《DNA的粗提取和鉴定市级公开课实用教案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《DNA的粗提取和鉴定市级公开课实用教案（13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一、基础知识一、基础知识（一）提取（一）提取(tq)DNA(tq)DNA的方法的方法1.1.提取(tq)DNA(tq)DNA的基本思路利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化、蛋白质和脂质等在物理和化学性质学性质(huxu xngzh)(huxu xngzh)方面的差异方面的差异, ,提取提取DNADNA，去除其他成分，去除其他成分第1页/共12页第一页，共13页。（1 1） DNA的溶解性思考思考1 1：图中：图中DNADNA溶解度最小的浓度溶解度最小的浓度(nngd)(nngd)是多少？是多少？2.DNA2.DNA的理化(lhu)(lhu)性质（2 2） DNA DN
2、A不溶于酒精不溶于酒精(jijng)(jijng)溶液溶液DNADNADNADNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将精。将精。将精。将DNADNADNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。思考思考2 2 2 2：如何控制浓度达到让：如何控制浓度达到让：如何控制浓度达到让：如何控制浓度达到让DNADNA析出的目的？析出的目的？0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L向向
3、向向NaClNaClNaClNaCl溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从2mol/L2mol/L2mol/L2mol/L下降下降下降下降到到到到0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L第2页/共12页第二页，共13页。（3 3） DNA DNA对酶、高温对酶、高温(gown)(gown)和洗涤剂的耐和洗涤剂的耐受性受性 蛋白酶蛋白酶蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，对水解蛋白质，对水解蛋白质，对水解蛋白质，对DNADNADNADNA没有没有没有没有(mi yu)(mi yu
4、)(mi yu)(mi yu)影影影影响响响响 高高高高 温温温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受6060606080808080 而而而而DNADNADNADNA在在在在80808080以上以上以上以上(yshng)(yshng)(yshng)(yshng)才会变性才会变性才会变性才会变性 洗涤剂洗涤剂洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对但对但对但对DNADNADNADNA没有影响没有影响（4 4）特定的颜色反应）特定的颜色反应鉴定鉴定DNADNA沸水
5、浴条件下，沸水浴条件下，DNADNADNADNA与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现蓝色。蓝色。蓝色。蓝色。第3页/共12页第三页，共13页。二、实验设计二、实验设计问题问题(wnt)(wnt)导学导学问题讨论问题讨论(toln)1(toln)1：什么样的材料更适合提取：什么样的材料更适合提取DNADNA？ 对植物和动物细胞处理的方法是否相同？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？问题讨论问题讨论(toln)2(toln)2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取取DNADNA有有 哪几种方案，有什么不同？哪几种方案，有什么不同？问题讨论问题
6、讨论3 3：DNADNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得 到白色丝状物？到白色丝状物？问题讨论问题讨论4 4：鉴定：鉴定DNADNA的具体方法是什么？在必修的具体方法是什么？在必修1 1教材实教材实 验中还用到哪种试剂来观察验中还用到哪种试剂来观察DNADNA在细胞中的分布在细胞中的分布第4页/共12页第四页，共13页。二、问题二、问题(wnt)(wnt)导导学学问题讨论问题讨论1 1：什么样的材料更适合：什么样的材料更适合(shh)(shh)提取提取DNADNA？ 对植物和动物细胞处理的方法是否相同？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？选用选用DNAD
7、NA含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血( (加柠檬加柠檬酸钠防止凝固酸钠防止凝固) )；或植物细胞如菜花需要或植物细胞如菜花需要(xyo)(xyo)加洗涤剂和食盐并充分搅拌加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。和研磨。对应训练对应训练1 1：你认为下列提供的材料中哪些不适合提取DNA？洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。答案：答案：大肠杆菌、猪血。大肠杆菌大肠杆菌1 1条条DNADNA，哺乳动物血红细胞不，哺乳动物血红细胞不含细胞核和从多细胞器，没有含细胞核和从多细胞器，没有DNADNA第5页/共12页第五页，共13页。问题讨论问题讨论2 2：去除滤液中的杂质：
8、去除滤液中的杂质(zzh)(zzh)即初步纯化粗提取即初步纯化粗提取DNADNA有哪有哪几种方案，有什么不同？几种方案，有什么不同？方案一：向滤液中加入方案一：向滤液中加入2mol/l2mol/l的的NaCl,NaCl,充分溶解充分溶解DNADNA，过滤去除杂质，过滤去除杂质，加入蒸馏水，使加入蒸馏水，使DNADNA析出直至析出物不再增加，过滤得到析出直至析出物不再增加，过滤得到DNADNA析出物，析出物，去除溶液中的杂质。可反复多次溶解去除溶液中的杂质。可反复多次溶解DNADNA去除杂质。再将析出物溶去除杂质。再将析出物溶解到解到2mol/l2mol/l的的NaClNaCl，用纱布过滤去杂质
9、后，再向滤液中加入等体积，用纱布过滤去杂质后，再向滤液中加入等体积(tj)(tj)的冷酒精进一步提纯的冷酒精进一步提纯方案二：直接向滤液方案二：直接向滤液(ly)(ly)中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液(ly)(ly)中的蛋白质分解。中的蛋白质分解。方案三：将滤液方案三：将滤液(ly)(ly)放在放在60607575度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温101015min,15min,严格控制温度。严格控制温度。第6页/共12页第六页，共13页。问题讨论问题讨论3 3：DNADNA在酒精中析出时注意哪些问题才能在酒精中析出时注意哪些问题才能(cinng)(
10、cinng)确保得到白色丝状物？确保得到白色丝状物？问题讨论问题讨论4 4：鉴定：鉴定DNADNA的具体方法是什么的具体方法是什么(shn me)(shn me)？在必修？在必修1 1教材教材实验中还用到什么实验中还用到什么(shn me)(shn me)别的试剂用来鉴定别的试剂用来鉴定DNADNA呢？呢？加入加入(jir)(jir)与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为95%95%，用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。先将丝状物溶解于先将丝状物溶解于2mol/l2mol/l的的NaClNaCl溶液中溶解
11、，再加入溶液中溶解，再加入4ml4ml二二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变化。化。第7页/共12页第七页，共13页。三、书写三、书写DNADNA粗提取和鉴定的主要步骤粗提取和鉴定的主要步骤 要求：先写一句概括性话语，具体细节要求：先写一句概括性话语，具体细节只写相关只写相关(xinggun)(xinggun)试剂和关键操作方法，试剂和关键操作方法，要求写出此步骤中要求写出此步骤中DNADNA在哪里？在哪里？1 1、材料的选择、材料的选择 2 2、破碎细胞、破碎细胞(xbo)(xbo)释放释放DNADNA3 3、去除滤液中的杂质
12、、去除滤液中的杂质4 4、DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定DNA含量(hnling)丰富的细胞含核物质DNA的滤液DNA再溶解在2mol/lNaCl中向2mol/lNaCl 中加入冷酒精，让DNA析出物在沸水浴下与二苯胺反应显蓝色第8页/共12页第八页，共13页。1 1填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。 提取(tq)(tq)鸡血细胞中核物质： 溶解核内DNADNA： 析出2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液中的DNADNA： DNA DNA白色丝状物的析出： DNA DNA的鉴定： 四、典型四、典型(dinxng)(dinxng)例题例题 蒸馏水2mol/LNaCl加入(jir
13、)蒸馏水95%冷酒精沸水浴中与二苯胺反应第9页/共12页第九页，共13页。2、某同学在做DNA的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的结果是有DNA的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能(knng)是（ ）A经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少， 使红细胞破裂数量少B未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致DNA含量少，染色 时间不够C选择鸡血液时，选用鸡血细胞液，D用NaCl溶液进行盐析时，所配制的NaCl溶液浓度达不到 0.14moL/L，使析出的DNA少C第10页/共12页第十页，共13页。3、本实验中有三次过滤： 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶
14、液 过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上(yshng)三次过滤分别为了获得（ ） A、含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液 B、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液 C、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNA D、含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液A第11页/共12页第十一页，共13页。感谢您的欣赏(xnshng)！第12页/共12页第十二页，共13页。内容(nirng)总结一、基础知识。DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。（4）特定的颜色反应鉴定DNA。问题讨论3：DNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得。或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。问题讨论2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNA有哪几种方案，有什么不同。问题讨论3：DNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物。1填写本实验(shyn)完成下列实验(shyn)操作时所用试剂。感谢您的欣赏第十三页，共13页。
