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1、专题专题3 植物的组织培养技术植物的组织培养技术1课题课题1菊花的组织培养菊花的组织培养2（一）植物组织培养的基本过程一 基础知识原理：原理：植物细胞的全能性植物细胞的全能性3离体的 植物器官、 组织、细胞愈伤 组织脱分化脱分化根芽再分化再分化植 物 体4例例1：下列关于愈伤组织叙述错误的是下列关于愈伤组织叙述错误的是 A. 愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的B. 愈伤组织的细胞具有全能性愈伤组织的细胞具有全能性 C. 愈伤组织是由排列紧密的薄壁细胞组成愈伤组织是由排列紧密的薄壁细胞组成 D. 愈伤组织可形成具有生根发芽能力的胚状结构愈伤组织可形成具有生根
2、发芽能力的胚状结构脱分化：脱分化：由高度分化的植物器官、组织或由高度分化的植物器官、组织或 细胞产生愈伤组织的过程。细胞产生愈伤组织的过程。脱分化（去分化）、愈伤组织、再分化：脱分化（去分化）、愈伤组织、再分化：C5愈伤组织的特点：排列疏松无规则、高度液泡化、细胞壁薄等排列疏松无规则、高度液泡化、细胞壁薄等脱分化：由高度分化的植物器官、组织或由高度分化的植物器官、组织或 细胞产生愈伤组织的过程。细胞产生愈伤组织的过程。脱分化（去分化）、愈伤组织、再分化：再分化：再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，脱分化产生的愈伤组织继续进行培养， 重新分化成根或芽的过程。重新分化成根或芽的过程。6细胞分
3、化、脱分化（去分化）、再分化三者的关系未分化 的细胞分化(高度)分 化的细胞脱分化(相对)未分化的细胞(高度)分 化的细胞再分化7例例2：下列叙述错误的是下列叙述错误的是 A. 细胞的分化在一定条件下是可逆的细胞的分化在一定条件下是可逆的 B. 细胞分化的本质是细胞分化的本质是DNA分子结构发生了改变分子结构发生了改变 C. 细胞分化是指细胞的形态、结构和功能发生细胞分化是指细胞的形态、结构和功能发生 稳定性改变的过程稳定性改变的过程 D. 细胞分化发生在生物体的整个生命进程中细胞分化发生在生物体的整个生命进程中B8（二）影响植物组织培养的因素（二）影响植物组织培养的因素1.外植体的选取外植体
4、的选取不同植物不同植物的组织培养难度不同的组织培养难度不同 同一种植物的同一种植物的不同组织不同组织培养难度不同培养难度不同如：菊花如：菊花未开花植株的茎上部新萌生的侧枝未开花植株的茎上部新萌生的侧枝92.培养基的配制（MS培养基）大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：Fe 、Mn 、B、 Zn 、Mo 、Cu、I有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素等生长素、细胞分裂素等103.不同植物激素使用顺序、用量和比例不同植物激素使用顺序、用量和比例P33使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素先使用生长素利于
5、细胞分裂，但不分化利于细胞分裂，但不分化先使用细胞分裂素先使用细胞分裂素细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化同时使用同时使用分化频率提高分化频率提高生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素比例高：利于根的分化、抑制芽的形成。比例高：利于根的分化、抑制芽的形成。比例低：利于芽的分化、抑制根的形成。比例低：利于芽的分化、抑制根的形成。114.消毒在培养的整个过程中，都需要是一个在培养的整个过程中，都需要是一个 无菌环境无菌环境5.pH、温度、光照菊花： pH=5.8 温度控制在温度控制在18 22 每日光照每日光照12h 12二 实验操作视频录象13二 实验操作制备MS 固体培养基外植体消毒外植体消毒：外植
6、体消毒：流水冲洗流水冲洗洗衣粉刷洗洗衣粉刷洗流水冲洗流水冲洗酒精酒精 无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至少无菌水冲洗至少 三次之上三次之上14二 实验操作制备MS固体培养基外植体消毒 接种 培养 移栽栽培外植体消毒：外植体消毒：流水冲洗流水冲洗洗衣粉刷洗洗衣粉刷洗流水冲洗流水冲洗酒精酒精 无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至少无菌水冲洗至少 三次之上三次之上15思考思考在整个操作过程中，是如何实现无菌环境的？在整个操作过程中，是如何实现无菌环境的？1. 培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2. 外植体的消毒（酒精、氯化汞）外植体的消毒（酒精、氯化汞）3.
7、接种的无菌操作接种的无菌操作 （酒精、酒精灯（酒精、酒精灯 灼烧）灼烧）4.无菌箱中的培养无菌箱中的培养5.移栽到消过毒的环境中生存一段时间移栽到消过毒的环境中生存一段时间16例例3：根据单倍体育种大致过程回答问题：1）过程）过程是把花药分离出来，在无菌条件下放在人工培是把花药分离出来，在无菌条件下放在人工培养基上进行离体培养，该培养基中加入的物质应该有养基上进行离体培养，该培养基中加入的物质应该有_。（至少答三种）。（至少答三种）答案：大量元素、微量元素、有机物（氨基酸、答案：大量元素、微量元素、有机物（氨基酸、 蔗糖、维生素等）、水、植物激素等蔗糖、维生素等）、水、植物激素等17例例3：根
8、据单倍体育种大致过程回答问题：2）过程）过程是花药在培养基所提供的特定条件下是花药在培养基所提供的特定条件下 发生多次细胞分裂，形成愈伤组织，此过程叫发生多次细胞分裂，形成愈伤组织，此过程叫 作作_，细胞分裂的方式是，细胞分裂的方式是_。脱分化脱分化有丝分裂有丝分裂18例例3：根据单倍体育种大致过程回答问题：3）过程是诱导愈伤组织分化出芽和根，最后 长成植株。这一过程叫_。该植株是_ 植株，其特点是 _，生产上没有应用价值。 植株弱小,高度不育 再分化再分化单倍体单倍体19例例3：根据单倍体育种大致过程回答问题：4）若图中提供花药的植株基因型为）若图中提供花药的植株基因型为AaBb，则经过，则经过 处理后的植物中，可稳定遗传的个体占处理后的植物中，可稳定遗传的个体占_。100%202122例例3：根据单倍体育种大致过程回答问题：5）花药离体培养应用的是_技术 其理论基础是_。 23例例3：根据单倍体育种大致过程回答问题：5）花药离体培养应用的是_技术 其理论基础是_。 答案：植物组织培养 细胞的全能性24
