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1、医院感染标本医院感染标本的采集与结果判断的采集与结果判断李芳芳讲师李芳芳讲师病病例例：某某院院胸胸外外科科在在一一个个星星期期内内分分别别送送来来三三份份不不同同病病人人的的标标本本（痰痰标标本本、切切口口分分泌泌物物标标本本、血血标标本本），经经检检测测均均检检出出了了金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌，PCRPCR结结果果相相同同，耐耐药药谱谱结结果果相相同同：耐耐药药：头头孢孢唑唑啉啉、头头孢孢哌哌酮酮、头头孢孢三三嗪嗪、青青霉霉素素、氨氨苄苄青青霉霉素素、羧苄青霉素，敏感：万古霉素。羧苄青霉素，敏感：万古霉素。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 爆发爆发l临床标本检验临床标本检
2、验l对病人及带菌者进行监测对病人及带菌者进行监测l配合医院感染爆发的调查配合医院感染爆发的调查l配合抗生素合理使用的管理配合抗生素合理使用的管理l医院环境的细菌学监测医院环境的细菌学监测l研究与教育研究与教育临床微生物学实验室的任务临床微生物学实验室的任务医院感染标本采集及检验医院感染标本采集及检验l标本采集、检验的一般程序标本采集、检验的一般程序l医院感染标本采集的一般标准医院感染标本采集的一般标准l标本的运送与处理标本的运送与处理l各类医院感染标本的采集和检验各类医院感染标本的采集和检验临临床床需需要要医医生生选选择择合合适适的的方方法法、开开医医嘱嘱、填填写写申申请请单单护护士士备备物物
3、、采采集集标标本本（正正确确的的用用物物、时时间间、方方法法）卫卫勤勤中中心心运运送送标标本本微微生生物物实实验验室室检检验验出出报告、指导临床用药报告、指导临床用药标本采集及检验标本采集及检验一般程序一般程序您认为在标本采集和检验时要注意什么您认为在标本采集和检验时要注意什么？标本采集的一般标准标本采集的一般标准l标本容器的要求：标本容器的要求：无菌干燥、宽口无菌干燥、宽口l棉拭要求：棉拭要求：l不同部位的标本采集：不同部位的标本采集：眼、耳、鼻、喉、眼、耳、鼻、喉、创面、脓肿、组织标本、痰、脑脊液创面、脓肿、组织标本、痰、脑脊液l标本及化验单标本及化验单：病人姓名、采集时间及日病人姓名、采
4、集时间及日期、病区、床号、标本名、采集部位、临床诊期、病区、床号、标本名、采集部位、临床诊断、检验项目断、检验项目l与抗生素使用的时间关系与抗生素使用的时间关系l存在正常菌群部位存在正常菌群部位：消毒或绕道消毒或绕道Lipsky和和Plorde将标本按存在部位的将标本按存在部位的深浅分为三层深浅分为三层l深层标本深层标本：循环血液、胸液、腹腔液、循环血液、胸液、腹腔液、关节液关节液l深层标本但与外界相通深层标本但与外界相通：子宫内膜、膀子宫内膜、膀胱、瘘管胱、瘘管l严重污染有正常菌群的标本严重污染有正常菌群的标本：皮肤或粪皮肤或粪便等便等标本的运送与处理标本的运送与处理l标本采集后应尽快送检标
5、本采集后应尽快送检l采集与培养有时间间隔采集与培养有时间间隔l收到标本后的处理：收到标本后的处理： 检查检查-肉眼观察肉眼观察-处理处理-涂片检查涂片检查-电话通知电话通知 立即处理的标本立即处理的标本：脑脊液、眼分泌物，洗胃液：脑脊液、眼分泌物，洗胃液 肺组织肺组织( (查结核分支杆菌查结核分支杆菌) ) 可暂缓处理的标本可暂缓处理的标本：创面拭子、痰、粪便（：创面拭子、痰、粪便（冷冷藏藏2-32-3小时）、尿（冷藏小时）、尿（冷藏2424小时小时 ）三、三、 各类标本的采集和检验各类标本的采集和检验l血标本血标本l尿标本尿标本l呼吸道标本呼吸道标本l粪标本粪标本l脑脊液标本脑脊液标本l脓及
6、伤口标本脓及伤口标本（一）血标本（一）血标本采样时机采样时机：l菌血症出现于发热或寒战前菌血症出现于发热或寒战前1 1h h内内l细菌性心内膜炎细菌性心内膜炎 3 3次血培养（次血培养（ 2424h h内内3 3次次, ,次间隔次间隔11h h）l间歇性菌血症间歇性菌血症 3 3次次/24-48/24-48h h内、不内、不同部位同部位l已接受抗生素治疗的病人已接受抗生素治疗的病人 4-64-6次，次，吸收或中和血中的抗生素吸收或中和血中的抗生素血标本血标本血标本血标本l采样方法采样方法消毒消毒 抽取（干燥、灭菌的针筒）抽取（干燥、灭菌的针筒） 更换针头更换针头 注入培养基注入培养基 混合混合
7、 周围血推片周围血推片l量：培养基的量：培养基的1/101/10 成人：成人：5-105-10mLmL（SBE10-20mlSBE10-20ml） 婴儿及儿童：婴儿及儿童：1-21-2mLmL血标本血标本抽血至培养瓶（需氧或厌氧）抽血至培养瓶（需氧或厌氧）35普通孵育普通孵育置置全自动血培养仪全自动血培养仪药敏试验药敏试验 获得纯菌获得纯菌菌种鉴定（生化鉴定：传统或自动化）菌种鉴定（生化鉴定：传统或自动化）二级二级报告，微生物学检验报告单报告，微生物学检验报告单每日观察每日观察仪器阳性报警仪器阳性报警涂片革兰染色涂片革兰染色一级报告，通知临床一级报告，通知临床血平板、巧克力平板、麦康凯平板分离
8、培养血平板、巧克力平板、麦康凯平板分离培养检验方法检验方法血标本血标本抽血至培养瓶（需氧或厌氧）抽血至培养瓶（需氧或厌氧）35普通孵育普通孵育置置全自动血培养仪全自动血培养仪每日观察每日观察仪器阳性报警仪器阳性报警无无细菌生长细菌生长第第5、7天作盲目移种天作盲目移种第第7天作盲目移种天作盲目移种阴性报告阴性报告无无细菌生长细菌生长检验方法检验方法血标本血标本检验方法检验方法结果分析结果分析l有意义菌有意义菌：类杆菌、肠杆菌科细菌、铜绿假：类杆菌、肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、嗜血流感杆菌、金黄色葡萄球菌、单胞菌、嗜血流感杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌肺炎链球菌l无病原学意义菌无病原学意义菌：
9、非溶血性链球菌（：非溶血性链球菌（D族除族除外）、类白喉杆菌、芽胞杆菌外）、类白喉杆菌、芽胞杆菌血标本血标本血标本血标本（二）尿标本（二）尿标本中段尿采样中段尿采样l女性：女性：清洁清洁-清洗清洗-无菌纱布擦干无菌纱布擦干-分开阴唇分开阴唇-置棉花于阴道口置棉花于阴道口-留取中段留取中段尿尿1010mlml（灭菌容器）灭菌容器）l男性：男性：清洗清洗-冲洗冲洗-留取中段尿留取中段尿l老年人和儿童：老年人和儿童：清洁外生殖器及肛门部位，清洁外生殖器及肛门部位，用清洁的尿盆或烧瓶接取用清洁的尿盆或烧瓶接取其它采样方法其它采样方法l耻骨上膀胱穿刺抽吸采样耻骨上膀胱穿刺抽吸采样：膀胱充盈时，19号或2
10、0号针头及针筒，穿刺点-脐与耻骨联合中点连线的下1/3处l长期导尿者长期导尿者：消毒尿管与引流管接头，无菌空针抽取消毒尿管与引流管接头，无菌空针抽取l膀胱镜检、导尿管导尿、逆行肾盂造影术膀胱镜检、导尿管导尿、逆行肾盂造影术：术中采取术中采取l输尿管膀胱梗阻输尿管膀胱梗阻：分段采集数份，分别培养分段采集数份，分别培养尿标本尿标本尿标本尿标本检查方法检查方法l湿片镜检湿片镜检-指导培养指导培养l离心离心-沉淀沉淀-涂片涂片-染色染色l分离培养分离培养-菌落观察菌落观察-涂片涂片-镜检镜检 纯培养纯培养 l结核杆菌检查结核杆菌检查-抗酸染色抗酸染色 培养（罗氏培养基）培养（罗氏培养基） 尿标本尿标本
11、尿标本尿标本1 1份标本份标本1010个油镜视野，每个视野细菌数：个油镜视野，每个视野细菌数：1-101-10个个 -每每1 1mLmL尿液有尿液有10104 4-10-105 5个细菌个细菌 污染或特殊情况污染或特殊情况100-1000100-1000个个-每每1 1mLmL尿液有尿液有10106 6-10-108 8个细菌个细菌 尿路感染尿路感染 常见病原菌：常见病原菌：大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌、伤寒沙门菌等变形杆菌、伤寒沙门菌等临床意义临床意义尿标本尿标本尿快速检验报告尿快速检验报告（2424h h报告报告）l无细菌生长或尿液含菌数无细菌生长或
12、尿液含菌数10103 3cfu/mlcfu/mll尿液含菌数尿液含菌数10105 5cfucfu/ml/ml, ,确定为大肠杆菌或粪链确定为大肠杆菌或粪链球菌球菌, ,直接药敏试验结果满意，作最后报告直接药敏试验结果满意，作最后报告l尿液含菌数尿液含菌数10105 5cfucfu/ml/ml，但鉴定结果不典型，但鉴定结果不典型，2424小时预报，第二天作细菌鉴定和纯菌的药敏小时预报，第二天作细菌鉴定和纯菌的药敏试验，争取试验，争取4848小时最后报告小时最后报告尿标本尿标本尿标本尿标本（三）呼吸道标本（三）呼吸道标本标本采集标本采集l采集时间采集时间-晨痰晨痰l采集方法采集方法：咽拭子咽拭子：
13、灌注活性炭粉的棉拭、：灌注活性炭粉的棉拭、StuartStuart运输培运输培养基养基痰标本痰标本：清晨咳痰法、小儿取痰法、导管取痰：清晨咳痰法、小儿取痰法、导管取痰法、气管穿刺吸痰法、气管切开者深入透气法、气管穿刺吸痰法、气管切开者深入透气孔中取痰、纤维支气管镜采取痰标本孔中取痰、纤维支气管镜采取痰标本痰标本的处理痰标本的处理l取可疑部分（脓、血）接种及涂片取可疑部分（脓、血）接种及涂片l涂片三张：涂片三张：1 1张革兰染色、张革兰染色、1 1张抗酸张抗酸染色、染色、1 1张备用张备用l接种接种5%5%血平板血平板1 1个：分离全部细菌个：分离全部细菌l中国兰平板中国兰平板1 1个：直接药敏
14、试验个：直接药敏试验呼吸道标本呼吸道标本痰标本检查方法痰标本检查方法l直接镜检直接镜检: :标本是否合格、区分正常部分和病标本是否合格、区分正常部分和病变部分变部分l结核菌检查结核菌检查：抗酸染色、罗氏培养基：抗酸染色、罗氏培养基-鉴鉴定定-药敏试验药敏试验l分离培养分离培养（巧克力平板、血平板）：（巧克力平板、血平板）：菌落观菌落观察察-鉴定鉴定呼吸道标本呼吸道标本不合格标本不合格标本：标本中平均每个视野内扁平：标本中平均每个视野内扁平上皮细胞多于上皮细胞多于2525个，找不到病变部分。个，找不到病变部分。合格标本合格标本：标本中可见白细胞（脓细胞）、：标本中可见白细胞（脓细胞）、柱状上皮细
15、胞集中，有时还可见到不少黏柱状上皮细胞集中，有时还可见到不少黏液丝（标本来自气管或支气管内分泌物）。液丝（标本来自气管或支气管内分泌物）。镜下观察镜下观察检验报告检验报告l直接镜检报告直接镜检报告（约（约2 2h h）：）：标本是否合格、有标本是否合格、有无脓细胞、柱状上皮细胞、扁平上皮细胞的无脓细胞、柱状上皮细胞、扁平上皮细胞的数量、阳性球菌？阴性球菌？数量、阳性球菌？阴性球菌？l培养检查结果报告培养检查结果报告：5%5%血平板、中国兰平板、血平板、中国兰平板、药敏试验结果药敏试验结果呼吸道标本呼吸道标本上呼吸道正常寄生菌：上呼吸道正常寄生菌：草绿色链球菌草绿色链球菌常见病原菌：常见病原菌：
16、肺炎链球菌、肺炎链球菌、A A族链球菌、金黄族链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、结核分支杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆结核分支杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌和军团菌等菌、肠杆菌和军团菌等临床意义临床意义呼吸道标本呼吸道标本（四）（四）粪标本粪标本l采集采集：量：量-0.5-0.52 2g g，保存液，保存液，4 4o oC C24h MICMIC的的5 5倍倍中中介介（intermediateintermediate，I I）：在在药药物物浓浓集集部部位位的的体体液液中中或或大大剂剂量量给给药药后后在在体体内内的的药药物物浓浓
17、度度能能抑抑制制待待测测菌菌，平平均均血血药药浓浓度度 MICMIC；在在“耐耐药药”和和“敏感敏感”之间的缓冲带之间的缓冲带耐耐药药（resistantresistant，R R）：待待测测菌菌不不能能被被所所测测药药物物常规剂量的体内浓度所抑制。常规剂量的体内浓度所抑制。 抑菌试验结果判断抑菌试验结果判断尿培养报告单尿培养报告单金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌敏感：敏感：万古霉素万古霉素中介：中介：氧氟沙星（诺氟沙星）氧氟沙星（诺氟沙星）耐药：耐药：青霉素、头孢唑啉、头孢哌酮、青霉素、头孢唑啉、头孢哌酮、 头孢三嗪、氨苄青霉素、羧苄青霉素头孢三嗪、氨苄青霉素、羧苄青霉素报告单结果分析报告单结果分析
