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1、常见病原性细菌常见病原性细菌的分离鉴定方法的分离鉴定方法1学习要求学习要求1熟悉一般细菌的鉴定流程。熟悉一般细菌的鉴定流程。2掌握化脓性球菌的鉴定方法。掌握化脓性球菌的鉴定方法。3掌握肠道细菌的鉴定方法。掌握肠道细菌的鉴定方法。实验内容实验内容1. 一般细菌的一般细菌的鉴定流程鉴定流程。2. 化脓性球菌的化脓性球菌的生物学性状生物学性状。3. 化脓性球菌的化脓性球菌的鉴定方法鉴定方法。4. 血液标本血液标本1和血液标本和血液标本2的检查。的检查。 （学生操作）（学生操作）5. 粪便标本粪便标本1和粪便标本和粪便标本2的检查。的检查。 （学生操作（学生操作 ） 小结小结1.1.一般细菌的鉴定流程
2、一般细菌的鉴定流程2.2.化脓性球菌的鉴定方法化脓性球菌的鉴定方法一般细菌的鉴定流程一般细菌的鉴定流程l采集标本和注意事项采集标本和注意事项l分离与培养分离与培养 1.培养基的选用培养基的选用 2.培养方法培养方法 3.无菌操作无菌操作l细菌的鉴定细菌的鉴定 1.涂片，革兰染色，镜检涂片，革兰染色，镜检 2.生化反应生化反应 3.血清学鉴定血清学鉴定细菌学检验细菌学检验的一般程序的一般程序化脓性球菌的生物学性状化脓性球菌的生物学性状l葡萄球菌葡萄球菌l链球菌（肺炎球菌）链球菌（肺炎球菌） l奈瑟菌属奈瑟菌属一、葡萄球菌属一、葡萄球菌属l1葡萄球菌的镜下形态葡萄球菌的镜下形态l2葡萄球菌的培养特
3、性葡萄球菌的培养特性l3葡萄球菌的生化反应葡萄球菌的生化反应 (1)血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 (2)触酶试验触酶试验 (3)甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验 葡萄球菌葡萄球菌镜下镜下形态观察形态观察（学生操作）（学生操作） 取取葡葡萄萄球球菌菌培培养养物物少少许许涂涂片片，革革兰兰染色，镜检。观察结果填入实验报告。染色，镜检。观察结果填入实验报告。 革兰染色后细菌革兰染色后细菌呈紫蓝色，球形或椭呈紫蓝色，球形或椭圆形，直径圆形，直径0.50.51.21.2m，排列成，排列成葡萄串状葡萄串状。 葡萄球菌葡萄球菌菌落观察菌落观察（教师示教）（教师示教） 分别取分别取金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌和和
4、表皮葡萄球表皮葡萄球菌菌培养物，用分离划线方法接种培养物，用分离划线方法接种血平板血平板，置置3737培养，培养，18h18h24h24h以后观察结果。以后观察结果。 血琼脂平板中血琼脂平板中18h-24h18h-24h后形成后形成圆形隆圆形隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落的菌落，不同菌种可产生，不同菌种可产生金黄色、白色或金黄色、白色或柠檬色柠檬色色素。某些菌种（株）有色素。某些菌种（株）有溶血溶血现象。现象。 血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验（教师示教）（教师示教） 致病性葡萄球菌产生血浆凝固酶，它致病性葡萄球菌产生血浆凝固酶，它可以使经过枸橼酸
5、钠或肝素抗凝的兔血浆可以使经过枸橼酸钠或肝素抗凝的兔血浆凝固。本试验采用凝固。本试验采用玻片法玻片法测定结合凝固酶。测定结合凝固酶。 在在载载玻玻片片两两端端滴滴加加生生理理盐盐水水一一滴滴，用用接接种种环环挑挑取取待待检检菌菌( (金金葡葡菌菌、白白葡葡菌菌) )，分分别别与与它它们们研研磨磨、混混匀匀，滴滴加加兔兔血血浆浆1 1滴滴，立立即即观观察察有有无无凝凝固固颗颗粒粒，若若有有即即为为阳阳性性。 此法用于测定结合型凝固酶。此法用于测定结合型凝固酶。二、链球菌属二、链球菌属l1链球菌的镜下形态链球菌的镜下形态l2链球菌的培养特性链球菌的培养特性l3链球菌的生化反应链球菌的生化反应 (1
6、)胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 (2)菊糖发酵试验菊糖发酵试验 链球菌镜下链球菌镜下形态观察形态观察（学生操作）（学生操作） 分分别别取取甲甲、乙乙型型溶溶血血性性链链球球菌菌培培养养物物涂涂片片，革革兰兰染染色色，镜镜检检。观观察察并并记记录录结结果果填入实验报告。填入实验报告。 革兰染色后细菌革兰染色后细菌呈紫蓝色，菌体呈呈紫蓝色，菌体呈圆形或卵圆形，直径圆形或卵圆形，直径0.61.0m，常呈常呈链状排列链状排列 。 链球菌链球菌菌落观察菌落观察（教师示教）（教师示教） 分别取分别取甲、乙型溶血性链球菌甲、乙型溶血性链球菌接种接种于于血琼脂平板血琼脂平板，置，置3737培养培养18h18h24
7、h24h后后观察结果。观察结果。 血琼脂中形成血琼脂中形成灰白色、表面光滑、灰白色、表面光滑、边缘整齐、直径边缘整齐、直径0.50.50.75mm0.75mm的细小菌落的细小菌落。菌落周围因链球菌种类不同，可呈现菌落周围因链球菌种类不同，可呈现透透明溶血环、草绿色溶血环或无溶血环明溶血环、草绿色溶血环或无溶血环。 肺炎链球菌肺炎链球菌镜下形态观察（学生操作）镜下形态观察（学生操作） 取取肺炎球菌肺炎球菌培养物涂片，革兰染色，培养物涂片，革兰染色，镜检。镜检。 革兰革兰染色染色阳性，常阳性，常呈双排列呈双排列。菌体呈菌体呈矛头状，尖端向外钝端相接矛头状，尖端向外钝端相接。无芽胞，无。无芽胞，无鞭
8、毛，在人及动物体内能形成荚膜。鞭毛，在人及动物体内能形成荚膜。 肺炎链球菌菌落观察肺炎链球菌菌落观察（教师示教）（教师示教） 取取肺炎球菌肺炎球菌培养物，接种于血平板，培养物，接种于血平板，置置3737培养，培养，18h18h24 h24 h后观察血平板后观察血平板上生长的菌落大小。形态、溶血性。上生长的菌落大小。形态、溶血性。 在血平板上与甲型溶血性链球菌很在血平板上与甲型溶血性链球菌很相似，形成相似，形成细小、灰白、圆形略扁、半细小、灰白、圆形略扁、半透明，直径透明，直径0.50.51.5mm1.5mm的菌落，有甲型的菌落，有甲型溶血环。溶血环。肺炎球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别肺炎球菌与甲
9、型溶血性链球菌的鉴别 1 . 菊糖发酵试验菊糖发酵试验 2胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 取取肺炎球菌和甲型溶血性链球菌肺炎球菌和甲型溶血性链球菌分分别接种于别接种于菊糖发酵培养基菊糖发酵培养基，置，置37培养培养24h48h，可见肺炎球可见肺炎球菌分解菊糖、产酸，使培养基变菌分解菊糖、产酸，使培养基变黄黄色色，而甲型溶血性链球菌培养管不，而甲型溶血性链球菌培养管不变色。变色。胆汁或胆盐胆汁或胆盐能活化能活化肺炎球菌自溶酶肺炎球菌自溶酶，促，促使细菌裂解自溶。分别取使细菌裂解自溶。分别取肺炎球菌和甲肺炎球菌和甲型溶血性链球菌型溶血性链球菌08ml于于2支试管中，支试管中，各加各加10%去氧胆酸钠溶液
10、去氧胆酸钠溶液0.2 ml，摇匀摇匀后置后置37 水浴水浴15 min后观察结果。如细后观察结果。如细菌悬液仍为浑浊状，为阴性；细菌悬液菌悬液仍为浑浊状，为阴性；细菌悬液由浑浊变为由浑浊变为透明状为胆汁溶菌试验阳性透明状为胆汁溶菌试验阳性。 三、奈瑟菌属三、奈瑟菌属 形态学观察（学生操作）形态学观察（学生操作） 分别取分别取脑膜炎球菌脑膜炎球菌和和淋球菌淋球菌培养物涂片，培养物涂片，革兰染色，镜检，油镜下观察细菌的大小、形革兰染色，镜检，油镜下观察细菌的大小、形态、排列及染色性。态、排列及染色性。 菌落观察（教师示教菌落观察（教师示教 ） 分别取分别取脑膜炎球菌、淋球菌脑膜炎球菌、淋球菌接种于
11、接种于巧巧克力色血平板克力色血平板，置，置3737培养培养24h24h或或48h48h后观后观察结果，注意菌落形态、大小等特征。察结果，注意菌落形态、大小等特征。奈瑟菌属生化鉴定奈瑟菌属生化鉴定 麦麦芽芽糖糖发发酵酵试试验验：分分别别取取脑脑膜膜炎炎球球菌菌、淋淋 球球 菌菌 接接 种种 于于 麦麦 芽芽 糖糖 发发 酵酵 管管 中中 ， 置置3724h48h观察结果。观察结果。 氧化酶试验：氧化酶试验：氧化氧化酶可将酶可将二甲基对二苯二甲基对二苯二胺或四甲基对二苯二胺二胺或四甲基对二苯二胺试剂氧化成试剂氧化成红紫色红紫色的酿类化合物。的酿类化合物。 分别滴加氧化酶试剂在脑膜分别滴加氧化酶试剂
12、在脑膜炎球菌、淋球菌及白色葡萄球菌培养物上，炎球菌、淋球菌及白色葡萄球菌培养物上，几分钟后观察结果。几分钟后观察结果。增增 菌菌接种平板培养基，分离单个菌落接种平板培养基，分离单个菌落各种鉴定试验各种鉴定试验涂片染色涂片染色快速诊快速诊断试验断试验生化试验生化试验血清学实验血清学实验涂片染色涂片染色药敏试验药敏试验动物试验动物试验初步诊初步诊断报告断报告明确诊断报告明确诊断报告细菌学检验的一般程序细菌学检验的一般程序挑取可疑菌落挑取可疑菌落乙型链球菌乙型链球菌葡萄球菌属葡萄球菌属血液标本血液标本血平板分离培养血平板分离培养革兰染色革兰染色染色性染色性 形状排列形状排列初步诊断初步诊断溶血现象、革兰染色溶血现象、革兰染色甲型链球菌或甲型链球菌或肺炎链球菌肺炎链球菌血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验（+）（-）金黄色葡金黄色葡萄球菌萄球菌表皮葡萄球表皮葡萄球菌菌胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验菊糖发酵试验菊糖发酵试验（+）（-）肺炎链球菌肺炎链球菌甲型链球菌甲型链球菌肺炎链球菌落特点：草绿色溶血、肺炎链球菌落特点：草绿色溶血、 肚脐状（肚脐状（48h)脑膜炎球菌脑膜炎球菌
