《2.2分解尿素的细菌ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2.2分解尿素的细菌ppt课件（20页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、课题课题课题课题2 2 2 2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数09生物组：庄生物组：庄晓晓冬冬11 1 1 1、尿素的利用、尿素的利用、尿素的利用、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。分解成氨之后才能被植物利用。分解成氨
2、之后才能被植物利用。分解成氨之后才能被植物利用。2 2 2 2、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NHCO(NHCO(NHCO(NH2 2 2 2) ) ) )脲酶脲酶脲酶脲酶+ CO+ CO+ CO+ CO2 2 2 2NHNHNHNH3 3 3 3+ H+ H+ H+ H2 2 2 2O O O O2 实验室中微生物的筛选原理：实验室中微生物的筛选原理：实验室中微生物的筛选原理：实验
3、室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件人为提供有利于目的菌株生长的条件人为提供有利于目的菌株生长的条件人为提供有利于目的菌株生长的条件( ( ( (包括营养、温度、包括营养、温度、包括营养、温度、包括营养、温度、pHpHpHpH等等等等) ) ) )，同时抑制或阻止，同时抑制或阻止，同时抑制或阻止，同时抑制或阻止其他微生物生长。其他微生物生长。其他微生物生长。其他微生物生长。 选择性培养基选择性培养基选择性培养基选择性培养基315.0g15.0g15.0g15.0g琼脂琼脂琼脂琼脂1.0g1.0g1.0g1.0g尿素尿素尿素尿素10.0g10.0g10.0g10.0g葡萄糖葡
4、萄糖葡萄糖葡萄糖0.2g0.2g0.2g0.2gMgSOMgSOMgSOMgSO44447H7H7H7H2 2 2 2O O O O2.1g2.1g2.1g2.1gNaHNaHNaHNaH2 2 2 2POPOPOPO4 4 4 41.4g1.4g1.4g1.4gKHKHKHKH2 2 2 2POPOPOPO4 4 4 4土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：从物理性质看此培养基属于哪类？从物理性质看此培养基属于哪类？从物理性质看此培养基属于哪类？从物理性质
5、看此培养基属于哪类？固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基4在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素氮源：尿素氮源：尿素氮源：尿素 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲
6、酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。5 5 5 5、培养基选择分解尿素的微生物的原理、培养基选择分解尿素的微生物的原理、培养基选择分解尿素的微生物的原理、培养基选择分解尿
7、素的微生物的原理56 6 6 6、怎样证明此培养基具有选择性呢？、怎样证明此培养基具有选择性呢？、怎样证明此培养基具有选择性呢？、怎样证明此培养基具有选择性呢？以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种目的目的结果结果只生长尿素细菌只生长尿素细菌生长多种微生物生长多种微生物是是61 1 1 1、显微镜直接计数：、显微镜直接计数：、显微镜直接计数：、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量
8、。利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。. . . .统计菌落数目：统计菌落数目：统计菌落数目：统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；需要相对高的细菌浓度；需要相对高的细菌浓度；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；个体小的细菌在显微镜下难以观察；个体小的细菌在显微镜
9、下难以观察；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点缺点缺点缺点72.2.2.2.间接计数法（间接计数法（间接计数法（间接计数法（活菌计数法）活菌计数法）活菌计数法）活菌计数法）原理：原理：原理：原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。细
10、胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。常用方法：稀释涂布平板法。常用方法：稀释涂布平板法。常用方法：稀释涂布平板法。常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M(CV)M(CV)M(CV)M其中，其中，其中，其中，C C C C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V V V V代表涂布平板时所用的代表涂布平板时所用的代表涂布平板时所用的代表涂布平板时所用的稀释液的体积稀释液的体积稀释液的体积稀释液的体
11、积(ml)(ml)(ml)(ml)，M M M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。代表稀释倍数。代表稀释倍数。8注意事项注意事项注意事项注意事项为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30303030300300300300的平板上进行计数。的平板上进行计数。的平板上进行计数。的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，
12、培养为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。计算出菌落平均数。计算出菌落平均数。计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。9 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。的可信度。的可
13、信度。的可信度。. . . .设置对照：设置对照：设置对照：设置对照：10实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌 落数目的实验时，落数目的实验时，落数目的实验时，落数目的实验时，A A A A同学从对应的同学从对应的同学从对应的同学从对应的101010106 6 6 6 倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150150150150个菌个菌个菌个菌 落，但是其他同学在同样的稀释度下落，但是其他同学在同样的稀释度下落，
14、但是其他同学在同样的稀释度下落，但是其他同学在同样的稀释度下 只选择出大约只选择出大约只选择出大约只选择出大约50505050个菌落。分析其原因。个菌落。分析其原因。个菌落。分析其原因。个菌落。分析其原因。原因：原因：原因：原因：土样不同，土样不同，土样不同，土样不同， 培养基污染或操作失误培养基污染或操作失误培养基污染或操作失误培养基污染或操作失误 ( ( ( (或者是混入了其他的含氮物质或者是混入了其他的含氮物质或者是混入了其他的含氮物质或者是混入了其他的含氮物质) ) ) )11二二二二. . . .实验的具体操作实验的具体操作实验的具体操作实验的具体操作 . . . .土壤取样土壤取样
15、土壤取样土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。. . . .制备培养基：制备培养基：制备培养基：制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。12应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g10g10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一
16、步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 三三三三 样品的稀释样品的稀释样品的稀释样品的稀释13. . . .取样涂布取样涂布取样涂布取样涂布实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。等。14. . . .取样涂布取样涂布取样涂布取样涂布分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度稀释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、101
17、06 6保证获得菌落数在保证获得菌落数在保证获得菌落数在保证获得菌落数在30303030300300300300之间、之间、之间、之间、适于计数的平板适于计数的平板适于计数的平板适于计数的平板放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4原因：不同微生物在土壤中含量不同原因：不同微生物在土壤中含量不同原因：不同微生物在土壤中含量不同原因：不同微生物在土壤中含量不同15. . . .微生物的培养与观察微生物的培养与观察微生物的培养与观察微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24
18、h24h24h24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。培养不同微生物往往需要不同培养温度。培养不同微生物往往需要不同培养温度。培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：细菌：细菌：细菌：3030303037373737培
19、养培养培养培养1 1 1 12d2d2d2d放线菌：放线菌：放线菌：放线菌：2525252528282828培养培养培养培养5 5 5 57d7d7d7d霉菌：霉菌：霉菌：霉菌：2525252528282828的温度下培养的温度下培养的温度下培养的温度下培养3 3 3 34d4d4d4d。16微生物的培养与观察微生物的培养与观察微生物的培养与观察微生物的培养与观察17 课外延伸课外延伸课外延伸课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果在
20、以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PHPHPHPH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到滤膜放到滤膜放到滤膜放到 伊红美蓝伊红美蓝伊红美蓝伊红美蓝 培养基上培养
21、，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。中大肠杆菌的数量。中大肠杆菌的数量。中大肠杆菌的数量。18大肠杆菌呈大肠杆菌呈大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心黑色中心黑色中心 , , , ,有或无金属光泽有或无金属光泽有或无金属光泽有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征上典型特征上典型特征 19本课题知识小结本课题知识小结本课题知识小结本课题知识小结: : : :20
