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1、动物细胞融合与单体克隆动物细胞融合与单体克隆抗体抗体 为什么为什么“甲甲流流”康复者或接康复者或接种疫苗种疫苗1 1月以上者月以上者的血浆会成为救的血浆会成为救治重症治重症“甲流甲流”患者的妙药？患者的妙药？ 血浆中的抗血浆中的抗体会与体会与“甲流甲流”病毒反应，从而病毒反应，从而将病毒消灭。将病毒消灭。获得抗体的传统方法获得抗体的传统方法 把把某种抗原某种抗原反复注射到动物体内，然后从动反复注射到动物体内，然后从动物物血清血清中分离出中分离出所需的抗体所需的抗体。缺点：缺点： 人们发现，人们发现，B B淋巴细胞尽管可以产生淋巴细胞尽管可以产生多达百万多达百万种以上种以上的特异性抗体，但是的特
2、异性抗体，但是每一个每一个B B细胞只分泌一细胞只分泌一种特异性抗体种特异性抗体。怎样才能获得大量的单一性抗体呢？怎样才能获得大量的单一性抗体呢？产量低产量低纯度低纯度低特异性差特异性差G. Kohler C. Milstein 英国科学家米尔斯坦和科勒于英国科学家米尔斯坦和科勒于19751975年设计和实年设计和实践了这个想法，并获得成功。摘得践了这个想法，并获得成功。摘得19841984年诺贝尔生年诺贝尔生理及医学奖。理及医学奖。一、动物细胞融合技术一、动物细胞融合技术1.1.概念：概念： 动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的
3、过程。或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为信息的单核细胞，称为杂交细胞杂交细胞。2 2、动物细胞融合基本原理、动物细胞融合基本原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性3 3、诱导方式、诱导方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒电激、振动、离心电激、振动、离心聚乙二醇聚乙二醇（PEGPEG）如：仙台病毒如：仙台病毒为什么要用为什么要用灭活灭活的病毒？的病毒？仙台病毒仙台病毒物理物理/化学化学方法方法丧失感染活性丧失感染活性保留融合活性保留融合活性 灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒
4、颗粒灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面黏附于细胞表面细胞膜被病毒细胞膜被病毒颗粒穿通颗粒穿通细胞融合，细胞融合， 形成杂种细胞形成杂种细胞4 4、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途获得杂种植株获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱导使细胞分散后诱导细胞融合细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙
5、二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）制备单克隆抗体制备单克隆抗体灭活的病毒灭活的病毒二、单克隆抗体的制备二、单克隆抗体的制备用抗原免疫小鼠用抗原免疫小鼠骨髓瘤细胞的培养骨髓瘤细胞的培养B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞融合融合多种细胞多种细胞由于培养由于培养基中缺乏基中缺乏相应的营相应的营养物，骨养物，骨髓瘤细胞髓瘤细胞死亡死亡B B淋巴细胞淋巴细胞培养几天后培养几天后死亡死亡杂交瘤细胞杂交瘤细胞置于选择培置于选择培养基上培养养基上培养多多孔孔细细胞胞培培养养板板阳性克隆的筛选和阳性克隆的筛选和克隆化培养克隆化培养用培养液稀释用培养液稀释注射到小鼠体内注射
6、到小鼠体内体外培养体外培养 由由单个杂交瘤细胞单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的通过克隆，所产生的化学性质化学性质单一单一、特异性强的抗体特异性强的抗体。 单克隆抗体单克隆抗体整个制备过程为何要经过整个制备过程为何要经过两次筛选两次筛选? ?第一次筛选：第一次筛选：第二次筛选：第二次筛选：用特定的选择培养基筛选出用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞多种杂交瘤细胞筛选出能产生所需抗体的筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。三、单克隆抗体的特点和应用三、单克隆抗体的特点和应用“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药单克隆抗体药物物l诊断试剂诊断试剂l用于治疗疾病用于治疗疾病1 1、特点：、特点：特
7、异性强特异性强，灵敏度高灵敏度高，产量高产量高。2 2、应用：、应用：l用于运载药物用于运载药物优点：准确，高效，快速优点：准确，高效，快速练习练习1 1、动物细胞融合技术最重要的用途是（、动物细胞融合技术最重要的用途是（ ） A. A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B. B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C. C.培育新物种培育新物种 D. D.生产杂种细胞生产杂种细胞B B2 2、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（ ） A.B A.B淋巴细胞淋巴细胞 B.T B.T淋巴细胞淋巴细胞 C. C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D. D.杂交瘤细胞杂交瘤细胞
8、D D3 3、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身融合淋巴细胞自身融合细胞细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A. B. C. D. A. B. C. D. C CB B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到
9、小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的生单一抗体的B B淋巴细胞。淋巴细胞。(1).(1).该实验方案的目的是：该实验方案的目的是：_(2).(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A(3).A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_ _ 该细胞能该细胞能够产生够产生_ _ 。(4).(4).图中图中B B为
10、为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,_,又能又能_。(5).C(5).C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段。培养两个阶段。B B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活的病毒灭活的病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代B BB B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞？细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞筛选杂种细胞已知细胞合成已知细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条条DNADNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有瘤细胞中尽管没有S S途径，但能不断分裂增殖，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加将这两种细胞在试管中混合，加PEGPEG促融，在促融，在筛选培养基上筛选获得杂种细胞。筛选培养基上筛选获得杂种细胞。多孔细胞培养板结束结束
