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1、实验中心网站：实验中心网站：http:/ 2010.127/26/2024细菌生理生化反应细菌生理生化反应1 1目的要求目的要求 学习并掌握细菌分类鉴定中常用的学习并掌握细菌分类鉴定中常用的 生理生化反应。生理生化反应。2细菌生理生化反应细菌生理生化反应实验原理 细菌的代谢与呼吸，主要取决于酶的催化作细菌的代谢与呼吸，主要取决于酶的催化作用，各种细菌具有不同的酶系统。用，各种细菌具有不同的酶系统。1不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和终产物也不一样。终产物也不一样。2细菌代谢类型的多样性
2、，具体表现在生化细菌代谢类型的多样性，具体表现在生化反应多样性，因此在细菌分类鉴定中，常反应多样性，因此在细菌分类鉴定中，常利用其生理生化反应作为重要依据。利用其生理生化反应作为重要依据。3细菌生理生化反应细菌生理生化反应糖发酵试验 1在肠道细菌的鉴定上尤为重要在肠道细菌的鉴定上尤为重要2细菌可发酵的基质细菌可发酵的基质 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖）糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖） 醇（甘露醇）醇（甘露醇） 糖苷（甘油）糖苷（甘油）发酵后产生的有机酸发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等乳酸、醋酸、丙酸等发酵后产生的气体发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等甲烷、氢、二氧化碳等4细菌生理生化反应细菌生理生
3、化反应葡萄糖发酵试验葡萄糖发酵试验乳糖发酵试验乳糖发酵试验 指示剂：溴甲酚紫（变色范围指示剂：溴甲酚紫（变色范围pH5.2-6.8, pH6.8紫色）紫色）安装倒立的徳汉氏氏小管（内充满液体）安装倒立的徳汉氏氏小管（内充满液体）pH5.2, 溶液由清亮紫色变为浑浊黄色溶液由清亮紫色变为浑浊黄色 乳酸、醋酸、丙酸乳酸、醋酸、丙酸葡萄糖葡萄糖/乳糖乳糖甲烷、氢、二氧化碳甲烷、氢、二氧化碳徳汉氏小管内有气泡，产气漂浮徳汉氏小管内有气泡，产气漂浮5细菌生理生化反应细菌生理生化反应乙酰甲基甲醇试验（乙酰甲基甲醇试验（V.P.V.P.试验）试验）甲基红试验（甲基红试验（M.R.M.R.试验）试验）1细菌在
4、糖代谢过程中，分解葡萄糖，细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。2细菌体内丙酮酸代谢途径的不同，细菌体内丙酮酸代谢途径的不同，可通过可通过V.P. 和和M.R. 这一对实验进行这一对实验进行鉴别。鉴别。6细菌生理生化反应细菌生理生化反应l l V.P.V.P.反应阳性途径：反应阳性途径：7细菌生理生化反应细菌生理生化反应吲哚产生试验判断细菌是否（含色氨酸酶）能利用判断细菌是否（含色氨酸酶）能利用色氨酸。色氨酸。8细菌生理生化反应细菌生理生化反应实验材料1. 1. 大肠杆菌大肠杆菌 （Escherichia coliEscherichia
5、 coli）2. 2. 产气肠杆菌产气肠杆菌（EnterobacterEnterobacter aerogenesaerogenes ) )3. 3. 普通变形杆菌普通变形杆菌( (ProteusProteus vulgarisvulgaris) )9细菌生理生化反应细菌生理生化反应实验方法与步骤（一）液体培养基的制备与灭菌（一）液体培养基的制备与灭菌 1）蛋白胨培养基：）蛋白胨培养基：1蛋白胨蛋白胨 4.0 g2NaCl 2.0 g3H2O 400 mL 调调pH 7.6，分出，分出2管，然后加管，然后加0.5ml 1.6 % 溴甲酚紫乙醇溶液溴甲酚紫乙醇溶液,溶液呈浅紫色；溶液呈浅紫色；分
6、装到装有倒立的德汉氏小管的试分装到装有倒立的德汉氏小管的试管中（管中（6管）管）10细菌生理生化反应细菌生理生化反应2）10%葡萄糖溶液，葡萄糖溶液，10%乳糖溶液乳糖溶液各各20ml 112度，度，30分钟灭菌分钟灭菌 3支德汉氏管中加葡萄糖溶液各支德汉氏管中加葡萄糖溶液各1ml 3支德汉氏管中加乳糖溶液各支德汉氏管中加乳糖溶液各1ml 11细菌生理生化反应细菌生理生化反应3）葡萄糖蛋白胨培养基：）葡萄糖蛋白胨培养基：1葡萄糖葡萄糖0.5 g2蛋白胨蛋白胨0.5 g3K2HPO40.2 g4H2O100 mL分装分装2管管12细菌生理生化反应细菌生理生化反应（二）接种培养（二）接种培养试验试
7、验名称名称被接菌种被接菌种1（管数）（管数）被接菌种被接菌种2（管数）（管数）对对照照（管数）（管数）1葡萄糖葡萄糖发发酵酵 大大肠肠杆菌杆菌普通普通变变形杆菌形杆菌 不接种不接种2乳糖乳糖发发酵酵大大肠肠杆菌杆菌普通普通变变形杆菌形杆菌 不接种不接种3 VP试验试验大大肠肠杆菌杆菌 产产气气肠肠杆菌杆菌4吲哚试验吲哚试验大大肠肠杆菌杆菌 产产气气肠肠杆菌杆菌13细菌生理生化反应细菌生理生化反应（三）反应结果鉴定 葡萄糖葡萄糖/乳糖发酵试验乳糖发酵试验 直接观察。直接观察。VP试验：试验：去塞，加去塞，加40KOH 10滴，再加滴，再加等量等量5%奈酚，用力振荡，奈酚，用力振荡，37培养培养30min，观察。观察。吲哚试验：吲哚试验：加加1ml乙醚（作用是萃取出吲乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂慢加入吲哚试剂10滴，观察。滴，观察。14
