确定 琼脂（或凝固脂（或凝固剂） 实验1大肠杆菌的分离和培养实验1大肠杆菌的分离和培养
